Apresentação do PowerPoint

31/10/2016
Agentes Químicos e Físicos no
Controle Microbiano e Biossegurança
no Cultivo de Bactérias
Profa Dra Cristina Alvarez Martinez
Depto Genética – IB
Lab de Genética de Bactérias
E-mail: [email protected]
Termos Importantes:
• Esterilização: eliminar todas as formas de vida microbianas → calor,
filtração e UV → físicos
• Desinfecção: destruição de microrganismos em ambientes e objetos
→ químicos ou físicos
• Antissepsia: destruição de microrganismos em tecidos vivos →
agentes químicos
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Termos Importantes:
Bactericida: mata as bactérias (fungicida, viricida)
Bacteriostático: inibem o crescimento
Taxa de Morte Microbiana
Constante para um determinado tratamento
Ex: 90% por minuto de tratamento
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Taxa de Morte Microbiana: Fatores Críticos
1) Número inicial de microrganismos: Nível de Contaminação!
2) Características do microrganismos: conhecer as possíveis fontes de contaminação
no ambiente de trabalho!
endosporos ?
vírus envelopado?
3) Tempo de Exposição, concentração do agente
4) Ambiente:
Temperatura
Presença de Matéria orgânica: IMPORTÂNCIA DE LIMPAR ANTES DA DESINFECÇÃO!!!!
Agentes Físicos no Controle Microbiano em Laboratório
1) Calor:
- Calor úmido: autoclave e fervura
- Calor seco: estufas, incineração, bico de Bunsen
2) Filtração:
- Para material sensível a temperatura
- Cabines de Segurança Biológica
3) Radiação
- UV: Cabines de Segurança Biológica
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Calor Úmido: fervura
1) Fervura: elimina a maioria dos microrganismos, mas não todos!!
Ex: vírus da hepatite precisa de mais de 30 min
E os endósporos? Sobrevivem por mais de 20 hs!!!
Calor Úmido: autoclave
- Vapor sob pressão: ESTERILIZAÇÃO
- Atinge temperaturas mais elevadas que o ponto de ebulição da
água: 121°C
- 10-15 minutos suficiente para esterilizar até formas mais resistentes
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Calor Úmido: autoclave
Calor Úmido: autoclave
Materiais sólidos e grandes volumes de líquido precisam de tempo
extra: mais difícil de atingir temperaturas
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Autoclave: Cuidados para eficiência
- Limpar antes os materiais
- Embalar adequadamente
- Tempo apenas após a temperatura atingir 121°C
- Distribuir o material permitindo que o vapor entre em contato com
todo o material.
Autoclave: controle de eficiência
Indicadores Químicos
Indicadores Biológicos:
discos de papel impregnados com esporos de Geobacillus stearothermophilus ATCC7953;
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Calor seco
- Incineração: eliminação de material biológico contaminado, lixo
hospitalar, carcaças de animais
- Ar quente – Forno - transmissão de calor menos eficiente em
ambiente seco:
Seco: 170°C por 2 h
Calor seco
Chama direta: alça de inoculação
Área estéril de ≈10 cm de raio
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Filtração
- Material sensível a altas temperaturas
- Uso de membranas filtrantes
- Tamanho do poro varia:
Bactéria: 0,22 µm ou 0,45 µm
Vírus, Micoplasmas e espiroquetas: 0,01 µm (vírus tem de 0,025-0,2 µm)
Radiação UV
- Radiação Não-Ionizante: UV → parada na replicação do DNA
Pouco penetrante!!!! contato direto
Usada para obter ambientes estéreis
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Cabines de Segurança Biológica
Proteção em procedimentos com potencial de produção de aerossóis:
-
Agitar
-
Verter
-
Pingar
-
Misturar
-
Vortexar
-
Abertura de recipientes com pressão interna maior que a externa
Partículas não visíveis a olho nu que podem carregar número alto de microrganismos
Cabines de Segurança Biológica (CSB) x Fluxo Laminar
•
Usa filtro de esterilização: HEPA
•
Retenção de 99.97% das partículas de 0.3μm de diâmetro e 99.99%
das partículas maiores.
