BIOLOGIA DO DESENVOLVIMENTO EM PLANTAS __________________________________________ ANO LECTIVO 2012/13 1ª AULA PRÁTICA Dep. Biologia Vegetal, FCUL Morfologia Vegetal Esta aula prática pretende relembrar os alunos de alguns aspectos estruturais das plantas ao nivel morfológico e de organização, assim como da sua anatomia interna. Inicialmente iremos olhar para uma selecção de plantas consideradas como espécies modelo, que devido às suas características singulares permitem uma simples manipulação em condições de laboratório e a fácil caracterização a nivel bioquimico, fisiológico e genético. Como exemplos temos Physcomitrella patens, Arabidopsis thaliana, Nicotiana tabacum, Petunia hybrida. Focaremos com maior enfase a organização morfológica do corpo da planta e identificação de tipos de células e tecidos ao nivel da parte vegetativa (caules, folhas e raizes) e da parte reprodutiva (estrutura da flor). A interpretação correcta da morfologia de uma planta madura e do seu desenvolvimento constitui a linha de base para futuras comparações com fenótipos mutantes. Nesta aula utilizaremos vários métodos que permitem um exame microscópico rápido das células e tecidos vegetais com procedimentos simples como, clarificações, impressões superficiais, destacamento de epidermes e secções coradas de tecidos vivos. O questionário que acompanha este protocolo deverá ser realizado pelos alunos e entregue na próxima aula: Q1, Q2, Q3, Q4, Q5, Q7 Morfologia Vegetal Organização da Fase Vegetativa 1. Examine um ramo de Rosmarinus officinalis. Localize o meristema apical. Comece por remover as folhas com a ajuda de uma pinça ou de uma agulha fina. À medida que se aproxima do primórdio foliar mais jovem o número de folhas (e o seu tamanho) diminui. Finalmente deverá conseguir ver o meristema apical como um domo hemisférico brilhante e verde, entre os primórdios foliares mais jovens. Q1: Defina tecido meristemático. Onde estão localizados numa planta e qual a sua função? 1 2. Obtenha uma placa de Petri com plântulas de Arabidopsis ou Lactuca sativa (alface). Retire uma das plântulas e monte em água entre lâmina e lamela. Observe a preparação num microscópio ou numa lupa. Identifique cotilédones, hipocótilo e raiz primária, contendo raizes laterais emergentes. Localize a região do meristema apical caulinar (SAM “shoot apical meristem”) rodeado dos primórdios foliares em desenvolvimento, e o meristema apical da raiz (RAM “root apical meristem”) protegido pela coifa (“root cap”). Observe a estrutura da raiz. Q2: Em que difere o meristema caulinar do meristema radicular? 3. Examine uma roseta de Arabidopsis a crescer no solo. Observe a filotaxia helicoidal e a heteroblastia foliar. Começando pelos cotilédones, remova as folhas uma de cada vez na ordem em que elas se formam e monte numa lâmina de vidro com fita cola de dupla face. Q3: Como é que as folhas diferem em tamanho, forma e distribuição de tricomas? Morfologia Superficial 4. O padrão, forma e tamanho das células epidérmicas pode ser determinada rapidamente isolando a camada epidérmica ou fazendo impressões superficiais. Primeiro pratique removendo a camada epidérmica abaxial de uma folha de Kalaenchoe fazendo duas incisões na margem, levantando o tecido da folha com a ajuda de uma pinça até ao tecido vascular central da folha. Monte a camada epidérmica em água entra lâmina e lamela e observe. Identifique células epidérmicas e estomas. Q4: Que função atribui a cada uma destas células? Organização da Fase Reprodutiva 5. Examine os primórdios florais de Rosmarinus officinalis bem como as flores abertas que lhe foram fornecidas. Identifique a sequência de sepalas, pétalas, estames e carpelos. Q5: Quantas peças de cada orgão estão presentes? Qual a sua posição em relação aos orgãos do verticilo seguinte? 2 6. Observe o estigma e estilete de uma flor de Arabidopsis, Nicotiana e Hibiscus. Observe os estigmas numa lupa. Q6: Em que diferem e o que pode inferir da sua função celular? Anatomia Interna 7. Comece com caules de Malvacea. Remova 1-2 cm de caule e prepare secções longitudinais e transversais utilizando uma lâmina. Core os cortes numa solução de 0,5% azul de toluidina, numa caixa de Petri durante 15 segundos, lava em água e transfira para uma lâmina contendo uma gota de água. O azul de Toluidina é um corante metacromático que cora as paredes secundárias lenhificadas de azul/verde (xilema e esclerênquima) e paredes celulares ricas em pectinas de púrpura/rosa (floema). Identifique xilema, floema, parênquima, colênquima, esclerênquima e células epidérmicas. 8. Seccione, core e observe um caule de Arabidopsis. Identifique células epidérmicas, estomas e tricomas, tecido vascular (xilema e floema), e células do colênquima, esclerênquima e parênquima. Faça secções de folhas de Arabidopsis. Identifique células epidérmicas, de palissada, mesófilo esponjoso e tecidos vasculares. 9. Compare as secções obtidas com preparações definitivas de caule, folhas e raizes. Q7: Baseando-se nas observações, como classifica as plantas que observou? Indique brevemente as principais diferenças entre Monocotiledóneas e Dicotiledóneas. Bibliografia: 1. Steeves, AT and Sussex, IM. 1989. Patterns in Plant Development. Cambridge University Press. 2. Howel, H F. 1998. Molecular Genetics in Plant Development. Cambridge University Press. 3. Buchanan BB, Gruissem W and Jones RL.2000. Biochemistry & Molecular Biology of Plants. American Society of Plant Physiologists 3 Lista de Preparações Definitivas TECIDOS VEGETATIVOS 254- Ruscus hypoglossum (monocotyledonous stem, primary growth) 230- Pelargonium (dicotyledon stem, secondary growth,) 275 – Urtiga (dicotyledonous stem, secondary growth) 248- Ranunculus sp. (Dicotyledon stem, primary growth,) 462 – Rosa (dicotyledonous leaf) 432 – Helleborus foetidus (dicotyledon leaf) 435 – Iris germanica (monocotyledon leaf) 90 – Brassica (dicotyledonous root, secondary growth) 107 – Iris germanica (monocotyledon root) 120- Dicotyledonous root 4