RESUMOS DE GENÉTICA VEGETAL

RESUMOS DE
GENÉTICA
VEGETAL
AMPLIFICAÇÃO CRUZADA DE MARCADORES EST-SSR EM EUGENIA
KLOTZSCHIANA BERG (MYRTACEAE)
Bernardes, V1,2; Siqueira, MN1,2; Anjos, DE2; Gondim, SGCA2; Chaves, LJ3;
Soares, TN2; Telles, MPC.2
Programa de pós-graduação em Genética e Biologia Molecular, Universidade
Federal de Goiás.
2
Laboratório de Genética & Biodiversidade. Instituto de Ciências Biológicas,
Universidade Federal de Goiás.
3
Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de
Goiás.
Email para correspondência: [email protected]
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
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Palavras-chave: Cerrado, marcadores microssatélites, pêra-do-cerrado.
Introdução: A família Myrtaceae é composta 4000 espécies amplamente distribuídas nas regiões neotropical e subtropical. No cerrado brasileiro existem
diversas espécies frutíferas com potencial de utilização, incluindo a Eugenia
klotzschiana, popularmente conhecida como pêra-do-cerrado. Pelo fato de ser
uma espécie endêmica do Cerrado, a pêra-do-cerrado vem sofrendo grande pressão antrópica em função da destruição de seus habitats e utilização de seus frutos
na alimentação de forma extrativista. Neste contexto, estudos sobre aspectos
genéticos da espécie tonam-se essenciais para o desenvolvimento de estratégias
eficientes de conservação e uso sustentável. Nos últimos anos os marcadores
microssatélites, também conhecidos como SSR (Simple Sequence Repeats) vem
sendo intensamente utilizados nos estudos genético-populacionais para avaliar a
diversidade e a estrutura genética, bem como aspectos da biologia reprodutiva das
espécies. Uma estratégia para reduzir os custos relacionados ao uso destes marcadores é
a utilização de primers descritos para outras espécies que são evolutivamente próximas à
espécie alvo, por meio de avaliação do potencial de transferibilidade destes marcadores.
Objetivo: testar, no genoma Eugenia klotzschiana, o potencial de amplificação cruzada
de primers oriundos de bibliotecas de regiões microssatélites derivadas de EST (Expressed Sequence Tags), desenvolvidos para Eucalypthus. Material & Métodos: O DNA de
três indivíduos de Eugenia klotzschiana foi extraído e utilizado para amplificação via
PCR de 120 pares de primers EST-SSR. A checagem da amplificação dos produtos de
PCR foi realizada em gel de agarose 3% corado com brometo de etídio. Para os primers
que apresentaram produtos de amplificação, os fragmentos foram analisados em gel de
acrilamida 6% corado em nitrato de prata. Foram testadas temperaturas de anelamento
acima e abaixo da primeira tentativa, a fim de possibilitar a individualização dos alelos no
loco e a obtenção dos genótipos. Resultados e conclusão: Do total de primers testados,
85 (71%) foram descartados por não apresentarem produtos de amplificação, 15 (12%)
amplificaram fragmentos inespecíficos e 20 (17%) apresentaram um bom padrão de amplificação cruzada. Os 20 marcadores foram padronizados com as seguintes temperaturas
de anelamento (ºC) e tamanho dos alelos (pb): Embra12 (50 e 124); Embra15 (50 e 310);
Embra809 (52 e 92-120); Embra943 (54 e 92-250); Embra975 (58 e 178); Embra1056
(52e 132); Embra1193 (51 e 122); Embra1332 (52 e 148-168); Embra1335 (50 e 300);
Embra1341 (50 e 230); Embra13632 (57 e 170-270); Embra1363 (55 e 315); Embra1639
(56 e 150); Embra1722 (51 e 126-142); Embra1753 (54 e 160); Embra1811 (58 e 159-205);
Embra1868 (56 e 200-320); Embra1944 (52 e 118); Embra1960 (54 e 160); Embra2002
(55 e 203-240). Portanto, esse conjunto de marcadores está disponível para ser utilizado
na caracterização do polimorfismo em populações naturais, por apresentar potencial de
utilização em estudos de estrutura genética, análise de vínculo genético e fluxo gênico
em populações de Eugenia klotzschiana.
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Fapeg/AUX PESQ CH 007/2009; CNPq (563839/2010-4) e Capes.
AMPLIFICAÇÃO CRUZADA DE MARCADORES MICROSSATÉLITES
ESTES PARA PTERODON EMARGINATUS
Santana, AR1; Telles, MPC1; Vianello, RP2; Soares, TN1;
LGBio - Laboratório de Genética & Biodiversidade. Instituto de Ciências Biológicas
– Universidade Federal de Goiás, Goiânia, Goiás.
2
Laboratório de Biotecnologia, Embrapa Arroz e Feijão, Santo Antônio de Goiás,
Goiás.
E-mail para correspondência: [email protected]
1
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Cerrado; conservação; microssatélites; amplificação cruzada; polimorfismo.
Introdução: A espécie Pterodon emarginatus Vogel conhecida como sucupira, é uma
espécie nativa do Cerrado pertencente à família Fabaceae. A espécie é importante
medicinalmente, com grande potencial econômico, o que faz dela alvo da exploração
extrativista, além de possuir importância na recuperação de áreas degradadas. Estudos
genéticos visando a conservação das espécies nativas, como P. emarginatus, são urgentemente necessários, em função das altas taxas de perda de remanescentes do Cerrado.
