Transformação genética de neurônios sensoriais olfativos com
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56º Congresso Brasileiro de Genética Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010 Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2 355 Transformação genética de neurônios sensoriais olfativos com vetores lentivirais Beato, FC; Papes, F Dept. de Genética e Evolução, IB – UNICAMP [email protected] Palavras-chave: lentivírus, olfação, neurônio, sistema sensorial, receptor olfativo Em todas as espécies animais, os estímulos sensoriais são transformados em atividade neural, levando a mudanças comportamentais e endócrinas. Ainda muito pouco é conhecido sobre como o sistema sensorial olfativo detecta e interpreta os odores. Particularmente, é de interesse conhecer as vias no cérebro por onde trafega a informação olfativa. Entretanto, os métodos disponíveis para este estudo dependem da manipulação genética de neurônios em animais transgênicos, um procedimento laborioso e caro. Neste projeto, obetivamos o uso de vetores lentivirais para a modificação genética de neurônios olfativos em cultura e em seu contexto neural. Diferentes condições foram testadas para a produção dos vírus por transfecção de DNA plasmidial em células HEK293T utilizando método de fosfato de cálcio, incluindo concentração de DNA e nível de confluência. Um dos plasmídeos utilizados na produção viral foi modificado por métodos de DNA recombinante para incluir um cassete de expressão que será utilizado no ‘tracing’ das vias neurais associadas a um odor específico. Os lentivetores assim modificados foram testados em neurônios olfativos em cultura. O sucesso da infecção foi avaliado através da expressão de GFP e do transgene, sob microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. A produção de lentivírus em altas concentrações será utilizada para o estudo da função das diferentes classes de receptores olfativos na cavidade nasal e para o detalhamento das projeções destes neurônios em direção ao cérebro.
