RTF - FeSBE

- Setor 27 - Oncologia Experimental
Número Final: 27.001
PARTICIPATION
OF
REACTIVE
OXYGEN
SPECIES
IN
THE
PHOTODESTRUCTION
OF
CELLS
MEDIATED
BY
OCTAETHYLPORPHYRIN AND VANADYL OCTAETHYLPORPHYRIN.
Ribeiro, J. N. ** ; Atilio Jorge, R. ; Instituto de Química, UNICAMP .
Objetivo: Photodynamic therapy is a clinical treatment that employs a combination of a
photosensitizer, oxygen, and light for the therapy of cancer. This technique is characterized
by the systemic administration of photosensitizer, which is preferentially retained by
tumoral tissue. The subsequent irradiation, with visible light, provokes excitation of
photosensitizer resulting in the production of reactive oxygen species (ROS). These species
provoke a sequence of oxidative events resulting in cancer cell death by apoptosis. In this
study we investigated the participation of singlet oxygen ( 1O2) and the hydroxyl radical
(·OH) in the photodestruction of human red blood cells (HRBC) mediated by
octaethylporphyrin (OEP), vanadyl octaethylporphyrin (VOOEP), and light. The
photodestruction of HRBC was used as an in vitro model for evaluating photosensitizing
properties of OEP and VOOEP.
Métodos e Resultados: The solution of 0,7% HRBC was prepared in 0.2M phosphate
buffer saline pH 7.4 containing 10 mM OEP or VOOEP. This solution was saturated with
oxygen and irradiated with mercury light (filter 400-600 nm), during 60 minutes. This
irradiation was performed in the presence or absence of L-histidine, azide (1O2 scavengers),
and mannitol (·OH scavenger). The photodestruction of HRBC was monitored, in intervals of
10 minutes, by way of absorbance readings (at 542 nm) of haemoglobin released from
damaged HRBC. The results indicated that OEP and VOOEP caused photodestruction of
HRBC. This event was significantly reduced by L-histidine and azide and partly inhibited by
mannitol.
Conclusões: The OEP and VOOEP caused photodestruction of HRBC in the presence of light
and oxygen. This process was inhibited by 1O2 and ·OH scavengers indicating the direct
involvment of 1O2 and ·OH in HRBC photodestruction.
Apoio Financeiro: CAPES , FAPESP , CNPq
Número Final: 27.002
INVOLVEMENT OF SINGLET OXYGEN IN THE PHOTOTOXIC LYSIS OF
ERYTHROCYTES INDUCED BY meso-TETRAMESITYLPOPHYRIN. Ribeiro,
J. N. ** ; Atilio Jorge, R. ; Instituto de Química, UNICAMP .
Objetivo: Photodynamic therapy is a cytotoxic clinical treatment that requires molecular
oxygen, photosensitizer compound, and visible light for the therapy of several oncological,
cardiovascular, dermatological, and ophthalmic diseases. This technique is characterized by
the systemic administration of photosensitizer, which is preferentially retained by tumoral
tissue. The photodestruction of the tumor is performed after visible light incidence. The
treatment results in the production of reactive oxygen species (ROS) that provoke a
sequence of oxidative events resulting in cancer cell death and eventual tumor ablation. In
this work we investigated the involvement of singlet oxygen ( 1O2) in the phototoxic lysis of
human erythrocytes induced by meso-tetramesitylporphyrin (m-TMP) and light. The
photolysis of erythrocytes was used as an in vitro model for evaluating photodynamic
activity of m-TMP.
Métodos e Resultados: The solution of 0,5% erythrocytes was prepared in 0.2M
phosphate buffer saline pH 7.4 containing 10 mM m-TMP. This solution was saturated with
oxygen and irradiated with mercury light (filter 400-600 nm), during 60 minutes. This
irradiation was performed in the presence or absence of L-histidine, azide (1O2 scavengers),
and deuterium oxide (D2O). The photolysis of erythrocytes was monitored, in intervals of 10
minutes, by way of absorbance readings (at 542 nm) of haemoglobin released from
damaged erythrocytes. The results indicated that m-TMP caused lyses of erythrocytes in the
presence of light and oxygen. This event was increased by D 2O and significantly reduced by
L-histidine and azide.
Conclusões: The m-TMP caused photolysis of erythrocytes in the presence of light and
oxygen. This process was increased by D 2O and inhibited by 1O2 scavengers indicating that
1
O2 is responsible for m-TMP Phototoxicity.
Apoio Financeiro: CAPES , FAPESP , CNPq
Número Final: 27.003
EFFECT OF PSORALEN PLUS ULTRAVIOLET A RADIATION ON IN
VITRO GROWTH OF MELANOMA CELLS. Bretas, M. L. * ; Carneiro Leite, V. ** ; Paula,
F. V. de * ; Duarte, D. T. * ; Santos, R. F. ; Guillo, L. A. ; Biomedicina, UFGO ; Ciências Fisiológicas,
UFGO .
Objetivo: A critical factor in the success of chemotherapeutic agents is the ability to induce
apoptosis in the malignant cell population. Melanoma cells are resistant to apoptosis induced
by currently anticancer drugs. The combination of 8-methoxypsoralen (8-MOP) and UVA
(320-400 nm) radiation termed PUVA therapy is widely used for the management of
psoriasis and cutaneous T-cell lymphoma. The effectiveness of PUVA treatment has been
attributed to its ability to induce apoptosis. The goal of this research was to assess whether
PUVA is effective in inducing apoptosis in an in vitro model of metastatic human melanoma.
Métodos e Resultados: The human melanoma cell line SK-MEL-37 stablished from
metastatic melanoma nodules was a gift from Dr.L.J.Old (Memorial Sloan-Ketterin Cancer
Center, N.Y.). Cells were treated with different concentrations of 8-MOP for 1h in the dark at
37oC, exposed to UVA light (0.3 J/cm2) followed by a recovery period of 24h in fresh
medium. Using the MTT assay, we found inhibition of proliferation (IC 50 55M). In order to
examine whether PUVA treatment induced DNA fragmentation, cells were lysed and DNA
was extracted and analysed by 1.0% agarose gel electrophoresis. Apoptosis-induced DNA
fragmentation was observed in PUVA-treated cells. Caspase-8 activation was assessed using
the ApoAlert assay (Clontech) and results demonstrated that caspase-8 enzymatic activity
was present in lysates of PUVA-treated cells. Immunoblotting analyses showed that PUVA
induced a specific decrease in the levels of a protein of 130 kDa which corresponds to
inducible nitric oxide synthase (iNOS
Conclusões: The treatment of SK-MEL-37 melanoma cells with PUVA caused cell death,
apoptosis induction and inhibition in the level of iNOS protein expression. Since
constitutively expressed iNOS represents a source of endogenous nitric oxide acting as a
survival factor for melanoma cells, the inhibition of iNOS by PUVA-treatment might provide
a therapeutic window to explore.
Apoio Financeiro: CNPq , PIBIC , FUNAPE , PRPPG , UFGO
Número Final: 27.004
INFLUÊNCIA DE FATORES ASTROCITÁRIOS NA SUPEREXPRESSÃO DE
PROTEÍNAS MDR EM LINHAGEM DE TUMOR DE PULMÃO RESISTENTE:
UM MODELO DE METÁSTASE CEREBRAL IN VITRO. Pinto de Faria, G. ** ; Moura
Neto, V. ; Maia, R. ; Hematologia, INCa ; Anatomia, UFRJ ; Anatomia - CCS, UFRJ .
Objetivo: Resistência a Múltiplas Drogas (MDR) em células tumorais envolve a
superexpressão de proteínas transportadoras da família ABC: a glicoproteína-P (gpP) e a
proteína relacionada a MDR (MRP). Existem evidências crescentes de que a expressão
elevada de MRP possa ser um fator envolvido no fenótipo MDR em tumores cerebrais.
Entretanto, a expressão de proteínas MDR é raramente estudada em metástases cerebrais.
Considerando que o tumor de pulmão se apresenta como tumor primário de maior
incidência em metástases cerebrais, nós estamos estudando a influência do microambiente
neural sobre a expressão das proteínas MDR em uma linhagem de tumor de pulmão
resistente.
Métodos e Resultados: Nós desenvolvemos um modelo experimental com o objetivo de
mimetizar uma metástase cerebral in vitro, utilizando uma linhagem humana resistente de
tumor de pulmão de pequenas células (GLC4 ADR), apresentando superexpressão de MRP.
Nós cultivamos a linhagem GLC4 ADR durante 4 dias in vitro em três diferentes condições:
(1) a cultura controle com as células GLC4 ADR, as quais sempre crescem em suspensão,
(2) a cultura com as células GLC4 ADR cultivadas sob a matriz extracelular (MEC) de
astrócitos corticais de rato e (3) a cultura de células GLC4 ADR cultivadas com meio
condicionado (MC) de astrócitos. Após a incubação, nós analisamos a expressão de MRP por
citometria de fluxo. Nossos resultados mostraram que a cultura controle GLC4 ADR
apresentou uma média de intensidade de fluorescência (MIF) igual a 2.0. Em paralelo, as
células cultivadas com a MEC astrocitária (2.3) apresentaram menor MIF quando
comparadas aquelas incubadas com o MC de astrócitos (3.2).
Conclusões: Nossos resultados sugerem que a MEC e fatores solúveis secretados pelos
astrócitos poderia influenciar o aumento na expressão do fenótipo MDR, podendo ter um
papel relevante na resistência aos quimioterápicos em metástases cerebrais.