Nesse contexto os marcadores microssatélites, têm sido importantes ferramentas para
estudos em populações naturais, por promover estimativas genéticas importantes para
caracterizar e conservar a diversidade vegetal. Estes marcadores consistem de pequenas regiões repetitivas em tandem de 1 a 6 motivos, altamente polimórficos, podendo
ser diferenciados em gênicos ou genômicos. Como o desenvolvimento de marcadores
microssatélites requer alto custo, o potencial de transferibilidade têm se tornado uma
alternativa econômica para disponibilizar estes marcadores para espécies que ainda não
possuem. Os microssatélites gênicos ou ESTs (Expressed Sequence Tags) possuem
maior potencial de transferibilidade por serem mais conservados entre espécies próximas evolutivamente. Objetivos: Testar o potencial de transferibilidade via amplificação
cruzada, de marcadores microssatélites ESTs desenvolvidos para Phaseolus vulgaris
em P. emarginatus, a fim de disponibilizar marcadores robustos para esta espécie. Material & Métodos: Foram coletados três indivíduos de P. emarginatus localizados na
cidade de Goiânia, e em seguida realizou-se a extração do DNA pelo protocolo CTAB
2% modificado para as espécies vegetais nativas do Cerrado. Estes indivíduos foram
utilizados para a amplificação, via PCR, testando várias temperaturas de anelamento
com 349 primers microssatélites ESTs desenvolvidos para P. vulgaris. A verificação
da amplificação foi realizada em gel de agarose 3% corado com Brometo de Etídeo
submetido à eletroforese horizontal. Os primers que foram confirmados a amplificação,
foram submetidos à eletroforese vertical em gel de acrilamida 6% corado com nitrato
de prata. Destes, os primers que obtiveram um padrão de amplificação satisfatório neste
gel, foram utilizados para análise do polimorfismo em oito indivíduos, também extraídos
pelo protocolo CTAB 2%, de uma população natural de P. emarginatus localizada na
cidade de Portelândia em Goiás. A análise do polimorfismo também foi avaliada em
gel de acrilamida 6%. Resultados e Conclusão: Dos 349 primers testados em três indivíduos de P. emarginatus, 23 obtiveram um bom padrão de amplificação. Quando esses
23 primers foram testados em oito indivíduos, cinco apresentaram polimorfismo contendo entre dois e sete alelos. Estes cinco locos obtiveram bom padrão de polimorfismo,
podendo ser utilizados em estudos genéticos populacionais da espécie P. emarginatus,
evitando gastos com o desenvolvimento de marcadores microssatélites para a espécie.
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Genpac 02 Edital CNPq/Fapeg/PRO-Centro-Oeste
AMPLIFICAÇÃO HETERÓLOGA DE MARCADORES MICROSSATÉLITES
DERIVADOS DE EST PARA EUGENIA DYSENTERICA DC.
Siqueira, MN1,2; Bernardes, V1,2; Castro, TG2; Guedes, LBS2; Collevatti, RG2; Soares,
TN2; Telles, MPC.2
Programa de pós-graduação em Genética e Biologia Molecular, Universidade Federal
de Goiás.
2
Laboratório de Genética & Biodiversidade. Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás.
E-mail para correspondência: [email protected]
1
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Amplificação cruzada, conservação, EST-SSR, genética.
Introdução: A família Myrtaceae é representativa do Cerrado, com diversas espécies com
potencial de utilização. Dentre elas, a espécie Eugenia dysenterica, conhecida como
cagaita, destaca-se por seus frutos possuírem grande potencial alimentício. Além disso,
as folhas e frutos possuem propriedades antidiarreica e laxantivas e existem relatos
de utilização nos tratamentos da diabete e icterícia. Neste contexto, como a utilização
ocorre por extrativismo, torna-se necessário a avaliação de aspectos genético-populacionais e da biologia reprodutiva da espécie, a fim de gerar informações importantes
para o manejo e conservação. Diversas metodologias estão disponíveis para os estudos
genético-populacionais que visem avaliar a variabilidade genética nas espécies nativas.
Dentre as metodologias disponíveis, os marcadores moleculares de regiões microssatélites têm sido utilizados por apresentarem um padrão de herança co-dominante, alta
taxa de polimorfismo, ser abundante nos genomas e apresentar alta reprodutibilidade.
As regiões que flanqueiam os microssatélites podem permanecer conservadas entre
as espécies, no tempo evolutivo, o que possibilita o teste de amplificação heteróloga
destes marcadores entre espécies evolutivamente próximas, reduzindo, desta forma,
os custos de desenvolvimento desses marcadores para cada espécie. Objetivo: Testar
a amplificação heteróloga de pares de primers de regiões microssatélites derivados de
bibliotecas ESTs (Expressed Sequence Tags), desenvolvidos para Eucalyptus spp. na
espécie Eugenia dysenterica. Material & Métodos: O DNA foi extraído a partir do tecido foliar de três indivíduos de Eugenia e utilizado para testar a amplificação, por PCR
(Reação em Cadeia da Polimerase), de 120 primers desenvolvidos para Eucalyptus ssp.
Os produtos de PCR foram primeiramente avaliados em gel de agarose 3%, corados com
brometo de etídeo. Para os primers que apresentaram fragmentos amplificados, os produtos da reação de PCR foram analisados por eletroforese vertical em gel de acrilamida
6%, corados por nitrato de prata. Foram testadas temperaturas de anelamento acima e
abaixo da tentativa inicial, a fim de possibilitar a individualização dos alelos no loco e
a obtenção dos genótipos. Resultados e Conclusão: Do total de marcadores testados,
96 (80%) não apresentaram produtos de amplificação e foram descartados, 9 (7,5%)
amplificaram fragmentos inespecíficos e 15 (12,5%) foram considerados com um bom
padrão de amplificação heteróloga, permitindo a visualização da segregação de alelos.
Os marcadores foram padronizados com as respectivas temperaturas de anelamento (ºC)
e tamanho dos alelos (pb): Embra1811 (54 e 206-208); Embra1364 (54 e 174-330);
Embra1363 (52 e 270-274); Embra809 (54 e 205-210); Embra1076 (50 e 328-330);
Embra941 (54 e 202-206); Embra954 (54 e 172-176); Embra13 (51 e 270); Embra1944
(54 e 228-236); Embra1868 (52 e 272-292); Embra1390 (52 e 278-280); Embra1798 (52
e 350-360); Embra1993 (52 e 360-380); Embra1470 (50 e 326-328); Embra943 (54 e
260-276). Estes resultados disponibilizam marcadores com potencial de utilização em
estudos genético-populacionais para Eugenia dysenterica.
