uso de isolados de bactérias endofíticas como agentes - IFRS

USO DE ISOLADOS DE BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS COMO AGENTES DE
BIOCONTROLE DA DOENÇA PÉ-PRETO EM VIDEIRA
PACINI, B. A. H.¹; COMACHIO, L.B²; TONELLO, J. C.³; ALMANÇA, M. A. K.4
RESUMO: A doença do Pé-preto ataca videiras jovens pelo seu sistema radicular, e tem como
1
agentes causais fungos do gênero Cylindrocarpon spp. Pesquisas apontam diversas bactérias
endofíticas como agentes de biocontrole. O objetivo do trabalho foi realizar o teste de
antagonismo in vitro entre um isolado de Cylindrocarpon spp. e bactérias endofíticas. Os
diferentes isolados de bactérias foram identificados de 1 a 30. O teste foi realizado utilizandose placas de Petri contendo meio de cultura BDA. Inoculou-se um fragmento de 5mm com
micélio do fungo no centro da placa e duas estrias de bactérias a 2 cm das bordas. Como
controle foi colocado apenas o fungo. Todos os tratamentos tiveram 5 repetições. As médias
do crescimento micelial foram comparadas por teste de Tukey 5%, através do programa
estatístico SPSS. Do total de tratamentos, as bactérias 1, 3, 20, 27 e 30 diminuíram o
crescimento micelial de Cylindrocarpon spp., diferindo-se estatisticamente da testemunha.
Baseado nisso, conclui-se que isolados de bactérias endofiticas apresentam potencial uso
como biocontrole do Pé-preto.
Palavras-chave: Antagonismo. Crescimento micelial. Controle biológico.
1 INTRODUÇÃO
No cenário mundial da viticultura, o declínio e morte de plantas de videiras associadas
a fungos traz graves prejuízos, representando um problema a ser enfrentado (HALLEEN et
al., 2003). No Estado do Rio Grande do Sul, esses mesmos fatores foram citados como os
limitantes à expansão da atividade (ALMANÇA; CAVALCANTI; BUENO, 2013).
O declínio e morte de videiras são ocasionados por um complexo de doenças fúngicas
que afetam o tecido lenhoso das raízes ou do colo das plantas, provocando infecções severas e
podridões que prejudicam ou evitam a sobrevivência devido ao comprometimento dos vasos
condutores de seiva.
Dentre as doenças de tronco de videira, destaca-se o Pé-preto. O ataque dos fungos é
feito em plantas jovens por meio do sistema radicular. Esta doença é citada por Alaniz et al.
1
Bolsista IFRS Campus Bento Gonçalves, Av. Osvaldo Aranha, 540, CEP 95.700.-206, Bento Gonçalves, RS,
[email protected]
² Bolsista IFRS Campus Bento Gonçalves, Av. Osvaldo Aranha, 540, CEP 95.700.-206, Bento Gonçalves, RS,
[email protected]
³ Bolsista Ballagro, IFRS Campus Bento Gonçalves, Av. Osvaldo Aranha, 540, CEP 95.700.-206, Bento Gonçalves, RS,
[email protected]
4 Eng.º Agrônomo, Prof. Doutor, IFRS Campus Bento Gonçalves, Av. Osvaldo Aranha, 540, CEP 95.700-206, Bento
Gonçalves, RS, [email protected]
(2007) como uma das mais importantes doenças de tronco e raiz que afetam viveiros e
vinhedos novos de todo o mundo. Os agentes causais dessa doença são fungos pertencentes ao
gênero Cylindrocarpon spp.
Os agrotóxicos são utilizados de forma intensiva, provocando prejuízos ao meio
ambiente e as pessoas. Com isso, há uma demanda de pesquisas que apontem formas de
controle de doenças que sejam menos nocivas. Nesse contexto, os agentes de biocontrole têm
sido adotados com frequência. Pesquisas apontam diferentes espécies de bactérias endofíticas
como biocontroladoras de grande quantidade de microrganismos, sendo aplicáveis em
diversas culturas.
O objetivo do presente trabalho foi realizar o teste de antagonismo in vitro entre um
isolado de Cylindrocarpon spp. e de bactérias endofíticas de videira.
2 METODOLOGIA
As bactérias endofíticas utilizadas tiveram sua origem por isolamentos feitos em
plantas de videira da Serra Gaúcha, Rio Grande do Sul. Elas foram identificadas por números
1 a 30. O fungo utilizado é o isolado 176 TD da micoteca do Laboratório de Fitopatologia do
IFRS/BG, identificado morfologicamente como Cylindrocarpon spp. Os fragmentos do fungo
utilizados no experimento advinham de uma placa de Petri com 30 dias de inoculação.
