Apresentação do PowerPoint
Propaganda
31/10/2016 Agentes Químicos e Físicos no Controle Microbiano e Biossegurança no Cultivo de Bactérias Profa Dra Cristina Alvarez Martinez Depto Genética – IB Lab de Genética de Bactérias E-mail: [email protected] Termos Importantes: • Esterilização: eliminar todas as formas de vida microbianas → calor, filtração e UV → físicos • Desinfecção: destruição de microrganismos em ambientes e objetos → químicos ou físicos • Antissepsia: destruição de microrganismos em tecidos vivos → agentes químicos 1 31/10/2016 Termos Importantes: Bactericida: mata as bactérias (fungicida, viricida) Bacteriostático: inibem o crescimento Taxa de Morte Microbiana Constante para um determinado tratamento Ex: 90% por minuto de tratamento 2 31/10/2016 Taxa de Morte Microbiana: Fatores Críticos 1) Número inicial de microrganismos: Nível de Contaminação! 2) Características do microrganismos: conhecer as possíveis fontes de contaminação no ambiente de trabalho! endosporos ? vírus envelopado? 3) Tempo de Exposição, concentração do agente 4) Ambiente: Temperatura Presença de Matéria orgânica: IMPORTÂNCIA DE LIMPAR ANTES DA DESINFECÇÃO!!!! Agentes Físicos no Controle Microbiano em Laboratório 1) Calor: - Calor úmido: autoclave e fervura - Calor seco: estufas, incineração, bico de Bunsen 2) Filtração: - Para material sensível a temperatura - Cabines de Segurança Biológica 3) Radiação - UV: Cabines de Segurança Biológica 3 31/10/2016 Calor Úmido: fervura 1) Fervura: elimina a maioria dos microrganismos, mas não todos!! Ex: vírus da hepatite precisa de mais de 30 min E os endósporos? Sobrevivem por mais de 20 hs!!! Calor Úmido: autoclave - Vapor sob pressão: ESTERILIZAÇÃO - Atinge temperaturas mais elevadas que o ponto de ebulição da água: 121°C - 10-15 minutos suficiente para esterilizar até formas mais resistentes 4 31/10/2016 Calor Úmido: autoclave Calor Úmido: autoclave Materiais sólidos e grandes volumes de líquido precisam de tempo extra: mais difícil de atingir temperaturas 5 31/10/2016 Autoclave: Cuidados para eficiência - Limpar antes os materiais - Embalar adequadamente - Tempo apenas após a temperatura atingir 121°C - Distribuir o material permitindo que o vapor entre em contato com todo o material. Autoclave: controle de eficiência Indicadores Químicos Indicadores Biológicos: discos de papel impregnados com esporos de Geobacillus stearothermophilus ATCC7953; 6 31/10/2016 Calor seco - Incineração: eliminação de material biológico contaminado, lixo hospitalar, carcaças de animais - Ar quente – Forno - transmissão de calor menos eficiente em ambiente seco: Seco: 170°C por 2 h Calor seco Chama direta: alça de inoculação Área estéril de ≈10 cm de raio 7 31/10/2016 Filtração - Material sensível a altas temperaturas - Uso de membranas filtrantes - Tamanho do poro varia: Bactéria: 0,22 µm ou 0,45 µm Vírus, Micoplasmas e espiroquetas: 0,01 µm (vírus tem de 0,025-0,2 µm) Radiação UV - Radiação Não-Ionizante: UV → parada na replicação do DNA Pouco penetrante!!!! contato direto Usada para obter ambientes estéreis 8 31/10/2016 Cabines de Segurança Biológica Proteção em procedimentos com potencial de produção de aerossóis: - Agitar - Verter - Pingar - Misturar - Vortexar - Abertura de recipientes com pressão interna maior que a externa Partículas não visíveis a olho nu que podem carregar número alto de microrganismos Cabines de Segurança Biológica (CSB) x Fluxo Laminar • Usa filtro de esterilização: HEPA • Retenção de 99.97% das