Apresentação do PowerPoint

TESTE DE QUANTIFICAÇÃO DE CV HCV DESENVOLVIDO EM BIOMANGUINHOS: AVALIAÇÃO DE DESEMPENHO FRENTE A AMOSTRAS DE
PACIENTES EM TRATAMENTO COM ALFA PEG-INTERFERONA
Daniele Ramos Rocha
Bio-Manguinhos/Fiocruz
Motivação
 Desenvolvimento Brasileiro
Competência Tecnológica em DT e
Produção com BPF + 2 plantas
produtivas
2014
2004
Absoluta dependência
Tecnológica e de insumos
 Custo
Kit comercial: ± R$ 150,00/reação
Kit Bio-Manguinhos: ± R$ 50,00/reação
Redução 3x
Epidemiologia
 Principal causa de doença crônica no Fígado (cirrose e câncer)
 90% assintomáticos ou sintomas inespecíficos
 Fatores de Risco: drogas intravenosas, atividade sexual, transfusão de sangue e hemodiálise
 Entre 123 milhões e 170 milhões (2-3%) de pessoas infectadas pelo
HCV em todo o mundo
 No Brasil, a prevalência da hepatite C é de 1,38% na população geral (30 a 59 anos),
podendo variar de acordo com a região:
Fonte: Roche Brasil
Vírus da Hepatite C
 Agente etiológico: HCV, da família Flaviviridae, Gênero Hepacivírus
 Vírus de RNA Fita simples
 Dividido: 6 genótipos (1 a 6) com vários subtipos (+50)
 Genótipos 1 e 4 tem maior resistência ao tratamento com interferon que os
2e3
Distribuição dos
genótipos de HCV no
Brasil
Genótipo
1
2
3
4
5
Incidência
64,90%
4,60%
30,20%
0,20%
0,10%
Fonte: Campiotto S. et al, 2005.
Diagnóstico e Monitoramento
 Diagnóstico:
 ELISA (anti-HCV)  4ª geração: sensibilidade e especificidade
superiores a 95% (com valor preditivo positivo superior a 95%)
 NAT HCV (qualitativo): sensibilidade ± 50UI/mL
 Genotipagem: determina o tratamento
 Monitoramento: Quantificação CV
 Roche: Taqman 48 HCV
 Abbott: Real Time HCV
Teste de Quantificação de CV HCV Bio-Manguinhos
 Fluorescência HCV: FAM
PC: Dye 3
Região 5’- UTR do HCV
P1 P2 P3
 Sensibilidade:
 Quantitativa: 2E+6 a 6E+1 UI/mL
 Detecta: até 3E+1 UI/mL




Módulo Controle
Padrões 1, 2 e 3 (em duplicata)
Partícula Calibradora (Patente Fiocruz)
Controle Negativo (em duplicata)






Módulo Amplificação
Sondas
Iniciadores
Mistura de PCR
Enzima RT
Água
PC
Teste de Quantificação de CV HCV Bio-Manguinhos
 Plataforma automatizada




até 88 amostras/rotina
Pipetagem das amostras + PC: Janus (Perkin Elmer)
Extração do RNA: MDx (Qiagen) – Coluna (sílica)
Amplificação (PCR em tempo Real): 7500 (Applied Biosytem)
Tempo: ± 7h.
 Software: Geração de Laudo
Validação de Método
 Setor de Validação de Bio-Manguinhos: RDC n° 27
CQA: CQ de alta concentração
CQM: CQ de média concentração
CQB: CQ de baixa concentração
LIQ: limite inferior de quantificação
CQD: CQ de diluição
Precisão %
Intracorrida
Roche
Intercorrida
Intracorrida
Bio-Manguinhos Intercorrida
CQA
18,4
18,6
0,32
0
CQM
18,7
17,1
0,98
1,33
CQB
12,7
9,8
8,24
5,02
Validação do Método
 Reprodutibilidade
P
R
E
C
I
S
Ã
O
Requisito RDC n°27:
 Precisão: CV ≤ 15% LIQ ≤ 20%
 Exatidão: EPR ± 15% LIQ ± 20%
E
X
A
T
I
D
Ã
O
CV: coeficiente de variância
EPR: Erro Padrão Relativo
Metodologia
 Amostras: Tratamento com Alfa Peg Interferona
 n= 191
 Sul e Sudeste
 Quantificação CV
 Início: Sem administrar a droga
 Cut Off: 12ª ou 24ª semana
 Resposta Virológica
Aplicação do Método: Resultados
 Resposta Virológica:
 Precoce Parcial: 21% (n=40)
 Precoce Completa: 51% (n=97)
 Lenta: 50% Parcial  Completa/ 24° semana (n=20)
 Não respondedor ao tratamento: 28% (n=54)
 61% (n=117) CV HCV não detectada em até 24 semanas
Avaliação de Desempenho: Resultados
 Resposta Virológica: Espectro de Carga Viral de HCV
AMPLA FAIXA DE DETECÇÃO
Resposta Virológica
8,00
7,00
6,00
Log
5,00
4,00
Início do Tratamento
3,00
12a Semana
2,00
1,00
0,00
0
10
20
30
n
40
50
60
Avaliação de Desempenho: Resultados
 CV Bio-Manguinhos x COBAS Taqman HCV
 30% das amostras (n=60)
 Resultado: Média de variação < 0,4 log
Bio
ND
1,78
nd
1,78
1,78
5,66
6,77
4,61
2,69
6,59
4,75
1,78
5,49
2,06
ND
5,63
1,78
LOG
Roche
ND
1,69
ND
1,92
1,40
6,05
7,09
4,58
2,90
6,88
5,16
1,40
5,87
2,24
ND
6,03
1,40
Diferença
0
0,09
0,00
-0,14
0,38
-0,39
-0,31
0,03
-0,21
-0,29
-0,40
0,38
-0,38
-0,18
0,00
-0,40
0,38
Conclusões
 A avaliação do desempenho do teste de QCV de HCV desenvolvido e validado
em Bio-Manguinhos, com as 191 amostras, foi considerada satisfatória e
adequada sob os aspectos técnico, operacionais e de funcionalidade
 Os resultados obtidos indicam que o potencial produto após registro junto aos
Órgãos Regulatórios servirá como alternativa eficaz e de menor custo a ser
ofertado para a população brasileira
Perspectiva
 Validar o método em plataforma flexível e
com extração com beads magnéticas visando
aumento de sensibilidade e menor custo
Equipe







Patrícia Alvarez
Antonio Ferreira
Edmilson Domingos
Elisabete Ferreira
Marisa Ribeiro
Marcela Fontana
Elaine Motta
Agradecimentos
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Ana Carolina de Andrade
Roberta Mílan
SEVAN (Lamev)
DITIN