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Fapeg/AUX PESQ CH 007/2009; CNPq (563839/2010-4) e Capes.
ANÁLISE DA MUTAGENICIDADE DO INFUSO DE FOLHAS DE BAUHINIA SPP.
EM ERITRÓCITOS DE POECILIA RETICULATA
Manso, JAX1; Cunha, DMC1; da Silva, CC1, 2; Cruz, AD1, 2
1
2
Núcleo de Pesquisas Replicon. Departamento de Biologia, Pontifícia Universidade
Católica de Goiás.
LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LACEN/ SES/
GO.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: planta medicinal, micronúcleo, pata-de-vaca.
Introdução: O consumo de plantas medicinais estabeleceu-se por durante muito tempo
como a base terapêutica da humanidade, instituindo-se de forma empírica sendo difundido entre as gerações e se radicado em diversas culturas de populações (humanas). Em
meio a tantas plantas com potencial terapêutico, tem se observado os representantes do
gênero Bauhinia, pertencentes à família leguminosae, os quais são amplamente utilizados
no tratamento de dores, infecções e diabetes. Eventos de instabilidade genômica são frequentemente associados à exposição a agentes xenobióticos como poluentes, fármacos,
metabólitos secundários entre outros. Objetivo: Tendo noção que o consumo de plantas
deste gênero ocorre em diversos casos sem orientação e estabelecimento de dosagens
seguras, devido à carência de divulgação de políticas que regulamentam o consumo,
este trabalho tem como objetivo avaliar o potencial mutagênico do infuso de folhas de
Bauhinia spp. em espécimes Poecilia reticulata através do teste Micronúcleo. Material
& Métodos: Para este estudo, foram coletados: folhas de Bauhinia spp. as quais se usou
no preparo das diferentes concentrações do infuso; e espécimes P. reticulta, utilizados
como biomonitores. Primeiramente os espécimes foram expostos às concentrações do
infuso, ocorrendo após o período de exposição à coleta das brânquias para a confecção
das lâminas, as quais são preparadas através da técnica do esfregaço, sendo em
seguida fixadas com etanol absoluto e coradas com corante hematológico rápido para
análise em microscopia óptica das frequências de micronúcleos nas células. Resultados e
Conclusão: A análise estatística ocorreu por meio do teste de Kruskal-Wallis (análise de
variância) não demonstrando diferenças significativas (P>0,05). Indicando a ausência de
atividade mutagênica do infuso de folhas de Bauhinia spp. em eritrócitos de P.reticulata.
A realização de outras metodologias voltadas à investigação toxicológica de plantas do
gênero é de caráter essencial para a compreensão do seu potencial toxicológico, o qual
sugere uma abordagem comparativa de informações entre os estudos.
Apoio: CNPq
ANÁLISE QUANTITATIVA DA DIVERGÊNCIA GENÉTICA ENTRE POPULAÇÕES
DE PLANTAS DO CERRADO
Souza, UJB1,3; Telles, MPC2; Diniz-Filho, JAF3
Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecular, Instituto de Ciências
Biológicas (ICB), Universidade Federal de Goiás (UFG), Goiás, Brasil.
2
Laboratório de Genética & Biodiversidade – LGBio, ICB, UFG.
3
Laboratório de Ecologia Teórica e Sintese (LETS), ICB, UFG.
Email para correspondência: [email protected]
1
Introdução: O Cerrado é considerado um dos “hotspots” mundiais de biodiversidade,
em função das espécies vegetais endemicas, que muitas vezes têm sido listadas como
prioridades em programas de conservação e estudos de diversidade genética. A caracterização genética de populações por marcadores moleculares permite acessar um considerável nível de polimorfismo, que por sua vez possibilita a análise da variabilidade
genética das espécies e do modo como essa variabilidade se encontra distribuída entre
e dentro das populações. Esse conhecimento é importante tanto para entender os processos microevolutivos atuando nas populações quanto para estabelecer programas de
conservação da diversidade genética e recursos naturais. O método mais usado para
acessar a estrutura genética é a estatística FST, que estima a divergência genética entre
populações. Com o desenvolvimento dos marcadores moleculares mais polimórficos,
outros estimadores analógos ao FST foram desenvolvidos, levando em consideração as
características dos marcadores. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi realizar uma
análise dos padrões de divergência genética (FST, θP, GST, ΦST) entre populações de espécies vegetais do Cerrado. Material & Métodos: Um total de 56 artigos publicados
entre 1999 e 2012 foi utilizado nas análises, obtidos a partir de buscas nas bases do
“Web-of-Science”, “Scielo”, “Scopus” e “Google-Scholar”, utilizando como palavra
chave o nome da espécie combinado com o nome dos marcadores moleculares. Foram
registrados os dados de divergência genética entre populações, estimador da divergência,
tipo de marcador, família botânica (FB), número de locos, de populações e de indivíduos. Análises de Variância (ANOVA) foram realizadas de modo a avaliar a divergência
genética em relação ao efeito do estimador, do tipo de marcador e da FB. Um teste
de Kruskal-Wallis (ANOVA não-paramétrica) também foi aplicado para o efeito do
estimador da divergência. Foi realizada uma correlação de Pearson entre a divergência
genética e as variáveis contínuas (número de locos, de populações e de indivíduos),
após transformação logarítmica. Resultados e Conclusão: Foram registrados dados
para 61 espécies vegetais do Cerrado, cujos valores de divergência genética variaram
de 0,01 a 0,89, com uma média de 0,19 (IC 95% 0,14-0,25). Os valores de divergência
genética em relação ao tipo de estimador não foram significativos (F=1,125; P=0,347),
mas marginalmente significativos pelo teste de Kruskal-Wallis (P=0,043). Também não
houve efeito significativo (F=1,72; P=0,134) do efeito do tipo de marcador molecular.
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Cerrado, divergência genética, marcadores moleculares.
