1 efeito da temperatura e tempo de armazenamento sobre a

Como citar este capítulo:
CASSOLI, L.D., MACHADO, P.F., COLDEBELLA, A. Efeito da temperatura e tempo de armazenamento sobre a contagem individual
de bactérias em amostras de leite conservadas com azidiol. In: DURR, J.W., CARVALHO, M.P., SANTOS, M.V.
O Compromisso com a Qualidade do Leite. Passo Fundo: Editora UPF, 2004, v.1, p. 307-311.
EFEITO DA TEMPERATURA E TEMPO DE ARMAZENAMENTO SOBRE A
CONTAGEM INDIVIDUAL DE BACTÉRIAS EM AMOSTRAS DE LEITE
CONSERVADAS COM AZIDIOL
L.D. Cassoli , P.F. Machado1, A. Coldebella 2
1
Clínica do Leite, Departamento de Zootecnia, Escola Superior de Agricultura “Luiz de
Queiroz”, Universidade de São Paulo, Piracicaba, SP, Brasil. E-mail: [email protected]
2
EMBRAPA Suínos e Aves, Concórdia, SC, Brasil.
Introdução
De acordo com a Instrução normativa 51 do Ministério da Agricultura, Pecuária e
Abastecimento (MAPA), a partir de Junho de 2005, será obrigatória a determinação da
contagem bacteriana do leite produzido em todas as fazendas. Paralelamente, as indústrias de
laticínios já estão adotando programas de pagamento por qualidade que contemplam esta
determinação.
Para atender tal demanda de análise, o MAPA adquiriu equipamentos automatizados
de última geração que determinam o número de bactérias presentes no leite através da
citometria de fluxo. Tal metodologia permite a utilização de conservantes para prolongar a
vida útil da amostra de leite sem alterar as características do mesmo, proporcionando
resultados acurados.
O presente estudo tem como objetivo verificar o efeito da temperatura de
armazenamento e tempo decorrido entre a coleta e a análise em amostras preservadas com o
Azidiol, sobre a contagem individual de bactérias (CIB). Esses dados irão contribuir para a
elaboração de procedimentos adequados de armazenamento e conservação do leite para tal
determinação.
Material e Métodos
O leite utilizado foi coletado do tanque de expansão do rebanho leiteiro do
Departamento de Zootecnia da ESALQ/USP. Antes da coleta o agitador do tanque
permaneceu ligado por cinco minutos, proporcionando, desta forma, uma correta
homogeneização. Este leite foi distribuído em 130 frascos esterilizados, sendo que, em 120
destes adicionou-se 4 gotas do conservante Azidiol.
Os recipientes foram submetidos a um arranjo fatorial de tratamentos 3 x 4 +1, sendo
avaliadas três temperaturas de armazenamento (0, 7 e 22 oC), quatro tempos entre a
amostragem e a análise (1, 3, 5 e 7 dias), além do tratamento controle (sem
Azidiol e análise no dia da coleta). Em cada tratamento foram alocados 10 frascos.
As amostras foram analisadas pelo equipamento Bactocount® (Bentley Instruments,
2001) para determinação da CIB (contagem individual de bactérias).
As análises estatísticas foram realizadas utilizando-se o programa SAS (2001),
considerando um delineamento inteiramente ao acaso, sendo que o desdobramento da análise
foi realizado através do teste de Tukey (Gomes, 1976).
Disponível em: http://www.cbql.com.br/biblioteca.php
1
Como citar este capítulo:
CASSOLI, L.D., MACHADO, P.F., COLDEBELLA, A. Efeito da temperatura e tempo de armazenamento sobre a contagem individual
de bactérias em amostras de leite conservadas com azidiol. In: DURR, J.W., CARVALHO, M.P., SANTOS, M.V.
O Compromisso com a Qualidade do Leite. Passo Fundo: Editora UPF, 2004, v.1, p. 307-311.
Resultados e Discussão
Os resultados de CIB estão apresentados na Tabela 1. Os dados foram transformados
em logaritmo (LOG 10).
Tabela 1. Médias do LOG CBI para amostras armazenadas em diferentes temperaturas em
função do tempo entre a coleta e a análise.
