Vírus da Diarréia Epidêmica Suína (PEDV)

Vírus da Diarréia Epidêmica Suína
(PEDV)
Albert Rovira, Nubia Macedo
Diarréia
Epidêmica Suína
• PED é causada por um coronavírus (PEDV)
• PEDV causa diarréia e vômito em suínos de
todas as idades
• Mortalidade alta em leitões < de 2 semanas
de idade
Diarréia
Epidêmica Suína
• PEDV foi descoberto na Europa nos anos 70
• PED não causa problemas na Europa
atualmente _ surtos isolados
• PED é um problema na Ásia – grandes perdas
econômicas
Primeiro caso diagnosticado: 16 de Maio
Retrospectivo : Ohio, 16 de Abril
1,3 milhões de animais mortos - 20 de setembro, 2013
Emergência da PED – 17 estados afetados
Courtesy of Dr. Dane Goede
Porcentagem de sobrevivência
Source: Dr. Ackerman _ Swine Veterinary Services
35
30
0
15-Mar
17-Mar
19-Mar
21-Mar
23-Mar
25-Mar
27-Mar
29-Mar
31-Mar
2-Apr
4-Apr
6-Apr
8-Apr
10-Apr
12-Apr
14-Apr
16-Apr
18-Apr
20-Apr
22-Apr
24-Apr
26-Apr
28-Apr
30-Apr
2-May
4-May
6-May
8-May
10-May
12-May
14-May
16-May
18-May
20-May
22-May
24-May
26-May
28-May
30-May
1-Jun
3-Jun
5-Jun
7-Jun
9-Jun
11-Jun
13-Jun
15-Jun
17-Jun
19-Jun
21-Jun
23-Jun
25-Jun
27-Jun
29-Jun
Number of Cases
Primeiros casos observados em Maio
Negative
POSITIVE
25
20
15
10
5
500
0
15-Mar
17-Mar
19-Mar
21-Mar
23-Mar
25-Mar
27-Mar
29-Mar
31-Mar
2-Apr
4-Apr
6-Apr
8-Apr
10-Apr
12-Apr
14-Apr
16-Apr
18-Apr
20-Apr
22-Apr
24-Apr
26-Apr
28-Apr
30-Apr
2-May
4-May
6-May
8-May
10-May
12-May
14-May
16-May
18-May
20-May
22-May
24-May
26-May
28-May
30-May
1-Jun
3-Jun
5-Jun
7-Jun
9-Jun
11-Jun
13-Jun
15-Jun
17-Jun
19-Jun
21-Jun
23-Jun
25-Jun
27-Jun
29-Jun
Number of Cases
>100 novos casos diagnosticados em 2 meses
600
Negative
POSITIVE
400
300
200
100
MN VDL + ISU + KSU + SDSU
Diarréia
Epidêmica Suína
• PEDV replica nas células epiteliais
do intestino delgado
• Período de incubação: 1-2 dias
• Eliminação nas fezes: 7-11 dias
• Resposta imune: anticorpos no
soro 7-14 dpi
Source: Kim et al. 1999
Diarréia Epidêmica Suína
• Mortalidade em granjas negativas _ leitões ≤ 7 dias de
idade
– Média 50%
– Alta 100%
• Adultos geralmente sobrevivem
• Granjas endêmicas
– Diarréia e vômito na maternidade e início da creche
– Curta duração e autolimitante
Diagnóstico
• Procedimento básico de diagnóstico de
diarréia
• Selecione leitões vivos, apresentando
diarréia aguda e vômito
• Realize a necrópsia e colete amostras dentro
de 15 minutos após eutanásia
Source: Dr. Ackerman
Lesão macro: conteúdo intestinal líquido
Coleta de amostras
• Intestino delgado:
– 6-10 porções representando todo o comprimento
do intestino delgado
– 10 cm no gelo e 2 cm na formalina
• Outros tecidos coletados para diagnóstico
diferencial
– Estômago, cólon, tonsila, linfonodo, pulmão,
coração, baço, fígado, rim – gelo e formalina
Diagnóstico de PEDV
• Isolamento viral:
– Dificuldades de crescimento
in vitro
• Histopatologia:
– Enterite atrófica
– Similar ao TGEV e
Rotavírus
• PCR tempo real:
– Sensitivo e específico
– Disponível em laboratórios nos EUA
Diagnóstico de PEDV
• IHC:
– Menos sensitivo que PCR
– Ideal para pesquisa e estudos
retrospectivos
• IFA: disponível em ISU
• ELISA:
– Disponível na Ásia
– Em andamento nos EUA
Diagnóstico Diferencial
• Gastroenterite viral
– Vírus da gastroenterite transmissível (TGEV) e
Rotavírus
• Gastroenterite bacteriana
– Clostridium spp, E. coli, Salmonella spp,
Brachyspira spp, Enterococcus durans, L.