Apoio Financeiro: CAPES , INCa , PRONEX
Número Final: 27.005
ENHANCED
BLOOD-TUMOUR
BARRIER
PERMEABILITY
BY
8
9
SAR-[D-PHE ]DES-ARG BK,
A
METABOLICALLY
RESISTANT
BRADYKININ B1 AGONIST IN RAT C6 GLIOMA MODEL. Soares, B. L. * ;
Fernandes Cardoso, R. C. * ; Bianchin, M. ; Walz, R. ; Alvarez-Silva, M. ; Sakamoto, A. C. ; Trentin, A. G.
; Nicolau, M. ; Biologia, UFSC ; Biologia Celular - Embriologia e Genética, UFSC ; Ciências
Fisiológicas - CCB, UFSC ; Fisiologia, UFSC ; FMRP, USP ; Neurologia, USP .
Objetivo: The bradykinin (BK) analog, Sar-[D-Phe8]des-Arg9BK (SAR), was characterized in
a series of in vivo experiments to prove its selectivity as a B1 agonist. The molecular
addition of some aminoacids in its aminoterminal portion gives it some metabolic resistance
that means protection against enzimatic degradation and longer activity into blood
circulation. It is well known that while BK B2 agonists increase plasma protein extravasation
(PPE) in brain tumours, the BK B1 agonists already tested are unable to produce this effect.
The objective in this work was to examine the effect of this B1 agonist the C6 rat glioma
model.
Métodos e Resultados: C6 glioma cells were harvested in DMEM, with 5% SBF. Then, C6
glioma cells (1 x 105 cells), or cell vehicle were stereotaxically implanted in the right brain
hemisphere of Wistar rats. The animals received intravenously infusion of saline (Sal), BK
(100nM/kg) or SAR (100nM/Kg) 17 days later and were sacrificed to determine PPE by
Evans blue method. For comparisons we used ANOVA and student t test in graph pad prism
software. SAR administration enhanced 135 percent of PPE in C6 rat brain glioma in
comparison to saline or BK (p=0.001). The pre-administration of the bradykinin B1
antagonist [Leu8]-des-Arg blocked the SAR induced PPE in the tumour area, leading PPE to
control levels. In this different group there were also compared PPE in the right (91.90 ±
7.893, n=9) and left (21.77 ± 3.005 n=6) hemispheres (C6-inoculated + SAR group) p
value was of 0.0001.
Conclusões: Our data suggests that B1 receptor modulates PPE in the blood tumour barrier
of C6 glioma. The possible role of SAR use in synergistic chemotherapy of gliomas deserves
further studies.
Apoio Financeiro: CAPES , CNPq , FAPESP
Número Final: 27.006
ANÁLISE DE MOLÉCULAS ENVOLVIDAS NO CICLO CELULAR, INVASÃO
E MIGRAÇÃO DE CÉLULAS C6 IN VIVO. Benadiba, M. ** ; Colquhoun, A. ; Biologia
Celular e do Desenvolvimento, Instituto de Ciências Biomédicas ; Biologia Celular e do
Desenvolvimento, USP .
Objetivo: Analisar a expressão gênica in vivo de moléculas envolvidas no ciclo celular,
invasão, migração e angiogênese de células C6 de glioma de rato, modelo esse referente ao
Glioblastoma Multiforme, que é a forma mais maligna e invasiva dos gliomas.
Métodos e Resultados: A metodologia utilizada foi a implantação estereotáxica das células
C6 no cérebro de ratos adultos Wistar, permanecendo durante 28 dias com o tumor.
Posteriormente realiza-se a retirada macroscópica do tumor e do contra-lateral. Este último
refere-se ao nosso controle interno, que é tirado do hemisfério oposto ao do tumor. Assim,
é feita a análise em RT-PCR (Reação em Cadeia da Polimerase – Transcriptase Reversa).
Contudo obtivemos resultados que comprovam que este modelo de glioma é capaz de
expressar moléculas específicas como Metaloprotease-2, Ciclooxigenase-2, Brevican (nas
formas: secretada e a ancorada ao Glicosilfosfatidilinositol-GPI), p53, p21, p16, ciclina D1,
pRb, E2F-1, nm23a e b, bcl-2, VEGF-A e flt-1. Também vimos que este modelo não é capaz
de expressar a enzima Metaloprotease-9.
Conclusões: Com estes resultados concluímos que a expressão gênica dessas moléculas
contribui para a alta capacidade invasiva, migratória, angiogênica e proliferativa dessas
células tumorais. Contudo, são resultados importantes para podermos dar continuidade aos
nossos estudos envolvendo tratamentos promissores para este tumor. Apoio Financeiro:
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) – bolsa nº 03/01619-2;
projeto nº 02/13121-6
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.007
AUMENTO DO ÍNDICE TERAPÊUTICO DO PACLITAXEL ATRAVÉS DA
ASSOCIAÇÃO COM UMA MICROEMULSÃO RICA EM COLESTEROL
(LDE) Rodrigues, D. G. ; Fernandes, D. C. ** ; Valduga, C. J. ; Heitmann Mares Azevedo, C. ** ; Lo
Prete, A. C. ** ; Maria, D. A. ** ; Célia Martinez Ibañez, O. ; Maranhão, R. C. ; Imunogenética,
BUTANTAN ; Lípides, InCor - HCFMUSP ; Genética, INSTITUTO BUTANTAN ; Análises
Clínicas, USP .
Objetivo: Depois de ser injetada na circulação, uma microemulsão rica em colesterol (LDE)
é captada pelos receptores da lipoproteína de baixa densidade (LDL), os quais tem sua
expressão aumentada em grande parte das células neoplásicas. Portanto, a LDE pode ser
utilizada como veículo no direcionamento de agentes quimioterápicos. Neste estudo, a
adição do grupo oleíla a molécula de paclitaxel foi proposta para se aumentar a lipofilicidade
do fármaco e permitir uma associação estável com a LDE.
Métodos e Resultados: A pureza e o rendimento da reação de esterificação do paclitaxel
foram determinados por HPLC, RMN e espectrometria de massa. A estabilidade de
LDE-oleato de paclitaxel foi avaliada através de diálise contra plasma e variação no
tamanho da partícula. A captação celular, atividade citostática e mecanismo de ação foram
testados em linhagens celulares neoplásicas, NCI-H292 e B16F10. A toxicidade aguda foi
determinada em camundongos saudáveis C57BL/6J e a biodistribuição, farmacocinética e
atividade anti-tumoral em camundongos inoculados com tumor de melanoma B16. A
associação LDE-oleato de paclitaxel mostrou ser estável, preservou a atividade citostática
do fármaco e aumentou a fase G2/M do ciclo celular. A tolerabilidade do complexo aos
camundongos foi surpreendente, de tal forma que a dose letal (DL50) é dose vezes maior
do que a da formulação comercial (DL50=364 and 31,8 mg/kg,). LDE concentrou o
paclitaxel aproximadamente quatro vezes mais no tumor do que nos tecidos normais
adjacentes. LDE-oleato de paclitaxel promoveu o retardamento no crescimento do tumor,
aumentou a sobrevida e percentagem de cura dos animais em comparação a formulação
comercial.
Conclusões: A associação LDE-oleato de paclitaxel é estável e possui índice terapêutico
superior ao da formulação comercial de paclitaxel.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.008
TOXICIDADE E AÇÃO ANTITUMORAL DE UM DERIVADO DO
QUIMIOTERÁPICO
ETOPOSÍDEO
(OLEATO
DE
ETOPOSÍDEO)
ASSOCIADO A UMA MICROEMULSÃO RICA EM COLESTEROL. Lo Prete, A.
C. ** ; Maria, D. A. ** ; Rodrigues, D. G. ; Valduga, C. J. ; Heitmann Mares Azevedo, C. ** ; Fernandes, D.
C. ** ; Célia Martinez Ibañez, O. ; Maranhão, R. C. ; Imunogenética, BUTANTAN ; Lípides, InCor HCFMUSP ; Genética, INSTITUTO BUTANTAN ; Análises Clínicas, USP .
Objetivo: Recentemente o etoposídeo foi associado a uma microemulsão lipídica artificial
(LDE) através de modificação em sua estrutura. A LDE é captada por células neoplásicas
que apresentam aumento de expressão dos receptores da lipoproteína de baixa densidade
(LDL). O objetivo deste estudo é determinar através de estudos de toxicidade crônica e
aguda, a dose máxima tolerada (DMT), doses letais (DL10, DL 50, e DL 90) e eficácia
antitumoral da associação LDE-oleato de etoposídeo em comparação com o fármaco
comercial.
Métodos e Resultados: A DMT, dose em que não houve morte de animal ou perda de peso
superior a 15% em todo o grupo, foi determinada em camundongos saudáveis C57BL/6J
após administração de LDE-oleato de etoposídeo e etoposídeo comercial em doses de
150-250 mg/kg e 25-75 mg/kg, respectivamente. As doses letais foram calculadas através
de simples interpolação entre a porcentagem de morte e doses, após administração de
100-500 e 25-150 mg/kg, respectivamente. Para comparação da eficácia antitumoral das
formulações de LDE-oleato de etoposídeo e etoposídeo comercial foram utilizados
camundongos C57BL/6J inoculados com tumor de melanoma B16F10. Doses de10 e 50
mg/kg foram administradas. Observação da evolução do crescimento tumoral e
sobrevivência dos animais foram realizadas durante 45 dias. A DMT (n=8) para a
LDE-oleato de etoposídeo é oito vezes maior do que a encontrada para o etoposídeo
comercial, enquanto que a DL50 (n=5) é 5,4 vezes menor. A associação provou ser mais
eficaz em retardar o crescimento tumoral e aumentar a sobrevida dos animais.
