Caracterização físico

Cláudia Turra - Física
Gabriel Kaulfmann - Informática
Ismael Osmari - Química
Michelli Antonow - Farmácia
Profª Drª Solange Binotto Fagan
Profª Drª Marta Palma Alves
Profª Drª Renata P. Raffin
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SUMÁRIO
Introdução
Materiais e Métodos
Resultados e Discussão
Conclusão
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O objecivo deste trabalho foi desenvolver nanopartículas lipídicas
sólidas e avaliar o potencial dessas nanopartículas como portadoras
de Penciclovir para aplicação tópica.
Materiais e preparação das SLNs
SLNs
Caráter promissor das
SLNs como
carregadoras de
Penciclovir na
aplicação tópica.
Caracterização Físico-química das SLNs
Avaliação da permeação percutânea in
vitro e comportamentos da absorção na
pele
Análise por HPLC do Penciclovir
Investigação sobre os mecanismos de
penetração
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INTRODUÇÃO
Penciclovir é um nucleosídeo sintético análogo, é um potente e altamente
seletivo inibidor do vírus da herpes.
Inibidor:
Vírus herpes simplex tipo 1 e tipo 2.
Vírus varicela-zoster.
Vírus Epstein-Barr.
Vírus da hepatite e citomegalovírus.
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Mas...
A biodisponibilidade oral do Penciclovir é muito baixa (5 à 10%) e sua
aplicação clínica é muito restrita.
Sendo que...
Um caminho promissor de administração do penciclovir é a entrega tópica.
O que tem atraído a atenção de pesquisadores
Na qual
As várias formulações tópicas na literatura
incluindo gel, creme e veículos adequados com
capacidade de permeação alta.
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A alternativa que surge é...
Nanopartículas lipídicas sólidas (SLNs)
Devido vantagens como:
Sendo utilizada como
transportadora do Penciclovir
Irritação da pele desprezível.
Liberação controlada.
Da protecção para as
substâncias ativas.
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MATERIAIS
Poloxamer 188 e Brij 78 foram obtidos da Sigma Chemical
(St. Louis, MO, EUA).
O Penciclovir (pureza 99%) foi comprado
Pharmaceutical Group Co., Ltd. (Changzhou, China).
Fosfatidilcolina de ovo (EPC)
(Ludwigshafen, Alemanha).
foi
obtido
a
da
partir
Livzon
Lipoid
Monoestearato de Gliceril (GMS) foi fornecido pela Shanghai Co.
Ltd. (China Shanghai).
Diclorometano, Tween 80 e Tween 20 foram adquiridos da
Yongda reagente químico Co. Ltd. (Tianjin, China).
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MÉTODOS
PREPARAÇÃO DAS NANOPARTÍUCLAS LIPÍDICAS SÓLIDAS
SLNs foram preparados por técnica
(água/óleo/água) com ligeiras modificações.
de
dupla
emulsão
6mg de penciclovir foi dissolvido numa solução de 200 µl de
hidróxido de sódio 0,1 M.
fase de óleo foi preparada por dissolução de uma quantidade
diferente de GMS e 40mg de EPC em 1 ml de diclorometano.
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A fase interna aquosa foi misturada com a fase de óleo e em
seguida submetida a sonda ultra-sônica por 60 segundos de 40
Watts para obter a primeira parte da emulsão água/óleo.
A emulsão água/óleo/água foi formado após a adição de 3,8 ml da
solução com surfactante em diferentes concentrações e em
seguida passou por sonicação por 18 segundos em 40 Watts.
A emulsão formada foi mantida em 25 ºC sob agitação mecânica em
700 rpm por 5 h para remover o solvente orgânico e formar as
SLNs.
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As variáveis como a concentração de GMS, tensoativos na fase externa e
suas concentrações estão diretamente ligadas a eficácia das SNLs contendo
Penciclovir.
Sendo que estas...
Foram investigadas para conseguir uma formulação ideal.
O pó de SLNs foi preparado por liofilização com 5,0%
manitol como agente de apoio, a fim de facilitar a investigação.
As amostras de SNLs dispersão com manitol foram congeladas em
um freezer ultra frio a -80°C durante 24 h, em seguida, liofilizadas
utilizando um liofilizador em -40°C, com pressão de 0,10 mbar por
48 h para produzir o pó seco.
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Caracterização físico-química das SLNs
Tamanho de Partícula e Potencial Zeta
Diâmetro – PCS – distribuição de volume
Potencial Zeta
25° C
triplicata
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Morfologia
Placa de cobre
Tingimento com PTA
Excesso removido
Secagem da amostra
Análise com TEM
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Eficiência de Encapsulação (EE) e
Carregamento de Fármaco (DL)
ultrafiltração
centrifugação
10.000 rpm
1h
25° C
WFi  WFL
EE 
100%
WFi
WFi  WFL
DL 
100%
WLip
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Estudo de Estabilidade
Estabilidade Físico-química:
T = 4° C
t = 3 meses
Transparência
Tamanho de partícula
EE
Estabilidade Física:
Teste de centrífuga – 13.000 rpm/30 minutos
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Análise de calorimetria diferencial de varredura
(DSC)
Células de Al
10° C/min →
30 - 400° C
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Permeação percutânea in vitro e comportamento de
absorção na pele
Preparação da pele
Ratos Wistar machos (~200g)
Pêlos removidos
Pele da região abdominal
Integridade – lâmpada de inspeção
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Estudo de permeação in vitro
Amostras com 3,8 cm2
Hidratação
37° C – 600 rpm
1,2 mg de penciclovir
800 μl de suspensão
120 mg de creme
Aplicação na pele
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Cálculo dos dados de permeação in vitro
n 1
Qn 
Cn  V0   Ci  Vi
i 1
A

