Especificações técnicas

MÉTODO
Teste imunocromatográfico
FINALIDADE
O teste rápido Dengue Test Bioeasy IgG / IgM é uma fase sólida do ensaio
imunocromatográfico para uma detecção rápida, qualitativa e diferencial dos
anticorpos IgG e IgM para o vírus da dengue no soro ou no plasma de seres
humanos. Esse teste é direcionado para o uso profissional como auxílio no
diagnóstico presumível entre a infecção primária e secundária da dengue. Esse
teste fornece apenas um resultado preliminar. Então, o isolamento do vírus, a
detecção do antígeno em tecidos fixados, o RT-PCR e o teste sorológico como o
teste de inibição de hemaglutinação, métodos alternativos mais específicos para
o diágnóstico devem ser usados a fim de obter uma confirmação da infecção
pelo vírus da dengue.
FUNDAMENTO:
As viroses da Dengue, transmitidas pelos mosquitos Aedes aegypti e Aedes
albopictus, são amplamente distribuída através das áreas tropicais e sub
tropicais do mundo. Há quatro sorotipos distintos conhecidos (vírus da dengue
1, 2, 3 e 4). Em crianças, a infecção freqüentemente é sub clínica ou causa uma
doença febril auto limitada. Entretanto, se o paciente é infectado uma Segunda
vez com um sorotipo diferente, uma doença mais severa, a febre da dengue
hemorrágica ou a síndrome de choque da dengue, é mais provável de ocorrer.
A dengue é considerada ser a mais importante doença viral transmitida por
mosquito devido a morbidade e a mortalidade que causa.
Tradicionalmente, o diagnóstico sorológico de uma infecção aguda por dengue
tem confiabilidade 4 vezes maior no anticorpo contra o vírus da dengue entre
a fase aguda dupla e a fase convalescente do soro do paciente. O teste de
inibição da hemaglutinação tem sido o ensaio mais comumente usado para o
diagnóstico da dengue.
Testes rápidos e seguros para infecção primária e secundária de dengue são
essenciais para conduzir o paciente. A Infecção Primária da Dengue é associada
com febre suave a alta, dor de cabeça, dor muscular e erupções de pele. A
reposta imune inclui produção de anticorpos IgM perto do 5º dia de sintomas
e persiste por 30 a 60 dias. As IgGs aparecem no 14º dia e persistem por toda
a vida. A Infecção Secundária freqüentemente resulta em febre alta em muitos
casos com hemorragia e falência circulatória. A infecção secundária apresenta
aumento das IgGs dentro de 1 a 2 dias após o início dos sintomas e induz a
resposta da IgM após 20 dias de infecção.
PRINCÍPIO
O teste rápido Dengue Test Bioeasy IgG / IgM é recomendado para
simultaneamente detectar e diferenciar anticorpos IgG e IgM para o vírus da
dengue no soro ou no plasma de seres humanos. Esse teste também pode
detectar todos os 4 sorotipos de Dengue através do uso de uma mistura das
proteínas do envelope dos recombinantes da Dengue.
O cassete de teste Dengue Test Bioeasy IgG / IgM possui 3 tipos pré revestidos,
“G” (Teste para IgG de Dengue), “M” (Teste para IgM de Dengue) e “C” (Controle)
sobre a superfície do cassete. Todos os três tipos não são visíveis na janela
de resultados antes da aplicação das amostras. O “Controle” é usado para
procedimentos controle. O Controle deve sempre aparecer se o procedimento
do teste for realizado adequadamente e se os reagentes de teste do controle
estiverem funcionando. A linha púrpura “G” e “M” devem ser visíveis na janela
do resultado se houver anticorpos de IgG e/ou IgM suficientes para o vírus da
Dengue na amostra. Se os anticorpos de IgG e/ou IgM para o vírus da Dengue
não estiverem presentes na amostra, não irá aparecer cor em “G” e/ou “M”.
Quando a amostra é adiconada ao poço, IgG ou IgM da amostra se liga aos
anticorpos IgG ou IgM anti humanos imobilizados em duas linhas através do
teste de membrana. Se imunoglobulinas específicas de IgG e IgM da dengue
estiverem presentes na amostra, o complexo coloidal de ouro contendo o
antígeno capturado da dengue através de ligação da IgG ou IgM de pacientes,
tornam as linhas coradas visíveis.
