Retroviroses Felinas - Laboratório de Epidemiologia e Bioestatística

20/10/2015
Família Retroviridae
Retroviroses
Felinas
Sueli Akemi Taniwaki Miyagi
Laboratório de Biologia Molecular Aplicada e
Sorologia (LABMAS)
Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e
Saúde Animal (VPS)
FMVZ - USP
[email protected]
• Classificação
– Subfamília Orthoretrovirinae
• Gammaretrovirus
– Vírus da Leucemia felina
• Lentivirus
– Vírus da Imunodeficiência felina
– Subfamília Spumaretrovirinae
• Spumavirus
– Vírus formador de sincício felino (Feline Foamy Virus)
» Até 90% infecção
» Não-patogênico
Família Retroviridae
Família Retroviridae
• Vírion
Hosie & Beatty, 2007
• Transcriptase Reversa
– DNApol-RNAd
– RNaseH
– DNApol-DNAd
Vírus da imunodeficiência felina (FIV)
• Integrase
Lecollinet & Richardson, 2008
Família Retroviridae
• Genoma viral
Família Retroviridae
• Retrovírus simples
– 2 cópias de ssRNA(+)
– DNA pró-viral
– Apenas 1 splicing
• 5’ e 3’ LTR (Long terminal repeats)
– Regulação da expressão dos genes virais
• Genes gag, pol e env
• Genes acessórios (simples/complexos)
http://viralzone.expasy.org/
Vírus da Leucemia Felina (FeLV)
Flores, 2007
1
20/10/2015
Família Retroviridae
• Retrovírus Complexo
Família Retroviridae
• Replicação viral
Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV)
Mahy & van Regenmortel, 2010
Família Retroviridae
• Ligação e Fusão (FIV)
Família Retroviridae
• Replicação viral
SU
TM
Ligação
(CD134)
Exposição do peptídeo
Rearranjos
TM
conformacionais
Ligação ao coreceptor CXCR4
Fusão
Figueiredo, 2006
Mahy & van Regenmortel, 2010
Família Retroviridae
Família Retroviridae
• Replicação FIV
Flores, 2007
Kenyon & Lever, 2011
2
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Família Retroviridae
• Maturação
SU/TM
Vírus da
Imunodeficiência Felina
(FIV)
http://viralzone.expasy.org/
FIV
• Organização genômica complexa
• Introdução
–
–
–
–
–
FIV
1986: Norte da Califórnia
Família Retroviridae
Gênero Lentivirus
105-125nm
9400 bases
Lecollinet & Richardson, 2008
• Semelhante ao HIV
Figueiredo & Taniwaki, 2007
– Filogenéticas
– Patogênicas (AIDS)
FIV
FIV
• Epidemiologia
– Distribuição mundial
– Felídeos domésticos e selvagens
– Prevalência:
• 1 a 44%
• Comportamento: machos, vida-livre e alta densidade
populacional
B
– Transmissão:
• Inoculação pela mordida (brigas)
• Venérea
• Intrauterina (antes ou durante o parto)
• Transmamária
Alterado de Yamamoto et al., 2007
• Subtipos: A, B, C, D e E
– Região variável V3-V5 gene env
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FIV
FIV
Brasil
• Patogenia
– Tropismo celular
Caxito et al., 2006
(1,47-13,95%)
Marçola et al., 2013
Martins et al., 2008
Subtipo B
Teixeira et al., 2010
Lara et al., 2008
•
•
•
•
•
Linfócitos T CD4+ e CD8+
Linfócitos B
Macrófagos
Astrócitos
Células microgliais
Kenyon & Lever, 2011
Reche et al., 1997
(6,5-14%)
Taniwaki et al.,
2002 (13,4%)
Caldas et al.,
2000 (37,5%)
FIV
FIV
• Patogenia
• Sinais clínicos
– Fase aguda/primária
•
•
•
•
Febre
Letargia
Linfoadenopatia transitória
Neutropenia
– Fase assintomática
Lecollinet & Richardson, 2008
Hosie & Beatty, 2007
FIV
• Sinais clínicos
– Fase secundária (pré-AIDS/AIDS)
• Sinais clínicos
FIV
– Gengivite/Estomatite
Lecollinet & Richardson, 2008
• Imunodeficiência e/ou Imunoestimulação
– Diminuição CD4+/CD8+
• Perda de peso e linfoadenopatia generalizada
• Infecções crônicas (secundárias ou oportunistas)
– Vírus, bact., fungos e protozoários
– Problemas de pele (parasitas/fungos)
• Neoplasias e distúrbios neurológicos
• Rinite crônica
• Glomerulonefrite imuno-mediada
Figueiredo & Taniwaki, 2007
4
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FIV
• Sinais clínicos
– Dermatofitose
FIV
• Sinais clínicos
– Conjuntivite
Figueiredo & Taniwaki, 2007
Paparotto & Taniwaki, 2007
FIV
• Sinais clínicos
• Diagnóstico
FIV
– Achados laboratoriais
•
•
•
•
•
•
•
Figueiredo & Taniwaki, 2007
Inespecíficos
Reflexo da doença concomitante
Neutropenia
Linfopenia (CD4+)
Anemia
Hiperglobulinemia
Azotemia
– Contagem de CD4+/ CD8+
FIV
• Diagnóstico
• Diagnóstico direto
FIV
– Isolamento viral
Hosie & Beatty, 2007
• Detecção do vírus
• Isolamento viral
• PCR
• Detecção de anticorpos
Taniwaki, S.A.