Um efeito significativo da FB foi encontrado (F=2,075; P=0,024), com valores médios
de divergência variando entre 0,02 e 0,847, para Vochysiacea e Graminae, respectivamente. Não foram observados efeitos significativos para número de locos (r=0,164;
P=0,228) e indivíduos (r=0,042; P=0,761), mas o efeito foi significativo para número de
populações (r=0,402; P=0,002). Análises futuras deverão incluir outras caracteristicas
ecológicas das espécies, tais como modo de dispersão, tipo de polinizador e habito, a
fim de explicar os padrões encontrados.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Fapeg e CNPq (564717/2010-0 e 563727/2010-1) e Capes.
AVALIAÇÃO MUTAGÊNICA DO INFUSO DE ILEX PARAGUARIENSIS A. ST. HIL
de Moura, AL¹; Santos, CS¹; Ribeiro, LC¹; e Cunha, DMC¹; e da Cruz, AD1,2
¹ Núcleo de Pesquisa Replicon. Departamento de Biologia, Pontifícia Universidade
Católica de Goiás
2
LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LACEN/
SES/GO.
Email para correspondência: [email protected]
Introdução: Uma das formas mais antigas de pr������������������������������������������
ática medicinal para prevenção e tratamen���������
to de doenças é a utilização de plantas medicinais. Grande parte da população depende
dessas plantas como única forma de acesso aos cuidados básicos de saúde. A erva-mate
(Ilex paraguariensis A. St. Hil.) da família Aquifoliaceae é nativa da América do Sul, e
aparece como uma das espécies arbóreas naturais de maior importância econômica para
o sul do Brasil, nordeste da Argentina e todo Paraguai. O grande interesse comercial por
erva-mate além de seus aspectos culturais e gastronômicos deve-se à presença de bases
xânticas como cafeína, teobromina, flavonóides e princípios farmacológicos estimulantes. É através da industrialização das folhas e ramos da erva mate que se obtém o
produto para a preparação das bebidas, mais conhecidas como chimarrão, chá-mate e
tererê, os quais exercem ações sobre o sistema cardiovascular, respiratório, muscular
e gastrointestinal. Infusões de plantas medicinais podem conter substâncias tóxicas
e com efeitos mutagênicos, por outro lado, o consumo desses chás podem suprir os
efeitos de agentes mutagênicos que estejam atuando sobre o organismo. O teste Allium
cepa tem uma ótima aceitação entre os estudos de citotoxicidade de plantas medicinais.
Objetivo: O objetivo do presente estudo foi verificar o possível potencial mutagênico ou
antimutagênico do infuso de Ilex paraguariensis A. St. Hil. sobre o sistema teste Allium
cepa. Material & Métodos: O estudo citogenético vegetal, através do teste Allium
cepa, foi desenvolvido no Núcleo de Pesquisas Replicon do Departamento de Biologia
na Pontifícia Universidade Católica de Goiás. Foi utilizada uma marca de erva-mate
comercializada na cidade de Goiânia, Goiás. Para o teste de A. cepa, foram utilizados
cinco concentração de Ilex paraguariensis (5g.L-1; 10g.L-1; 20g.L-1; 30g.L-1; 40g.L-1) e
grupos controles. Para o controle positivo foi utilizado Paracetamol a 1 MOL. Também
foi realizado o teste de crescimento radicular. Resultados e Conclusão: Os resultados
mostram uma diferença significativa entre o Grupo Controle quando comparado com o
Grupo Exposto, e sugerem que o Ilex paraguariensis pode ter substancias que interferem
no adequado desenvolvimento radicular, pois as radículas do Grupo Exposto apresentaram aspectos morfológicos disformes, cor amarelada e pontas maleáveis. Também
foi evidenciado que houve inibição do crescimento quando exposto ao infuso. Não foi
possível observar o crescimento normal das raízes das concentrações de 75% e 100%
incapacitando medição do comprimento, o que caracteriza que o mesmo possui efeito
citotóxico. A análise do índice mitótico também foi prejudicada devido às células estarem
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Ilex paraguariensis, citotóxico, mutagênico, inibidor.
em cariólise, o que impossibilitou a contagem e diferenciação das mesmas. Também
foram, observadas alterações na análise citogenética das células meristemáticas, possivelmente, podendo haver alguma atividade mutagênica, no entanto se faz necessária a
realização de testes complementares para maior esclarecimento quanto a esse potencial.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: CNPq
Correlação entre medidas de diversidade genética, variáveis
quantitativas e dados demográficos em populações de Cabralea
canjerana (Meliaceae) na Mata Altântica
Melo, ATO1; Coelho, ASG1; Franceschinelli, EV2
1
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Escola de Agronomia e Melhoramento de Plantas, Universidade Federal de Goiás, Goiânia.
Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Goiânia.