Conclusões: A modificação e associação do fármaco à LDE aumentou o seu índice
terapêutico.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.009
Determinação do potencial citotóxico do oleato de etoposide
associado à uma emulsão lipídica rica em colesterol (LDE) nas
linhagens celulares: K562, HT29 HL60 E H292 Moura, J. A. ** ; Valduga, C. J. ;
Fernandes, D. C. ** ; Rodrigues, D. G. ; Heitmann Mares Azevedo, C. ** ; Maranhão, R. C. ; Lípides,
InCor - HCFMUSP ; Análises Clínicas, USP .
Objetivo: A LDE é uma microemulsão rica em colesterol que é captada pelos receptores de
lipoproteínas de baixa densidade (LDL), que são superexpressos em muitas células
tumorais. Dando continuidade aos experimentos com o derivado oleato do etoposide,
associado a LDE, o presente trabalho visa comparar a citotoxicidade da associação
LDE-oleato de etoposide, e oleato de etoposide, com o etoposide comercial, nas linhagens
celulares HL60 (leucemia pró-mielocítica aguda), K562 (leucemia mielóide crônica), H292
(carcinoma mucoepidermoidal de pulmão) e HT29 (adenocarcinoma de cólon humano).
Métodos e Resultados: As células foram submetidas a diferentes concentrações das
formulações testadas, sendo incubadas em estufa. O índice de citotoxicidade 50% foi
determinado através do método do MTT. A transformação do etoposide no seu derivado
oleato aumentou a citotoxicidade do fármaco para as linhagens K562 e HL60 (IC50
etoposide comercial (mM): H292 0,21; HT29 0,88; K562 0,52; HL60 0,14; IC50 oleato de
etoposide (mM): H292 0,17; HT29 0,79; K562 0,26; HL60 0,03). A associação oleato de
etoposide-LDE apresentou IC50 maior que a formulação comercial (IC50 LDE-oleato de
etoposide(mM): H292 0,46; HT29 0,43; K562 0,28; HL60 0,09), exceto para a H292, onde
o IC50 foi o dobro (0,46 e 0,21 mM, respectivamente). A LDE apresentou citotoxicidade
apenas na K562, porém em altas concentrações (IC50 LDE (mM): H292 > 3,5; HT29 >
3,05; K562 3,05; HL60 > 0,35).
Conclusões: O oleato de etoposIde apresentou citotoxicidade semelhante e até superior ao
etoposide. Já associado à LDE, seu IC50 é maior que o etoposide comercial em todas as
linhagens, exceto para a H292. Além disso, a LDE mostra-se eficiente como veículo,
possuindo ação citotóxica apenas na K562, porém em altas concentrações.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.010
CINÉTICA PLASMÁTICA E CAPTAÇÃO DA ASSOCIAÇÃO DE UMA
MICROEMULSÃO RICA EM COLESTEROL AO QUIMIOTERÁPICO
OLEATO DE ETOPOSÍDEO EM PACIENTES COM CÂNCER DE OVÁRIO
Heitmann Mares Azevedo, C. ** ; Carvalho, J. P. ; Valduga, C. J. ; Rodrigues, D. G. ; Lo Prete, A. C. ** ;
Fernandes, D. C. ** ; Moura, J. A. ** ; Maranhão, R. C. ; Ginecologia, FMUSP ; Lípides, InCor HCFMUSP ; Análises Clínicas, USP .
Objetivo: Previamente foi descrito a associação do oleato de etoposídeo a uma
microemulsão rica em colesterol (LDE), a qual é captada por células malignas que tem
expressão aumentada dos receptores da lipoproteína de baixa densidade (LDL). O objetivo
deste estudo é verificar a cinética plasmática da associação LDE-oleato de etoposídeo e sua
concentração em tumor de ovário e tecido equivalente normal.
Métodos e Resultados: [3H]-oleato de etoposídeo associado a LDE marcada
radioativamente com [14C]-oleato de colesterol, foi injetado intravenosamente em 10
pacientes com câncer de ovário (50,6 ± 7,5 anos), 24 h antes da cirurgia. Amostras de
sangue foram coletadas no período de 24 h para determinar a curva de decaimento
plasmático da associação. A taxa fracional de remoção (TFR) foi calculada através de análise
compartimental. A radioatividade presente nas amostras dos tecidos, foi quantificada após
extração por cintilação líquida. A TFR da LDE e do oleato de etoposídeo foi 0,0881 e 0,1722
respectivamente (p = 0,2422). A média da captação tecidual de ambos pelo tecido maligno
de ovário foi quatro vezes maior quando comparado com o tecido contralateral sem a
doença (captação da LDE= 448 ± 184 e 143 ± 51 e captação do oleato de etoposídeo= 346
± 75 e 103 ± 56, respectivamente).
Conclusões: Os resultados indicam que o fármaco acompanha a partícula da microemulsão
no compartimento plasmático. Além disto, a associação LDE-oleato de etoposídeo teve
habilidade de concentrar o fármaco nos tecidos malignos de ovário. Portanto, a LDE pode
ser utilizada como agente direcionador do oleato de etoposídeo em câncer de ovário.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.011
EFEITO ANTI-PROLIFERATIVO CAUSADO POR EMULSÃO LIPÍDICA
CONTENDO 7-CETOCOLESTEROL (7KC) Favero, G. M. ** ; Otake, A. H. ** ; Caldini, É.
G. ; Maranhão, R. C. ; Chammas, R. ; Bydlowski, S. P. ; Clínica Médica, FMUSP ; Oncologia
Experimental - FM, FMUSP ; Lípides, InCor - HCFMUSP ; Biologia Celular, USP ; Clínica
Médica - FMUSP, USP ; Disciplina de Oncologia, USP .
Objetivo: Oxisteróis, incluindo 7KC, têm a capacidade de inibir o crescimento e viabilidade
celular. Neste projeto, avaliou-se o uso de uma emulsão lipídica (LDE), conhecida por
interiorizar quimioterápicos em células tumorais, através de receptores apo B/E, com 7KC a
ela incorporada (complexo LDE/7KC), avaliando sua citotoxicidade e seu possível
mecanismo de ação.
Métodos e Resultados: Células de melanoma murino (B16F10) foram tratadas e seis
grupos foram formados: controle (somente meio de cultura); LDE (concentrações de 2%,
4% e 6% de emulsão em meio); LDE/7KC (100mM e 200mM de 7KC); LDE/col (100mM e
200mM de colesterol); 7KC (100mM em etanol); colesterol (100mM). O complexo LDE/7KC
induziu um efeito predominantemente citostático nas células, associado a alterações de
morfologia, com um aumento na polimerização das fibras de actina do citoesqueleto
observados pela faloidina. Analisou-se também o potencial transmitocondrial, com o
fluorocromo JC-1, onde se observou hiperpolarização seguida de despolarização do potencial
transmembranar. Analisou-se o ciclo celular com iodeto de propídio, observando-se acúmulo
de células poliplóides, impossibilitadas de fazerem a citocinese. A análise ultraestrutural
mostrou vacúolos autofágicos, como figuras de mielina.
Conclusões: O efeito anti-proliferativo de LDE/7KC se caracterizou por: (i) indução de
morte celular em uma pequena fração das células tratadas, por processo marcado pela
hiperpoliarização do potencial transmembranar mitocondrial e aparecimento de figuras de
mielina (apoptose e autofagia); (ii) alterações de citoesqueleto associadas à poliploidia,
sugerindo inibição da citocinese.
Apoio Financeiro: FAPESP , CAPES
Número Final: 27.012
ESTUDO DA ATIVIDADE ANTI-ANGIOGÊNICA DA PROTEÍNA
RECOMBINANTE CORRESPONDENTE AO FRAGMENTO K(1-3) DO
PLASMINOGÊNIO HUMANO Silbiger, V. N. * ; Higuchi, D. A. ** ; C Araujo, R. ; Pesquero, J. L.
; Fisiologia e Biofísica, UFMG ; Biotecnologia, UMC ; CIIB, UMC .
Objetivo: Fatores anti-angiogênicos, produzidos pelo organismo, podem inibir o
crescimento de tumores primários e secundários metastáticos. A angiostatina, um
fragmento do plasminogênio de 39 kDa é um destes fatores que apresenta capacidade
anti-angiogênica. Esta glicoproteína contém quatro das cinco regiões denominadas
“kringles” do plasminogênio. O objetivo deste experimento é testar a eficiência de uma
proteína recombinante que contém os três primeiros “kringles” k1-3, uma proteína de 30
kDa, em inibir o crescimento de tumor de Erlich implantado em camundongo.
Métodos e Resultados: O fragmento do plasminogênio correspondente ao segmento K1-3
vem sendo obtido por fermentação de Pichia pastoris. O produto da fermentação é
centrifugado, a 4º C, a 15.000xg e o sobrenadante concentrado 5x, dializado contra salina
tamponada, a concentração de proteína estimada, e utilizada para aplicar nos animais
inoculados com tumor de Erlich. Inoculam-se 2,5 x 106 células de Erlich nos camundongos
Swiss machos, sadios de peso em torno 30g, subcutâneo dorsal, espera-se sete dias para o
crescimento do tumor e no oitavo dia inicia-se o tratamento por sete dias, com injeções
diárias de 0,5, 1, 5 e 10 µg de K1-3 ou o volume correspondente de salina (grupo controle).
