USO DA TÉCNICA DE PCR EM TEMPO REAL E INICIADORES ESTIRPE

Anais do XI Fórum da Pós-Graduação da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
USO DA TÉCNICA DE PCR EM TEMPO REAL E INICIADORES ESTIRPEESPECÍFICOS PARA QUANTIFICAÇÃO DAS BACTÉRIAS QUE COMPÕEM O
INOCULANTE COM BACTÉRIAS DIAZOTRÓFICAS PARA CANA-DE-AÇÚCAR
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Cleudison Gabriel Nascimento da Silva ; Jean Luiz Simões de Araújo & Segundo Urquiaga .
1. Mestrando do Programa de Pós-Graduação em Fitotecnia, [email protected]; 2. Genética e Bioquímica;
Embrapa Agrobiologia, [email protected]; 3. Ciclagem de Nutrientes, Embrapa Agrobiologia,
[email protected].
Palavras-chave: FBN, endofíticas, estirpe-específico, qPCR.
RESUMO
O inoculante com bactérias diazotróficas para cana-de-açúcar é uma tecnologia desenvolvida pela
Embrapa Agrobiologia visando contribuir através da fixação biológica de nitrogênio (FBN) e ação
promotora do crescimento na nutrição nitrogenada da cultura de cana-de-açúcar. Esse biofertilizante
é composto por estirpes de cinco espécies de bactérias diazotróficas: Herbaspirillum rubrisubalbicans
T
(BR 11504), H. seropedicae (BR 11335), Gluconacetobacter diazotrophicus (BR11281 ), Azospirillum
T
amazonense (BR 11145) e Burkholdeira tropica (BR 11366 ), as quais foram isoladas da própria
cultura. Além de fixarem N2 atmosférico, essas bactérias também desempenham outros papeis tais
como: atividade antipatogênica, produção de hormônios vegetais e de sideróforos e aumento da
tolerância a estresse, que somados à FBN resultam na promoção do crescimento vegetal. Apesar
desses efeitos benéficos, ainda há necessidade do estabelecimento de uma relação direta entre a
inoculação e o ganho de crescimento e para isso se faz necessário à quantificação de maneira
específica da presença das bactérias inoculadas na planta. Baseado nisso, foi montado um
experimento na área experimental da Embrapa Agrobiologia, km 7, BR 465, Seropédica-RJ com mini
toletes (inoculados e não inoculados) de duas variedades comerciais de cana-de-açúcar, RB92579 e
BR567515. Os mini toletes foram plantados em vasos de100 litros preenchidos com ARGISSOLO,
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adubado com macro e micronutrientes, e com e sem a dose equivalente a45 kg de N ha . Os
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tratamentos para as duas variedades (Inoculado com dose de 45 kg de N ha , Não Inoculado com
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dose de 45 kg de N ha , Inoculado sem dose de N e Não Inoculado sem dose de N) foram
submetidos ao desenho experimental de blocos casualizados com delineamento em parcelas
subdivididas fatorial 2 X 2 X 2+4. Programaram-se quatro coletas de colmos e raízes ao longo do
ciclo da cana planta, para extração de DNA total e posterior quantificação da presença das bactérias
que compõem o inoculante aplicado na cultura, usando iniciadores estirpe-específicos para cada
bactéria e a técnica de PCR em Tempo Real. Até o momento foram feitas três coletas, aos 90, 180 e
270 dias de idade das plantas de cana, verificando-se a presença de bactérias utilizando-se
iniciadores para o gene 16S rRNA (amplicon~1500 pb) mostrado que o DNA total extraídos de
colmos contem o DNA bacteriano. As análises utilizando os iniciadores estirpe-específicos estão em
andamento.
Agência Financiadora: CAPES.
CD-ROM, 2016. ISSN 1984-0632.