Módulos

I – EMENTA
São apresentados os métodos imunológicos que são amplamente utilizados
em ambientes clínicos e de pesquisa. A disciplina visa que o aluno adquiria
conhecimento das principais técnicas imunológicas, entendendo o objetivo
de cada técnica e obtendo conhecimento para interpretar seus resultados e
identificar o valor diagnóstico das mesmas. São enfatizados os conceitos de
sensibilidade, especificidade, avidez e afinidade dos anticorpos. A disciplina
contém vários tópicos de discussão, visando o exercício do aluno para
identificar o valor diagnóstico dos métodos, seu correto emprego,
discernimento de falso-positivos e falso negativos.
II - OBJETIVOS GERAIS
O aluno deverá adquirir conhecimento sobre a metodologia de cada ensaio
imunológico, assim como o aluno deve obter discernimento da escolha de
cada ensaio conforme a situação apresentada. O aluno também deverá ser
capaz de interpretar os resultados, identificar resultados falso-positivos e
falso negativos, elaborar controles, interpretar resultados.
III - OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Conhecer os principais métodos imunológicos empregados no diagnóstico
e pesquisa
- Saber os principais métodos que são utilizados para diagnóstico de
patologias relacionadas ao sistema imunológico
- Entender o conceito de especificidade, avidez e afinidade dos anticorpos
- Entender o conceito de sensibilidade de um teste
- Entender os conceitos de resultados falso-positivo e falos negativo
- Saber montar um protocolo para diagnóstico utilizando os métodos
aprendidos
- Aprender o desenho experimental de um protocolo e desenhar controles
desejados
- Saber interpretar os resultados obtidos em cada técnica e conhecer os
conceitos básicos de imunologia envolvidos
IV - CONTEÚDO PROGRAMÁTICO
 Apresentação do curso: Relevância dos métodos imunológicos na pesquisa
e diagnóstico
Revisão de conceitos básicos de imunologia
Aplicação dos métodos imunológicos no diagnóstico, pesquisa e epidemiologia
Hematopoiese
Prática/Discussão: Ampla utilização dos métodos imunológicos na pesquisa e
diagnóstico
 Isolamento de linfócitos
- Hematopoiese
- Órgãos linfóides primários e secundários
- Isolamento de linfócitos do sangue periférico
- Isolamento de linfocitos de outros tecidos
Prática: Isolamento de linfócitos do sangue periférico por gradiente de FicollHypaque e contagem de células
 Reconhecimento de Antígeno pelo Sistema Imune
Receptores envolvidos na resposta imune inata : Padrões moleculares de
microorganismos e fagocitose
O complexo de histocompatibilidade principal : Moléculas de MHC
Anticorpos
Receptor da linfócito T e Linfócito B
A geração da diversidade para o reconhecimento de antígenos
Prática : Fagocitose e contagem do índice fagocítico
 Anticorpo
- Conceitos básicos de biologia: estrutura primária, secundária , terciária e
quaternária da proteína
- Estrutura básica de uma imunoglobulina – Porções (Fab – papaína) e (Fc –
pepsina)
- Genes de imunoglobulina, recombinação e diversidade
- Classes de Imunoglobulinas : variantes estruturais das imunoglobulinas e
funções
- Conceito de soro e anti-soro
Prática : Ensaio de hemaglutinação
 Interação antígeno e anticorpo
- Definição de anticorpo, antígeno, imunógeno, haptenos, epitopos, anti-soro
- A natureza do reconhecimento do antígeno pelo anticorpo
- Conceito de afinidade, avidez e especificidade
- Titulação de anticorpos: conceito de sensibilidade
Prática/Discussão: Diálise de equilíbrio : medida de afinidade e avidez
 Estudo dos anticorpos monoclonais e policlonais e suas aplicações no
diagnóstico imunológico
- Histórico da descoberta do anticorpo monoclonal
- Técnicas de produção de anticorpos monoclonais
- Utilização de anticorpos monoclonais
Prática : Descrição da técnica de produção de anticorpo monoclonal e cultura
de células
 Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como
ferramentas de diagnóstico
- Formação do imunocomplexo e medição de antígenos
- Radioimunoensaio (RIA), ensaio imunoenzimático (ELISA) e ensaio de
inibição competitiva
- Anticorpos anti-imunoglobulinas: teste de Coombs
- Ensaio nefelométrico
- Imunoprecipitação
Prática : Detecção de beta-HCG - teste de gravidez
 Purificação e detecção de antígenos
