Avaliação preliminar da toxicidade de componentes de efluentes domésticos sobre o desenvolvimento embriolarval do ouriço-do-mar Lytechinus variegatus. Wesley de Almeida Mazur1, 2 ; Fernando Sanzi Cortez3 ; Fábio Hermes Pusceddu 3 ; Camilo Dias Seabra Pereira3, 4 1 Mestrando em Ecologia – Programa de Pós-Graduação em Sustentabilidade de Ecossistemas Marinhos 2 Bolsista CAPES 3 Universidade Santa Cecília – Laboratório de Ecotoxicologia Prof. “Caetano Belliboni” 4 Universidade Federal de São Paulo – Campus Baixada Santista Resumo Ações antrópicas incidem diretamente e indiretamente sobre a qualidade de diversos ambientes aquáticos, alteram as características dos mesmos e trazem riscos à biota e à saúde humana. O bactericida Triclosan (TCS), e o surfactante Dodecil Sulfato de Sódio (DSS) são amplamente utilizados para diferentes finalidades e considerados como um dos principais constituintes dos efluentes domésticos. Nesse contexto, a toxicidade desses compostos foi avaliada em concentrações ambientalmente relevantes, por meio de ensaios de toxicidade crônica com o ouriço-do-mar Lytechinus variegatus. Os resultados obtidos demonstraram que os compostos TCS e DSS não apresentaram efeitos adversos significativos sobre o desenvolvimento embriolarval de L. variegatus nas concentrações 20 µg. L-1 e 200µg. L-1, respectivamente. Por outro lado, tratando-se de efluentes domésticos, futuros estudos devem avaliar efeitos sinérgicos, uma vez que esses compostos são introduzidos em misturas complexas nos ecossistemas marinhos. Palavras-chave: Dodecil Sulfato de Sódio, Triclosan, efluente doméstico, ambiente marinho. ____________________________________________________________ Preliminary assessment of the toxicity of domestic effluent components on embryo-larval development of sea urchin Lytechinus variegatus. abstract Anthropogenic actions relate directly and indirectly on the quality of aquatic environments, change their characteristics and pose risks to biota and human health. The antibacterial Triclosan (TCS) and the surfactant sodium dodecyl sulfate (DSS) are widely used for different purposes and considered as a major constituent of effluents. In this context, the toxicity of these compounds was evaluated in environmentally relevant concentrations through chronic toxicity assays employing the sea urchin Lytechinus variegatus. The results revealed that the TCS and DSS compounds showed no significant adverse effects on embryo-larval development of L. variegatus at concentrations of 20 µg. L- 1 and 200 µg.L-1, respectively. On the other hand, in the case of domestic effluents, future studies should evaluate synergistic effects, since these compounds are introduced in complex mixtures on marine ecosystems. Keywords: Sodium dodecyl sulfate, Triclosan, domestic effluents, marine environment. UNISANTA BioScience – p. 115 - 119; Vol. 2 nº 2, (2013) Página 115 INTRODUÇÃO O lançamento de efluentes líquidos domésticos, em alguns casos sem o devido tratamento, constitui-se a maior fonte de poluição para o ambiente aquático (ABESSA et al., 2005). Os surfactantes e os bactericidas, dentre eles o Triclosan, têm sido considerados como principais constituintes dos efluentes domésticos (FARRÉ et al., 2007). Os surfactantes aniônicos mais utilizados mundialmente, em volume, são os Alquilbenzeno Sulfonatos de Sódio Lineares (LAS) e o Dodecil Sulfato de Sódio (DSS) (SIRISATTHA et al., 2004). O DSS (C12H25S04Na) é um surfactante aniônico formado por uma cadeia carbônica com 12 átomos de carbono com um composto aniônico (NaSO4) ligado a sua extremidade. Devido à sua capacidade de atuar sobre a tensão superficial são amplamente utilizados em processos industriais como lubrificação, indústrias