febre amarela

INSTITUTO EVANDRO CHAGAS
Fundação Nacional de Saúde - FUNASA
Ministério da Saúde - Brasil
FEBRE AMARELA
Diagnóstico Laboratorial
Sueli Guerreiro Rodrigues
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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
ESPECÍFICO DA FEBRE AMARELA
Pesquisa de Vírus
Isolamento: Camundongos swiss recém-nascidos
Cultura de células C6/36
Detecção de ácido nucléico: RT-PCR
Detecção de Anticorpos
Ensaio imunoenzimático: MAC-ELISA, ELISA IgG
Inibição da hemaglutinação
Exame Histopatológico e Detecção de Antígeno por
Imunohistoquímica
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Coleta, Conservação e Transporte de
Amostras para Pesquisa de Vírus
Espécime/
Coleta
Sangue* (soro)/
0-5 dias após o
início dos sintomas
Tecidos (óbito)/
Ideal: 8 hs
Máximo: 24 hs
Conservação/
Transporte
Tipo de
Análise
-70 °C/
Gelo seco
Isolamento do vírus
PCR
-70 °C/
Gelo seco
Isolamento do vírus
PCR
* Retração do coagulo: 2 - 6 horas a 4° C.
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ISOLAMENTO VIRAL EM
CAMUNDONGOS RECÉM-NASCIDOS
A
B
A - Sangue (fase aguda)
B – suspensão de tecido (óbito)
Camundongos Swiss
Detecção de antígeno no cérebro dos
camundongos recém-nascidos, pelo
teste de fixação do complemento.
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ISOLAMENTO VIRAL EM CULTURA
DE CÉLULAS C6/36
A
B
A – Sangue, soro (fase aguda)
B – suspensão de tecido (óbito)
Imunofluorescência direta
(A) células não inoculadas
(B) células infectadas - VFA
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DETECÇÃO DE GENOMA VIRAL
Faixas 1 a 3 (fígado) - cDNA com 1000, 848 e 1024 pb,
respectivamente (região estrutural).
Faixas 6 (fígado) e 10 (baço) - cDNA com 695 pb (NCR 3’).
Faixa 8 (C6/36 infectadas) - cDNA com 695 pb (NCR 3’).
Faixas 5 (baço), 7 (coração) e 9 (fígado) - controles negativos.
Faixas 4 e 11: peso molecular.
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Coleta, Conservação e Transporte de
Amostras para Pesquisa de Anticorpos
Espécime/
Coleta
Conservação/
Transporte
Tipo de
Análise
-20° C/
Gelo seco ou comum
Detecção de
anticorpos IgM
(MAC-ELISA)
1ª amostra: até 7 dias
-20° C/
2ª amostra: 14° - 30° dias Gelo seco ou comum
(após o início dos sintomas)
Detecção de
anticorpos IgG
(IH, ELISA)
Sangue* (soro)/
> 5 dias após o
início dos sintomas
Sangue* (soro)/
* Retração do coagulo: 2 - 24 horas à temperatura ambiente.
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MAC-ELISA
Microplaca para teste de ELISA
Anti-IgM humana
IgM humana (soro do paciente)
Antígeno
Conjugado ( peroxidase)
Substrato (Sistema ABTS)
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INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO
Anticorpos anti-VFA
Anticorpo não específico
Antígeno do VFA
Hemácias de Ganso
HEMAGLUTINAÇÃO
INIBIÇÃO DA
HEMAGLUTINAÇÃO
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EXAME HISTOPATOLÓGICO
IMUNOHISTOQUÍMICA
Espécime/
Coleta
Tecidos (óbito)/
Ideal: 8 hs
Máximo: 24 hs
Conservação/
Transporte
Temperatura ambiente/
Formalina tamponada
Tipo de
Análise
Histopatologia
Imunohistoquímica
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IMUNOHISTOQUÍMICA
A
Legenda
B
Fase sólida (LÂMINA)
Antígeno
Anticorpo
Conjugado (peroxidase)
Substrato
Antígenos detectado
Seta indicando áreas com antígenos específicos. A - Fígado, B - Baço.11
FEBRE AMARELA
Rede de Laboratórios
RR
AP
AM
Instituto Evandro Chagas - IEC/PA
Laboratório de Referência Nacional
Centro Colaborador da OMS
PA
CE
MA
RN
RN
PB
PE
PI
AC
RO
TO
SE
MT
BA
DF
GO
ES
MS
SP
Sorologia (17)
Sorologia a implantar (1)
MG
AL
FLUXO DE AMOSTRAS:
Isolamento Viral
Exames Histopatológico
Imunohistoquímica
Controle de Qualidade
PR
RJ
Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ-RJ
Laboratório Colaborador.
SC
RS
Instituto Adolfo Lutz - IAL/SP
Laboratório Colaborador.
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