Após sacrifício dos animais, o tumor é dissecado, pesado e homogeneizado em reagente
próprio para dosagem de hemoglobina (LABTEST DIAGNÓSTICO). Animais do grupo que
recebeu dose diária de 10 µg (N = 15) apresentaram significante redução no tamanho do
tumor (0,529 ± 0,108) quando comparado a do grupo controle (1,364 ± 0,442, N = 16). Os
níveis de hemoglobina também foram menores nos grupos tratados.
Conclusões: Através dos experimentos realizados com camundongos Swiss foi possível
concluir que a K1-3, obtida a partir de recombinação genética e fermentação, possui
atividade anti-angiogênica.
Apoio Financeiro: CAPES , CNPq , FAPESP , FAEP
Número Final: 27.013
DETERMINAÇÃO DO PESO TUMORAL E TAXA DE PROLIFERAÇÃO
CELULAR DO TUMOR DE WALKER 256 EM RATOS SUPLEMENTADOS
CRONICAMENTE COM ÓLEO DE PEIXE Campos Mund, R. ** ; Pizato, N. ** ; Bonatto, S.
J. R. ** ; Yamazaki, R. K. ** ; Aikawa, J. ** ; Nogata, C. ** ; Nunes, E. A. ** ; Piconcelli, M. C. de A. * ; Garcia,
E. M. * ; Fernandes, L. C. ; Curi, R. ; Cancer Biology, UFPR ; fiisologia, UFPR ; Fisiologia, UFPR ;
Fisiologia e Biofísica ICB1, USP .
Objetivo: Ácidos Graxos desempenham várias funções celulares tais como constituintes de
membranas, armazenamento de energia, cofatores enzimáticos, detergentes, transportadores,
hormonais e sinalizadores intracelulares. Estima-se que 30% dos casos de câncer estejam ligados à
dieta, onde o consumo excessivo de gorduras saturadas e de ácidos graxos n-6 associado a baixa
ingestão de ácidos graxos n-3 facilitam o aparecimento de doenças cardiovasculares e câncer. O
objetivo deste trabalho foi o de determinar o peso do tumor e a taxa de proliferação tumoral em ratos
suplementados cronicamente com óleo de peixe.
Métodos e Resultados: Ratos Wistar com 21 dias foram divididos em grupos: sem
suplementação, suplementado com 1g/Kg p.c. de gordura de coco ou peixe até atingirem 70
dias. Então, foram inoculados com 2x107/mL de suspensão de células de tumor de Walker
256 no flanco direito dos animais, obtendo-se assim os animais com tumor (W) e com
tumor suplementados com gordura de coco (SW) ou óleo de peixe (PW). Nos ratos controle
foram injetados 1mL de salina. Os animais foram ortotanaziados após 14 dias e a massa
tumoral retirada e pesada. As células tumorais foram isoladas e cultivadas em meio
RPMI-1640 com 10% de soro fetal bovino e antibióticos. Adicionou-se 1x105 células por
poço em placa de 96 escavações a 37ºC em atmosfera de 95% de ar/ 5% de CO 2. Para
determinação da proliferação 20 μl de [2-14C]-Timidina (0,02μCi/poço) foi também
adicionado. Após cultivo de 48 horas, as células foram coletadas automaticamente e a
radioatividade incorporado ao DNA lida em cintilador Beckman LS 6500. A massa tumoral
(g) nos ratos W foi 7,43 ±0,60; no SW 6,52 ±0,72 e no PW 2,76 ±0,57. A proliferação
celular (cpm) no W 254,2±29,5; no SW 158,5±16,08 e no PW 38,7 ±1,1.
Conclusões: O peso tumoral e a taxa de proliferação das células do tumor de Walker 256
nos ratos suplementados cronicamente com óleo de peixe foi significativamente menor
quando comparados aos grupos W e SW.
Apoio Financeiro: CNPq , PRONEX
Número Final: 27.014
EFFECT OF DIETS WITH DIFFERING N-6 TO N-3 PUFA RATIOS ON CACHEXIA AND
TUMOR GROWTH IN WALKER 256 TUMOR-BEARING RATS.
Campos Mund, R. ** ; Pizato, N. ** ; Bonatto, S. J. R. ** ; Yamazaki, R. K. ** ; Aikawa, J. ** ; Nogata, C. ** ;
Nunes, E. A. ** ; Piconcelli, M. C. de A. * ; Curi, R. ; Calder, P. ; Fernandes, L. C. ; fiisologia, UFPR ;
Fisiologia, UFPR ; Physiology, University of Southampton ; Fisiologia e Biofísica ICB1, USP .
Objetivo: Western societies consume diets with n-6 to n-3 PUFA (polyunsaturated fatty
acids) ratios of 20-30:1. There is an association between this ratio and risk of chronic
diseases including some cancers. In this study we investigate the effect of two different
dietary ratios of n-6 to n-3 PUFA upon tumor growth and cachexia.
Métodos e Resultados: Weanling male Wistar rats (aged 21 days) were treated lifelong
with a low fat control diet (4% total fat), a high fat fish oil diet (30% fat), a diet with n-6 to
n-3 PUFA ratio of 5:1 and a diet with n-6 to n-3 PUFA ratio of 20:1 (30%). After 60 days of
feeding, the animals were inoculated in the right flank with a sterile suspension of 2 x 107
Walker 256 tumor cells obtained from an ascitic tumor-bearing rat. Thus 5 animal groups
were established: non-tumor-bearing fed low fat diet (C), Walker 256 tumor-bearing fed low
fat diet (W), tumor-bearing fed with fish oil (WFO), tumor-bearing fed ratio 5:1 (W5) and
tumor-bearing fed ratio 20:1 (W20). After 14 days, the animals were killed by decapitation;
tumors were removed, weighed and frozen in liquid nitrogen for lipid peroxidation analysis.
Blood was collected for measurement of glucose, lactate, cholesterol and triacylglycerol
concentrations. Food intake was also measured. Mean tumor weight (g) was 19.4 (W), 7.7
(WFO), 20.6 (W5) and 20.1 (W20). Mean carcass weight (g) (final body weight - tumor
weight) changes were 28 (C), -18 (W), 14.6 (WFO), 11 (W5), and 8.5 (W20).
Hypoglyaecemia, hyperlacticidemia and decreased food intake in the W and W20 groups
indicated cachexia. These parameters were normal in the WFO and W5 groups. Lipid
peroxidation was increased in the WFO group only.
Conclusões: These results confirm that dietary fish oil decreases tumor growth and the
development of cachexia. Furthermore, a dietary n-6 to n-3 PUFA ratio of 5 also decreases
cachexia, even though tumor growth was not decreased.
Apoio Financeiro: CAPES , PRONEX
Número Final: 27.015
Expressão da Enzima Cox-2 no Tecido Tumoral de Ratos Portadores de Tumor de
Walker 256, Suplementados por Duas Gerações com Ácido Graxo Poliinsaturado
Ômega-3.
Oliveira, H. H. P. * ; Pizato, N. ** ; Aikawa, J. ** ; Yamazaki, R. K. ** ; Campos Mund, R. ** ; Nunes, E. A. ** ;
Bonatto, S. J. R. ** ; Nogata, C. ** ; Folador, A. ** ; Fernandes, L. C. ; Curi, R. ; fiisologia, UFPR ;
Fisiologia, UFPR ; Fisiologia - ICB, USP ; Fisiologia e Biofísica ICB1, USP .
Objetivo:
Investigar a expressão da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2) no tecido tumoral de ratos portadores de
tumor de Walker 256, suplementados por duas gerações com óleo de peixe e, determinar a glicemia e
laticidemia como parâmetros sangüíneos de caquexia.
Métodos e Resultados:
Geração F2 de ratos Wistar machos foram suplementados todos os dias com 1g/Kg p.c. de óleo de peixe
ou gordura de coco, a partir do desmame até atingirem 90 dias. Então, foi inoculado no flanco direito dos
ratos suspensão de células do tumor de Walker 256 (2x10 7 células /mL). No controle injetou-se salina.
No 14º dia após a inoculação, os animais foram ortotanasiados por decapitação. O sangue e o tumor
foram retirados para estudo. A expressão da enzima COX-2 foi determinada por "Western Blotting". No
grupo portador de tumor suplementado com óleo de peixe (PWK) a expressão foi 25% menor quando
comparada à do grupo portador de tumor (WK) e à do suplementado com gordura de coco (SWK). O
peso do tumor foi 4 vezes menor quando comparado ao do WK e SWK. Glicemia (mg/dL) e laticidemia
(mol/mL) nos PWK foi de 124,30 ± 0,09 e 1,38 ± 0,12 enquanto no WK foi de 100,20 ± 0,09 e 2,63 ±
0,13 e no SWK de 97,70 ± 0,10 e 2,51 ± 0,17. Nos animais sem tumor, a glicemia foi de 125,20 ± 0,09 e
a laticidemia 1,32 ± 0,12.
Conclusões:
Estes resultados sugerem que a suplementação com óleo de peixe foi hábil em reduzir significativamente
a taxa de crescimento tumoral, restaurar a glicemia e laticidemia nos animais portadores de tumor aos
níveis controle e que, provavelmente, a redução da expressão da enzima COX-2 seja um dos
mecanismos pelo qual o óleo de peixe poderia estar inibindo o crescimento tumoral.
Apoio Financeiro: PRONEX
Número Final: 27.016
REVERSÃO DO FENÓTIPO DE RESISTÊNCIA A MÚLTIPLAS DROGAS
(MDR-1)
ATRAVÉS
DE
OLIGONUCLEOTÍDEOS
ANTISSENSO
COMPLEXADOS COM EMULSÃO COM CARACTERÍSTICAS DE LDL (LDE)
EM CÉLULAS DE SARCOMA UTERINO HUMANO, IN VITRO. Levy, D. ** ;
Debes-Bravo, A. A. ** ; Maranhão, R. C. ; Bydlowski, S. P. ; Divisão de Pesquisa, HEMOCENTRO DE
SÃO PAULO ; Pesquisa, HEMOCENTRO DE SÃO PAULO ; Lípides, InCor - HCFMUSP ; Clínica
Médica - FMUSP, USP .
