RAIO-X, EDX E MEV COMO MÉTODOS DE AVALIAÇÃO DO PROCESSO DE REPARAÇÃO DO TECIDO ÓSSEO: REVISÃO DE LITERATURA Alexandre Greca Diamantino, Renata Amadei Nicolau Universidade do Vale do Paraíba / Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento (IP&D), Av. Shishima Hifumi, 2911, Urbanova, CEP 12244-000, São José dos Campos, SP, Brasil, e-mail: [email protected]; [email protected] Resumo- A terapia de enxertos ósseos é aplicada com finalidade de adequações estéticas e funcionais. Na sua utilização, os aspectos relacionados à origem do material enxertado (autógeno, alógeno, xenógeno ou sintético) devem ser considerados e correlacionados com as suas propriedades de osteocondução, osteoindução e osteogênese. Assim, torna-se imprescindível o emprego de métodos fidedignos e precisos de avaliação clínica e de pesquisas que visam observação destes parâmetros. Com base nesta questão, este trabalho tem como proposta realizar um levantamento bibliográfico da utilização do Raio-X, da Espectroscopia de Energia Dispersiva de Raio-X (EDX) e da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) como modalidades competentes de avaliação do processo de regeneração do tecido ósseo, uma vez que para este fim, é fundamental que as análises permitam a visualização da organização do trabeculado ósseo, das células e dos elementos químicos presentes. Palavras-chave: Raio-X; EDX; MEV; Enxerto ósseo Introdução O objetivo primário das técnicas de enxertia óssea é proporcionar um preenchimento ou união do defeito com um material que possua propriedades osteoindutivas e/ou osteocondutivas. Além disso, o resultado da enxertia está na dependência da ativa participação do enxerto no processo da osteogênese reparativa, no qual o osso autógeno possui superioridade e vantagem de não ser transmissor de doenças infectocontagiosas e de não promover reações imunes. Mas limitações de aplicação do osso autógeno, como quantidade insuficiente de material doador e/ou necessidade de abertura de áreas doadoras com intervenção em outro leito e conseqüente aumento da morbidade do procedimento cirúrgico levam a necessidade de uso de outros materiais de enxertia. Considerando que já são conhecidos os processos de reparação óssea com materiais doadores de diversas naturezas, é imperativa a aplicação de métodos de pesquisa que demonstrem as propriedades e a eficácia peculiares a cada um destes, permitindo assim, a seleção precisa e confiável destes materiais de enxertia para a prática clínica. Metodologia Este levantamento bibliográfico foi elaborado com base em pesquisas de artigos recentes nacionais e internacionais indexados no banco de dados Pubmed e Capes em um período de publicações de 2002 a 2009 visando analisar a aplicação do Raio-X, do EDX e do MEV como modalidades de avaliação em estudos do processo de reparo e regeneração do tecido ósseo. Revisão de Literatura Os procedimentos para aumento e/ou manutenção de tecido ósseo podem ser requeridos no tratamento de perdas ósseas em traumas bucomaxilofaciais, lesões periodontais, lesões císticas, deficiências congênitas, aumento de rebordo alveolar, lesões apicais e preparação de leito para a colocação de implantes. Tendo em vista a necessidade da obtenção do substituto ósseo ideal, pesquisas vêm aprimorando o desenvolvimento de materiais. As diferentes possibilidades de material doador para os enxertos ósseos e seus diferentes mecanismos de ação geram questões relacionadas as necessidades de avaliação de parâmetros que possibilitem melhores condições de sua incorporação ao leito receptor e consequentemente no sucesso do resultado (CHAN et al., 2002). A aplicação do Raio-X é um método de diagnóstico para o tecido ósseo (FIGUEIREDO et al. 2004; OLIVEIRA et al., 2006) e pode trazer importantes informações indicativas à fraturas, tumores, quadros degenerativos e osteomielite (inflamação óssea causada por infecção), além de possibilitar dados referentes ao processo de ossificação em um intervalo de tempo. Os RaiosX são ondas eletromagnéticas de alta freqüência XIII Encontro Latino Americano de Iniciação Científica e IX Encontro Latino Americano de Pós-Graduação – Universidade do Vale do Paraíba 1 produzidas em tubos de vácuos, nos quais um feixe de elétrons é submetido a uma rápida desaceleração ao colidir contra um alvo metálico. O fato das radiografias convencionais serem bidimensionais, não permite avaliação fidedigna da quantidade e qualidade óssea da área de interesse (FIGUEIREDO et al. 2004). Assim, para suprir as necessidades de diagnóstico, planejamento e de controle pós-operatório, os Raios-X são utilizado em métodos como a tomografia computadorizada (BAUER & LINK, 2009; PARK et al., 2009) , que ao invés da projeção simples, utilizam uma combinação matemática de centenas de projeções, formando uma imagem sem distorções, num único plano, que geralmente é transverso ao eixo longitudinal corporal. A análise de densitometria é outro método que permite a avaliação da qualidade do tecido ósseo, constituindo uma importante aplicação do Raio-X na medicina para diagnóstico e avaliação em