MATERIAIS FORNECIDOS
1)
25 Cassetes de teste individualmente embalados em um envelope de alumínio com um dessecante
Cada cassete de teste contem IgG anti humana (G), IgM (M) anti humana e IgG anti Dengue (C) como materiais de captura. O cassete também contém um pad conjugado de ouro com a proteína do envelope do vírus recombinante da dengue.
2)
Diluente de ensaio
3)
Instrução de Uso
MATERIAIS NÃO FORNECIDOS
1)
Pipeta de capilaridade ou pipeta automática para dispersar a amostra.
PRECAUÇÕES
1)
Para melhores resultados, é necessário seguir rigorosamente as instruções.
2)
Todas as amostras devem ser manipuladas como sendo potencialmente infecciosas.
3)
Não abrir ou remover os cassetes de teste de suas embalagens individuais a não ser imediatamente antes do uso
4)
Não reutilizar os cassetes de teste.
5)
Todos os reagentes devem estar a temperatura ambiente antes do início do ensaio.
6)
Não usar reagentes com a data de validade da embalagem vencida.
7)
Os componentes desse kit foram submetidos a testes de controle de qualidade, de acordo com a padronização de cada grupo. Não misturar os componentes de lotes diferentes.
8)
O tampão de ensaio contém baixa concentração do preservativo azido de sódio. Azido de sódio é tóxico e deve ser manipulado com cuidado evitando a ingestão e o contato com os olhos.
ESTOCAGEM E ESTABILIDADE
Esse kit pode ser estocado a temperatura ambiente (1 ~ 30°C) ou refrigerado.
O kit é estável dentro do prazo de validade impresso na embalagem. NÃO
CONGELAR. Não estocar o kit de teste em local onde a luz solar incida
diretamente.
Coleta e Preparação das Amostras
1)
Amostras de soro ou plasma podem ser usadas neste teste.
2)
Manipular todos os derivados do sangue como agentes capazes de transmitir doenças infecciosas.
3)
Se as amostras de soro ou plasma não forem testadas imediatamente, deve-se refrigerá-las a uma temperatura entre 2 e 8C. Para uma estocagem maior do que uma semana, congelar as amostras a uma temperatura de –20º ou abaixo.
4)
As amostras contendo precipitado podem gerar resultados inconsistentes. Tais amostras devem ser clarificadas antes do ensaio.
5)
O uso de amostras contaminadas com hemolíticos, lipaêmicos, icterícios ou com bactérias deve ser evitado. Podem ocorrer resultados errôneos.
Procedimento do teste
Ler o resultado entre
15 e 20 minuttos
1) Remover o cassete de teste da embalagem de alumínio e colocá-lo em uma
superfície plana e seca.
2) Adicionar 5µl de soro ou plasma com a pipeta de 5µl de capilaridade dentro
dos espaços quadrados destinados as amostras.
3) Adicionar 3 a 4 gotas (cerca de 90 a 120 µl) do diluente de ensaio no orifício
em forma de círculo.
4) Interpretar os resultados do teste entre 15 e 20 minutos.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
IgM Positivo
O controle (C) e o tipo IgM (M) são visíveis no cassete de teste. Isso é positivo
para anticorpos IgM para o vírus da Dengue, indicando uma infecção primária.
IgG Positivo
O controle e o tipo IgG l(G) são visíveis no cassete de teste. Isso é positivo
para anticorpos IgG, indicando uma infecção secundária ou dengue contraída
no passado.
IgG e IgM Positivo
O controle, o tipo IgM (M) e o tipo IgG (G) são visíveis no cassete de teste. Isso
é positivo tanto para anticorpos IgM quanto para IgG, indicando uma infecção
primária tardia ou infecção secundária precoce.
Negativo
O controle é visível apenas no cassete de teste. Não são detectados anticorpos
IgG e IgM. Fazer o teste novamente dentro de 3 a 5 dias se houver suspeita de
dengue.
Inválido
A linha de controle não aparece. Volume insuficiente da amostra ou técnicas
incorretas de procedimento são as razões mais comuns para a ausência da
linha controle. Repetir o teste usando um novo cassete.
Limitações do teste
1)
2)
3)
4)
5)
6)
Esse teste é indicado apenas para o diagnóstico in vitro.
Esse teste detecta a presença de anticorpos contra a dengue nas amostras e não deve ser usado como único critério para o diagnóstico da infecção pelo vírus da Dengue.
