Seleção de primers e repetibilidade de marcadores ISSR para

54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Seleção de primers e repetibilidade
de marcadores ISSR para análise
genético-populacional da espécie
de Astyanax bimaculatus
Martelli-de-Paula,V; Batista, EC; Telles, MPC; Resende, LV
Laboratório de Genética & Biodiversidade, Universidade Católica de Goiás
[email protected]
Palavras-chave: Astyanax bimaculatus, ISSR, caracterização molecular, seleção de primers
A caracterização genética de comunidades aquáticas é fundamental para revelar a história evolutiva das populações.
A utilização de marcadores moleculares possibilita o conhecimento da distribuição da variabilidade genética de uma
espécie. Com o aprimoramento das técnicas de marcadores moleculares, houve uma ampliação de seu uso na ecologia,
com diversas abordagens. O marcador molecular ISSR (inter simple sequence repeat) possui herança de padrão
dominante e baseia-se na amplificação de fragmentos distribuídos no genoma entre regiões repetitivas do DNA. Este
marcador é indicado para estudos com espécies selvagens endêmicas do cerrado, além de ser uma técnica relativamente
rápida, barata e simples. O objetivo desse trabalho foi selecionar primers de ISSR que amplifiquem regiões entre
blocos microssatélites em indivíduos Astyanax bimaculatus. Foram utilizados três indivíduos para os testes de primers
e a otimização das temperaturas de anelamento para essa espécie. A extração do DNA dos indivíduos foi feita a partir
de tecidos musculares com o Kit illustra tissue & cells genomicPrep Mini Spin, fornecido pela GE Healthcare. Após a
extração as amostras foram submetidas à eletroforese em géis de agarose a 1% para comprovar a qualidade do DNA.
Com essas amostras foram testados 30 primers de ISSR ancorados sintetizado pela RW genes. Cada primer foi utilizado
na amplificação das regiões ISSR, via PCR (reação de cadeias em polimerase), com a sua temperatura de anelamento
específica (www.rwgenes.com.br- oligo calculator). Além disso, foram testadas com todos os primers outras temperaturas,
abaixo e acima da TM, para otimizar a amplificação dessas regiões para essa espécie. Para Astyanax bimaculatus foram
selecionados 10 primers (864; 868; 825; 808; 811; 827; 861; 862; 840; 852) pelo bom padrão da amplificação e pelo
número de fragmentos. Após a seleção as amplificações foram feitas novamente a fim de analisar a robustez e o índice
de repetibilidade dos locos e dos marcadores. A codificação dos locos foi feita pela presença e ausência dos fragmentos
amplificados, gerando uma matriz de dados binários, que permite a análise da repetibilidade por loco e por primer. A
escolha dos locos foi feita a partir das bandas mais nítidas que não fossem maiores que 2.000 bp (pares de bases) nem
inferiores a 300 bp. Os 10 primers selecionados serão importantes em estudos futuros acerca da diversidade genética das
populações de Astyanax bimaculatus. Essa diversidade de diversas populações de peixes está ameaçada principalmente
pela poluição, pela introdução de espécies exóticas e pela destruição dos habitats. A perda da mesma reduz a habilidade
da espécie à adaptação às mudanças ambientais. Assim torna-se indispensável o estudo da variabilidade nas populações
de A. bimaculatus para garantir a sua manutenção e propor possíveis medidas conservacionistas.
Orgão financiador: Universidade Católica de Goiás.
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