Introdução: Um dos principais objetivos dos estudos de genética de populações
naturais é mensurar a variabilidade genética existente nos níveis intra e
interpopulacional. A caracterização da estruturação da diversidade genética, assim como
de outros aspectos demográficos, permite detectar a existência de padrões evolutivos e
de mudanças populacionais que são importantes para os programas de conservação de
espécies ameaçadas. A avaliação de caracteres quantitativos, aliada à caracterização
molecular fornece informações importantes a respeito das populações. Cabralea
canjerana é uma espécie dioica, considerada modelo para a Mata Atlântica, além de
possuir na madeira elevado valor econômico. Ocorre em áreas com mais de 1800 metros
de altitude, muito citadas em discussões sobre o novo código florestal brasileiro,
sobretudo a respeito das Áreas de Preservação Permanente (APPs). Objetivo: Avaliar o
comportamento de caracteres quantitativos em oito populações de C. canjerana,
correlacionando-os com os níveis de diversidade genética, a densidade populacional
(De) e a altitude de localização de cada população. Material & Métodos: O local de
estudo faz parte da APA Fernão Dias, localizada no sul de Minas Gerais, com altitude
variando entre 1500 e 2000 metros. Foram avaliados 183 indivíduos em oito
populações. Os dados genético-moleculares foram obtidos pela análise de seis locos
microssatélites. Os dados quantitativos foram obtidos para as variáveis altura e diâmetro
a 1,50 metros do solo (DAP). Os parâmetros genéticos foram estimados utilizando-se o
software FSTAT (Goudet, 2002). As análises de estatística descritiva e de correlação de
Pearson entre as variáveis foram realizadas utilizando-se o software R (R Core Team,
2012). Resultados e Conclusão: Uma porção pequena, porém significativa da variância
genética total, estimada com base na frequência dos alelos, está estruturada entre as
populações (θ = 0,053), o que é típico de espécies alógamas. A correlação entre as duas
variáveis fenotípicas foi de baixa magnitude, mas significativa (r = 0,263, p-valor <
0,001). As estimativas dos níveis de diversidade genética nas populações localizadas
acima de 1800 metros de altitude foram maiores, corroborando com a importância
destas populações na manutenção da diversidade genética. A densidade observada de
indivíduos adultos também foi maior nos fragmentos de maior altitude (r = 0,849; pvalor = 0,007). A correlação entre a densidade de indivíduos e a altura de plantas foi
elevada (r = 0,687, p-valor = 0,059), assim como aquela obtida entre as estimativas de
riqueza alélica e tamanho médio dos indivíduos (r = 0,735 p-valor = 0,037). Estes
resultados corroboram com a hipótese de que os contínuos populacionais de maior
altitude, por apresentarem uma maior densidade de indivíduos e por incluírem
indivíduos maiores, ainda preservam elevados níveis de diversidade genética.
Considerando-se que estes fragmentos foram menos expostos às ações antrópicas, podese afirmar que desempenham hoje o papel de repositórios de diversidade genética.
Apoio: CNPq
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras chave: C. canjerana, microssatélites, caracteres quantitativos,
conservação.
CURVA DE CRESCIMENTO DE CALOS DE HANDROANTHUS IMPETIGINOSUS
(MART. EX DC.). MATTOS EM MEIO COM REGULADORES DE CRESCIMENTO
Mamedes, TC1; Sibov, ST1; de Araujo, FG1; Araujo CHP1; Gilberti, M1; Tenório, JHF1.
LCTV - Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais – ICB, - Universidade Federal
de Goiás, UFG, Campus II (Samambaia), Rodovia Goiânia / Nova Veneza, km 0
– Caixa Postal 131, CEP 741001-970, Goiânia, GO Caixa Postal 131, CEP 741001970, Goiânia, GO, Brasil.
E-mail para correspondência: [email protected]
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estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: cultura de tecidos, calogênese, ipê-roxo
Introdução: Handroanthus impetiginosus (Mart. ex DC.). Mattos, é uma espécie arbórea
que possui importância medicinal, paisagística e madeireira. Técnicas de cultura de tecidos vegetais são utilizadas na propagação de espécies lenhosas para obter grande número
de mudas de qualidade, em pouco tempo. Tais técnicas auxiliam tanto no melhoramento
genético quanto na conservação do germoplasma da espécie. A organogênese indireta,
passando pela fase de calo, é uma das técnicas possíveis. Calos também podem se tornar
matéria-prima para a embriogênese somática e estudos sobre a produção de metabólitos secundários in vitro. O estabelecimento da curva de crescimento de calos permite
identificar fases importantes no processo, principalmente o momento da repicagem dos
calos já desenvolvidos para um meio novo. Objetivo: Avaliar o crescimento de calos
in vitro submetidos à presença de 6-benzilaminopurina (BAP) e ácido naftalenoacético
(ANA). Material & Métodos: Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de
Cultura de Tecidos Vegetais da Universidade Federal de Goiás. Foram utilizados calos
mantidos in vitro, oriundos de segmentos de epicótilo de H. impetiginosus. Os calos
foram cultivados em frascos baby food contendo 25 mL de meio de cultura MS na
presença de 4,0 mg.L-1 de BAP e 0,5 de ANA mg.L-1. Após inoculação, os frascos
foram mantidos em sala de crescimento com temperatura e luminosidade controlada.
As avaliações do desenvolvimento dos calos foram feitas em intervalos de quatro dias.
Em cada avaliação foram dadas notas de acordo com o crescimento do calo. Estas notas
baseavam-se em gabarito variando a escala de tamanho de 5 mm a 27 mm. Também
foram avaliadas a coloração e a percentagem de oxidação dos calos. O delineamento
experimental foi inteiramente casualizado, com 10 repetições, contendo três calos por
frasco/repetição. Resultados e Conclusão: A maioria dos calos apresentou cor creme,
porém houve calos de coloração heterogênea, podendo identificar áreas de cor creme,
marrom-creme e esverdeado e marrom escuro. A oxidação ocorreu em 57,5% dos calos.
Aos 80 dias de cultivo foi verificado o início de estabilização do acúmulo de fitomassa.
A média do crescimento dos calos chegou à nota cinco, entre 9 mm a 11 mm. Portanto,
o subcultivo de calos de H. impetiginosus, poderá ocorrer aos 70 dias, quando ocorre
desaceleração no seu crescimento.
Apoio: Reuni e Fapeg
ESTRUTURA GENÉTICA E PADRÃO ESPACIAL DA VARIABILIDADE GENÉTICA
EM POPULAÇÕES DE ANACARDIUM OCCIDENTALE L. NO CERRADO
Oliveira, LK1,2; Carvalho, LM2; Chaves, LJ4; Soares, TN2; Collevatti, RG2; Telles, MPC2
Programa de pós-graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, Universidade
Federal de Goiás.
2
Laboratório de Genética & Biodiversidade. Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás.
3
Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de Goiás.
