MEIOS E MÉTODOS DE CULTIVO CELULAR E EMBRIONÁRIO
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MEIOS E MÉTODOS DE CULTIVO CELULAR E EMBRIONÁRIO • INTRODUÇÃO – O CULTIVO CELULAR REQUER CUIDADOS ESPECIAIS EM RELAÇÃO AO MATERIAL E PRODUTOS UTILIZADOS: – DEVEM SER ATOXICOS OU DE BAIXA TOXICIDADE; – NÃO DEVE DEGRADAR DURANTE O CULTIVO; – NÃO DEVE RESULTAR EM CATABOLITOS TÓXICOS CÉLULA DURANTE O CULTIVO; – NÃO DEVEM SER PIROGÊNICOS OU LIBERAR PIROGENOS DURANTE O CULTIVO. PARA A MEIOS E MÉTODOS DE CULTIVO CELULAR E EMBRIONÁRIO • MATERIAL : Origem e Qualidade – ÁGUA - temos três tipos de água para uso em laboratório • Água Tipo 1 • Água Tipo 2 • Água Tipo 3 – SAIS – Utilizados na preparação dos meios – – – – Atóxico PA – Para Análise SÍNTESE Testados Para cultivo Celular ou Embrionário MEIOS E MÉTODOS DE CULTIVO CELULAR E EMBRIONÁRIO • MATERIAL : Origem e Qualidade • Produtos Orgânicos – Pureza ou testados para cultivo celular – ex. Hepes, • Plásticos Atóxico – Poliestireno (PS) ou Polipropileno (PP) – De preferência com superfície tratada para cultivo celular – ex. Placas de cultivo, Garrafas de cultivo, Tubos de cultivo ou manipulação • Fluídos Orgânicos: de Origem Animal ou Vegetal – Sem composição definida – ex. Soro Fetal Bovino (SFB), Albumina Sérica Bovina (BSA); Água de Coco • Vidrarias Atóxica – Cristal ou Borosilicato – De Preferência com superfície tratada para Cultivo Celular ÁGUA TRADICIONAL ÁGUA TIPO 3 ÁGUA TIPO 2 ÁGUA TIPO 1 SAIS DE BOA QUALIDADE PRODUTOS ORGÂNICOS MATERIAL PLÁSTICO: PLACAS DE POLIESTIRENO (PS) MATERIAL PLÁSTICO: TUBOS DE POLIESTIRENO (PS) OU POLIPROPILENO (PP) FLUÍDOS ORGÂNICOS: Origem animal ou vegetal VIDRARIAS ATÓXICA ESTERILIZAÇÃO DO MATERIAL • CALOR ÚMIDO – AUTOCLAVE 1-1,5 atm – Vidrarias, Plasticos em PP, Metais, Membranas e Filtros • CALOR SECO – ESTUFAS ACIMA DE 100 C – Vidrarias, Metais, gase • RADIAÇÃO – Gama – Borrachas, Suplementos, Meios, Membranas e filtros – Plasticos em PS e PP • GAS – Oxido etileno – Plasticos em PS e PP, Membranas e filtros • FILTRAÇÃO – Líquidos – meios de cultivo EQUIPAMENTOS DE SEGURANÇA EQUIPAMENTOS DE SEGURANÇA EQUIPAMENTOS DE SEGURANÇA MATERIAL DE SEGURANÇA • • • • • • • • • • LUVAS DE PROCEDIMENTO AVENTAL DE ROTINA OU CIRURGICO MASCARA, GORRO E PROPÉ AMBIENTE COM PRESSÃO NEGATIVA OU POSITIVA DEPENDENDO DO CASO ROUPAS ESPECIAIS FLUXO LAMINAR VERTICAL FLUXO LAMINAR HORIZONTAL UTENCILIOS PARA DESCARTE DO MATERIAL BOMBA DE VÁCUO AUTOCLAVE NOÇÕES BÁSICAS DE CULTIVO CELULAR Table 1: Differential potential ranges from totipotent stem cells to nullipotent cells. Compiled from information in sources shown Differentiation Potential Number of cell types Example of stem cell Cell types resulting from differentiation Source Totipotential All Zygote (fertilized egg), blastomere All cell types [m1] Pleuripotential All except cells of the embryonic membranes Cultured human ES cells Cells from all three germ layers [m2] Multipotential Many Hematopoietic cells skeletal muscle,cardiac muscle, liver cells, all blood cells [m3] Myeloid precursor 5 types of blood cells (Monocytes, macrophages, eosinophils, neutrophils, erythrocytes) [m4] Oligopotential Few Quadripotential 4 Mesenchymal progenitor Cartilage cells, fat cells, stromal cell cells, bone-forming cells Tripotential 3 Glial-restricted precursor Bipotential 2 Bipotential precursor from murine fetal liver B cells, macrophages [m7] Unipotential 1 Mast cell precursor Mast cells [m8] Nullipotential None Terminally differentiated cell e.g. Red blood cell No cell division 2 types of astrocytes, oligodendrocytes [m5] [m6]
