UNIVERSIDADE FEDERAL DE JUIZ DE FORA DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA, MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA Genética Bacteriana Disciplina: Biologia de Microrganismos Professora: Alessandra Machado Genética Bacteriana As bactérias possuem material genético que é transmitido aos descendentes no momento da divisão celular. Este material genético não está contido dentro de um núcleo, portanto o genoma destes microrganismos está disperso no citoplasma. ORGANIZAÇÃO DO GENOMA BACTERIANO O genoma bacteriano está condensado e organizado em uma estrutura denominada NUCLEÓIDE. A informação genética pode ser utilizada de duas formas DNA Componentes do DNA Purinas Adenina Guanina Pirimidinas Timina Citosina Bases nitrogenadas Ligação glicosídica – entre átomo C1 do açúcar e átomo N das bases Ligação fosfodiéster Estrutura química do DNA fita simples Ligações de hidrogênio Ligações de hidrogênio Ligações de hidrogênio Estrutura química do DNA fita dupla Antiparalelas Complementares Cromossomo Bacteriano Cromossomo: elemento genético que carreia os genes essenciais à função celular. Gene: unidade de hereditariedade, um segmento de DNA que especifica uma proteína ou um RNA. Cromossomo bacteriano Molécula de DNA dupla fita circular; Disperso no citoplasma; Todas as informações essenciais para a sobrevivência da célula; Possui apenas uma cópia de seu cromossomo, sendo portanto haploides. Elemento genético extracromossomal Moléculas de DNA dupla fita Circulares; Menores que os cromossomos; Auto-duplicam (independentemente do cromossomo); Muitas bactérias (Gram positivas e Gram negativas) Carregam informação genética não essencial a célula, mas podem prover uma vantagem seletiva. Ex.: genes de resistência a antibióticos, toxinas. Elementos celulares envolvidos na genética bacteriana DNA móvel: elementos transponíveis Transposons São elementos que mudam de posição dentro do genoma. Podem estar presentes no cromosssomo ou no plasmídeo. Também chamados de “genes saltadores”. Podem afetar a expressão de outros genes. Não se auto-duplicam. Molécula de DNA dupla fita com extremidades repetidas e invertidas; Transposons Genes de transposição Ex: gene de resistência a um antibiótico Podem afetar a expressão de outros genes (rearranjo cromossomal) Variabilidade genética -Evolução e adaptação Alterações Genotípicas: • Alterações na sequência dos pares de bases. • Através dos processos de mutação e mecanismos de recombinação. 1. Mutação: alteração na sequência de bases do DNA sem aquisição de genes de outro microrganismo. 2. Recombinação genética: alteração no genótipo que ocorre pela aquisição de material genético de outro microrganismo. MUTAÇÃO RECOMBINAÇÃO Processo vertical; Processo horizontal; Ocorre durante a Ocorre durante os processos replicação do cromossomo de transformação, transdução bacteriano ou conjugação 1. Mutação Geralmente resultante de deleção, inserção ou substituição de um ou mais nucleotídeos. Esta alteração genética pode modificar o produto (proteína). As mutações podem ser neutras ou silenciosoas, desvantajosas ou benéficas. Erro que ocorre durante a replicação do material genético que pode ser espontâneo ou induzido. 1. Mutação • Espontânea – Ocorre naturalmente sem a adição de um agente mutagênico específico, geralmente decorrente de erros cometidos pela DNA polimerase (enzima que sintetiza DNA durante a replicação). • Induzida – Resultado da exposição do microrganismo a um agente mutagênico que é capaz de introduzir danos ou alterações no DNA. *físico – radiações UV *químico – nitrosoguanidina, óxido nitroso 1. Mutação • Pontual: envolve um único par de bases. • Mutação por inserção: ganho de pares de bases. • Mutação por deleção: perda de pares de bases. 2. Recombinação genética Requer transferência de material genético de uma bactéria para outra (transferência horizontal de genes). Embora as mutações sejam responsáveis pela expressão de várias novas características por uma célula, muitos fenótipos procarióticos são decorrentes da aquisição de novos fragmentos de DNA, por meio de processos de transferência horizontal de genes. Mecanismos de recombinação genética bacteriana Transformação Conjugação Transdução Transformação Incorporação de DNA livre, geralmente decorrente da lise celular Algumas bactérias são naturalmente transformáveis (competentes). Na natureza, o processo ocorre quando uma célula sofre lise, liberando seu DNA. Este, por ser de grande tamanho tende a sofrer quebras, originando centenas fragmentos pequenos. Como uma célula absorve poucos fragmentos, apenas uma pequena proporção de genes podem ser transferidos. Transformação Transformação: Com cápsula: patogênica o Frederick Griffith: Streptococcus pneumoniae Sem cápsula: não patogênica o 4 experimentos: • S. pneumoniae capsuladas vivas em camundongos vivos ->Camundongos morreram! • S. pneumoniae sem cápsula vivas em camundongos vivos ->Camundongos não morreram! • S. pneumoniae capsuladas mortas em camundongos vivos -> Camundongos não morreram! • S. pneumoniae sem cápsula vivas e S. pneumoniae capsuladas mortas em camundongos vivos. ????? As bactérias não-encapsuladas vivas absorveram material genético das encapsuladas mortas pelo calor e passaram a produzir cápsula, o que lhes conferiu a capacidade de causar doença. As bactérias não-encapsuladas foram transformadas em encapsuladas. Conjugação Processo de transferência de DNA de uma bactéria para outra que envolve o contato entre as duas células. Conjugação A conjugação está associada à presença de plasmídeos F. Estes plasmídeos contêm genes que permitem a transferência do DNA plasmidial de uma célula para outra. Célula F+: célula portadora do plasmídeo F Célula F-: célula não portadora do plasmídeo F Conjugação Etapas da conjugação - Formação de pares específicos Conexão celular Mobilização do fator F Transferência do fator F Eventualmente, os plasmídeos podem ser integrados no cromossomo. As células apresentando tais plasmídeos integrados são denominadas Hfr. Quando integrados, esses plasmídeos podem mobilizar a transferência de genes cromossomais também. Transdução Transferência de material genético mediada por vírus (bacteriófagos). Pode ser transdução generalizada (qualquer fragmento de DNA) ou especializada (genes específicos). Célula de Escherichia coli Bacteriófago Cromossomo de E. coli Forma circular do cromossomo do fago Ciclo lítico Ciclo lisogênico Recombinação sítio-específica Replicação Profago Montagem Lise Transdução generalizada Requer ciclo lítico – adsorção, penetração, replicação, montagem e liberação - pode haver o empacotamento de fragmentos de DNA da célula hospedeira, gerando partículas denominadas partículas transdutoras, que correspondem ao capsídeo viral contendo em seu interior DNA bacteriano. Empacotamento acidental Transdução especializada A etapa inicial corresponde à infecção e lisogenização do fago, que ocorre em sítios específicos do genoma. Pela ação de algum indutor (ex: UV) há a separação do fago do genoma, que normalmente ocorre perfeitamente. Entretanto, em alguns casos, essa separação é defeituosa, promovendo a remoção de genes bacterianos e deixando parte do genoma viral na célula. Alta frequência de transferência Mecanismos de recombinação genética bacteriana