•
•
•
•
Não usado de rotina
Co-cultivo de linfócitos do sangue
2-3 semanas
Confirmação pela detecção de proteínas virais no
sobrenadante
• ELISA
• Western blotting
• IFA
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• Diagnóstico direto
FIV
– Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR)
FIV
• Diagnóstico direto
– Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR)
• Detecção
– DNA pró-viral
– RNA viral (RT-PCR)
• Vantagens:
–
–
–
–
• Método
– Convencional
– PCR em tempo-real (qPCR)
Detecção 5-10 dias pós-infecção
Fase terminal
s/ interferência de Ac. Maternos
Vacinação...
• Desvantagens:
Taniwaki, S.A.
• Diagnóstico indireto
FIV
– Variabilidade genética
» Subtipos existentes
» Mutação/recombinação
– Fase assintomática
– Padronização
Hosie & Beatty, 2007
FIV
• Diagnóstico indireto
– Imunofluorescência indireta (IFA)
• CrFK/linfócitos infectados
– ELISA/Imunocromatografia
• Teste de triagem
• Antígenos virais/recombinantes
– Western blot (WB)
• Vírus purificado
• Separação em gel
• Detecção Ac específicos para cada
proteína viral
• Confirmatório
www.microvet.arizona.edu/.../ToolBox/elisa.html
– p24 (CA)
– p15/17 (MA)
– TM
• Soro/plasma
– sangue
Poli et al., 2001
• Diagnóstico indireto
FIV
FIV
• Diagnóstico indireto
– ELISA/Imunocromatografia
– Interpretação de testes sorológicos
• Prevalência na população
– Baixa x Alta
• Fase da infecção
• Vantagens
– Rápido e fácil
– Anticorpos circulantes = infecção
– Produção de anticorpos alta
• Desvantagens
–
–
–
–
Fase aguda
Fase terminal
Filhotes (12 semanas-Ac maternos)
Vacinação
– Inicial ou terminal x Assintomática
Lecollinet & Richardson, 2008
• Estado clínico do animal
– Saudável x doente
• Filhotes
– Ideal após 6 meses
– Retestar após 2 meses
• Vacinação
– Ac. Vacinais x infecção
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FIV
• Vacinação
– Vários tipos testados
– sem proteção de 100%
•
•
•
•
Subunidades
Recombinantes
Atenuadas
Inativadas
Vírus da Leucemia
Felina (FeLV)
– Uso comercial
• Fel-O-Vax FIV® (Fort Dodge Animal Health)
– Vírus inteiro inativado
– Proteção heteróloga?