Objetivo: Verificar a reversão do fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR-1)
através de oligonucleotídeos antissenso (OAS) complexados com emulsão com
características de LDL (LDE) em células de sarcoma uterino humano, in vitro.
Métodos e Resultados: As células de sarcoma uterino resistentes (MES-DX) a
doxorrubicina foram cultivadas em RPMI com SFB 10% e incubadas com OAS-1 e OAS-2
complexados ou não a LDE. O RNA total das amostras foi extraído com Trizol e a expressão
do gene MDR-1 avaliada por RT-PCR, tendo como controle interno o produto do gene da
-2-microglobulina. Incubou-se a mistura de reação por 3 min a 5oC, seguida de 30 ciclos
de 3 seg a 94oC, 3 seg a 55oC e 1 min a 72oC e, para extensão final, 72oC por 8 min. Após
eletroforese em gel de agarose 2%, avaliou-se densitométricamente. A incubação com o
OAS-1 isolado mostrou inibição da expressão, variando de 25 a 60% em relação às células
que foram incubadas com SFB que apresentou inibição de 0%. Quando as células eram
incubadas com o complexo OAS-1/LDE houve uma diminuição, ainda maior, da expressão
do gene MDR1, com níveis máximos de expressão da ordem de 60% indicando que a
inibição foi de cerca de 40% nas células cuja pré-incubação foi feita na presença de SFB. A
incubação com o
OAS-2 isolado mostrou pouca inibição da expressão. Já quando este oligo apresentava-se
complexado à LDE, os níveis de inibição aumentaram sensivelmente, chegando a cerca de
75% de inibição em relação a células não tratadas.
Conclusões: Ambos os oligos AS1 e AS2, quando complexados à LDE e pré incubados com
HDL na presença de SDL foram capazes de inibir até cerca de 70% o gene MDR-1 após 48
horas de incubação. Contudo, após 72 horas a expressão estava sendo retomada, com uma
expressão ao redor de 60%.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.017
CRESCIMENTO TUMORAL E TAXA DE PEROXIDAÇÃO LIPÍDICA NO
TECIDO TUMORAL DE RATOS SUPLEMENTADOS DURANTE UMA
GERAÇÃO (F1) COM ÓLEO DE PEIXE. Garcia, E. M. * ; Piconcelli, M. C. de A. * ;
Campos Mund, R. ** ; Pizato, N. ** ; Nunes, E. A. ** ; Aikawa, J. ** ; Nogata, C. ** ; Yamazaki, R. K. ** ; Curi,
R. ; Fernandes, L. C. ; fiisologia, UFPR ; Fisiologia, UFPR ; Fisiologia e Biofísica ICB1, USP .
Objetivo: Populações que consomem óleo de peixe são caracterizadas por possuírem
menor taxa de tumores. O mecanismo pelo qual o óleo de peixe induz a este efeito não é
totalmente sabido. Peroxidação lipídica (LPO) é um mecanismo postulado como causador da
redução de crescimento tumoral. Este trabalho tem como objetivo mensurar a taxa de LPO
no tecido tumoral de ratos Wistar portadores do tumor de Walker 256 (WK), suplementados
cronicamente com óleo de peixe.
Métodos e Resultados: Ratas Wistar, pós desmame, foram suplementadas com gordura
de coco ou óleo de peixe (1g/kg, p.c.). Então, foram colocadas para cópula com ratos não
suplementados para obtenção da geração F1. Os machos F1 (n=15 por grupo) foram
submetidos ao mesmo protocolo de suplementação de suas respectivas mães. Após 70 dias,
foi inoculada suspensão de células WK nos animais e, 14 dias depois, ortotanaziados por
deslocamento cervical. O tumor foi retirado para determinação do peso bem como da taxa
de LPO pelo método FOX. O peso da massa tumoral (g) dos ratos não suplementados (W)
foi 28,9 ± 3,53; dos ratos suplementados com gordura de coco (SW) foi 31,9 ± 3,4 e; dos
com óleo de peixe (PW) foi 7,3 ± 3,7. A taxa de LPO (mmol/mg de tecido) no grupo W foi
1,19 ± 0,11; no grupo SW foi 1,12 ± 0,12 e; no grupo PW foi 2,03 ± 1,18. A massa
tumoral e a taxa de LPO do grupo suplementado com óleo de peixe foi significativamente
diferente quando comparadas às do W e SW.
Conclusões: A suplementação com óleo de peixe durante uma geração diminuiu a massa
tumoral e um provável mecanismo foi a taxa de LPO elevada nos PW.
Apoio Financeiro: PRONEX , CNPq
Número Final: 27.018
DIFERENTES EFEITOS DOS EXTRATOS BUTANÓLICO E AQUOSO DA
PFAFFIA PANICULATA SOBRE O CRESCIMENTO CELULAR IN VITRO
Nagamine, M. K. ** ; Matsuzaki, P. ** ; Akisue, G. ; Haraguchi, M. ; Barbuto, J. A. M. ;
Hernandez-Blazquez, F. J. ; Silva, T. C. ** ; Dagli, M. L. Z. ; Patologia e Toxicologia - FMVZ,
FMVZ-USP ; Centro de Sanidade Animal, INSTITUTO BIOLÓGICO ; Ciências Farmacêuticas,
USF ; Anatomia Animais Domésticos, USP ; Imunologia - ICB lll, USP ; Patologia Animal,
USP ; Patologia e Toxicologia - FMVZ, USP .
Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos extratos butanólico (EB) e aquoso
(EA) da Pfaffia paniculata (ginseng brasileiro) sobre a proliferação celular das linhagens
tumorais mamárias humanas MCF7 e SKBR3.
Métodos e Resultados: As células MCF7 ou SKBR3 foram plaqueadas em sextuplicata e
tratadas com EB ou EA. A porcentagem de crescimento das células foi determinado pelo
método do cristal violeta. Tratamento com EB: Células MCF7 ou SKBR3 (5x10 3células/poço)
foram pré-incubadas por 24h, tratadas com EB(100 a 900ug/ml), e reincubadas por 48h.
Nas células MCF7 o EB causou diminuição (p<0,05) do crescimento celular nas
concentrações
de
400(41,19+-29,19),
500(19,81+-19,41),
600(6,91+-10,18),
700(-13,2+-14,85), 800(-35,37+-9) e 900 ug/ml(-52,67+-13,12) em relação ao
controle(99,76+-65,91). Nas células SKBR3 observou-se diminuição (p<0,05) do
crescimento celular nas concentrações de 500(58,89+-12,53), 600(43,24+-12,85),
700(7,99+-18,45), 800(3,37+-10,51) e 900ug/ml(-4,61+-16,26) em relação ao
controle(99,77+-12,53). Tratamento com EA: Células MCF7(2x104células/poço) foram
pré-incubadas por 4h e tratadas com EA(10ng/ml a 1mg/ml). No tratamento tipo pulso, as
células foram incubadas por 1h com EA, substituído por meio de cultura e reincubadas por
19h. No tratamento contínuo, as células foram incubadas por 20h com EA. O EA apresenta
efeito estimulatório sobre o crescimento de células MCF7 com tratamento tipo pulso nas
concentrações
de
1ug/ml(155,1+-11,8),
10ug/ml(169,62+-22,92),
100ug/ml(205,37+-72,01)
e
1mg/ml(183,87+-12,34)
em
relação
ao
controle(99,46+-25,3). Com o tratamento contínuo houve aumento no crescimento celular
nas
concentrações
de
1ug/ml(176,72+-19,31),
10ug/ml(177,58+-24,83),
100ug/ml(192,24+-28,83)
e
1mg/ml(192,81+-35,51)
em
relação
ao
controle(100,57+-25,73).
Conclusões: O EB possui atividade inibitória sobre o crescimento celular em concentrações
superiores a 500ug/ml nas linhagens MCF7 e SKBR3 quando tratadas por um período de
48h. O EA estimula o crescimento de células MCF7 em concentrações superiores a 1ug/ml
quando tratadas por 20h ou por curto período de tempo (1h).
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.019
SOBREVIDA E EVOLUÇÃO DO TUMOR DE EHRLICH EM
CAMUNDONGOS TRATADOS COM Pfaffia paniculata (GINSENG
BRASILEIRO).
Matsuzaki, P. ** ; Oloris, S. C. S. ** ; Akisue, G. ; Haraguchi, M. ; Dagli, M. L. Z. ; Centro de Sanidade
Animal, INSTITUTO BIOLÓGICO ; Ciências Farmacêuticas, USF ; FMVZ - Patologia, USP ;
Patologia e Toxicologia - FMVZ, USP .
Objetivo: Extratos de Pfaffia paniculata (P. paniculata), popularmente utilizada em diversas
afecções, têm demonstrado efeitos antineoplásicos (Cancer Detect. Prev.; 24:173, 2000).
Os objetivos deste estudo foram avaliar o tempo de sobrevida de camundongos portadores
do tumor ascítico de Ehrlich (TAE) tratados com extratos de P. paniculata, e avaliar o
desenvolvimento deste mesmo tumor em camundongos tratados com estes extratos.