casos de osteoporose em ossos longos (OLIVEIRA et al., 2006). A espectroscopia de energia dispersiva de Raio-X (EDX) tem sido demonstrada em vários estudos (MORIYAMA et al., 2004; MARTINELLI et al. 2006; E´GUES et al., 2008) como método de avaliação do tecido ósseo, sendo este um instrumento de análise que permite a aferição dos elementos químicos presentes em vários tipos de amostra assim como determinação das concentrações com grande precisão. Isto é possível através da aplicação de Raios-X nas superfícies da amostra e a posterior análise dos fluorecentes Raios-X emitidos. É uma técnica não destrutiva para todos os tipos de amostras, possibilitando sua aplicação em pesquisas e controle de qualidade em uma ampla área de atuação. Estudos para avaliações do tecido ósseo com utilização do EDX (YU et al., 2008; POULSSON et al., 2009; CHARLES et al., 2009), mostram que este método permite a análise qualitativa rápida dos constituintes principais da amostra, detectando a presença de vários elementos como o O, Na, Mg, Cl, P e Ca, com observação de quantidade majoritária para os elementos Ca e P (PICON et al., 2006). No processo físico pertinente à análise, ocorrem fenômenos de interação da radiação com a matéria, dentre eles o efeito fotoelétrico, que é sinal de interesse da análise e o espalhamento da radiação incidente, o qual reduz a razão sinal/ruído e conseqüentemente, a sensibilidade. As análises EDX são rápidas e não requerem o uso de regentes e vidrarias especiais, além de não produzir quantidade significativa de resíduos. Estas características tornam esta técnica bastante viável para análise de rotina (BEST et al., 2008). A utilização de microscopia eletrônica de varredura (MEV) demonstra a possibilidade de visualização de imagens com alta ampliação (até 300.000 X) e resolução, permitindo a observação e registro de imagens tridimensionais (PICON et al., 2006). As imagens fornecidas pelo MEV possuem caráter virtual, sendo visualizadas em um monitor através da transcodificação da energia emitida pelos elétrons. O MEV é um recurso especialmente útil na caracterização de amostras biológicas não resistentes a grandes diferenças de pressão e qualquer outro tipo de amostra onde a metalização pode gerar artefatos. Um dos objetivos do MEV é a análise de superfícies irregulares, como é a do osso, possibilitando uma análise qualitativa uma vez que a análise quantitativa acurada de sua superfície é quase impossível pela dificuldade de padronizar amostras biológicas. Estudos em tecido ósseo que utilizam MEV para sua análise (LOPES et al., 2007; SCHIAPPARELLI et al., 2009) demonstram a capacidade deste método em permitir a análise da arquitetura óssea, a neoformação óssea em casos de reparação e a sua maturação. Nos casos de avaliação de resultados de enxertos realizados no tecido ósseo, a análise com MEV pode demonstrar o formato e o tamanho das partículas dos substitutos ósseos (CRUZ et al., 2007). Resultados e Discussão A partir dos dados encontrados na literatura, algumas constatações podem ser realizadas. Os diversos estudos avaliados nesta revisão da literatura desenvolveram diversas modalidades de pesquisa relacionadas ao tecido ósseo, mas sempre pertinentes à necessidade de observação e investigação do comportamento ósseo em várias modalidades terapêuticas e de análise de resultados ligados à estrutura física e ao padrão celular. De modo independente ou conjugado as técnicas de Raio-X, EDX e MEV, são capazes de promover importantes informações relacionadas ao tecido ósseo. Assim, estes métodos de análise, podem ser possíveis desde modalidades mais simples de avaliação do tecido ósseo por meio de Raio-X, obtidas por técnicas convencionais de obtenção de imagens bi-dimensionais (FIGUEIREDO et al. 2004; OLIVEIRA et al., 2006) até uma investigação e visualização de componentes químicos (PICON et al., 2006) e celulares e também do padrão estrutural do tecido ósseo (CRUZ et al., 2007), com imagens tridimensionais com alta resolução e possibilidade de ampliação de até 300.000 vezes no caso do MEV (PICON et al., 2006). Atualmente, as imagens digitais obtidas são anexadas ao computador da estação de trabalho e, uma vez armazenadas possibilitam a análise XIII Encontro Latino Americano de Iniciação Científica e IX Encontro Latino Americano de Pós-Graduação – Universidade do Vale do Paraíba 2 das imagens especializados. obtidas utilizando programas Conclusões A aplicação do Raio-X em técnicas convencionais de radiografia apresenta diversas limitações de resultados. A análise em um padrão tridimensional é possibilitada somente com utilização de um sistema de processamento de imagens captadas em vários planos. A necessidade de observação mais acurada de padrões relacionados à estrutura química e física do tecido ósseo exige a aplicação de técnicas como o MEV e o EDX. A associação destas modalidades de análise permitirá a observação quantitativa e qualitativa da amostra. Referências BAUER, J.S.; LINK, T.M. Advances in osteoporosis imaging. Eur J Radiol. V.1, 2009. 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