I – EMENTA São apresentados os métodos imunológicos que são amplamente utilizados em ambientes clínicos e de pesquisa. A disciplina visa que o aluno adquiria conhecimento das principais técnicas imunológicas, entendendo o objetivo de cada técnica e obtendo conhecimento para interpretar seus resultados e identificar o valor diagnóstico das mesmas. São enfatizados os conceitos de sensibilidade, especificidade, avidez e afinidade dos anticorpos. A disciplina contém vários tópicos de discussão, visando o exercício do aluno para identificar o valor diagnóstico dos métodos, seu correto emprego, discernimento de falso-positivos e falso negativos. II - OBJETIVOS GERAIS O aluno deverá adquirir conhecimento sobre a metodologia de cada ensaio imunológico, assim como o aluno deve obter discernimento da escolha de cada ensaio conforme a situação apresentada. O aluno também deverá ser capaz de interpretar os resultados, identificar resultados falso-positivos e falso negativos, elaborar controles, interpretar resultados. III - OBJETIVOS ESPECÍFICOS - Conhecer os principais métodos imunológicos empregados no diagnóstico e pesquisa - Saber os principais métodos que são utilizados para diagnóstico de patologias relacionadas ao sistema imunológico - Entender o conceito de especificidade, avidez e afinidade dos anticorpos - Entender o conceito de sensibilidade de um teste - Entender os conceitos de resultados falso-positivo e falos negativo - Saber montar um protocolo para diagnóstico utilizando os métodos aprendidos - Aprender o desenho experimental de um protocolo e desenhar controles desejados - Saber interpretar os resultados obtidos em cada técnica e conhecer os conceitos básicos de imunologia envolvidos IV - CONTEÚDO PROGRAMÁTICO Apresentação do curso: Relevância dos métodos imunológicos na pesquisa e diagnóstico Revisão de conceitos básicos de imunologia Aplicação dos métodos imunológicos no diagnóstico, pesquisa e epidemiologia Hematopoiese Prática/Discussão: Ampla utilização dos métodos imunológicos na pesquisa e diagnóstico Isolamento de linfócitos - Hematopoiese - Órgãos linfóides primários e secundários - Isolamento de linfócitos do sangue periférico - Isolamento de linfocitos de outros tecidos Prática: Isolamento de linfócitos do sangue periférico por gradiente de FicollHypaque e contagem de células Reconhecimento de Antígeno pelo Sistema Imune Receptores envolvidos na resposta imune inata : Padrões moleculares de microorganismos e fagocitose O complexo de histocompatibilidade principal : Moléculas de MHC Anticorpos Receptor da linfócito T e Linfócito B A geração da diversidade para o reconhecimento de antígenos Prática : Fagocitose e contagem do índice fagocítico Anticorpo - Conceitos básicos de biologia: estrutura primária, secundária , terciária e quaternária da proteína - Estrutura básica de uma imunoglobulina – Porções (Fab – papaína) e (Fc – pepsina) - Genes de imunoglobulina, recombinação e diversidade - Classes de Imunoglobulinas : variantes estruturais das imunoglobulinas e funções - Conceito de soro e anti-soro Prática : Ensaio de hemaglutinação Interação antígeno e anticorpo - Definição de anticorpo, antígeno, imunógeno, haptenos, epitopos, anti-soro - A natureza do reconhecimento do antígeno pelo anticorpo - Conceito de afinidade, avidez e especificidade - Titulação de anticorpos: conceito de sensibilidade Prática/Discussão: Diálise de equilíbrio : medida de afinidade e avidez Estudo dos anticorpos monoclonais e policlonais e suas aplicações no diagnóstico imunológico - Histórico da descoberta do anticorpo monoclonal - Técnicas de produção de anticorpos monoclonais - Utilização de anticorpos monoclonais Prática : Descrição da técnica de produção de anticorpo monoclonal e cultura de células Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como ferramentas de diagnóstico - Formação do imunocomplexo e medição de antígenos - Radioimunoensaio (RIA), ensaio imunoenzimático (ELISA) e ensaio de inibição competitiva - Anticorpos anti-imunoglobulinas: teste de Coombs - Ensaio nefelométrico - Imunoprecipitação Prática : Detecção de beta-HCG - teste de gravidez Purificação e detecção de antígenos - Cromatografia de afinidade : purificação de antígeno