 D
Qn  A  K  L  C0  2t
L


 D
Qn
 K  L  C0  2t
A
 L
 (1) 
 1  2 
    2    2  e
  6  
 n 
  1 
   
  6 
n
J  C0
 D n 2 2t 


 L2








K D
 C0  K p
L
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Determinação do conteúdo de fármaco na epiderme e
na derme
2, 6 e 12 horas após tratamento
Excesso removido – lavagem com álgool e água
Imersão em água destilada (2 min)
Epiderme/Derme –
ácido perclórico (24 h)
Homogeneização (1 min)
Sonicação (1 h)
Centrifugação
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Análise HPLC do penciclovir
HPLC + coluna
Alíquotas de 20 μg
Ensaio linear para 1-50 μg/ml
Nenhuma interferência
Filtro de membrana de celulose
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Investigação do mecanismo de reforço de
penetração
Efeito das SLNs na superfície da pele do rato
Encontrar efeito tópico nas peles
Estudos patológicos – formalina 10%
coloração com hematoxilina/eosina
figuras microscópicas - microscópio
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Investigação DSC
Epiderme em filtro com tripsina
4° C por 24h/ 37° C por 1h
EC removido - tripsina
Enxágue – “dessecador”
Amostra dividida – análise em DSC
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Resultados e discussão
Otimização de Formulação
Para otimizar SLNs penciclovir foi elaborado um método de dupla emulsão,
diferentes variáveis na formulação foram avaliados.
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Otimização de Formulação:
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Caracterização:
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Estabilidade:
•SLNs Penciclovir apresentaram uma boa estabilidade
durante o
período de três meses;
• Nenhuma alteração óbvia de clareza e de
degradação
foram encontrados;
•O diâmetro médio delas foi 264,5 ± 9.3nm.
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Estudo DSC:
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Permeação cutânea e comportamentos de
absorção da pele:
Fig. 3. Percutaneous permeation profiles of penciclovir from the SLNs and the commercial cream through
the excised rat skins (mean±S.D.; n = 5).
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Permeação cutânea e comportamentos de
absorção da pele:
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Permeação cutânea e comportamentos de
absorção da pele:
Fig. 4. The amount of penciclovir in epidermis (a) and dermis (b) after 2, 6, and 12 h, respectively.
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Efeito na superfície da pele de ratos:
Fig. 5. Microphotograph (400×) of vertical section of rat skin (H/E staining): (a) untreated skin, (b) skin treated with
commercial cream, and (c) skin treated with penciclovir-loaded SLNs.
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CONCLUSÃO
 SLNs de Penciclovir penetrou na pele de ratos 2 X mais que o creme
comercial, com um controle de 12 após a administração.
 SLNs de Penciclovir teve um aumento de 130% na penetração na derme
comparado com o creme comercial.
 O estudo mostrou que as SLNs aumentaram a penetração de Penciclovir.
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OBRIGADO!
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