Métodos e Resultados: Avaliação do tempo de sobrevida: Camundongos machos Swiss
receberam diariamente, por gavage, 200, 100 ou 50mg/Kg de extrato etanólico, resíduo
aquoso (RA) ou resíduo butanólico (RB) de P.paniculata, ou água como grupo controle. No
8o dia de tratamento os animais foram inoculados, intraperitonealmente, com 5 x 10 6 células
do TAE, e tratados até a morte.
Os animas tratados com 200mg/Kg de RB (log-rank, p=0.0389, n=5), 50 mg/Kg de RB
(log-rank, p=0.0079, n=5) ou 100 mg/Kg de RA (log-rank, p=0.00184, n=5) apresentaram
maior sobrevida em relação aos animais pertencentes ao grupo controle. Os demais grupos
não apresentaram diferença em relação ao grupo controle.
Avaliação do desenvolvimento do TAE: Camundongos machos Swiss receberam
diariamente, por gavage, 200, 50 ou 12,5 mg/Kg de resíduo butanólico (RB), ou água como
grupo controle. No 8o dia de tratamento os animais foram inoculados, intraperitonealmente,
com 5 x 106 células do TAE, e eutanasiados no 15o dia de tratamento. Foi colhido o fluído
ascítico total para a mensuração do volume e contagem do número de células tumorais
presentes, realizada em câmara de Neubauer.
Não houve diferença estatisticamente significante quanto ao volume e número de células
tumorais presentes no fluído ascítico dos animais tratados com RB, nas 3 diferentes
concentrações, em relação aos animais pertencentes ao grupo controle. O volume do fluído
ascítico foi numericamente menor nos animais tratados com o RB nas 3 concentrações.
Conclusões: Os animais inoculados com o tumor ascítico de Ehrlich e tratados com o
resíduo butanólico de P. paniculata (200 ou 50mg/Kg), apresentaram maior sobrevida,
provavelmente devido a uma menor formação de fluído ascítico.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.020
PHENOLIC ACID DERIVATIVES MODULATES THE CELL CYCLE
PROGRESSION ON HUMAN MALIGNANT CELL LINES IN VITRO Costa, M.
S. e. ** ; Faulhaber, M. ; Marcucci, M. C. ; Metzger, M. ; Oliveira, A. C. ** ; Favero, G. M. ** ; sawaya, A. C.
H. ; Pasin, F. ; Bydlowski, S. P. ; Novak, E. M. ; --, 0 ; Clínica Médica, FMUSP ; FISIOPATOLOGIA
EXPERIMENTAL, FMUSP ; Divisão, HEMOCENTRO DE SÃO PAULO ; Laboratório Clínico, HIAE
; Anatomia Patológica, INCor ; UNIBAN, UNIBAN ; Clínica Médica - FMUSP, USP ; Faculdade
de Medicina, USP .
Objetivo: In the present study we have investigated the effects of fractions of a new type
of Brazilian propolis containing phenolic acid derivatives (FRRP) on cell growth and cell
proliferation in a human melanoma ( A2058) and multiple myeloma (RPMI 8226) cell lines.
Métodos e Resultados: The effects on cell cycle progression in the human melanoma and
multiple myeloma cell lines were assayed with propidium iodide using DNA histograms and
multiparametric flow cytometry. The inhibitory concentrations 50 (IC 50) were estimated by
cytostatic assay of tetrazolium (MTT) reduction. The IC50 (± S.E.M; n =3) of FRRP at 48 h
exposure, were 30 ± 5g/ml to human melanoma and 28 ± 8 g/ml to multiple myeloma
cell lines. FRRP at a concentration of 20 g/ml inhibited the G1/S transition of the cell cycle
of the human melanoma and human multiple myeloma cell lines, an action consistent with
its cytostatic effect. The cytostatic effect of FRRP acid was less pronounced in human lung
fibroblasts cell (LL24) than in myeloma cell line. Our results also revealed that mRNA
expression of cyclin-dependent kinase inhibitors, p16, as assayed by RT-PCR, did not
change in multiple myeloma cell lines. All procedures were performed in triplicate with
appropriate controls. The chemical composition of FRRP was evaluated by High performance
liquid chromatography coupled to mass detector, and it was identified some antocyanins.
Conclusões: Our observations suggest that the FRRP acid from Brazilian propolis may be a
powerful therapeutic target for novel antitumor agents.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.021
EXPRESSÃO DO GENE MDR-1 EM CÃO COM LINFOMA DURANTE O
TRATAMENTO QUIMIOTERÁPICO: RELATO ED UM CASO. Rezende, B. C. G. **
; Levy, D. ** ; Debes-Bravo, A. A. ** ; Bydlowski, S. P. ; Ricci Lucas, S. R. ; Clínica Cirúrg. Veterinária CCA, FMVZ-USP ; Divisão de Pesquisa, HEMOCENTRO DE SÃO PAULO ; Pesquisa,
HEMOCENTRO DE SÃO PAULO ; Clínica Médica - FMUSP, USP .
Objetivo: O linfoma canino corresponde histologicamente ao linfoma não Hodgkin humano, tendo
como tratamento eletivo a quimioterapia; entretanto, no decorrer do tratamento, a recidiva do tumor é
freqüente e pode estar relacionada ao fenômeno de resistência a múltiplas drogas (MDR), semelhante
ao que ocorre nas neoplasias humanas. O objetivo deste relato foi relacionar o envolvimento do gene
MDR1 no processo de recidiva do linfoma na espécie canina.
Métodos e Resultados: Atendeu-se no Hospital Veterinário da FMVZ/USP, um animal da
espécie canina, sem raça definida, com 2 anos de idade, macho, com diagnóstico de linfoma
multicêntrico. Puncionaram-se os linfonodos poplíteos, previamente à quimioterapia e
durante a recidiva do processo tumoral e o material foi imediatamente encaminhado para a
Divisão de Pesquisa da Fundação Pró-Sangue-Hemocentro de São Paulo. A extração de RNA
total foi processada com TRIzol ® Reagent (Invitrogen, Inc.). A amplificação foi realizada
pela técnica de RT-PCR, nas seguintes condições: síntese de cDNA por 30 minutos a 50°C;
desnaturação por dois minutos a 94°C. A amplificação foi feita com 40 ciclos de:
desnaturação 30 segundos a 94°C; anelamento 30 segundos a 55°C e extensão por um
minuto a 72°C. Finalmente, foi feita uma última extensão por oito minutos a 72°C. O
controle de amplificação foi realizado com células de mieloma múltiplo e de sarcoma uterino
humanos. A amostra colhida previamente ao início da quimioterapia foi negativa para o
gene MDR1; enquanto aquela obtida durante a recidiva tumoral expressou o MDR1.
Conclusões: A expressão do gene MDR1 nesse caso, sugere a existência da resistência adquirida a
drogas e a relação com a recidiva do tumor. Desta forma, o mecanismo de MDR1 pode estar envolvido
em outros casos de neoplasias na espécie canina, assim como se observa em seres humanos.
Apoio Financeiro: FAPESP , CAPES
Número Final: 27.022
EFFECTS OF NUTRITIONAL SUPPLEMENTATION IN WALKER 256
TUMOR-BEARING RATS Moraes, S. ; Ciampi, K. ** ; Meana, S. ; Padovani, C. R. ; Spadotto, A.
J. ; Barbosa, H. ; Assunção, J. ; Guerrini, I. A. ; Física e Biofísica - IB, Instituto de Biociências/IB ;
Laboratório de Técnica Operatória de Cirurgia Experimental, PUCCamp ; Estatística, UNESP Botucatu ; Física e Biofísica, UNESP - Botucatu ; CPQBA, UNICAMP ; Laboratório de Técnica
Operatória de Cirurgia Experimental, UNICAMP .
Objetivo: The use of a new nutritional supplementation, registered as TIVALLEC at ANVISA,
seems to be a promising pathway in the investigation of alternative treatments for cancer.
The aim of this study is to evaluate the efficiency of TIVALLEC over Walker 256 solid tumor
growth.
Métodos e Resultados: Ninety male Wistar rats, eight weeks old and weighing from 250
to 300 grams, were housed in sterilized polypropylene cages (10 animals/cage), in sterilized
bedding, in a room maintained at controlled temperature (22 ± 2 C), humidity (50 ± 10 %),
with a 12-hour light-dark cycle. TIVALLEC (T), a compound of vitamins B6 and E, chelated
minerals (selenium, zinc and copper), enriched with an essential aminoacid (triptophan) and
a nitrogened base (thymine), is produced in form of fine powder and was added to the
filtered water of treated animals. After one week of acclimation, animals were randomly
distributed into five groups (Gp): Gp 1: no tumor, no T (n = 10); Gp2: no tumor, received T
(n = 20); Gp3: with tumor, no T (n = 20); Gp4: received T seven days prior to being
inoculated with tumor cells (n = 20); Gp5: received T one day after being inoculated with
tumor cells (n = 20). The animals were inoculated sub-cutaneously in the right flank with
approximately one million Walker 256 tumor cells. Body weight and tumor dimensions were
measured three times a week during an experimental period of 48 days and cachexia was
not possible to be evaluated. Groups 1 and 2 showed no alterations. The percentage of
animals that did not develop the tumor after being inoculated is: 30% in Gp3, 50% in Gp4
and 90% in Gp5. All the data obtained from this study was submitted to statistical analyses
through Pearson’s Chi-Square test, the univariate approach of Winner, Kaplan-Meir
estimates and long-rank tests.
Conclusões: The results suggest that TIVALLEC may have a strong positive
pharmacological effect in rats with Walker 256, dramatically lowering the incidence of
tumor-bearing animals as well as expanding the first detection of the tumor mass. These
data might be indicating positive effects over the host immune system that go far beyond
the nutritional ones. A complex approach to cancer as proposed by Kitano (Nature, 426:
125, 2003) is being considered to understand the action of the product utilized.
