Análise da sequência do gene TcPR-4 isolado da

Sara Pereira Menezes1, Edson Mário de Andrade Silva2, Lívia Santos Lima Lemos3, Karina Peres Gramacho4, Fabienne Micheli5
Estudante de doutorado, UESC; [email protected];(77) 9123 2933 – Bolsista CAPES.
2 Estudante de graduação, UESC – Bolsista CNPq.
3 Professor pesquisador, UESC/CEPLAC.
4 Pesquisador, Ceplac/Cepec & Professor UESC..
5 Pesquisador, UESC/CIRAD, França.
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INTRODUÇÃO
Os genes que codificam para as proteínas relacionadas à patogênese (PRs) são geralmente expressos nas plantas em situações de defesa contra patógenos. As proteínas PR são
classificadas em 17 famílias baseadas na sequência e propriedades biológicas. A família PR-4 é caracterizada por codificar para proteínas acídicas de baixo peso molecular (13 a 16kDa)
compreendendo as quitinases de classe I e II.
MATERIAL e MÉTODOS
O gene TcPR-4 foi identificado de uma bliblioteca de interação de Theobroma cacaoMoniliophthora perniciosa. Ferramentas de Bioinformática foram usadas para análise da
sequência. A análise da ORF (open reading frame) foi realizada no programa ORF Finder
seguido de busca por homologia no BLAST e alinhamento no ClustalW2. Possíveis sítios de
fosforilação foram analisados pelo NetPhos 2.0 Server, a predição da massa molecular e do
ponto isoelétrico no Expasy e o ponto isoelétrico no SignalP 4.0 Server.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
O gene TcPR-4 identificado na interação de Theobroma cacao-Moniliophthora
perniciosa apresenta uma ORF de 429pb que codifica para uma proteína de
142 aminoácidos com massa molecular de 16kDa e ponto isoelétrico (pI) 6,69
possuindo peptídeo sinal com ponto de clivagem entre os aminoácidos A20 e
Q21 e sítio de fosforilação no resíduo T97. A proteína apresenta o domínio
funcional barwin com seis resíduos de cisteínas conservados e não possui sítio
de ligação à quitina sendo classificada como PR-4 de classe II.
Figura 1. Sequência de nucleotídeos e aminoácidos da proteína relacionada à
patogênese 4 (TcPR-4). A região do peptídeo sinal está sublinhada o restante da
sequência corresponde ao domínio barwin. O sítio de fosforilação está destacado
em negrito e sublinhado.
A
Figura 3. Alinhamento da sequência de aminoácidos de TcPR-4 . Os
aminoácidos idênticos, altamente conservados e conservados entre as
sequências estão identificados com (*), (: ) e (.), respectivamente. Os resíduos
de conservados de cisteínas estão destacados em preto.
CONCLUSÕES
O gene TcPR-4 pertence à classe II de quitinase com domínio funcional
barwin sendo um gene com potencial biotecnológico para combate ao
fungo Moniliophthora perniciosa.
B
Agradecimentos: À Dra. Karina Peres Gramacho (Cepec/Ceplac) pelo
suporte no desenvolvimento deste trabalho.
Figura 2. A- Predição de peptídeo sinal no gene TcPR-4 usando o sofwtare SignalP 4.0
Server. B – Análise da presença de domínio funcional no gene TcPR-4 (InterProScan).