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ISSN: 1981-8963
DOI: 10.5205/reuol.530-5649-1-LE.0401201012
Silva TCL, Filho JV, Araújo JM, Albuquerque UP et al.
Antimicrobial activity of three species of Phyllanthus…
ORIGINAL ARTICLE
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF THREE SPECIES OF PHYLLANTHUS (QUEBRAPEDRA) AND ITS COMMERCIAL PRODUCT
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE TRÊS ESPÉCIES DE PHYLLANTHUS (QUEBRA-PEDRA) E DE
SEU PRODUTO COMERCIAL
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LAS TRES ESPECIES DE PHYLLANTHUS (QUEBRE-PEDRA) Y SUS PRODUCTOS
COMERCIALES
Tássia Campos de Lima Silva1, Jorge Veras Filho2, Janete Magali Araújo3, Ulysses Paulino Albuquerque4, Vânia
Teixeira Lima5, Elba Lúcia Cavalcanti Amorim6
ABSTRACT
Objective: to determine the antimicrobial activity of three plant species of the genus Phyllanthus (P. amarus Schum. and
Thom., P. tenellus Roxb. and Phyllanthus niruri L.) and its commercial dye (phytotherapic), opposite the bacteria and
yeasts. Method: we evaluated the antimicrobial activity against microorganisms by disk diffusion method, and then
evaluated minimum inhibitory concentration of the best results from the microdilution method. Results: the medicinal
species have antimicrobial activity to Gram-positive bacteria. The commercial dye showed significant antimicrobial
activity. The extracts showed the best activity for S. aureus (P. amarus with MIC 0.16 mg / mL and P. tenellus with MIC
0.10 mg / mL), opposite to B. subtilis results were also satisfactory (P. amarus 0.25 mg / mL and P. tenellus 0.30 mg /
mL). The commercial dye showed MIC greater than 1mg/ml only for S. aureus with MIC of 0.70 mg / mL, and for B. subtilis
showed MIC 1.10 mg / mL. With respect to the yeast, all substances were less significant than for gram-positive bacteria,
ranging from 0.70 to 1mg/ml for crude extracts and 1.10 to 1.20 mg / mL for the dyeing trade. Conclusion: this study
showed the potential antibacterial and antifungal therapeutic value of these species can be better evaluated.
Descriptors: Phyllanthus, MIC, antimicrobial, fungicide.
RESUMO
Objetivo: determinar a atividade antimicrobiana de três espécies de plantas do gênero Phyllanthus (P. amarus Schum e
Thom., P. tenellus Roxb. e Phyllanthus niruri L.) e de sua tintura comercial (fitoterápico), frente a bactérias e leveduras.
Método: foi avaliada a atividade antimicrobiana frente a microrganismos através do método de disco difusão, em seguida
foram avaliadas as concentrações mínimas inibitórias dos melhores resultados a partir do método da microdiluição.
Resultados: as espécies medicinais apresentam atividade antimicrobiana para bactérias Gram-positivas. A tintura
comercial apresentou sensível atividade antimicrobiana. Os extratos apresentaram melhor atividade para S. aureus (P.
amarus com MIC 0,16 mg/mL e P. tenellus com MIC 0,10 mg/mL), frente a B. subtilis os resultados também foram
satisfatórios (P. amarus 0,25mg/mL e P. tenellus 0,30mg/mL). A tintura comercial apresentou MIC maior que 1mg/mL
apenas para S. aureus com MIC de 0,70mg/mL, já para B. subtilis apresentou MIC 1,10mg/mL. Com relação as leveduras,
todas as substâncias resultaram ser menos expressivos que para as bactérias gram-positivas, variando de 0,70 a 1mg/mL
para os extratos brutos e 1,10 a 1,20 mg/mL para a tintura comercial. Conclusão: este estudo mostrou o potencial
antibacteriano e antifúngicos destas espécies cujo valor terapêutico pode ser melhor avaliado. Descritores: Phyllanthus,
CMI, antimicrobiana, fungicida.
RESUMEN
Objetivo: determinar la actividad antimicrobiana de tres especies de plantas del género Phyllanthus (P. amarus Schum y
Thom., P. tenellus Roxb. y Phyllanthus niruri L.) y su tinte comercial (phytotherapic), frente a las bacterias y levaduras.