Email:[email protected]
1
Introdução: A espécie Anacardium occidentale L. (cajuzinho-do-cerrado) é polinizada
por borboletas e abelhas e a dispersão das sementes é realizada por morcegos frugívoros,
mas também pelas águas dos rios, que carregam as castanhas que flutuam. A espécie está
entre as nativas que são utilizadas pela população local do Cerrado para comercialização
do fruto visando complementar a renda familiar, através de exploração extrativista. Devido a várias características como: viabilidade de sementes, alto potencial nutricional e
alto potencial para geração de renda, sendo considerada de alta relevância para região e
bastante promissora para iniciar o processo de cultivo. Com isso, torna-se necessário a
realização de estudos genéticos que contribuam para aumentar o conhecimento sobre a
espécie, o que proporcionará o desenvolvimento de estratégias mais eficientes para sua
conservação e uso sustentável. Uma estratégia possível é a utilização de marcadores
moleculares para avaliar a variabilidade genética existente nas populações naturais e
também verificar se a variação existente está estruturada espacialmente, uma vez que
essas informações são importantes para a definição das estratégias ótimas de conservação
in situ e ex situ. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a estrutura genética e
o padrão espacial da variabilidade genética entre populações naturais de Anacardium
occidentale pertencentes ao ecótipo do Cerrado. Material & Métodos: Foram utilizados 590 indivíduos oriundos de 20 populações naturais de Anacardium occidentale
L dos estados de Goiás, Bahia e Tocantins. O DNA genômico foi acessado utilizando
12 marcadores microssatélites, os quais foram utilizados para amplificação via PCR,
gerando fragmentos que foram analisados em sequenciador automático. Os genótipos
foram utilizados para avaliar a diversidade genética nas populações, a estrutura genética através das estatísticas F de Wright e o padrão espacial da variabilidade genética
a partir do teste de Mantel. Resultados e Conclusão: O conjunto de locos apresentou
alto índice de polimorfismo e exibiu uma riqueza alélica média igual a 6,55, variando
nas populações entre 5,21 (Pop10) e 7,28 (Pop14). A diversidade genética (He) foi alta
apresentando uma média igual a 0,775, variando nas populações entre 0,717 (Pop2)
e 0,834 (Pop20). A variabilidade genética existente está fracamente estruturada entre
as populações (Fst 0,066). Todavia, foi verificado um valor relativamente alto de FIS
(0,215) e FIT (0,267), sugerindo que este padrão esteja mais relacionado ao sistema
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Cajuzinho-do-cerrado, conservação, estrutura genética, padrão espacial.
de cruzamento dentro das populações (endocruzamento) e também pelo fluxo gênico
preferencial mais intenso entre algumas populações. Entretanto, a partir do teste de
Mantel (r=-0,06/P=0,635), foi possível verificar que a variabilidade genética existente
nas populações não se encontra estruturada espacialmente. Estes resultados permitem
sugerir que o tamanho efetivo histórico das populações de Anacardium occidentale
provavelmente é grande e os efeitos da deriva genética não são suficientes para sobrepor
aos efeitos dos outros fatores microevolutios e do sistema reprodutivo.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Fapeg/AUX PESQ CH 007/2009; CNPq (472717/2011-1).
ESTRUTURA GENÉTICA EM ACESSOS DE UMA COLEÇÃO DE GERMOPLASMA
DE ANACARDIUM OCCIDENTALE L. DO CERRADO
Carvalho, LM1,2; Oliveira, LK1,3; Naves, RV4; Chaves, LJ4; Soares, TN2; Collevatti,
RG2; Telles, MPC2
1
2
3
4
Iniciação científica, graduação em Ciências Biológicas, Universidade Federal de
Goiás.
Laboratório de Genética & Biodiversidade. Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás.
Programa de pós-graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, Universidade
Federal de Goiás.
Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de Goiás.
Email para correspondência: [email protected]
Introdução: As coleções de germoplasma são conjuntos de genótipos representativos da
variabilidade da espécie objeto da conservação ex situ. Esta estratégia de conservação
pode ocorrer na forma de coleções permanentes (pólen, sementes, etc), ou de coleções
de plantas em campo. A avaliação e caracterização de germoplasma referem-se ao
emprego de metodologias que geram informações sobre os recursos genéticos dessas
coleções. Essas informações são utilizadas por diversos profissionais e funcionam como
guia para utilização dos recursos genéticos em programas de melhoramento da espécie
e pesquisas relacionadas. A avaliação e caracterização podem ser conduzidas empregando-se marcadores morfo-agronômicos tradicionais e/ou marcadores moleculares. A
informação sobre a variabilidade genética estimada por marcadores moleculares (entre
indivíduos, acessos, populações, tipos e origem geográfica) permite identificar populações e/ou regiões geográficas que apresentam maior diversidade ou que se encontram
subrepresentadas na coleção, subsidiando estratégias e planejamento de novas coletas.
Em 2011 a Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos da UFG (EAEA-UFG)
implantou uma coleção de germoplasma (CG) de Anacardiumoccidentale (ecótipo do
cerrado ou cajuzinho-do-cerrado), buscando a preservação ex situ desta espécie que
apresenta potencial de utilização econômica. Objetivo: O objetivo desse trabalho
foi utilizar marcadores microssatélites para caracterizar a variabilidade e a estrutura
genética existente na CG de A. occidentale. Material & métodos: Foram avaliados
546 acessos, proveniente de 182 progênies oriundas de 24 localidades distribuídas no
estado de Goiás, pertencentes à coleção de germoplasma de A. occidentale da EAEA-UFG.
O DNA dos acessos foi extraído e utilizado para a caracterização molecular com base
em 12 marcadores microssatélites. Os produtos de PCR foram avaliados em sequenciador automático de DNA. A partir dos genótipos foram estimados parâmetros básicos
de variabilidade genética e a estrutura genética foi avaliada por meio da análise de
variância molecular (AMOVA). Resultados e Conclusão: Os 12 locos constituíram
uma bateria de marcadores com bom poder de discriminação, com alta probabilidade
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Cajuzinho-do-cerrado, marcadores microssatélites, SSR.
de exclusão de paternidade (0, 9999) e baixa probabilidade de identidade (3,4x10-11).