e anticorpo - Eletroforese SDS PAGE - Western blotting - Localização de antígenos em células e tecidos : Imuno histoquímica e Imuno fluorescência - Marcadores tumorais e diagnóstico imunológico Prática : Análise de lâminas de imunohistoquímica e interpretação de resultados Métodos de estudo das respostas dos linfócitos T - Caracterização da espeficidade, da frequência e da função dos linfócitos - Cultura em liluição limitante - Ativadores policlonais : concavalina A, fitohemaglutinina, PMA, ionimicina - Ativação de populações monoclonais - Métodos de enumeração e estudo das respostas funcionais de linfócitos T : ensaios de proliferação e corantes fluorescentes - Citometria de fluxo Prática : Apresentação da técnica de citometria de fluxo, interpretação de resultados de contagem de linfócitos T CD4 e T CD8 Métodos de estudo das respostas dos linfócitos B - Ativação de populações policlonais de linfócitos B - Análises para produção de anticorpos das células B: ELISA e ELISPOT - Dosagem de IgM e IgG no soro - marcadores de inflamação aguda e crônica Prática/Discussão: Discussão de dados referentes a dosagem de isotipos de imunoglobulinas no soro e diagnóstico de doenças Vacinação Histórico e conceito de Vacinação Imunização Passiva e Ativa Características da Vacinação: vias de administração, características do antígeno, doses e calendário de vacinação Uso de adjuvantes Prática/ Discussão : Uso terapeutico e preventivo de vacinas e Vacinação de pacientes imunocomprometidos Avaliação da resposta imune e compotência imunológica Avaliação da resposta imunológica : níveis de anticorpos e linfócitos específicos Dosagem de citocinas : ELISA, citometria e ELISPOT Diagnóstico de pacientes com imunodeficiência : avaliação da resposta humoral e celular do paciente - Diagnóstico da infecção por HIV, teste para triagem, confirmação, fluxograma diagnostico, testes para seguimento da doença Prática : Interpretação dos resultados obtidos pela técnica de ELISA e ELISPOT Avaliação de respostas de hipersensibilidade a Imunidade in vivo - Anafilaxia - papel dos mastócitos - Alergia atópica : asma, rinite, eczema, urticária, alergia alimentar - Hipersensibilidade citotóxica anticorpo dependente – tipo II – reações trasnfusionais, auto-imunologicas, medicamentosas - Hipersensibilidade mediada por imunocomplexo : Reação de Arthus, doenças decorrentes de complexos circulantes - Hipersensibilidade tipo IV : dermatite de contato - Hipersensibilidade tipo V e “inatas” - Teste da tuberculina (PPD) - Testes clínicos para avaliação da resposta alérgica Prática : Interpretação de testes cutâneos e sorológicos de alergia Diagnóstico de Doenças Auto-Imune Etiologia e patogenia das Doenças Auto imune: papel de anticorpos, fatores genéticos, evasão dos mecanismos reguladores Prática/Discussão: Valor diagnóstico dos testes para auto-anticorpos Imunologia dos transplantes - Teste imunológicos pré-transplante - prevenção da rejeição do transplante - xenoenxerto e engenharia tissular - Metodologia da PCR e tipagem HLA - revisão do dogma central da biologia molecular (DNA-RNA-proteina) Prática : PCR e interpretação de resultados pré- transplantes AVALIAÇÃO Provas escritas; Avaliação de relatórios de aulas práticas; Seminários VII – BIBLIOGRAFIA Bibliografia Básica ABBAS, A.K.; LICHTMAN, A.H. Imunologia Celular e Molecular. Tradução da 6ª Edição. Rio de Janeiro:Elsevier, 2008. JANEWAY, C..A.; TRAVERS, P. Imunobiologia - O sistema imune na saúde e na doença. 6a. edição. Artmed, 2007 ROITT, I.M.; DELVES, PJ. Fundamentos da Imunologia, 10ª Edição. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan. 20045. Bibliografia Complementar BENJAMINI, E.; COICO, R.; SUNSHINE, G. Imunologia. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 2002. GOLDSBY, R. Kuby – Imunologia. 4ª Edição. Rio de Janeiro:Revinter. 2002. STITES, D.P.; PARSLOW, T.G.; TERR, A.I. Imunologia Médica. 9ª Edição. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan. 2000. DIAS DA SILVA, W.; MOTA, I. B. Imunologia Básica e Aplicada. 5. ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 2003. ROSSETTI, M. L.; SILVA, C. M. D. ; RODRIGUES, J. J. S. Doenças Infecciosas - Diagnóstico Molecular. 1. ed. Guanabara-Koogan, 2006