Em infecções precoces e em algumas infecções secundárias, níveis detectáveis de anticorpos IgM podem ser baixos. Alguns pacientes podem não produzir níveis detectáveis de anticorpos dentro dos primeiros sete a dez dias após a infecção. Quando os sintomas persistem, os pacientes devem ser re testados 3 a 4 dias após a primeira amostra.
Reação sorológica cruzada entre o grupo Flavivirus (vírus da Dengue, Encefalite São Luiz, encefalite Japonesa, Nile Oeste e vírus da febre amarela) é comum.
Como todos os testes de diagnósticos, todos os resultados devem ser considerados com outra informação clínica válida para o médico.
Se o resultado do teste é negativo e os sintomas clínicos persistem, recomenda-se um acompanhamento adicional com outros métodos clínicos. O resultado negativo não exclui a possibilidade de uma infecção precoce pelo vírus da Dengue.
Valores Esperado
A dengue primária é caracterizada pela presença de IgM detectável de 3 a 5 dias
após o início da infecção. A dengue secundária é caracterizada pela elevação
da IgG específica 1 a 2 dias após o início da infecção e na maioria dos casos
isso é geralmente acompanhado por uma elevação da IgM.
O Teste Rápido Dengue Test Bioeasy IgG / IgM tem sido comparado com o
principal teste comercial Teste Rápido de IgM e IgG de Dengue. A correlação
entre esses dois sistemas é de 99.5 %
CARACTERISTICAS DE EXECUÇÃO
1) Comparação do Teste Rápido Dengue Test Bioeasy IgG / IgM com o Teste
Rápido HI Test SD BIOLINE Dengue IgG / IgM com o Teste HI mostrou uma boa
correlação com o teste de inibição da hemaglutinação (HI).
Titulação do Teste HI
Dengue Test Bioeasy IgG/IgM
Dengue IgM Positiva
Dengue IgG Positiva
1:10
+/-
1:20
+
-
>1:40
+
-
1:320
+
+
1:640
+
+
1:1280
+
+
>1:2560
+
+
Infecção Primária
Infecção Secundária
2) Sensibilidade
Para avaliar a sensibilidade, 15 amostras pareadas de pacientes com infecção
primária e 20 amostras pareadas de pacientes com infecção secundária foram
testadas. Nesse teste, o Teste Rápido Dengue Test Bioeasy IgG / IgM apresentou
capacidade de diagnosticar de forma efetiva a maioria dos vírus da dengue.
Nº IgM+/
Total 1º
coleta
Nº IgM+/
Total
2º coleta
Nº
IgG +/Total
1º coleta
Nº
IgG +/Total
2º coleta
Primária
14/15
15/15
0/15
3/15
Secundária
4/20
18/20
20/20
20/20
3) O Teste Rápido Dengue Test Bioeasy IgG / IgM não apresentou reação
cruzada mediada por outro Flavivirus e por doença transmitida por mosquitos
como a Malaria
Doença
IgM de Dengue
Negativo / Total
IgG de Dengue
Negativo / Total
Encefalite Japonesa
25/25
25/25
Febre Amarela
25/25
25/25
Malaria P. falcifarum
25/25
25/25
Malaria P. vivax
25/25
25/25
al
100/100
100/100
APRESENTAÇÃO DO KIT:
Dispositivo de Teste - 25
Tampão de Lavagem –5,0 mL ( um frasco)
Instrução de Uso - 1
SERVIÇO DE ATENDIMENTO AO CLIENTE:
Para esclarecimentos de dúvidas do cliente quanto ao produto:
Telefax (31)3491-4120- E.mail [email protected]
Data de Fabricação, Data de Validade, Nº do Lote vide rótulo do produto.
BIBLIOGRAFIA
1)
Dengue haemorhagic fever: diagnosis,
2)
2) Songee L. ranch and Paul N. Levett. Evaluation of four methods for detection of immunoglobulin M antibodies to dengue virus. Clin. Diagn.Lab. immunol.Vol. 6(4) p 555-557, 1999
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3) Jan Groen et al. Evaluation of six immunoassays for detection of diagn. Lab.Immunol. Vol7(6) p867-871, 2000.
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PRODUZIDO PARA Bioeasy Diagnóstica Ltda Alameda dos Coqueiros, 1228,
Bairro São José. Belo-Horizonte – M.G. – Brasil. CEP: 31.275.170 – Telefax:
(31) 3491-4120. CNPJ (MF) 02.719715/0001-24 Eng. Quím. Resp.: Adelson
Lima Pereira – CRQ – MG- 02300039. Autorização MS. 1.03.746-6 Reg.MS
10374660071 -