O número médio de alelos e a riqueza alélica foram, respectivamente, iguais a 9,82 e
4,04, variando nas populações (localidades) entre 3,6/3,6 (Pop5) e 11,3/4,12 (Pop4). A
diversidade genética foi alta e variou entre 0,739 (Pop9) e 0,802 (pop17). Foram encontrados 21 alelos privados em 13 populações. A análise molecular de variância permitiu
verificar que a variabilidade genética preservada na coleção está fracamente estruturada
nas populações, com valor de FST igual a 0,0058. Todavia, os valores observados para o
índice FIT (0,267) e FIS (0,271) foram relativamente altos e significativos sugerindo um
papel importante tanto para o fluxo gênico preferencial e intenso em algumas regiões,
quanto para o endocruzamento dentro das populações. Os acessos de A.occidentale
avaliados apresentaram altos níveis de diversidade genética que poderá ser explorada
em programas de pré-melhoramento.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Fapeg/AUX PESQ CH 007/2009; CNPq (472717/2011-1).
INFERÊNCIAS QUANTO À ATUAÇÃO DA SELEÇÃO NATURAL
NA DETERMINAÇÃO DA ESTRUTURA GENÉTICA DE POPULAÇÕES
DE EUGENIA DYSENTERICA DC. DO CERRADO GOIANO
Almeida Júnior, EB1; Rodrigues, EB1; Telles, MPC3; Chaves, LJ2; Soares, TN3
Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, Escola de
Agronomia e Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de Goiás;
2
Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de Goiás;
3
Laboratório de Genética & Biodiversidade, Departamento de Biologia Geral, Instituto
de Ciências Biológicas
E-mail para correspondência: [email protected]
1
Introdução: A estruturação genética das populações tem sido avaliada pelas estatísticas
F de Wright e seus análogos. Para obtenção dessas estimativas, os marcadores microssatélites têm sido usados com frequência, enquanto ferramentas moleculares para gerar
dados genotípicos, para estudos populacionais. Esses marcadores, no entanto, são neutros
e não sofrem ação da seleção natural. Dessa forma, a interpretação da estrutura genética
é feita como o resultado da interação entre o efeito homogeneizador do fluxo gênico e a
divergência provocada�������������������������������������������������������������������
pela deriva genética e a mutação. Para avaliar a importância relativa dos processos microevolutivos (deriva genética vs seleção natural) na determinação
da estrutura genética de populações, tem sido utilizada uma abordagem comparativa entre
as estimativas de FST (obtidas para os loci neutros), com as estimativas de QST (obtidas
para caracteres quantitativos). Essas informações são importantes na formulação de
estratégias mais eficientes para conservação de várias espécies. A espécie em estudo é
nativa do Cerrado e é conhecida por cagaiteira – Eugenia dysenterica DC. Objetivo:
Avaliar geneticamente indivíduos pertencentes à espécie E. dysenterica DC. a partir
de caracteres quantitativos e marcadores microssatélites, para fazer inferências quanto
à atuação da seleção natural na diferenciação das populações provenientes do sudeste
do Estado de Goiás, Brasil. Material & Métodos: Os dados moleculares foram obtidos
pela amplificação via PCR de oito loci microssatélites. Foram coletados, ainda, dados
referentes aos caracteres quantitativos: altura da planta (AP), circunferência do caule
(CC), diâmetro médio de projeção da copa (DC), comprimento do limbo foliar (CL),
largura do limbo (LL), formato das folhas (FF) e comprimento do pecíolo (CP). Foram
realizados testes comparativos entre as distribuições de probabilidade dos parâmetros de
estrutura genética para dados quantitativos e moleculares ( vs ), por meio da técnica de
bootstrap paramétrico, utilizando 1000 randomizações. Resultados e Conclusão: Foi
obtida a estimativa de FST igual a 0,142. Para os caracteres: AP, CC e DC, os valores
de QST foram, respectivamente, -0,019, -0,029, -0,012, todos significativos e menores
que a estimativa de FST. Para as variáveis das folhas: CL, LL, FF e CP, os valores de
QST foram, respectivamente, 0,347, 0,283, 0,363 e 0,808. Esses valores são significativamente maiores que a estimativa de FST. Os resultados indicam que os caracteres das
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Estrutura genética, QST vs FST, cagaiteira, Recursos genéticos
plantas, que incluem AP, CC e DC estão sob seleção natural convergente, enquanto que
os caracteres das folhas CL, LL, FF e CP estão sob seleção divergente nas populações
de cagaiteira do sudeste do Estado de Goiás.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Capes e MCT/CNPq Nº14/2009 – Universal
POTENCIAL DE AMPLIFICAÇÃO CRUZADA DE MARCADORES
MICROSSATÉLITES PARA CAMPOMANESIA ADAMANTIUM (CAMB.) BERG
Miranda, EAGC1,2; Siqueira, MN1,2; Bernardes, V1,2; Braga, RS2; Castro, TG2; Soares,
TN2,3; Ferreira HD2,3;Telles, MPC2,3
Programa de pós-graduação em Genética e Biologia Molecular, Universidade Federal
de Goiás.
2
Laboratório de Genética & Biodiversidade, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás.
3
Departamento de Biologia Geral, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade
Federal de Goiás.
E-mail para correspondência: [email protected]
1
Introdução: O Cerrado possui a flora mais rica dentre as savanas do mundo, com alto
nível de endemismo. Além disso, a exploração de certas espécies nativas do Cerrado
brasileiro tem sido feita de forma extrativista. O endemismo torna o extrativismo um
risco para a manutenção da variabilidade genética dessas espécies. Dentre estas espécies
se encontra Campomanesia adamantium (Camb.) Berg., pertencente à família Myrtaceae,
conhecida popularmente como gabiroba, tem importância econômica diversificada, seus
frutos além de serem consumidos in natura são processados, também é considerada
uma planta medicinal. O uso de marcadores moleculares têm possibilitado um rápido
acúmulo de informações acerca do genoma dos eucariotos, sendo muito utilizado nos
estudos genético-populacionais. Os marcadores de regiões microssatélites (SSR) são os
mais indicados para este tipo de estudo em função do padrão de herança codominante
e ser altamente polimórfico. Sua utilização pode ser limitada pelo custo elevado e tempo extenso necessário para o seu desenvolvimento, o que faz com que a amplificação
cruzada de primers desenvolvidos para espécies evolutivamente próximas se torne uma
importante alternativa. Objetivo: Testar no genoma de Campomanesia adamantium
o potencial de amplificação cruzada de marcadores microsatélites desenvolvidos originalmente para Eucalyptus spp.. Material & Métodos: O DNA foi extraído a partir
de tecido foliar de três indivíduos, para ser utilizado nas reações de amplificação, por
PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), de 120 primers de regiões microssatélites.