Método: se evaluó la actividad antimicrobiana contra microorganismos por el método de difusión en disco y, a
continuación, detectado concentración mínima inhibitoria de los mejores resultados de la microdilución método.
Resultados: los medicamentos especies actividad antimicrobiana de las bacterias Gram-positivas. El tinte comercial
mostraron un importante actividad antimicrobiana. Los extractos mostraron la mejor actividad para S. aureus (P. amarus
MIC con 0,16 mg / ml y P. tenellus MIC con 0,10 mg / ml), frente a B. subtilis resultados también fueron satisfactorios (P.
amarus 0,25 mg / ml y P. tenellus 0,30 mg / ml). El tinte comercial mostró superior a 1mg/ml MIC sólo para S. aureus con
CMI de 0,70 mg / ml, y para B. subtilis mostró MIC 1,10 mg / mL. Con respecto a la levadura, todas las sustancias eran
menos importantes que para las bacterias gram-positivas, que van desde 0,70 a 1mg/ml de extractos crudos y de 1,10 a
1,20 mg / ml de tintura para el comercio. Conclusión: este estudio demostró el potencial antibacteriano y antimicótico
valor terapéutico de estas especies pueden ser mejor evaluadas. Descriptores: Phyllanthus, CMI, los antibióticos,
fungicidas.
1
Enfermeira, professora mestra do Centro Acadêmico de Vitória/Núcleo Enfermagem/Universidade Federal de Pernambuco –Vitória de Santo Antão,
Pernambuco, Brasil. Mestra pelo Departamento de Ciências Farmacêuticas — CCS/UFPE. E-mail: [email protected]; 2Farmacêutico. Email: [email protected]; 3Bióloga. E-mail: [email protected]; 4 Professora Doutora do Departamento de Antibióticos —
CCB/UFPE, Recife, Pernambuco, Brasil. E-mail: [email protected]; 5Professor doutor Departamento de Biologia/Área de Botânica/UFRPE, Recife,
Pernambuco, Brasil. E-mail: [email protected]; 6Professora doutora do Departamento de Ciências Farmacêuticas – CCS/UFPE, Recife,
Pernambuco, Brasil. E-mail: [email protected]
Estudo realizado com apoio financeiro do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico/PIBIC/CNPq.
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INTRODUÇÃO
O uso de produtos naturais como matériaprima para a síntese de substâncias bioativas,
especialmente
fármacos,
tem
sido
amplamente relatado ao longo do tempo.1 Há
séculos, as plantas medicinais são utilizadas
pelas comunidades indígenas e atualmente
vários povos em todo mundo buscam a cura de
doenças, usando-as em rituais mágicos, com
fins medicinais.2
Durante os
últimos
anos,
o
uso
indiscriminado de antibióticos, tem mostrado
que vários microrganismos
patogênicos
desenvolveram resistência, sendo verificado
um grande avanço científico envolvendo os
estudos químicos e farmacológicos de plantas
medicinais visando obter novos compostos
com propriedades antibióticas.
Nas pesquisas envolvendo o gênero
Phyllanthus
foram
citadas
atividade
3,4,5
5,6,7
antibacteriana
e fungicida
para
determinadas espécies. Algumas espécies são
utilizadas com o nome popular de ―saúde da
mulher‖, devido às aplicações ginecológicas,
principalmente para o tratamento da
candidíase.
Neste gênero encontramos Phyllanthus
amarus Schum. & Thonn, Phyllanthus tenellus
Roxb. e Phyllanthus niruri L., oriundas de
regiões tropicais e subtropicais, utilizadas
como medicamentos por diversos povos,
principalmente
pelas
propriedades
anticarcinogênica, antitumoral8, diurética,
hipotensora, antibiótica9, além de ser uma
alternativa no tratamento da infecção pelo
vírus da hepatite B.10 Tratam-se de plantas de
fácil disseminação, encontradas em terrenos
baldios, calçadas, quintais e jardins. Estas
espécies sempre se encontram em abundância
nos solos com muita umidade além de bases
de muros. De uma forma geral são plantas que
preferem locais sombreados, com umidade e
solos de preferência ricos em matéria
orgânica.11
As
principais
classes
de
metabólitos citados na literatura são
alcalóides12, taninos, quinonas e flavonóides13.
