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Anais do VII CONERA – Bovinos
Acta Veterinaria Brasilica, v.8, Supl. 2, 2014
AVALIAÇÃO DO EFEITO DA MELATONINA SOBRE O GRAU DE
QUALIDADE DE EMBRIÕES BOVINOS PRODUZIDOS IN VITRO
[Evaluation of the effect of melatonin on the quality grade of bovine embryos produced in vitro]
Luiz Harliton Cavalcante Monteiro Mota1, Felipe Pereira da Silva Barçante1*, Ícaro Oliveira Torres de
Souza1, Yndyra Nayan Texeira Carvalho1, Savio Ruan Sampaio de Sousa1, José Adalmir Torres de Souza1
1
Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal - LBR, UFPI. *Autor para correspondência. E-mail:
[email protected].
ABSTRACT - The present study evaluated the effect of melatonin on the degree of embryonic quality during
the process of in vitro production of embryos. 512 cumulus-oocyte complexes of type I and II were submitted to
in vitro production of embryos with 0 and 100 µM of melatonin in the maturation medium. There was no
difference relative to the rate of cleavage 36.44% vs 32.93% and total viable embryos 16.44% vs 12.16% (p
<0.05). Likewise, there was no difference in the degree of embryonic quality (p <0.05). Therefore, the medium
supplemented with melatonin was not able to improve the cleavage rate, total viable embryos and quality of
embryos fertilized in vitro.
Keywords: ROS; antioxidant; blastocyst; embryo quality.
Palavras-Chave: ROS; antioxidante; blastocisto; qualidade embrionária.
INTRODUÇÃO
A qualidade e a integridade do oócito podem
influenciar o sucesso da fertilização in vitro, assim
como a competência do desenvolvimento até a fase
de blastocisto. No entanto, durante o processo de
ovulação, são produzidas dentro dos folículos
espécies reativas de oxigênio (ROS), que levam ao
estresse oxidativo, prejudicando o desenvolvimento
in vitro dos oócitos até a fase de blastocisto (Papis
et al., 2007). A melatonina que é conhecida por
modular a função ovariana em mamíferos, atua
também como uma eliminadora dos ROS, agindo
como um potente antioxidante, evitando o estresse
oxidativo durante a maturação oocitária e no
desenvolvimento embrionário (Tsantarliotou et al.,
2007). Diante disso, o objetivo desse trabalho foi
avaliar os efeitos na melatonina adicionada ao meio
de maturação in vitro, sobre a qualidade durante o
desenvolvimento embrionário em bovinos.
MATERIAL E MÉTODOS
O projeto foi desenvolvido no Laboratório de
Biotecnologia da Reprodução Animal (LBR), da
UFPI, durante o período de abril a junho de 2013.
Os ovários foram obtidos de fêmeas bovinas
abatidas em frigoríficos de Teresina-PI. No
laboratório, os complexos cumulus-oócitos (CCOs)
foram recuperados por aspiração e classificados de
acordo com a qualidade morfológica em Graus I, II,
III e IV. Foram selecionados 512 CCOs de grau I e
II, para maturação.
Os CCOs selecionados, foram maturados com 0 e
100 µM de melatonina, acrescido ao meio de
maturação (Nutricell®), suplementado com 10% de
SFB (Soro Fetal Bovino), sob óleo mineral em
incubadora a 38,5 ºC, por 22 horas, em 5% de CO 2
em ar. Após as 22 horas, os CCOs maturados foram
transferidos para o meio de fecundação
(Nutricell®) suplementado com Heparina e PHE
(Nutricell®). O sêmen foi descongelado e
submetido ao gradiente de Percoll. Em seguida foi
determinada a concentração espermática e ajustada
para 25 x 106 espermatozoides vivos/mL. Após a
FIV, os prováveis zigotos foram transferidos para o
meio SOF (Nutricell®) suplementado com 5% de
SFB e mantidos em estufa à temperatura de 38,5 ºC,
em 5% de CO2, durante 7 dias. No quinto dia de
cultivo foi realizado o (feeding). A avaliação da
taxa de clivagem foi realizada com 48 horas de
início da FIV e a formação de blastocisto após 168
horas. As taxas de clivagem e de blastócitos foram
avaliadas pelo teste não-paramétrico de QuiQuadrado (2), e a comparação das medias pelo
teste de Student-Newman-Keuls (SNK), ao nível de
5% de probabilidade. Os dados foram avaliados
pelo programa SAS (Statistical Analysis System),
versão 9.0 (SAS 2002).
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RESULTADOS E DISCUSSÃO
No presente estudo, não houve diferença na taxa de
clivagem (Tab. 1), 36,44% para 0 µM de
melatonina no meio de MIV e 32,93% para 100 µM
de melatonina no meio de MIV (p<0,05). Da
mesma forma não houve diferença no Total de
embriões viáveis (Tab. 1), 16,41% para 0 µM de
melatonina no meio de MIV e 12,16% para 100 µM
de melatonina no meio MIV (p<0,05). Com relação
aos graus de qualidade embrionária (GI, GII, GIII)
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(Tab.1), também não houve diferença significativa
em (p<0,05). Esses resultados corroboram com
Adona et al., (2008), onde a adição de 100 µM de
melatonina no meio de maturação in vitro, não
interferiu na taxa de clivagem e nos diversos
estágios de desenvolvimento embrionário. No
entanto, esses resultados discordam com estudos
em que a concentração de melatonina de 1 pM e
100 µM aumentou o desenvolvimento embrionário
em bovinos (TAN et al., 1993).
Tabela 1. Taxa de clivagem, total de embriões viáveis e grau de qualidade embrionária em meio suplementado
com melatonina
0 µM
100 µM
Taxa de Clivagem (%)
36,44±13,50a (100/281)
32,93±10,26 a (93/277)
Total de Embriões
16,41±5,13 a (44/281)
12,16±6,55 a (36/277)
Viáveis (%)
GI
1,50±0,63 a
1,37±0,50 a
a
GII
2,62±0,88
2,31±1,25 a
a
GIII
1,68±0,87
1,56±0,81 a
*Médias, seguidas da mesma letra minúscula na mesma linha não difere entre si pelo teste de SNK (p<0,05).
GI=Grau 1; GII=Grau 2; GIII=Grau 3
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
CONCLUSÕES
Os meios suplementados com melatonina não
foram capazes de melhorar a primeira divisão
embrionária após a fecundação in vitro. Como da
mesma forma não melhoraram o grau de qualidade
embrionária, produzindo taxas de embriões viáveis
similares aos obtidos pelos sistemas tradicionais de
PIV.
Adona, P. R., Pires, P. R., Quetglas, M. D. Schwardz, K. R.,
Leal, C. L. Nuclear maturation kinetics and in vitro embryo
development of cattle oocytes prematured with butyrolactone I
combined or not combined with roscovitine. Animal Science
Reproduction, v. 104, p. 389-397, 2007
Papis, K., Poleszczuk, O., Wenta-Muchalska, E., Modlinski, J.
Melatonin effect on bovine embryo development in vitro in
relation to oxygen concentration. Journal Pineal Research, v.
43, p. 321-236, 2007.
Tan, D. X., Chen, L. D., Poeggeler, B., Manchester, L. C.
Melatonin: A potent, endogenous hydroxyl radical scavenger.
Endocrinology, v. 1, p. 57-60, 1993.
Tsantarliotou, M. P., Attanasio, L., De Rosa, A., Boccia, L.,
Pellerano, G., Gasparrini, B. The effect of melatonin on bovine
in vitro embryo development. Italian Journal Animal Science, v.
6, p. 88-489, 2007.
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