Número Final: 27.023
ANTITUMOR ACTIVITY OF MELATONIN ON MICE SOLID TUMORS AND
HISTOPATHOLOGICAL ANALYSIS OF THESE TUMORS. Medeiros, P. L. de ;
Nascimento, S. C. ; Medeiros, F. L. ; Valença, M. M. ; Biologia Celular e do Desenvolvimento, UFPE
; Neuropsiquiatria - CCS, UFPE ; Antibiótico, Universidade Federal de Pernambuco ;
Neuropsiquiatria - CCS, Universidade Federal de Pernambuco .
Objetivo: To evaluate melatonin antitumor activity on mice solid tumors (sarcoma 180 and
Ehrlich carcinoma) and to undertake histopathological analysis of these tumors.
Métodos e Resultados: In 20 male Swiss albino mice (Mus musculus) a tumoral fragment
of 2,5 mm3 was implanted in the right axillar area of the healthy animals previously
weighted. After 24 hours of the implant, the quimiotherapy was realized during 7 days
making use of melatonin (5 or 10 mg/kg) intraperitoneally and the equivalent volume of
saline solution (0,1mL/10g) for the control group. The dose of melatonin (10 mg/Kg/day)
showed tumoral inhibition of 67,60% (0,46 ± 0,13, p < 0,05) for the Ehrlich carcinoma. The
control and sarcoma 180 groups revealed tumoral development of 100% (1,42 ± 0,47 and
1,44 ± 0,44, respectively). In these tumors, the histopathological analysis demonstrated
ductal formations (Ehrlich carcinoma) and muscular infiltrations (sarcoma 180). Both
tumors presented expanded areas of coagulative necrosis.
Conclusões: The melatonin, the major pineal gland hormone, shows significant antitumor
activity on the Ehrlich carcinoma in Swiss albino mice and important histopathological
changes (ductal formations) for this tumor.
Apoio Financeiro: UFPE
Número Final: 27.024
ANÁLISE DOS EFEITOS TERAPÊUTICOS DO TRATAMENTO DO
MELANOMA B16F10 COM HEPARINA DE BAIXO PESO MOLECULAR
(HBPM) Lapetina, D. L. * ; Gazzaneo, E. * ; Maria, D. A. ** ; Bioquímica - IB, BUTANTAN ;
Imunogenética, BUTANTAN ; Imunogenetica, INSTITUTO BUTANTAN .
Objetivo: As complicações hemodinâmicas, tromboembolismo e flebites venosas são
comuns em neoplasias malignas e possuem mecanismos modulados pela liberação de
substâncias pró-coagulantes pelas células tumorais. Determinamos DL50 da HBPM
expressando sua toxicidade aguda e janela terapêutica em modelo experimental de
melanoma.
Métodos e Resultados: Realizamos os testes in-vitro de citotóxicidade em células
tumorais e o potencial inibitório do crescimento e formação de metástases. A DL50 da HBPM
foi determinada por duas vias de administração. Nas concentrações de 0.125mg/kg, à
400mg/kg, em camundongos C57BL/6J. A citotoxicidade da HPBM sob células SKMEL-28 e
B16F10 realizado pelo método de MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide). A célula tumoral humana SKMEL-28 e murina B16F10 foram cultivadas na
presença e ausência de HBPM (0,15 a 80 ug/ml) por 24 hrs a 37ºC e 5% de CO2. Após
incubação o sobrenadante foi descartado e adicionado a suspensão celular 0,5ug/ml MTT.
Centrifugadas as placas o sobrenadante é desprezado, os cristais de Formazam foram
eluídos com 100ul de Dimetilsulfóxido e a D.O. determinada em leitor de ELISA (540nm).
Não foram encontrados efeitos citotóxicos. A inibição do crescimento foi realizado após o
implante das células B16F10 em camundongos, que foram tratados diariamente com HBPM
ou salina pela via s.c. durante 14 dias. Os animais foram pesados, determinada a área, o
volume e peso tumoral. A DL50 da HBPM em camundongos foi de 150mg/kg-1 (i.p), e a
dose máxima tolerável de 50mg/kg-1. O crescimento tumoral avaliado a partir do 12º dia
da implantação das células B16F10, não mostrou diferenças significativas (p>0.05) no
volume tumoral entre animais tratados e grupo controle.
Conclusões: Não foi observado efeito terapêutico no tratamento do melanoma na fase
exponencial de crescimento, não ocorreu redução significante da massa tumoral ou
aumento do tempo de sobrevida. A HBPM não se mostrou citotóxica para células de
melanoma humano ou murino.
Número Final: 27.025
ATIVIDADE DE MACRÓFAGOS EM ANIMAIS PORTADORES DE TUMOR
DE EHRLICH (TE) E TRATADOS COM DIAZEPAM Sakai, M. ** ; Fonseca, E. de S.
M. ** ; Dagli, M. L. Z. ; Neto, J. P. ; FMVZ, USP ; Patol. Exp. e Comparada, USP ; Patologia e
Toxicologia - FMVZ, USP .
Objetivo: Pesquisas mostram que drogas de ação central, como o diazepam, interferem
com a imunidade de animais de laboratório, em especial com a atividade de macrófagos
(Life Science 65(20):2157-65, 1999). Considerando a importância dos macrófagos nos
processos neoplásicos, assim como a ampla utilização dos benzodiazepínicos como terapia
complementar nestes processos, este trabalho avaliou os efeitos do diazepam sobre a
atividade de macrófagos de animais portadores do TE.
Métodos e Resultados: Camundongos Machos SWISS foram divididos em 2 grupos: D
(diazepam 3,0 mg/kg) e V (veículo Cristália a 20%). Os grupos foram tratados por 2 dias
via oral. Uma hora após o 1º. dia de tratamento os animais foram inoculados 5x10 6
células/animal (ip). No dia seguinte, dia da 2º. injeção do fármaco, os macrófagos foram
coletados 1 hora após o tratamento para avaliação do espraiamento, da fagocitose, da
produção de H2O2 e de NO. A analise estatística mostrou que os macrófagos peritoneais dos
animais tratados com diazepam apresentaram menor capacidade de espraiamento
(D=20,78 ± 3,99; V=29,21 ±4,48 para p<0,01), e menor liberação de NO espontânea ou
induzida por LPS. (D=6,83 ± 2,86, V= 15,15 ±6,32; D=11,529 ± 6,2, V=19,48 ± 5,25)
respectivamente, ambos para p<0,05). Não foram observadas diferenças significantes em
relação a fagocitose e a produção de H2O2. Para a análise foi utilizado o teste "t" de
Student.
Conclusões: Sugere-se que o uso do diazepam, na presença de um processo neoplásico,
diminui a atividade dos macrófagos peritoneais dos animais. Mais estudos estão sendo
realizados para avaliar outros efeitos do diazepam sobre a imunidade de animais portadores
do TE.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.026
A
(E)-3-[4-(DIMETILAMINO)FENIL]-1-FENIL-2-PROPEN-1-ONA
INDUZ APOPTOSE EM LINHAGEM NEOPLÁSICA DE CÉLULAS
FOLÍCULO ESTRELADA (TTT/GF) DE CAMUNDONGO Canavieira, L. M. * ;
Bitencourt, H. R. ; do Nascimento, J. L. ; Fisiologia - CCB, UFPa ; Quimica, UFPa ; Fisiologia CCB, Universidade Federal do Pará .
Objetivo: Analisar o efeito citotóxico e o padrão morfológico de morte celular induzido pela
(E)-3-[4-(dimetilamino)fenil]-1-fenil-2-propen-1-ona
em
células
de
adenoma
adeno-hipofisárias de camundongo (TTT/GF).
Métodos e Resultados: A linhagem celular TtT/GF foi estabelecida a partir de um tumor
tireotrófico na adeno-hipófise de camundongo. As células foram cultivadas com DMEM-F12
suplementado com 2,5% FBS e 15% de soro de cavalo, em estufa de CO2 a 37ºC. A droga
usada foi sintetizada no Laboratório de Química da UFPA. Para a avaliação de citotoxicidade
foi usado o método fotocolorimétrico do MTT. O padrão de morte celular foi avaliado por
microscopia eletrônica de transmissão. A adição de diferentes concentrações da droga
(50µg/ml, 100µg/ml e 200µg/ml) promoveu significativa morte celular dependente da
concentração e do tempo de exposição. Observamos uma diminuição de 50% ± 2,7 na
viabilidade celular para a concentração de 200µg/ml da droga durante 24 h de exposição.
As fotomicrografias eletrônicas demonstraram a presença de corpos apoptóticos nas células
tratadas por 24h com 100µg/ml.
Conclusões:
Este
trabalho
apresenta
evidências
que
a
(E)-3-[4-(dimetilamino)fenil]-1-fenil-2-propen-1-ona induz apoptose em linhagem de
células cancerígenas de camundongo TTT/GF.
Apoio Financeiro: CNPq , CAPES , PROPESP , SECTAM
Número Final: 27.027
EFEITOS DA DIETA RICA EM LEUCINA SOBRE MÚSCULO DE FETOS DE
RATAS PORTADORAS DE TUMOR. Cruz, B. L. G. da * ; Ventrucci, G. ** ;
Gomes-Marcondes, M. C. C. ; Departamento de Fisiologia, UNICAMP ; Fisiologia e Biofísica - IB,
UNICAMP .
Objetivo: Avaliar o efeito da dieta rica em com leucina sobre a atividade celular e estresse
oxidativo em músculo de fetos de ratas com tumor Walker 256 (W).