Fluxo Laminar: Ar que entra é filtrado
Proteção ao produto
X
CSB: Ar que é expelido é filtrado
Proteção ao manipulador
Proteção ao ambiente
CSB I, II, III
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Cabines de Segurança Biológica – CSB I
Apenas o ar que sai é filtrado
Não protege o produto
Cabines de Segurança Biológica – CSB II
Filtração ocorre na entrada e saída do ar
Protege o produto
4 tipos A1, A2, B1, B2
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Cabines de Segurança Biológica – CSB III
Agentes Grupo de Risco 4
Selagem das perfurações
Luvas acopladas
Ar expelido passa por 2 filtros HEPA
CSB II: NB-2 quando há risco de aerossol
NB-3
CSBIII: NB-4
Cabines de Segurança Biológica: Cuidados
- Evitar circulação de pessoas em torno da cabine.
- Ligar a cabine e a luz UV 10 a 15 minutos antes de seu uso.
- Desinfectar a superfície interior com gaze estéril embebida em álcool etílico ou isopropílico
a 70%.
- Lavar as mãos e antebraços com água e sabão.
- Passar álcool etílico ou isopropílico a 70% nas mãos e antebraços.
- Limpar todos os objetos antes de introduzi-los na cabine.
- Minimizar os movimentos dentro da cabine.
- Colocar os recipientes para descarte de material no fundo da área de trabalho
- NÃO USAR BICO DE BUNSEN
- Conduzir as manipulações no centro da área de trabalho.
- Limpar a cabine, ao término do uso, com gaze estéril embebida em álcool etílico ou
isopropílico à 70%.
- Deixar a cabine ligada 10 a 15 minutos, antes de desligá-la.
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Agentes Químicos
Desinfecção e antissepsia
Diferentes suscetibilidades de acordo com o microrganismo
Cloro é o mais eficiente para uso geral
Efetividade: um bom agente químico
•
Efetivo contra diferentes tipos de microrganismos, em baixas concentrações e na
presença de matéria orgânica
•
Não tóxico e não corrosivo
•
Uso abusivo: problemas ambientais e desenvolvimento de resistência
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Cloro
Água sanitária: hipoclorito de sódio (NaClO)
Não elimina esporos
Atividade muito reduzida pela presença de matéria orgânica: LIMPAR ANTES!!!
Recomendação de Uso como Desinfetante e para mergulhar material contaminado:
1g/L cloro ativo: pouco contaminadas
5g/L: muito contaminadas
Água sanitária: 50 g/L → diluir 1:50 ou 1:10
Usar em área ventilada! (gás tóxico)
Não misturar com ácido
Compostos fenólicos
Danos a membranas lipídicas
Ativos na presença de compostos orgânicos: pus, saliva, fezes
Ativos contra micobactérias
Cresol (Lysol):desinfetantes
Controle cirúrgico
Sabonetes antibacterianos, pasta de dente
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Iodo
Antisséptico
Eficaz contra muitos vírus e endosporos
Tintura de iodo: em solução com álcool, maior eficiência
Usado para feridas
Alcoóis
Eliminam bactérias , fungos e vírus
Não eficazes contra endosporos e alguns vírus
Não servem em feridas!!
Mais eficientes em mistura com água
Misturados a outros agentes: tinturas (maior eficiência)
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Agentes de Superfície: surfactantes
Sabões e detergentes:
remoção mecânica (degerminação) de microrganismos
Emulsificam gordura da pele
Antissepsia:
Lavagem de mãos e antebraços com água e sabão
Limpeza com álcool 70%
Antes e depois de iniciar o trabalho
Não são eliminados na autoclave
Uso de proteases, incineração de carcaças
Pseudomonas e Burkholderia
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Fonte
• CIBIO – IB/UNICAMP (www.ib.unicamp.br/cibio/cartilha)
• Manual de Segurança Biológica em Laboratórios – OMS - 3ª edição
• Sistema de Informação em Biossegurança – FIOCRUZ
(http://www.fiocruz.br/biosseguranca/Bis/StartBIS.htm)
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