modelo resumo GA.indd

50º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 50º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2004
Costão do Santinho • Florianópolis • Santa Catarina • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-04-6
[email protected]
Palavras-chave: maracajá, Felidae, DNA fecal
Schneider, A; Roratto, PA; Bitencourt, JVT; Bartholomei-Santos, ML; Santos, S
Departamento de Biologia, Centro de Ciências Naturais e Exatas, Universidade Federal de Santa Maria.
Padronização de um protocolo
para extração de DNA de fezes
de Leopardus wiedii
O gato-maracajá (Leopardus wiedii) é um felídeo que está vulnerável à extinção. Por possuir hábitos elusivos,
de difícil observação, a análise da diversidade genética da espécie pode ser realizada com amostras de DNA
obtidas de fezes. Este é um bom método para coleta de material por não ser invasivo e não necessitar de captura
do animal. A utilização de ferramentas moleculares para estudo populacional de L. wiedii é informativa para
a caracterização dos indivíduos e escolha dos mesmos em possíveis situações de cruzamento, com objetivo de
evitar endocruzamento e preservar a diversidade genética. Para tanto, faz-se necessário um protocolo ideal de
extração de DNA que não comprometa a qualidade do material. O objetivo desse trabalho foi padronizar um
protocolo de extração de DNA de fezes de L wiedii. Quatro protocolos de extração foram testados utilizando
100mg de fezes conservadas a 4°C de uma mesma amostra. Os seguintes métodos foram testados: A) QIAamp
DNA Mini Kit; B) Lise em tampão contendo β-mercaptoetanol e proteinase K durante 2 horas, seguida por
extração com fenol-clorofórmio; C) Lise em tampão contendo β-mercaptoetanol durante 16 horas, seguida por
extração com fenol-clorofórmio; D) Homogeneização da amostra em tampão gelado (10 mM Tris-HCl; 1 mM
EDTA; 0,1% SDS), seguida da precipitação do DNA com acetato de potássio e isopropanol. O protocolo A foi o
único no qual a amostra de DNA obtida não continha pigmentos das fezes e não apresentava degradação, embora
a quantidade de DNA fosse pouca (4ng/µL). As outras amostras (B, C e D) foram submetidas à purificação
com PEG 13%/NaCl 1,6M para retirada dos pigmentos, sendo que a amostra D permaneceu pigmentada.
As amostras B e C apresentaram DNA de alto peso molecular, além de fragmentos de degradação. A amostra
D apresentou apenas DNA de alto peso molecular, sendo portanto, a precipitação com acetato de potássio e
isopropanol o método que se apresentou mais adequado.
114