partículas de 0.3μm de diâmetro e 99.99% das partículas maiores. Fluxo Laminar: Ar que entra é filtrado Proteção ao produto X CSB: Ar que é expelido é filtrado Proteção ao manipulador Proteção ao ambiente CSB I, II, III 9 31/10/2016 Cabines de Segurança Biológica – CSB I Apenas o ar que sai é filtrado Não protege o produto Cabines de Segurança Biológica – CSB II Filtração ocorre na entrada e saída do ar Protege o produto 4 tipos A1, A2, B1, B2 10 31/10/2016 Cabines de Segurança Biológica – CSB III Agentes Grupo de Risco 4 Selagem das perfurações Luvas acopladas Ar expelido passa por 2 filtros HEPA CSB II: NB-2 quando há risco de aerossol NB-3 CSBIII: NB-4 Cabines de Segurança Biológica: Cuidados - Evitar circulação de pessoas em torno da cabine. - Ligar a cabine e a luz UV 10 a 15 minutos antes de seu uso. - Desinfectar a superfície interior com gaze estéril embebida em álcool etílico ou isopropílico a 70%. - Lavar as mãos e antebraços com água e sabão. - Passar álcool etílico ou isopropílico a 70% nas mãos e antebraços. - Limpar todos os objetos antes de introduzi-los na cabine. - Minimizar os movimentos dentro da cabine. - Colocar os recipientes para descarte de material no fundo da área de trabalho - NÃO USAR BICO DE BUNSEN - Conduzir as manipulações no centro da área de trabalho. - Limpar a cabine, ao término do uso, com gaze estéril embebida em álcool etílico ou isopropílico à 70%. - Deixar a cabine ligada 10 a 15 minutos, antes de desligá-la. 11 31/10/2016 Agentes Químicos Desinfecção e antissepsia Diferentes suscetibilidades de acordo com o microrganismo Cloro é o mais eficiente para uso geral Efetividade: um bom agente químico • Efetivo contra diferentes tipos de microrganismos, em baixas concentrações e na presença de matéria orgânica • Não tóxico e não corrosivo • Uso abusivo: problemas ambientais e desenvolvimento de resistência 12 31/10/2016 Cloro Água sanitária: hipoclorito de sódio (NaClO) Não elimina esporos Atividade muito reduzida pela presença de matéria orgânica: LIMPAR ANTES!!! Recomendação de Uso como Desinfetante e para mergulhar material contaminado: 1g/L cloro ativo: pouco contaminadas 5g/L: muito contaminadas Água sanitária: 50 g/L → diluir 1:50 ou 1:10 Usar em área ventilada! (gás tóxico) Não misturar com ácido Compostos fenólicos Danos a membranas lipídicas Ativos na presença de compostos orgânicos: pus, saliva, fezes Ativos contra micobactérias Cresol (Lysol):desinfetantes Controle cirúrgico Sabonetes antibacterianos, pasta de dente 13 31/10/2016 Iodo Antisséptico Eficaz contra muitos vírus e endosporos Tintura de iodo: em solução com álcool, maior eficiência Usado para feridas Alcoóis Eliminam bactérias , fungos e vírus Não eficazes contra endosporos e alguns vírus Não servem em feridas!! Mais eficientes em mistura com água Misturados a outros agentes: tinturas (maior eficiência) 14 31/10/2016 Agentes de Superfície: surfactantes Sabões e detergentes: remoção mecânica (degerminação) de microrganismos Emulsificam gordura da pele Antissepsia: Lavagem de mãos e antebraços com água e sabão Limpeza com álcool 70% Antes e depois de iniciar o trabalho Não são eliminados na autoclave Uso de proteases, incineração de carcaças Pseudomonas e Burkholderia 15 31/10/2016 Fonte • CIBIO – IB/UNICAMP (www.ib.unicamp.br/cibio/cartilha) • Manual de Segurança Biológica em Laboratórios – OMS - 3ª edição • Sistema de Informação em Biossegurança – FIOCRUZ (http://www.fiocruz.br/biosseguranca/Bis/StartBIS.htm) 16