têxtil, alimentar, cosméticas, produtos de limpeza e higiene, dispersão de fases, emulsificação de substâncias hidrofóbicas como óleos, gorduras e petróleo (SCOTT & JONES, 2000; NITSCHKE & PATORE, 2002). A Resolução CONAMA n° 357/2005 estabelece o limite de 0,2 mg. L-1 para os surfactantes em águas salinas e salobras, valor também utilizado pela Agência de Proteção Ambiental Norte Americana (USEPA). Grande destaque também tem sido dado aos micropoluentes ou poluentes emergentes, que são aquelas substâncias que não eram monitoradas devido a sua baixa concentração no ambiente e por isso não eram consideradas tóxicas. Porém, com o avanço da química analítica, foi possível determinar as concentrações ambientais destes compostos e assim avaliar a capacidade de produzir efeitos biológicos adversos (BILA & DEZOTTI, 2006). Na classe dos poluentes emergentes estão inclusos os fármacos e os produtos de higiene e cuidados pessoais (FPHCP). Os produtos farmacêuticos são sintetizados com a finalidade de produzir um efeito biológico, porém, 50% a 90% da dosagem de um fármaco são liberados de forma inalterada pelo corpo humano, sendo assim disponibilizados ao ambiente aquático onde efeitos nocivos em organismos não alvos podem ocorrer (MULROY, 2001). Dentro da classe dos fármacos e produtos de higiene e cuidados pessoais (FPHCP) destaca-se o Triclosan (5-cloro-2-(2,4-diclorofenoxy)) fenol (TCS), um composto sintético clorado aromático com representantes funcionais do grupo dos fenóis, é um bactericida muito eficiente ao combate a bactérias gram positivas e gram negativas e devido a isso, muito utilizado em vários produtos de higiene pessoal e demais materiais aos quais se queira adicionar uma capacidade antibacteriana (USEPA, 2008). No estudo feito por Farré et al. (2007) utilizando a bactéria Vibrio fischeri, o TCS também foi considerado como um dos poluentes orgânicos que mais contribuem com a toxicidade aguda dos efluentes domésticos (FARRÉ, 2007). Tendo em vista a presença constante dos surfactantes nos efluentes, a persistência dos fármacos no ambiente marinho e o mecanismo de ação desses compostos que pode incidir diretamente sobre membranas biológicas, faz-se necessário o uso de métodos que possam avaliar seus impactos sobre organismos marinhos. Nesse sentido, o presente estudo visou avaliar os efeitos biológicos adversos provenientes do TCS e do DSS em concentrações ambientalmente relevantes, sobre o ouriçodo-mar Lytechinus variegatus através do ensaio de toxicidade crônica de curta duração. Os dados gerados poderão contribuir com as análises de risco desses compostos. UNISANTA BioScience – p. 115 - 119; Vol. 2 nº 2, (2013) Página 116 MATERIAIS E MÉTODOS Os ensaios para avaliação de efeito crônico de curta duração sobre o ouriço-do-mar Lytechinus variegatus foram conduzidos de acordo com a norma técnica ABNT/NBR 15350:2012. Este método possibilita avaliar efeitos tóxicos de xenobióticos no desenvolvimento dos embriões de ouriço expostos às concentrações-teste. O ouriço do mar Lytechinus variegatus e a água utilizada na manutenção dos organismos e na preparação das soluções-teste foram coletados na costa do município de Guarujá, São Paulo/SP. Por ser pouco solúvel em água, a diluição inicial do Triclosan foi feita com o solvente Dimetilsulfóxido (DMSO), o qual também teve a sua toxicidade avaliada para que se tenha conhecimento da sua influência sobre o resultado. Assim, as soluções-teste abrangem os controles de água de diluição, o solvente DMSO, e as concentrações de TCS (20 µg. L-1) e DSS (200, 20 e 2 µg. L-1). Os dados obtidos foram submetidos a análises estatísticas, sendo assim avaliados quanto à normalidade, homogeneidade de variância por meio do método