Abbott realtime hcv

ABBOTT
REALTIME HCV
Desempenho no
monitoramento terapêutico
Luciana G Gentil
Abbott Molecular
Company Confidential ©2014 Abbott
Abbott RealTime HCV
Região-alvo conservada
Desenho único de sonda
Condições de ciclagem otimizadas
Calibração externa precisa
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Abbott RealTime HCV: desenho do teste
Região-alvo conservada
Company Confidential ©2014 Abbott
Abbott RealTime HCV: desenho do teste
Desenho único de sonda
Detecção e quantificação
dos genótipos do HCV
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Abbott RealTime HCV: desenho do teste
Condições de ciclagem otimizadas
Denaturação
Extensão
Detecção
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Abbott RealTime HCV: desenho do teste
Calibração externa precisa
Curva de calibração armazenada
Calibração
Cal A (3)
Fluorescence
CT
CT
CT
CN
Cal B
Número de cópias
do paciente
Fluorescence
Cal A
Threshold Cycle CT
Cal B (3)
Amostra do paciente
log (número de
cópias)
threshold cycle
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CN
Abbott RealTime HCV
Características e Desempenho do Abbott RealTime HCV
12 UI/mL para amostras com volume de 0,5 mL
Sensibilidade
30 UI/mL para amostras com volume de 0,2 mL
Intervalo Linear
12 UI/mL (1,08 log UI/mL) a 100 milhões UI/mL (log 8,0 UI/mL)
Precisão
Desenhado para atingir um desvio padrão inter-ensaios inferior ou igual a
0,25 log UI/mL de RNA do HCV em amostras contendo concentrações de HCV
entre 100 e 100 milhões de UI/mL.
Especificidade
≥ 99,5%
Genótipos Detectados
Quantificação precisa de genótipos 1, 2, 3, 4, 5 e 6
Padronização
De acordo com o Segundo Padrão Internacional para RNA do HCV da OMS
(NIBSC Código 96/798)
Controle Interno
Adicionado ao tampão de lise durante a extração e detectado em todos os
níveis
Fonte: Instruções de uso do ensaio Abbott RealTime HCV (4J8690R09)
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Abbott RealTime HCV
USO PRETENDIDO:
O ensaio Abbott RealTime HCV é destinado para uso como
meio auxiliar no monitoramento de pacientes infectados pelo HCV
submetidos à terapia antiviral.
Fonte: Instruções de uso do ensaio Abbott RealTime HCV (4J8690R09)
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Monitoramento da carga viral do HCV
Recomendações do Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas para
Hepatite C e Coinfecções (PCDT) do Ministério da Saúde:
- Metodologia: Real Time PCR
LoD: < 15 UI/mL
- Para pacientes tratados com sofosbuvir, daclatasvir e simeprevir
recomenda-se o monitoramento:
• Antes do início do tratamento;
• Ao final do tratamento (12ª semana);
• Após 12 semanas do final do tratamento.
Fonte: Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas para Hepatite C e Coinfecções/ Ministério da Saúde, Secretaria de
Vigilância em Saúde, Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais. – Brasília : Ministério da Saúde, 2015.
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Monitoramento da carga viral do HCV
• Terapia Guiada pela Resposta (TGR):
- Alguns tratamento ainda podem necessitar do uso de IFN.
- Pacientes em uso de IFN/RBV/daclatasvir devem ser tratados de
acordo com a resposta virológica (ex.: Genótipo 4)
• HCV-RNA 4ª semana: indetectável (< 25 UI/mL) e
10ª semana: indetectável (< 25 UI/mL):
Interromper daclatasvir na 12ª sem e manter INF/RBV até
a 24ª semana.
• HCV-RNA 4ª semana: detectável e
10ª semana: indetectável (< 25 UI/mL):
Manter todos os três medicamentos até a 24ª semana
Fonte: Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas para Hepatite C e Coinfecções/ Ministério da Saúde, Secretaria de
Vigilância em Saúde, Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais. – Brasília : Ministério da Saúde, 2015.
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Diagnótico na era das novas terapias para HCV
Sensibilidade do ensaio
• Comparação de seis ensaios para quantificação do RNA
• Taxas de detecção dos padrões PEI e WHO a
1.
.
de HCV utilizando diluições de padrões:
25, 10 e 5 UI/ml
2. .
3. .
(2 Padrões x 3 diluições x 3 alíquotas por ensaio)
1. Qiagen artus HCV QS-RGQ 4. Roche HPS/CTM HCV v2
2. Roche CAP/CTM HCV v1
5. Abbott RealTime HCV
3. Roche CAP/CTM HCV v2
6. Siemens Versant HCV RNA v1
Número de amostras com
RNA-HCV Detectado
Taxa de detecção
(%)
Abbott RealTime HCV
16/18
89
Roche CAP/CTM
14/18
78
Roche HPS/CTM v2
12/18
67
Siemens Versant kPCR
10/18
56
Qiagen artus HCV QS-RGQ
9/18
50
Roche CAP/CTM HCV v2
7/18
39
Ensaio
Tabela: Abbott (adaptada de: Wiesmann F et al; Med Microbiol Immunol. 2015; 204(4): 515-525)
PEI: Paul Ehrlich Institute