O presente trabalho objetivou determinar a
atividade antimicrobiana de P. amarus Schum
e Thom., P. tenellus Roxb. e P. niruri L. e de
uma tintura comercial a base de quebra-pedra
adquirida em farmácia de fitoterápicos, na
região metropolitana do Recife, frente a oito
microrganismos, sendo duas bactérias Gram
positivas, Staphylococcus aureus (ATCC6538) e
Bacillus subtilis (UFPEDA16), três bactérias
Gram negativas, Escherichia coli (ATCC25922),
Klebsiella
pneumoniae
(ATCC25922)
e
Pseudomona aeruginosa (ATCC27853) e três
leveduras, Candida sp.(UFPEDA720), Candida
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albicans (UFPEDA1007)
(UFPEDA4249).
e
Candida
sp.
MÉTODO
● Material vegetal e fitoterápico
As espécies foram coletadas na Região
Metropolitana do Recife, sendo Phyllanthus
amarus Schum & Thom coletada no Campus da
Universidade Federal de Pernambuco –
Recife/PE, Phyllanthus tenellus Roxb. Na
cidade de Paulista/PE e Phyllanthus niruri L.
na cidade de Camaragibe/PE.
A identificação do material coletado foi
confirmada pelo Laboratório de Taxonomia
Vegetal da Universidade Federal Rural de
Pernambuco e depositado no Herbário da
Universidade Federal de Pernambuco.
As amostras coletadas apresentavam folhas
e caule verde-claro, sem nenhum dano
aparente de predação.
O fitoterápico (tintura de quebra-pedra),
foi adquirido em uma farmácia de produtos
naturais localizada no centro da cidade do
Recife.
● Extrato vegetal e fitoterápico
As plantas frescas foram submetidas à
secagem a temperatura ambiente, protegidas
da luz. As partes aéreas foram separadas,
trituradas e pesadas (350g), seguida de
extração com álcool etílico (96ºGL) até o
esgotamento. Os extratos foram evaporados
com o auxílio de Evaporador Rotativo MA120
(temperatura 45±2ºC) e apresentaram um
aspecto turvo, odor forte e coloração verdeescuro.
O produto fitoterápico – Tintura de
quebra-pedra, também foi evaporado e
apresentava coloração marrom claro e com
odor semelhante aos extratos brutos obtidos.
● Microorganismos-teste da atividade
antimicrobiana
Foram utilizados como microorganismostestes as bactérias Staphylococcus aureus
(ATCC6538), Bacillus subtilis (UFPEDA16),
Escherichia coli (ATCC25922), Klebsiella
pneumoniae
(ATCC25922),
Pseudomona
aeruginosa (ATCC27853) e as leveduras
Candida sp. (UFPEDA720), Candida albicans
(UFPEDA1007) e Candida sp. (UFPEDA4249). Os
microrganismos pertencem a coleção de
microorganismos
do
Departamento
de
Antibióticos da Universidade Federal de
Pernambuco.
● Avaliação antimicrobiana
A atividade antimicrobiana dos extratos foi
determinada pelo método de difusão em disco
ágar14 segundo normas do NCCLS15, utilizando
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uma concentração de 1mg/ml. Como controle,
foi utilizado Ampicilina na concentração de
10mg/mL. A atividade antimicrobiana foi
determinada através dos halos de inibição.
sp. (UFPEDA720), C. albicans (UFPEDA1007) e
Candida sp. (UFPEDA4249) que foram
inoculadas.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
● Concentração Mínima Inibitória (CMI) –
Diluição em Meio Líquido
● Avaliação da atividade antimicrobiana
A determinação da CMI foi determinada
pelo método da diluição em ágar MuellerHinton, de acordo com as recomendações do
NCCLS15. Foram avaliadas concentrações de
0,05 a 2mg/ml de cada amostra. Neste teste
foram utilizadas as bactérias S. aureus
(ATCC6538), B. subtilis (UFPEDA16), Candida
Os resultados da atividade antimicrobiana
em disco de papel podem ser observados na
Tabela 1 pelo diâmetro do halo de inibição
que variou de 10 a 17mm para as bactérias
gram-positivas. Não foi observada atividade
para as bactérias gram-negativas e para
Candida spp.