Chi-quadrado e teste de Barttlett, respectivamente. Posteriormente, para identificar diferenças entre as médias das concentrações testadas com relação ao controle, foi empregado o Test-t de Student com bioequivalência. Para todas as análises, diferenças significativas foram determinadas quando p < 0,05. As análises estatísticas foram realizadas através do programa TOXSTAT 3.5. RESULTADOS Desenvolvimento embriolarval (%) Os ensaios de toxicidade crônica realizados com TCS e DSS não evidenciaram efeitos adversos nas concentrações testadas. Os resultados estão apresentados na Figura 1. 100 80 60 40 20 0 Ensaio 4 Ensaio 3 Ensaio 2 Ensaio 1 UNISANTA BioScience – p. 115 - 119; Vol. 2 nº 2, (2013) Página 117 Figura 1 – Resultados dos ensaios de toxicidade com Lytechinus variegatus (Test-t de Student com bioequivalência (p<0,05)). DISCUSSÃO O controle de água do mar, o solvente DMSO e a concentração de TCS (20 µg. L-1 ) e DSS (200, 20 e 2 µg. L-1) isolados não causaram nenhum efeito biológico adverso. Para os fármacos não há legislação específica e a concentração utilizada nesse trabalho para o Triclosan é relatada no estudo feito por Aguera et al. (2003) em valores superiores no sedimento (130,7 µg. Kg-1) e nos efluentes tratados (22 µg. L-1), já o valor de surfactantes utilizado foi o mesmo permitido pela legislação e menor em duas ordens de grandeza. O método utilizado no presente estudo não foi capaz de identificar algum efeito adverso sobre o ouriço-do-mar, porém, no estudo realizado por Stefanoni & Abessa (2008), utilizando um biomarcador de estresse celular pode identificar a capacidade do surfactante LAS isolado em gerar danos na estabilidade da membrana lisossômica do mexilhão Perna perna em concentração (60 µg. L-1) abaixo do padrão estabelecido na legislação. Na avaliação feita por Cortez et al. (2013) o TCS gerou efeitos significativos no desenvolvimento embriolarval de ouriço-do-mar a partir de 0,135 mg. L-1, concentração acima das relatadas para ambinetes aquáticos, mas também foi capaz de causar estresse celular ao mexilhão Perna perna em concentração ambientalmente relevante de 12 µg. L-1. No estudo realizado por Farré et al. (2007) foi encontrado um aumento dos efeitos associados a mistura de TCS e o surfactante LAS, na inibição da bioluminescência da bactéria Vibrio fischeri. Assim, apesar da ausência de toxicidade evidenciada no presente estudo, faz-se necessário avaliar também os possíveis efeitos provenientes da mistura entre os dois compostos para uma melhor avaliação do risco ambiental em ecossistemas marinhos. CONCLUSÕES As concentrações de TCS (20 µg. L-1) e DSS (200, 20 e 2 µg. L-1) testadas não apresentaram efeitos adversos sobre o desenvolvimento embriolarval de Lytechinus variegatus; O limite estabelecido pela legislação aos surfactantes mostrou-se adequada a partir dos resultados obtidos pelo método utilizado no presente estudo; Tratando-se de efluentes domésticos, futuros estudos devem avaliar efeitos sinérgicos do TCS e DSS, uma vez que esses compostos são introduzidos em misturas complexas nos ecossistemas marinhos. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ABESSA, D. M. S.; CARR, R. S.; RACHID, B. R. F.; SOUZA, E. C. P. M.; HORTELANI, M. A.; SARKIS, J. A. Influence of a Brazilian sewage outfall on the toxicity and contamination of adjacente sediments. Marine Pollution Bulletin. v.50, p. 875-885, 2005. UNISANTA BioScience – p. 115 - 119; Vol. 2 nº 2, (2013) Página 118 ABNT – ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS – Ecotoxicologia Aquática – Toxicidade crônica de curta duração – Método de ensaio com ouriço-do-mar (Echinodermata: Echinoidea). Rio de Janeiro. 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