intracellularis
• Gastroenterite parasitária
– Coccidia, Cryptosporidium, Nematodes
Diagnóstico diferencial
PEDV
TGEV
Rotavírus
Família
Coronaviridae
Coronaviridae
Reoviridae
Genoma
RNA envelopado
RNA envelopado
RNA não envelopado
Sinais clínicos
Diarréia, vômito,
desidratação
Diarréia, vômito,
desidratação
Diarréia
Lesões Macro
Parede intestinal fina e
transparente, conteúdo
líquido
Parede intestinal fina
e transparente,
conteúdo líquido
Parede intestinal fina
e transparente,
conteúdo líquido
Lesões Micro
Atrofia de vilosidades
Atrofia de vilosidades Atrofia de vilosidades
Diagnóstico
RT-PCR, IFA, IHC, ELISA
RT-PCR, IFA, IHC,
ELISA
RT-PCR, IFA, IHC, EM,
ELISA
Vacinas
Vacinação oral com vírus
atenuado PVDV DR-13 (não
aprovada nos EUA)
Vacina viva atenuada
e morta
Vacina viva atenuada
e morta
Tratamento
• Similar a outras enterites virais
• Livre acesso a água de qualidade
• Antimicrobianos se houver infecção
bacteriano secundária
Porta de Entrada?
• Ásia, Europa,…???
• Como apareceu nos EUA?
– Suínos
– Pessoas
– Ração
– Animais selvagens,…
• Estudos epidemiológicos estão sendo
realizados para responder estas questões
Prevenção e Controle
• Transmissão: fecal-oral
– Fontes de infecção: suínos, caminhões, botas,
roupas e outros fômites
• Interromper a entrada de animais na granja
infectada seguido de feedback em 100% dos
animais
– Procedimento bem sucedido para eliminar TGE
• Métodos de biossegurança
• Primeira sequência completa do genoma de uma
amostra PEDV dos USA
• RNA foi extraído de uma amostra de fezes positiva
para PEDV pela RT-PCR obtida de um leitão de 7
dias de idade
• 99.4% idêntico à amostra chinesa de PEDV
Rações contaminadas com
PEDv?
• Alguns ingredientes usados em rações
testaram positivos pela PCR
• Bioensaio foi realizado para descobrir se o vírus estava
vivo
• 3 leitões foram inoculados com PBS (controle negativo)
• 3 leitões inoculados com ração positiva pela PCR
(bioensaio)
• 3 leitões inoculados com amostras de fezes que
testaram positivas pela PCR (controle positivo)
Resultados do Bioensaio
Vomit
Diarrhea
PED PCR
Atrophic
enteritis
NEG Control
No
1/3
0/3
0/3
Bioassay
No
No
0/3
0/3
YES
2/3
3/3
3/3
POS Control
CONCLUSÃO: ração pode conter material
genético de PEDV que não é infeccioso mas pode
testar positivo pela PCR
Detecção de PEDV em amostras de ar
• Amostras de ar coletas de 18 m a 16 km de
distância de galpões infectados
• 10 amostras testaram positivas pela PCR
(ct 36-38)
• 12 leitões de 10 dias de idade foram
inoculados com as amostras de ar positivas
para PEDv
Source: Dan Goede
Bioensaio: Detecção de PEDV em
amostras de ar
Vomit
Diarrhea
PED PCR
Atrophic
enteritis
NEG Control
No
0/1
0/1
0/1
Bioassay
No
No
0/12
0/12
YES
1/2
1/2
1/2
POS Control
CONCLUSÃO: Não havia vírus vivo nas amostras
de ar coletadas
Source: Dan Goede
Sobrevivência de PEDv em fezes e
chorume
• Amostras coletadas de granjas livres de PEDV
• Amostras inoculadas com PEDV (homogenado de
raspado de mucosa proveniente de leitão positivo para PEDV)
• PEDv RNA
– Fezes: 3-7 dias a 40°C, 50°C e 60°C
– Chorume: até 28 dias a 25°C, 4°C, -20°C
• Amostras serão inoculadas em leitões de 2 semanas
de idade para determinar a sobrevivência do vírus
Source: Dr. Goyal
Situação atual
• Diagnóstico de rotina em granjas
suspeitas
• Vigilância em granjas negativas
• Esforços para erradicar PED em granjas
positivas
• Pesquisa: origem do vírus, transmissão,
diagnóstico, isolamento viral,
resistência…
Agradecimentos
•
•
•
•
•
Albert Rovira
Matt Ackerman, Swine Veterinary Services
MN Veterinary Diagnostic Laboratory
Dan Goede
American Association of Swine Veterinarians
(AASV)
• Swine Disease Erradication Center (SDEC)