» Variabilidade genética
– Interferência no diagnóstico sorológico
FeLV
FeLV
• Introdução
• Subgrupos do FeLV
– Baseada no gene env/receptores de entrada
– Subgrupos
– 1964: gato com linfoma
– Família Retroviridae
– Gênero Gammaretrovirus
• FeLV-A (único transmissível)
• FeLV-B (50%)
– Recombinação FeLV-A seq. retrovírus endógenos
– Linfomas e neuropatogenicidade
• FeLV-C (raro)
– Mutação no gene env do FeLV-A
– Anemia fatal
• FeLV-T
Dunham & Graham, 2008
– Mutação na seq. SU do FeLV-A
– Tropismo por linfócitos T / Imunodeficiência
FeLV
Brasil
• Epidemiologia
FeLV
Hagiwara et al., 2007 (6,2%)
Figueiredo et al., 2009 (5,3%)
– Distribuição mundial
– Felídeos domésticos e selvagens
– Prevalência:
•
•
•
•
1-8% (gatos saudáveis)
21% (gatos doentes)
Diminuição com teste e separação/vacinação
Grupo de risco: contato social
Barbosa et al., 2001
(12,6%)
Teixeira et al., 2007
(32,5%)
Souza et al., 2002
(17,4%)
Coelho et al., 2008
(47,5%)
– Transmissão:
• Filhotes + susceptíveis
• Contato
– Eliminação pela saliva
• Intrauterina (antes ou durante o parto)
• Transmamária
Meinerz et al., 2010
(38,3%)
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FeLV
• Patogenia
• Sinais clínicos
FeLV
Replicação na orofaringe
(linfócitos e macrófagos)
FeLV-A
– Desenvolvimento de tumores
Imunidade
celular/humoral
1. Infecção abortiva
•
s/ DNA pró-viral
s/ RNA viral
• s/ p27
• s/ isolamento
Viremia
•
DNA pró-viral moderado
• RNA viral moderado/ausente
• p27 indetectável/transiente
3. Infecção latente
•
• Transdução
– Incorporação de oncogene no provírus do FeLV-A
– Vírus recombinante (FeLV-B, FeSV)
– Receptores Pit 1 e 2
4. Infecção progressiva
• Ausência p27
Ausência RNA viral e DNA pró-viral
(sangue)
• Potencial reativação na medula
• Sinais clínicos
•
↑ DNA pró-viral
↑ RNA viral
• ↑ p27
Isolamento constante
•
•
FeLV
– Desenvolvimento de tumores
• Sinais clínicos
• FeLV-C (raro)
Mediastínico (timo)
Alimentar
Multicêntrico
Extra-nodal
» Pele, olhos, rins, SNC
– Receptor FLVCR1
– Inibe produção de eritrócitos
– Acúmulo fatal de heme
• Imuno-mediada
• Secundária
– Doenças mieloproliferativas
– Doenças mielossupressivas
– Outros agentes
» Mycoplasma haemofelis
• Desordens Mieloproliferativas
– Leucemias
– Mielofibrose
– Fibrossarcoma
• Sinais clínicos
– Desordens reprodutivas
• Aborto, reabsorção fetal, infertilidade
• Natimortos
– Enterite associada ao FeLV
• Diarréia, hematemese, anemia
– Disfunção neurológicas
FeLV
– Anemia
• Linfomas
–
–
–
–
– Ativação de oncogenes celulares
2. Infecção regressiva
Medula
óssea
•
• Mutagênese insercional
< 4 sem
> 4 sem
FeLV
• Diagnóstico
FeLV
– ELISA/Imunocromatografia
• Detecção de p27 solúvel (viremia)
– Infecção progressiva
– Infecção regressiva (?)
•
•
•
•
Soro/plasma
4 semanas pós-infecção
Triagem
Teste rápido
– Imunossupressão
• Pré-AIDS/AIDS
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FeLV
• Diagnóstico
– Imunofluorescência direta (IFA)
• Diagnóstico
FeLV
– DNA pró-viral
• Granulócitos, linfócitos e plaquetas
• Viremia
• Convencional x tempo-real
• 1 semana pós-infecção
– Infecção progressiva
• Detecção de proteínas do gag
– RNA viral
• Convencional x tempo-real
• Replicação ativa
• 1 semana pós-infecção
– Isolamento viral
• Detecta vírus infectantes
• Viremia
– Infecção progressiva
FeLV
• Diagnóstico
1. Infecção abortiva
•
2. Infecção regressiva
s/ DNA pró-viral
• s/ RNA viral
• s/ p27
• s/ isolamento
• DNA pró-viral moderado
• RNA viral moderado/ausente
• p27 indetectável/transiente
• s/ isolamento
3. Infecção latente
4. Infecção progressiva
• Ausência p27
Ausência RNA viral (sg)
Ausência DNA pró-viral (sg)
Potencial reativação na medula
•
•
•
•
↑ DNA pró-viral
↑ RNA viral
• ↑ p27
Isolamento constante
•
•
• Vacinação
FeLV
– Infecção abortiva
• Ac. Neutralizantes contra FeLV-A
• Imunidade celular
– Não há proteção esterilizante
– Não previne a infecção
• Baixos níveis de RNA e DNA pró-viral
– Previne antigenemia persistente
• Menor doenças associadas ao FeLV
• Maior sobrevida
– Antigenemia
– Reteste após 4-12 semanas
– Não interfere com diagnóstico
• Antigenemia/DNA pró-viral
• Vacinação
FeLV
– Quando vacinar
• Fatores de risco
– Contato com animais infectados
– Filhotes
• Testar antes de vacinar
– Esquema vacinal
• Primo-vacinação
– 8-9 semanas
– 12 semanas
Controle, Tratamento
e Prevenção de
Retroviroses felinas
• Reforço
– Anual
– Após 3-4 anos de idade
» a cada 2-3 anos
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FIV e FeLV
• Cuidados
– Isolamento
– Castração
– Acompanhamento clínico periódico
• Tratamento de suporte
FIV e FeLV
– Animais doentes
• Diagnóstico e tratamento específico rápido
• Tratamento prolongado e agressivo
• Corticóides – com cuidado!!