- Cromatografia de afinidade : purificação de antígeno e anticorpo
- Eletroforese SDS PAGE
- Western blotting
- Localização de antígenos em células e tecidos : Imuno histoquímica e Imuno
fluorescência
- Marcadores tumorais e diagnóstico imunológico
Prática : Análise de lâminas de imunohistoquímica e interpretação de
resultados
 Métodos de estudo das respostas dos linfócitos T
- Caracterização da espeficidade, da frequência e da função dos linfócitos
- Cultura em liluição limitante
- Ativadores policlonais : concavalina A, fitohemaglutinina, PMA, ionimicina
- Ativação de populações monoclonais
- Métodos de enumeração e estudo das respostas funcionais de linfócitos T :
ensaios de proliferação e corantes fluorescentes
- Citometria de fluxo
Prática : Apresentação da técnica de citometria de fluxo, interpretação de
resultados de contagem de linfócitos T CD4 e T CD8
 Métodos de estudo das respostas dos linfócitos B
- Ativação de populações policlonais de linfócitos B
- Análises para produção de anticorpos das células B: ELISA e ELISPOT
- Dosagem de IgM e IgG no soro - marcadores de inflamação aguda e crônica
Prática/Discussão: Discussão de dados referentes a dosagem de isotipos de
imunoglobulinas no soro e diagnóstico de doenças
 Vacinação
Histórico e conceito de Vacinação
Imunização Passiva e Ativa
Características da Vacinação: vias de administração, características do
antígeno, doses e calendário de vacinação
Uso de adjuvantes
Prática/ Discussão : Uso terapeutico e preventivo de vacinas e Vacinação de
pacientes imunocomprometidos
 Avaliação da resposta imune e compotência imunológica
Avaliação da resposta imunológica : níveis de anticorpos e linfócitos
específicos
Dosagem de citocinas : ELISA, citometria e ELISPOT
Diagnóstico de pacientes com imunodeficiência : avaliação da resposta
humoral e celular do paciente
- Diagnóstico da infecção por HIV, teste para triagem, confirmação, fluxograma
diagnostico, testes para seguimento da doença
Prática : Interpretação dos resultados obtidos pela técnica de ELISA e
ELISPOT
 Avaliação de respostas de hipersensibilidade
a Imunidade in vivo
- Anafilaxia - papel dos mastócitos
- Alergia atópica : asma, rinite, eczema, urticária, alergia alimentar
- Hipersensibilidade citotóxica anticorpo dependente – tipo II – reações
trasnfusionais, auto-imunologicas, medicamentosas
- Hipersensibilidade mediada por imunocomplexo : Reação de Arthus, doenças
decorrentes de complexos circulantes
- Hipersensibilidade tipo IV : dermatite de contato
- Hipersensibilidade tipo V e “inatas”
- Teste da tuberculina (PPD)
- Testes clínicos para avaliação da resposta alérgica
Prática : Interpretação de testes cutâneos e sorológicos de alergia
 Diagnóstico de Doenças Auto-Imune
Etiologia e patogenia das Doenças Auto imune: papel de anticorpos, fatores
genéticos, evasão dos mecanismos reguladores
Prática/Discussão: Valor diagnóstico dos testes para auto-anticorpos
 Imunologia dos transplantes
- Teste imunológicos pré-transplante
- prevenção da rejeição do transplante
- xenoenxerto e engenharia tissular
- Metodologia da PCR e tipagem HLA - revisão do dogma central da biologia
molecular (DNA-RNA-proteina)
Prática : PCR e interpretação de resultados pré- transplantes
AVALIAÇÃO
Provas escritas; Avaliação de relatórios de aulas práticas; Seminários
VII – BIBLIOGRAFIA
Bibliografia Básica
ABBAS, A.K.; LICHTMAN, A.H. Imunologia Celular e Molecular. Tradução da 6ª
Edição. Rio de Janeiro:Elsevier, 2008.
JANEWAY, C..A.; TRAVERS, P. Imunobiologia - O sistema imune na saúde e
na doença. 6a. edição. Artmed, 2007
ROITT, I.M.; DELVES, PJ. Fundamentos da Imunologia, 10ª Edição. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan. 20045.
Bibliografia Complementar
BENJAMINI, E.; COICO, R.; SUNSHINE, G. Imunologia. 4. ed. Rio de Janeiro:
Guanabara-Koogan, 2002.
GOLDSBY, R. Kuby – Imunologia. 4ª Edição. Rio de Janeiro:Revinter. 2002.
STITES, D.P.; PARSLOW, T.G.; TERR, A.I. Imunologia Médica. 9ª Edição. Rio
de Janeiro: Guanabara-Koogan. 2000.
DIAS DA SILVA, W.; MOTA, I. B. Imunologia Básica e Aplicada. 5. ed. Rio de
Janeiro: Guanabara-Koogan, 2003.
ROSSETTI, M. L.; SILVA, C. M. D. ; RODRIGUES, J. J. S. Doenças Infecciosas
- Diagnóstico Molecular. 1. ed. Guanabara-Koogan, 2006