Dias entre coleta e
análise
0
1
3
5
7
Controle
5,15 b
-
Temperatura de armazenamento
7oC
22oC
0oC
5,06 a
5,16 b
5,42 c
5,05 a
5,17 b
5,51 d
5,18 b
5,85 e
5,06 a
a
b
5,03
5,21
6,30 f
Médias seguidas por letras distintas diferem significativamente pelo teste de Tukey (P ≤0,05)
Na Tabela 2 são apresentadas as médias de CIB (mil bactérias/mL).
Tabela 2. Médias da CIB (mil bactérias/mL) para amostras armazenadas em diferentes
temperaturas em função do tempo entre a coleta e a análise.
Dias entre coleta e
análise
0
1
3
5
7
Controle
141
-
0oC
115
114
117
109
Temperatura de armazenamento
7oC
22oC
146
263
148
328
155
730
165
2061
O tempo entre a coleta e a análise influenciou a CIB, somente em amostras
armazenadas a 22oC. A CIB aumentou ao longo do tempo como pode ser observado na Fig. 1.
Amostras conservadas com Azidiol e mantidas a 7 °C tiveram CIB semelhantes à
amostra controle ao longo dos 7 dias, evidenciando que tal procedimento é o mais indicado,
como demonstrado também em outros estudos (Gunasekera et al., 2003).
Já as amostras armazenadas a 0oC (congeladas) tiveram CIB inferior à amostra
controle. A metodologia de citometria de fluxo requer células íntegras para que o corante atue
de forma satisfatória, proporcionando a identificação das bactérias (Guansakera et al., 2000).
O resultado obtido neste tratamento pode ser explicado pelo fato de que, durante o processo
de congelamento e descongelamento, as bactérias podem sofrer injúrias, impossibilitando a
contagem precisa das mesmas.
Disponível em: http://www.cbql.com.br/biblioteca.php
2
Como citar este capítulo:
CASSOLI, L.D., MACHADO, P.F., COLDEBELLA, A. Efeito da temperatura e tempo de armazenamento sobre a contagem individual
de bactérias em amostras de leite conservadas com azidiol. In: DURR, J.W., CARVALHO, M.P., SANTOS, M.V.
O Compromisso com a Qualidade do Leite. Passo Fundo: Editora UPF, 2004, v.1, p. 307-311.
6,40
6,20
LOG CBI
6,00
5,80
5,60
5,40
5,20
5,00
4,80
4,60
0
1
2
3
4
5
6
7
8
Tempo entre coleta e análise (Dias)
0oC
7oC
22oC
Figura 1. Médias do LOG CBI para amostras armazenadas em diferentes temperaturas em
função do tempo entre a coleta e a análise.
Conclusões
1.
2.
3.
4.
Amostras armazenadas a 7oC com Azidiol podem ser analisadas em até sete dias após a
coleta.
O congelamento das amostras provoca uma diminuição da CIB. Medidas devem ser
adotadas para que não ocorra eventual congelamento das amostras durante o transporte.
Amostras armazenadas a 22°C possuíam maior CBI após um dia da data de coleta. A
manutenção da temperatura ao redor de 7°C é fundamental para reduzir a multiplicação
bacteriana e garantir resultados confiáveis.
A conservação e armazenamento das amostras de leite até a análise é um ponto crítico de
controle a ser verificado dentro do processo de monitoramento da qualidade do leite.
Referências
1.
2.
3.
4.
5.
BRASIL, 2002. Regulamentos técnicos de produção, identidade, qualidade, coleta e
transporte de leite. MAPA. Diário Oficial da União, 18 de setembro de 2002.
Gomes, F.P. Curso de estatística experimental. 6.ª ed. São Paulo: Livraria Nobel, 1976.
Gunasekera, T.S.; Attfield, P.V.; Veal, D.A. A flow cytometry method for rapid detection
and enumeration of total bactéria in milk. Applied and Environmental Microbiology,
v.66, p. 1228-1232, 2000.
Gunasekera, T.S.; Veal, D.A.; Attfield, P.V. Potential for broad applications of flow
cytometry and fluorescence tecniques in microbiological and somatic cell analyses of
milk. International Journal of Food Microbiology, v.85, p. 269-279, 2003.
SAS INSTITUTE INC. System for Microsoft Windows, Release 8.2, Cary, NC, USA,
1999-2001. (cd-rom).
Disponível em: http://www.cbql.com.br/biblioteca.php
3