– Gengivite/estomatite grave (ideal extrair dentes)
– Doenças imuno-mediadas
– Neoplasias
• exames laboratoriais (6-12meses)
– Vacinação de rotina
• PFV, FHV-1, FCV e Raiva
• Vacinas inativadas
• Resposta imune adequada?
• Griseofulvina – não em gatos FIV
– Supressão da medula-óssea (panleucopenia grave)
• Itraconazol (5-10mg/kg VO/q12-24hs)
– Estágio de imunossupressão
– Dermatofitose
– Criptococose
• FIV: estimulação da produção viral?
• Avaliar risco-benefício
FIV e FeLV
• Tratamento de suporte
FIV e FeLV
• Tratamento antiretroviral
– Animais doentes
• Eritropoietina (100UI/kg SC/q48hs)
– Insuficiência renal crônica
• Doxiciclina (5-10mg/kg VO/q12-24hs/21dias)
– Mycoplasma haemofelis (anemia)
• Quimioterapia
– Linfoma
– Leucemias
• Cirurgias
FIV e FeLV
• Tratamento antiretroviral
FIV e FeLV
• Tratamento antiretroviral (não disponível no Brasil)
– Zidovudina/AZT (3’-azido-2’,3’-dideoxythymidine)
• Análogo de nucleosídeo
• Inibe a transcrição reversa
– Zidovudina/AZT (3’-azido-2’,3’-dideoxythymidine)
• 5-10mg/kg VO/q12hs
• Melhora dos sinais clínicos
– Estomatite
• Aumento da qualidade de vida
• Redução da carga viral
• FeLV
– Redução na antigenemia
• FIV
– Aumento da razão CD4+/ CD8+
Timina
• Hemograma (anemia não-regenerativa)
AZT
– Ht<20%
• Resistência: Mutação
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FIV e FeLV
• Tratamento antiretroviral (não disponível no Brasil)
FIV e FeLV
• Tratamento imunomodulador
– Interferon-α (recombinante humano)
– AMD3100 (Bicyclams)
• FIV
– Inibe a entrado do vírus
– Antagonista seletivo do quimioreceptor CXCR4
– 0,5mg/kg SC/q12hs/ 6meses
– Melhorou sinais clínicos
– Reduziu DNA pró-viral
– Europa apenas imunomodulador
• Atividade antiviral
• Alta-dose: 104-106UI/kg SC/q24hs
– Prod. Ac. anti-IFN-α
– Diminui eficácia
• Baixa-dose: 0,5-50UI/kg VO/q24hs/sem. alternadas
– 30UI/gato
– Sem reação adversa
• Resultados controversos
– Melhora dos sinais clínicos
– Aumento da sobrevida
– FeLV: Diminui p27 circulante?
FIV e FeLV
• Tratamento imunomodulador
FIV e FeLV
– Gatis e abrigos
• Diagnóstico
– Interferon-ω felino
•
•
•
•
•
• Prevenção e Controle
– Antes da introdução de novos animais
Atividade antiviral
106UI/kg SC/ q24hs/ 5 dias
Sem efeitos colaterais
Resultados controversos
FeLV
– Melhora sinais clínicos
– Aumento da sobrevida
• Separação infectado/não-infectados
• Desinfecção simples
– Fatores de risco
• Gatos de vida-livre
– Hospitais veterinários
• Desinfecção simples
– Vacinação
• FIV
– Ação antiviral in vitro
– 1 estudo controlado: sem efeitos
• FIV: não recomendada
• FeLV: fatores de risco
Muito Obrigada!!!
[email protected]
www.catvets.com (American Association of Feline Practitioners)
www.abcd-vets.org (European Advisory Board on Cat Diseases)
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