Tabela 1. Halos de inibição (mm) observados para os extratos testados e produto comercial.
Microorganismos
Phyllanthus
amarus
AN
MH
Phyllantus
tenellus
AN
MH
Phyllantus
niruri
AN
MH
Tintura
Comercial
AN
MH
Ampicilina
(10mg/mL)
AN
MH
S. aureus
14
16
15
17
12
12
12
12
57
(ATCC6538)
B. subtilis
10
11
11
13
13
13
10
10
40
(UFPEDA16)
E. coli (ATCC25922)
—
—
—
—
—
—
—
—
45
K. pneumoniae
—
—
—
—
—
—
—
—
07
(ATCC25922)
P. aeruginosa
—
—
—
—
—
—
—
—
15
(ATCC27853)
Legenda: Meio Ágar Nutriente (AN), Meio Muller Hinton (MH), não houve inibição (-).
Os extratos brutos de Phyllanthus amarus e
Phyllanthus tenellus apresentaram atividade
apenas para as bactérias Gram positivas,
merecendo destaque P. tenellus com halos de
inibição de 17 e 13mm, seguido dos halos para
P. amarus de 16 e 11mm, respectivamente
para Staphylococcus aureus e Bacillus subtilis.
A tintura comercial apresentou pequena
atividade para S. aureus com halo de 11mm.
Não foi observada atividade antimicrobiana
para as bactérias Gram-negativas e as
leveduras.
Em analogia aos resultados, estudos com
outras espécies de Phyllanthus mostram que
P. acidus (L.) Skeels apresentou ação
antibacteriana frente a bactérias Grampositivas (S. aureus) e Gram-negativas (E.
coli) com halos de inibição de 20 e 11mm,
respectivamente3, mostrando que o gênero
Phyllanthus apresenta promissores fármacos
antimicrobianos. Em teste realizado com a
espécie P. singampattiana frente a 11
bactérias Gram-negativas, 2 Gram-positivas e
3 espécies de fungos, este não apresentou
atividade, reafirmando os resultados descritos
anteriormente.16
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37
—
16
Contrapondo-se, testes de atividade
antifúngica mostraram que a espécie
Phyllanthus sellowianus possui atividade
frente a diferentes espécies de cândida (C.
tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei) com
halos que variavam de 10 a 20mm. 17 Além
disso, Kloucek (2005)4 refere que P. amarus
apresenta halo de 16mm frente a E. coli.
Plantas deste gênero têm sido empregadas
na medicina popular para o tratamento de
cálculos
renais,
infecções
intestinais,
infecções urinárias e ginecológicas, sendo
conhecidas popularmente como ―saúde da
mulher‖ devido a esta utilização ginecológica.
Levando em consideração o uso popular, foi
realizado o teste de CMI não só para as
bactérias Gram-positivas como também para
os fungos, apesar de não ter sido observado
halos de inibição neste ensaio qualitativo.
● Concentração Mínima Inibitória (MIC)
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Tabela 2. Concentração Mínima Inibitória (MIC) em µg/mL para Phyllanthus amarus, Phyllanthus
tenellus e tintura comercial frente a bactérias Gram positivas e leveduras.
Phyllanthus
amarus
Phyllanthus
tenellus
S. aureus (ATCC6538)
0,16 mg/mL
0,10 mg/mL
0,70 mg/mL
B. subtilis (UFPEDA16)
0,25 mg/mL
0,30 mg/mL
1,10 mg/mL
Candida sp. (UFPEDA720)
C. albicans (UFPEDA1007)
Candida sp.
(UFPEDA4249)
0,70 mg/mL
0,70 mg/mL
0,70 mg/mL
0,70 mg/mL
1,20 mg/mL
1,10 mg/mL
1 mg/mL
0,70 mg/mL
1,10 mg/mL
MICROORGANISMOS
Foi observado uma forte atividade
antimicrobiana e antifúngica para as plantas
testadas, tendo resultado mais expressivo os
extratos brutos. P. tenellus apresentou
melhor resultado frente a S. aureus
(ATCC6538) apresentando CMI 0,10mg/mL,
seguido por P. amarus com CMI 0,16mg/mL.