Para teste de antagonismo in vitro, utilizou-se metodologia adaptada de Benhamou &
Chet (1993). O experimento foi realizado utilizando-se placas de Petri de 90mm contendo
meio de cultura BDA (Ágar Batata Dextrose). Inoculou-se um fragmento de 5mm com
micélio do fungo no centro da placa e distante a 2cm das bordas inoculou-se a bactéria na
forma de estria. Foram feitas duas estrias por placa com tamanho (2cm) e conteúdo (10µL de
meio de cultura líquido) padronizados. As bactérias foram cultivadas em meio líquido TSB
(Tryptone Soya Broth) e mantidas em incubadora tipo BOD, sem fotoperíodo, por 72 horas à
28ºC. O controle contava apenas com a inoculação do fungo, sem acréscimo de nenhuma
bactéria. Todos os tratamentos tiveram cinco repetições.
A avaliação foi realizada com medições do diâmetro da colônia feitas com paquímetro
digital ao décimo dia após a montagem do experimento. As médias do crescimento micelial
de cada tratamento foram comparadas por teste de Tukey 5%, através do programa estatístico
SPSS Statistic.
3 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Do total de 30 bactérias testadas, apenas cinco delas tiveram efeito significativo sobre
a redução do crescimento micelial de Cylindrocarpon spp., ou seja, cerca de 15% das
bactérias selecionadas são eficientes agentes de controle biológico.
O índice de isolados antagonista é maior que o encontrado por Cottyn et al. 2009,
apenas 4% dos isolados inibiram o crescimento de Pyricularia grisea, 4% inibiram a
Rhizoctonia solani AG1 e 8% inibiram ambos os fungos. Procópio (2004) isolou e testou
bactérias endofíticas de eucalipto contra Cylindrocladium scoparium e B. cinerea obteve
13,6% de isolados efetivos na inibição desses patógenos, tal dado possui muita semelhança
com o encontrado no presente trabalho.
Figura 1: Crescimento micelial do diâmetro do fungo Cylindrocarpon spp. submetido a teste de antagonismo
com 30 bactérias endofíticas diferentes isoladas de videiras da Serra Gaúcha.
Dentre as cinco bactérias que foram eficientes no biocontrole de Cylindrocarpon spp.
existem diferentes percentuais de redução de crescimento micelial. A redução de crescimento
foi de aproximadamente 50%(Bac 1), 35% (Bac 3), 50% (Bac 20), 32% (Bac 27) e 60% (Bac
30).
Santos et al. (2013) fez teste de antagonismo de bactérias endofíticas isoladas das
folhas de Trichilia elegans A. Juss. ao fungo Colletotrichum sp. (causador de antracnose em
diversas culturas). Os índices de antagonismo foram de, aproximadamente, 38% (isol. 37),
10% (isol. 40), 5% (isol. 48), 13% (isol. 52), 13% (isol. 53) e 5% (isol. 54). Confrontando-os
com os índices encontrados no presente trabalho, nota-se que os percentuais de redução de
crescimento micelial atingidos pelas bactérias eficientes contra o Cylindrocarpon spp. são
maiores chegando a até 60% de redução para o isolado 30.
Ferreira, Matthee e Thomas (1991) encontrou uma média de 88% de inibição de
bactérias a Eutypa lata, valor superior as médias de inibição do presente trabalho que é de
45%.
4 CONCLUSÕES
Baseado nisso, conclui-se que há diferenças dos efeitos de cada isolado de bactéria
endofítica proveniente de isolamentos da Serra Gaúcha sobre Cylindrocarpon spp., sendo que
cinco isolados apresentam potencial para uso na agricultura como agentes de biocontrole do
Pé-preto.
5 REFERÊNCIAS
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BENHAMOU, N. & CHET, I. Hyphal interactions between Trichoderma harzianum and
Rhizoctonia solani: ultrastructure and gold cytochemistry of the mycoparisitic process.
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CAVALCANTI, F. R., ALMANÇA, M. A.K., BUENO, J. Declínio e morte de plantas de
videira. Embrapa Uva e Vinho, Bento Gonçalves. (Documentos). 2013.
COTTYN, B.; DEBODE, J.; REGALADO, E.; MEW, T.W.; SWINGS, J. Phenotypic and
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FERREIRA, J. H. S.; MATTHEE, F.N.; THOMAS, A. C. Biological Control of Eutypa lata
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1991.
HALLEEN, F.; CROUS, P. W.; PETRINI, O. Fungi associated with healthy grapevine
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SANTOS, C. M.; RHODEN, S. A.; GARCIA, A.; POLONIO, J. C.; POLLI, A. D.;
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Internacional de Produção Científica Cesumar, 2015.