Ensaios de quantificação viral não desempenham igualmente:
Abbott RealTime HCV mostrou uma taxa de detecção maior que os outros cinco ensaios.
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Abbott RealTime HCV: um ensaio com alta precisão
• 10 amostras medidas em 10 corridas independentes.
CV
(1.000 UI/mL)
CV
(100 UI/mL)
CV
(25 UI/mL)
RealTime (Abbott)
15%
18%
27%
CTM v1 (Roche)
19%
29%
-
CTM v2 (Roche)
20%
32%
53%
HPS (Roche)
23%
32%
-
artus (Qiagen)
25%
35%
-
Versant (Siemens)
27%
31%
49%
Ensaio
Adaptado de Wiesmann F et al. Poster #465. ESCV 2013. Comparison of viral load assays for
the quantification of HCV genotypes 1-4 in the setting of low viremic samples.
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Abbott RealTime HCV: um ensaio com alta precisão
Amostras de HCV Genótipo 1: Variação intra-ensaios
1000 IU/ml
100 IU/ml
5000
4000
3000
2000
1000
0

25 IU/ml
900
180
800
160
700
600
500
400
300
HCV RNA [IU/ml]
6000
HCV RNA [IU/ml]
HCV RNA [IU/ml]
7000
140
120
100
80
60
200
40
100
20
0
0
Abbott RealTime: melhor precisão na análise amostras de HCV Genótipo 1
Gráficos: Abbott (adaptados de: Wiesmann F et al; Med Microbiol Immunol. 2015; 204(4): 515-525
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Abbott RealTime HCV: um ensaio com alta precisão
Amostras de HCV Genótipos 2, 3 e 4: Variação intra-ensaios
1000 IU/ml
100 IU/ml
5000
4000
3000
2000
1000
0

25 IU/ml
900
180
800
160
700
600
500
400
300
HCV RNA [IU/ml]
6000
HCV RNA [IU/ml]
HCV RNA [IU/ml]
7000
140
120
100
80
60
200
40
100
20
0
0
Abbott RealTime: melhor precisão na análise amostras de HCV genótipo 2, 3 e 4
Gráficos: Abbott (adaptados de: Wiesmann F et al; Med Microbiol Immunol. 2015; 204(4): 515-525
14
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HCV Abbott RealTime: pequena faixa de incerteza pode
avaliar a carga viral de forma confiável
Genótipo 1
Faixa de incerteza
Diferenças consideráveis em precisão
de ensaios (Exemplo: 25 UI/mL)
Faixas de incerteza correspondentes
a 25 IU/mL
Adaptado de Wiesmann F et al. Poster #465. ESCV 2013. Comparison of viral load assays for
the quantification of HCV genotypes 1-4 in the setting of low viremic samples.
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Diagnótico na era das novas terapias para HCV
Sensibilidade do ensaio
Monitoramento do RNA do HCV nas novas terapias altamente eficientes:
Terapias curtas podem levar a baixos níveis de viremia ao final do tratamento, seguido de RVS.1
Pacientes ND durante tratamento (%)
Pacientes ND ao final do tratamento2
Terapia livre de Interferon
6 sem SOF/LDV/GS-9669; 20 pacientes; 95% RVS
Semana do tratamento
Explicações possíveis:
‣ Vírus residual é eliminado pelo sistema
imune do hospedeiro após o final da terapia
‣ Detecção de partículas virais não infecciosas
“
Ao contrário da experiência passada com
tratamentos contendo interferon, baixos
níveis de HCV RNA quantificáveis no final
do tratamento não impedem seu sucesso."
Graficos: Abbott (adaptados de:
1)
Maasoumy B et al; Poster #P0877 apresentado em EASL 2015, Vienna
2)
Sidharthan S et al; Clin Infect Dis. 2015 Jun 15;60(12):1743-51)
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Detecção de baixos níveis de RNA do HCV
• 20 pacientes tratados por 12 semanas com Sofosbuvir/Ledipasvir (Harvoni)
• Monitoramento de carga viral com o ensaio Abbott RealTime HCV
Dia 0
Sem 2
Sem 4
Sem 6
Sem 8
Sem 12
RVS2
RVS4
RVS8
RVS12
TD= < 12 UI/ml
• Abbott RealTime mostrou detectabilidade em 7/20 (35%) pacientes.
Figura adaptada de: Sidharthan S et al; Clin Infect Dis. 2015 Jun 15;60(12):1743-51)
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Sumário
• O Abbott RealTime HCV tem se mostrado como um ensaio de alta
sensibilidade e precisão confiável para quantificação de baixos níveis de
RNA do HCV, indispensável no auxílio de decisões clínicas na gestão HCV
paciente (TGR):
 Os médicos são capazes de avaliar melhor resposta ao tratamento;
 Os laboratórios, responsáveis pela execução dos testes, tem a
segurança necessária para liberar um resultados de qualidade;
 Os pacientes são os principais beneficiados com o acesso a resultados
de qualidade.
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Sumário
• Baixos níveis de vírus quantificáveis após o término do tratamento não
significam relapso (população estudada).
• Hipóteses:
- Vírus residual é eliminado pelo sistema imune do hospedeiro após o
final da terapia;
- Detecção de partículas virais não infecciosas.
• O monitoramento dos pacientes ainda é uma forte ferramenta para medir a
adesão do paciente em cenários do mundo real e detectar o avanço viral em
determinados regimes de tratamento.
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OBRIGADA!
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