Frente a B. subtilis (UFPEDA16), comparando
as espécies, P. amarus apresentou melhor
atividade com CMI 0,25mg/mL, seguido por P.
tenellus com CMI 0,30mg/mL. A tintura
comercial
não
apresentou
atividade
importante frente a este patógeno (CMI
1,10mg/mL) comparando com os resultados
dos extratos, apenas para S. aureus com CMI
0,70mg/mL.
Comparando com resultados anteriores,
poucos foram encontrados em relação ao
CMI de outras espécies frente aos patógenos
estudados. Foram encontrado resultados
negativos descritos quanto a atividade
antibacteriana para as seguintes espécies:
Phyllanthus acidus, P. amarus, P. debilis, P.
pulcher, P. reticulatus, P. urinaria. 18 Já,
Kloucek (2005)4 mostra a atividade do
Phyllanthus amarus frente a Bacillus cereus
(CMI16mg/ml.), E. coli (CMI 16mg/ml.) e
Pseudomonas aeruginosa CMI 8mg/ml.),
considerando
os
resultados
atuais
satisfatórios.
Com relação às leveduras, a CMI
apresentou valores maiores em comparação
as bactérias. A espécie P. tenellus
apresentou os mesmos resultados para as
três espécies de leveduras (0,70mg/mL)
sendo o melhor resultado. A espécies P.
amarus também apresentou CMI de
0,70mg/mL
frente
a
Candida
sp.
(UFPEDA720) e C. albicans (UFPEDA1007),
necessitando uma concentração maior para
Candida sp. (UFPEDA4249) (1mg/mL).
Mesmo com resultados da ação fungicida
considerados inferiores a bacteriana, ao
comparar com estudos anteriores de outras
espécies de Phyllanthus, observa-se uma
superioridade nos resultados obtidos. A
espécie P. emblica possui ação anti-cândida,
entretanto com CMI de 7mg/mL.6 Já os
extratos
de
Phyllanthus
piscatorum
apresentaram diferentes resultados para os
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Tintura
Comercial
fungos: Aspergillus fumigatus (CMI ≥ 1μg/mL),
Aspergillus flavus (CMI ≥12 μg/mL) e Candida
albicans (CMI ≥ 4μg/mL).7 Observando assim a
alta atividade fungicida em comparação com
outras espécies.
CONCLUSÃO
Os extratos brutos possuem uma atividade
maior para as bactérias Gram-positivas e há
divergências químicas entre as duas espécies,
o que resulta em diferentes resultados
antimicrobianos.
Comparando os resultados da Tintura
comercial com os extratos brutos, pode-se
atribuído esta atividade do fitoterápico as
condições de coleta da planta, tipo de solo,
armazenagem, extração, e controle de
qualidade do produto.
Quanto a ação dos extratos frente às
leveduras, observamos valores elevados de
CMI o que representa uma baixa atividade,
principalmente se compararmos com os
antibióticos
comercializados.
Entretanto,
como o estudo foi realizado empregando os
extratos brutos, o potencial antimicrobiano
dos extratos destas plantas precisa ser
purificado e realizados novos ensaios
antimicrobianos para caracterizar a potencial
atividade do produto purificado. Estes
resultados mostraram o potencial biológico de
duas espécies de Phyllanthus cujo valor
terapêutico poderá ser melhor estudado.
AGRADECIMENTO
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Científico e Tecnológico/PIBIC/CNPq, pela
concessão da bolsa de estudos.
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Sources of funding: CNPq
Conflict of interest: No
Date of first submission: 2009/09/09
Last received: 2009/10/25
Accepted: 2009/10/26
Publishing: 2010/01/01
Address for correspondence
Tássia Campos de Lima Silva
Dep. de Ciências Farmacêuticas ― CCS/UFPE
Av. Prof. Nelson Chaves, s/n
CEP: 50670-901 ― Recife, Pernambuco, Brasil
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