Os produtos de PCR foram primeiramente avaliados em gel de agarose 3%, corados
com brometo de etídeo. Em seguida, para os primers que apresentaram produtos de
amplificação, os mesmos foram analisados por eletroforese vertical em gel de acrilamida
6%, corados por nitrato de prata. Todos os marcadores foram inicialmente testados com
a temperatura de anelamento igual a 56ºC, a fim de possibilitar avaliar o potencial de
amplificação cruzada e verificar se há individualização dos alelos no loco e a obtenção
dos genótipos. Resultados e Conclusão: Do total de marcadores testados, 93 (77,5%)
não apresentaram produtos de amplificação na temperatura inicial testada, 11 (9,17%)
amplificaram fragmentos inespecíficos e 16 (13,3%) foram considerados com um bom
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: Amplificação cruzada, EST-SSR, variabilidade genética.
padrão de amplificação cruzada, permitindo a visualização dos alelos. Os marcadores
apresentaram produtos de amplificação com os seguintes tamanhos dos alelos (pb):
Embra13(260); Embra16 (270-280); Embra809 (210-220); Embra925 (112-114); Embra954 (400-410); Embra1076 (316-330); Embra1335 (310); Embra1362 (270-290);
Embra1363 (300-310); Embra1364 (310-320); Embra1768 (280); Embra1811 (278);
Embra1868 (278); Embra1939 (230); Embra1944 (96-100); e Embra2011 (290). Novos
testes variando a temperatura de anelamento serão conduzidos a fim de verificar se os
primers que não amplificaram apresentam produtos de amplificação em outras temperaturas.
Estes resultados são promissores no sentido de disponibilizar marcadores microssatélites
com potencial de utilização em estudos genético-populacionais para C. adamantium.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: FAPEG/AUX PESQ CH 007/2009; CNPq (563839/2010-4) e CAPES.
PROTOCOLOS PARA A OBTENÇÃO DE METÁFASES EM CYRTOPODIUM
SAINTLEGERIANUM RCHB. F. (ORCHIDACEAE) CULTIVADO IN VITRO
Mota-Silva, D1; Carneiro, LL1; Hanusch, AL2 Silva, DM23; Sibov ST3
Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, UFG.
Núcleo de Pesquisa Replicon, Departamento de Biologia, PUC-Goiás.
3
Instituto de Ciências Biológicas , Departamento de Biologia Geral, UFG.
Email para correspondência: [email protected].
1
2
Introdução: A citogenética engloba estudos relacionados com o cromossomo, isolado
ou em conjunto, condensado ou distendido, tanto no que diz respeito a sua morfologia,
organização, função e replicação, quanto a sua variação e evolução. Dados adquiridos
pela citogenética contribuem de forma excepcional na reformulação de hipóteses filogenéticas com base nas informações dos cromossomos, sendo esse um caractere bem
conservado em várias espécies. Assim, informações citogenéticas são de fundamental
importância para o melhoramento genético em vegetais e na caracterização de bancos
de germoplasma. Muitas técnicas e protocolos são empregados na citogenética vegetal,
devido à grande variabilidade cromossômica em número, forma, tamanho, capacidade
de pareamento, conteúdo de heterocromatina, entre outros. Cariótipos em orquídeas
são considerados de difícil obtenção devido, principalmente, a morfologia da raiz
(coberta por tecido espesso chamado velame) além de baixa frequência de mitoses.
Objetivo: Obter o melhor protocolo para citogenética em Cyrtopodium saintlegerianum, uma espécie de orquídea do Cerrado. Material & Métodos: Foram utilizadas
pontas de raízes provenientes de plantas cultivadas in vitro em meio de cultura MS.
Quatro protocolos foram testados, com diferenças quanto à solução enzimática para o
amolecimento das raízes, corantes, concentração do anti-mitótico e solução de hidrólise, e o uso de regulador de crescimento ácido naftalacético (ANA) para indução de
raízes in vitro. Todos os protocolos tiveram em comum raízes pré-tratadas com anti-mitótico 8-hidroxiquinoleína (0,002 M) durante 24 horas a 5 ºC ±1. As raízes foram
fixadas em Carnoy 3:1 por 18 a 24 horas em temperatura ambiente e estocados a -12
ºC no próprio fixador, para posterior análise. As raízes dos protocolos foram coradas
com diferentes corantes: hematoxilina, reativo de Schiff, orceína acética e Giemsa.
Resultados e Conclusão: O melhor protocolo avaliado para C. saintlegerianum foi
o utilizado com regulador de crescimento para o crescimento das raízes, com 24 h de
exposição à 8-hidroxiquinoleína solução de hidrólise (HCl) na concentração de 5 N,
fixadas em Carnoy (3:1) por 24 h e coradas com Giemsa 3% por oito minutos. Neste
protocolo foram obtidas 42 metáfases. No entanto, os cromossomos se encontravam
condensados, com núcleos interfásicos semi-reticulados e cromatina condensada.
Apesar dos bons resultados obtidos, é necessário adequar o protocolo para a espécie
estudada, testando reagentes, concentrações, tempo e temperatura ideais, para obter
metáfases de qualidade, visando, além da obtenção do número cromossômico, a mon-
estudos, Goiânia,v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Palavras-chave: citogenética, orquídeas, cultivo in vitro
tagem do cariótipo e a classificação dos cromossomos, de acordo com o tamanho e
a posição dos centrômeros.
estudos, Goiânia, v.39, n. 3, p. 437-459, jul./set. 2012.
Apoio: Capes, Reuni, Fapeg