aula prática 2 Microscopia e Plaqueamento de Bactérias

IB/RC – UNESP
UFSCar – Araras
II CURSO DE MONITORAMENTO DA FERMENTAÇÃO ETANÓLICA
PERÍODO: 11 a 15 DE FEVEREIRO DE 2008
ATIVIDADES PRÁTICAS
2° Aula Prática – Microscopia e Plaqueamento de Bactérias
1 – OBJETIVO:
Reconhecer uma contaminação bacteriana; contar as unidades
formadoras de colônias das bactérias.
2 – MATERIAL:
•
Tecido para limpeza tipo perfex;
•
Cultura denominada C;
•
Placas com meio pré-determinados para cultivo de
bactérias;
•
Banho-maria;
•
Fósforo;
•
4 pipetas esterilizadas;
•
1 alça de Drigalski;
•
Lâmina e lamínula para microscópio;
•
Microscópio;
•
Soluções corantes: azul de metileno e eritrosina;
•
1 tubo de cultura com a diluição para plaqueamento;
•
Papel absorvente;
•
Pisseta, conta-gotas com água destilada;
•
Becker;
•
Bico de Bunsen;
•
Frasco para descarte das pipetas;
•
Material para assepsia da bancada;
•
Caneta de retroprojetor.
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3 – PROCEDIMENTO DE COLETA DE AMOSTRAS NA INDÚSTRIA:
Frascos limpos e esterilizados ou com condições de assepsia
controlada. Coletar sempre pela metade do volume do frasco considerando as
condições da fermentação. Recomenda-se resfriar o mais rápido possível.
Transportar para o laboratório para as análises.
4 – PROCEDIMENTO COM AS AMOSTRAS:
Para fins de treinamento faremos plaqueamento da amostra C
(fermentação contaminada com leveduras selvagens e bactérias) nos seguintes
meios de cultura:
- MRS (Man, Rajosa e Sharpe) específico para bactérias láticas.
- CSN + CaCO3 (caldo de cana suplementado com nutrientes e
adicionado carbono de cálcio para verificação da presença de
bactérias ácidas).
- Colmer e Mayeux específico para bactérias produtoras de goma.
- PCA (Plate Count Agar). Trata-se de um meio de contagem
geral de bactérias.
4.1 Procedimento para plaqueamento em profundidade
Nas placas esterilizadas, colocar assepticamente 1mL de amostra
convenientemente diluída no centro da placa.
A seguir verter o meio de cultura, fundido e na temperatura entre
48 e 50 °C, na placa. Homogeneizar com movimentos suaves em forma de 8
até solidificação.
Realizar este procedimento com todos os meios.
Incubar as placas na posição invertida a 36 °C durante 24-30 h.
Observação: O plaqueamento em profundidade permite a utilização de maior
volume de material.
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