Métodos e Resultados: Ratas Wistar prenhes que foram alimentadas com dieta controle
(18% proteína) (C) ou dieta suplementada com leucina (3%) (L), inoculadas ou não com
tumor e distribuídas nos seguintes grupos: controle (C), com suplementação de leucina (L),
com tumor e dieta controle (W), com suplementação e tumor (LW), pair fed com dieta
controle (GP) e pair fed suplementadas (LP). Após o sacrifício no 20º dia de prenhez,
retirou-se os fetos para análises, da atividade da glutationa-S-transferase (GST;
nmol.min-1.ug proteina-1) e da fosfatase alcalina (FA; nmol.min-1.ug proteina-1) e a
concentração de malondialdeído (MDA; nM.ug proteína-1) no músculo gastrocnemio. Nos
grupos com tumor o músculo fetal apresentou maior atividade da GST em LW (9,71+-0,80
vs W 7,29 0,76). A FA nos fetos de mães portadoras de tumor foi maior no grupo LW que
no grupo W (LW=4682,4+-337,8 vs W=3440,5+-200,1). Os fetos LW apresentam menores
concentrações de MDA (W 8,23+-0,30 vs W 5,17+-1,72).
Conclusões: Fetos de ratas com tumor alimentadas com leucina apresentam efeito
potencializado sobre a detoxificação (GST) e atividade celular (FA) juntamente com a
redução da peroxidação lipídica (MDA) nos fetos quando comparadas aqueles de prenhez
alimentadas com dieta controle. Apoio Financeiro: FAPESP(01/02135-5; 04/00514-5),
CNPq, CAPES, FAEP-UNICAMP.
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.028
ASSOCIAÇÃO ENTRE DIETA RICA EM LEUCINA, VITAMINA C E TUMOR
DE WALKER: ESTUDO EM RATOS JOVENS. Marcondes, T. C. ; Cruz, B. L. G. da * ;
Maria Totti Alferes, L. * ; Miguel Salomão, E. ** ; Lumy Yano, C. ** ; Gomes-Marcondes, M. C. C. ;
Biologia e Fisiologia, UNICAMP ; Departamento de Fisiologia, UNICAMP ; Fisiologia e
Biofísica - IB, UNICAMP .
Objetivo: Avaliar efeitos da associação entre leucina e vitamina C sobre atividade da
glutationa-S-transferase em músculo, fígado e coração de ratos com tumor Walker 256(W).
Métodos e Resultados: Ratos Wistar jovens foram divididos em cinco grupos de acordo
com a dieta e inoculação de tumor:: dieta controle 18% de proteína (C), dieta controle e
inoculação de tumor Walker 256 (W), com tumor e dieta rica em leucina (3%) (WL),com
tumor e vitamina C (WC) e com tumor, leucina e vitamina C (WCL). Após 12 dias, os ratos
foram sacrificados e retirados coração, fígado, músculo gastrocnemio, tumor para análise da
atividade de glutationa-S-transferase (GST, nmol.min-1.ug proteína-1), fosfatase alcalina
(FA, nmol.min-1.ug proteína-1) e concentração de malondialdeído (MDA, nM.ug proteína-1).
Houve aumento da atividade da GST no músculo e fígado dos grupos WC e WCL em
comparação aos grupos W e WL. No coração, a atividade da GST foi elevada em presença
de vitamina C, o grupo WC (15,42+-3,03) apresentou maior atividade que os grupos com
suplementação de leucina, WCL (3,40+-0,24) e WL (8,27+-1,08). No fígado e músculo, a
FA aumentou nos grupos suplementados com leucina e vitamina C. No músculo, a FA
apresentou maior atividade nos grupos com vitamina C. No fígado, músculo e coração, dos
grupos com leucina e/ou vitamina C mostraram redução da concentração de MDA em
comparação grupo W. Por outro lado, a análise do tecido tumor mostrou menor atividade da
GST e FA nos grupos com leucina e vitamina C e concentração de MDA no tumor foi elevada
no grupo WCL (6,00+-0,58) se comparado com WL (2,15+-0,16) e WC (2,49+-0,56).
Conclusões: A associação leucina e vitamina C promoveu maior atividade da GST,
relacionada com detoxificação durante o estresse oxidativa, principalmente nos tecidos que
são mais afetados durante o crescimento tumoral. Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, CAPES,
FAEP-UNICAMP
Apoio Financeiro: FAPESP
Número Final: 27.029
REDUÇÃO
DA
ANGIOGÊNESE
EM
CÓRNEA
DE
CAMUNDOS
PORTADORES DE DELEÇÃO EM UM DOS ALELOS DA CONEXINA 43
(Cx43+/-). Rodrigues, L. C. de S. ** ; Sinhorini, I. L. ; Dagli, M. L. Z. ; Avanzo, J. L. ** ; Fonseca, I. ;
FMVZ - Patologia, USP ; Patologia, USP ; Patologia Animal, USP ; Patologia e Toxicologia FMVZ, USP .
Objetivo: As junções gap (JG) são canais intercelulares responsáveis pela comunicação de
células adjacentes, permitindo a passagem pequenas moléculas e íons que mantêm a
homeostasia celular. As JG são formadas pela união de dois conexons, cada um deles
constituído por seis proteínas, as conexinas (Cx). É sabido que a comunicação intercelular é
fundamental no processo de angiogênese. Na célula endotelial, a principal constituinte dos
vasos, encontram-se as Cxs 37, 40 e 43, sendo a que a Cx43 é a mais importante delas.
Desta maneira, animais que possuem um dos genes da Gja1 (Cx43) deletado podem ser
úteis na compreensão do papel desta proteína no processo de angiogênese.
Métodos e Resultados: Neste estudo, a neovascularização foi induzida em córnea de
camundongos selvagens (Cx43+/+) e heterozigotos Cx43+/- para a Cx 43 através da
cauterização com cristal de nitrato de prata. Para promover analgesia três doses de
bupremorfina (0,1 mg/Kg) foram administradas em intervalos de 12 horas. Após 6 dias da
cauterização, os animais foram anestesiados (Pentobarbital sódico - 90mg/Kg) e submetidos
a injeção de 10 mL de Tinta da China (Faber Castell®) para marcação dos vasos. As
córneas foram removidas, fixadas com formol 10%, diafanizadas e montadas com balsamo
do Canadá. A área de preenchimento vascular e a distância do maior vaso formado
preenchido com a tinta da China foram mensurados em sistema de análise de imagens
(Image-pro-plus®). Os camundongos Cx43+/+ machos (n=15) apresentaram em média
13,43% de formação vascular enquanto que os Cx43+/- (n=12) 7,88%. A área de formação
de vasos registrada entre as fêmeas Cx43+/+ (n=7) e Cx43+/- (n=10) foi de 16,7% e
11,04%, respectivamente. Com relação à extensão de vasos, não houve diferença entre os
grupos. Entretanto, em ambos os grupos, o maior vaso formado atingiu a lesão.
Conclusões: Em suma conclui-se, que a diminuição da angiogênese nos animais Cx43+/se deve, provavelmente, a uma diminuição da comunicação entre as células endoteliais,
ocasionada pela deficiência de um alelo da Gja1.
Número Final: 27.031
EFEITOS DA DIETA RICA EM LEUCINA NA ATIVIDADE ENZIMÁTICA
MUSCULAR DE RATAS PORTADORAS DE TUMOR. Ventrucci, G. ** ; Lumy Yano, C.
; Marcondes, M. C. C. G. ; Fisiologia e Biofísica - IB, UNICAMP .
Objetivo: Analisar os efeitos da dieta com alto teor de leucina e do tumor de Walker 256
sobre a atividade das enzimas fosfatase alcalina e quimiotripsina em músculo esquelético de
ratas.
Métodos e Resultados: Ratas Wistar foram distribuídas em grupos, sendo 3 submetidos a
dieta normoprotéica: controle (C), portadoras de tumor (VW), pair-fed (Vp) e 3 grupos
submetidos a dieta com alto teor de leucina: controle (VL), portadoras de (VLW) e pair-fed
(VLp). O homogeneizado do músculo gastrocnêmio foi utilizado para determinar a atividade
das enzimas fosfatase alcalina (usando como substrato PNPP a 37mM) e quimotripsina-like
(substrato solução de Suc Llevy). Houve aumento da atividade da quimiotripsina nos grupos
inoculados com tumor VW (5.087 ± 0.363) e VLW (4.296 ± 0.145), porém não
estatisticamente significativos, em comparação aos grupos controles V (2.645 ± 0.605) e VL
(1.846 ± 0.337) e houve redução da atividade no grupo VLW, cerca de 22%, em
comparação ao grupo VW. Os grupos pair feed (Vp = 0.5288 ± 0.018 e VLp = 0.3099 ±
0.029) apresentaram aumento da atividade da fosfatase alcalina sugerindo aumento da
atividade celular muscular em comparação aos controles (C = 0.2331 ± 0.018 e VL =
0.2527 ± 0.022); os grupos com tumor não diferiram dos controles porém VLW (0.2695 ±
0.021) apresentou aumento de 13% em comparação com W (0.2373 ± 0.024).
Conclusões: A enzima quimotripsina-like é ativada no catabolismo protéico; aumentou sua
atividade em função da presença da neoplasia, porém a vigência do câncer associada ao
excesso de leucina promoveu redução da atividade de quimotripsina sugerindo provável
efeitos benéficos da leucina e possivelmente diminuindo o catabolismo protéico muscular.
Apoio Financeiro: FAPESP , CNPq , UNICAMP , FAEP
**