Dengue - HUTec
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DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO DAS INFECÇÕES POR DENGUE, CHIKUNGUNYA E ZIKA VÍRUS Prof. Dra. Edna Maria Vissoci Reiche Imunologia Clínica Diagnóstico Molecular PAC/CCS/UEL Dengue • vírus da dengue • Flavivírus – RNA vírus • Grupo dos Arbovírus (Arthopod borne virus) • Sorotipos DEN-1,DEN-2, DEN-3 e DEN-4 • Geneticamente e antigenicamente diferentes • DEN-2: mais imunogênico • Diferentes genótipos para cada sorotipo Diferenças clínicas entre sorotipos • DEN1 • maior taxa de morbidade e • menor taxa de mortalidade • DEN2 • maior variabilidade na patogenicidade • alguns genótipos parecem produzir pouca ou nenhuma doença • outros genótipos podem apresentar doença grave (FHD) • DEN 3 • Infecções similares ao DEN1 • DEN 4 • Infecções similares ao DEN2 • DEN 5 • não identificado no Brasil (epidemia na Malásia) Organização genômica do vírus da dengue Dengue: Testes Laboratoriais • Específicos Diretos: • Isolamento viral • Detecção do RNA viral : RT-PCR • Pesquisa de antígeno NS1 • Específicos Indiretos: • Pesquisa de anticorpos IgM e/ou IgG • IHA • Teste de Neutralização • ELISA Isolamento viral • Inoculação em culturas celulares, animais e mosquitos • Detecção de antígenos virais (ELISA ou RIE) • Detecção do genoma viral (RT-PCR) Isolamento viral Cultura de células Coleta : Até o quinto dia Amostra: Sangue ou outros fluídos orgânicos, fragmento de órgãos e macerado de mosquito Procedimento: frasco estéril sem anticoagulante Método: Cultura celulares em linhagens C6/36 provenientes do mosquito Aedes Tempo: 6 a 10 dias Diagnóstico da dengue Resposta imune na dengue 30 a 60 dias Teste rápido para Dengue (IgG e IgM) – Imunocromatografia (para 4 sorotipos); Sensibilidade e especificidade depende do laboratório Sens: 96 - 99% Esp: 98% Diagnóstico laboratorial específico Sorologia - Pesquisa de IgM Coletar no 7º dia de início da doença, IgM persiste por 1 a 2 meses (s/n repetir entre o 11º e 30º dia do início dos sintomas) > 75% de positividade entre 7 a 10 dias > 99% de 10 a 20 dias IgG + no 9º dia na primo-infecção e no 1º dia na re-infecção Diagnóstico laboratorial específico Detecção do vírus ou antígenos virais: Detecção de antigenemia - NS1 Reação em cadeia de polimerase (RT-PCR) - genoma viral Isolamento viral - define sorotipo Imunohistoquímica - antígenos virais Indicação: casos graves (nos primeiros 3-5 dias de evolução) Teste rápido Ag NS1 - Imunocromatografia Teste positivo T C Kit – “COMBO” AgNS1 + IgM + IgG Dengue: Testes Laboratoriais • INESPECÍFICOS • Hemograma • Hematócrito • Plaquetas • Albumina • Função hepática: AST, ALT • Urina I Dengue Grave (Febre hemorrágica do dengue Síndrome de choque) • Hematócrito: aumento súbito de 20% do valor habitual do paciente em 24 horas • Plaquetas: < 100.000/mm3 • Hipoproteinemia • Elevação das aminotransferases AST e ALT • Elevação de uréia • Hiponatremia • Redução da fração C3 do complemento Dengue Grave (Febre hemorrágica do dengue Síndrome de choque) • CID • Redução dos fatores de coagulação • V, VII, IX e X • Prolongamento do tempo • Protrombina • Tromboplastina parcial • Elevação dos produtos de degradação da fibrina Prova do Laço • (PAS +PAD)/2: manguito insuflado • Adulto: 5 mim ( 20 petéquias) • Criança: 3 min (10 petéquias) • Presença de petéquias Área de 2,5 x 2,5 cm Vírus Chikungunya (CHIKV) RNA vírus Família: Togaviridae (mesmo da rubéola) Gênero: Alphavírus Apenas um subtipo causa a doença CHKV • Diagnóstico laboratorial: sangue ou soro, LCR • Métodos diretos: • Isolamento do vírus • Detecção do RNA viral: RT-PCR • Métodos indiretos: • Detecção de anticorpos IgM e/ou IgG: ELISA, IHA • Aumento de 4 vezes o título acs entre as amostras nas fases aguda (preferencialmente primeiros oito dias de doença) e convalescente, preferencialmente de 15 a 45 dias após o início dos sintomas, ou 1014 dias após a coleta da amostra na fase aguda • Teste de neutralização por redução de placas (PRNT) FEBRE CHIKUNGUNYA DIAGNÓSTICO LABORATORIAL • ISOLAMENTO DO VÍRUS (C636) • RT-PCR (fase aguda da doença – até D8) • DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO: • FASE AGUDA: após D5 • FASE CONVALESCENTE: 15 –45d • ELISA: Anticorpos anti-CHIKV (após D7) • INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO (5º - 7º d) Teste de Neutralização por Redução de Placas de Lise – PRNT • Plaque Reduction Neutralization Test • Método sorológico de quantificação dos anticorpos neutralizantes. • Teste referência (padrão) • Avaliação resposta vacinal • fornece a melhor correlação para proteção da infecção, • Mais sensível do que os testes IH e ELISA. Exames inespecíficos • Hemograma • Leucopenia • Linfocitose • Trombocitopenia: rara • VHS elevada Diagnóstico diferencial • • • • • • • • • Outras enfermidades a considerar são: malária leptospirose infecções por outros Alphavírus (ex. vírus Mayaro) artrite pós-infecciosa (Chlamydia, Shigella, Neisseria, febre reumática), artrite reumatoide juvenil, mononucleose infecciosa primo-infecção por HIV. Região Amazônica: a malária e febre Mayaro são endêmicas e fazem parte do diagnóstico diferencial obrigatório. Zika vírus (ZIKV) • É um vírus RNA pertencente à família Flaviviridae e causa quadro clínico semelhante à dengue. • O Brasil é um dos países com maior diversidade de flavivírus • • • • DEN 1-4, vírus da encefalite japonesa vírus da febre amarela vírus da hepatite C Serviços de referência no Paraná para atendimento de casos suspeitos de MICROCEFALIA e/ou outras malformações do SNC • Serviços de referência para as respectivas macrorregiões de saúde para o encaminhamento das crianças que ao nascimento apresentarem microcefalia. • Macrorregional Norte: • Hospital Universitário de Londrina (HU – UEL); • Macrorregional Noroeste: • Hospital Universitário de Maringá (HU – UEM); • Macrorregional Oeste: • Hospital Universitário do Oeste do Paraná (HUOP); • Macrorregional Leste: • Hospital Infantil Waldemar Monastier; • Hospital Infantil Pequeno Príncipe. Esquema proposto para diagnóstico laboratorial do ZIKAV por técnicas de isolamento, RT-PCR e sorologia (IgM/IgG) Sorologia X PCR Zika Pode ocorrer reação cruzada com outros flavivírus, como o da dengue, febre do Nilo Ocidental e febre amarela DIAGNÓSTICO LABORATORIAL ZIKA DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO ISOLAMENTO VÍRUS (C636) D1– D5 RT PCR TR DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO NOVOS TESTES SOROLÓGICOS – somente em laboratórios de referência Reação cruzada: dengue, febre amarela Teste rápido ZIKA- V • 15 fevereiro 2016 • ANVISA concedeu registro de um teste rápido para detecção do zika vírus. • Laboratório canadense Biocan Diagnostics • Detecta Anticorpos em até 20 minutos ZIKA-V • alterações típicas laboratoriais associadas com a infecção são escassas, • leucopenia, trombocitopenia • ligeira elevação da LDH sérica, gama-GT • ligeira elevação de marcadores de atividade inflamatória • proteína C reativa, fibrinogênio e ferritina Como diferenciar DEN, CHKV e ZIKV • DEN: • PCR para dengue • Teste rápido para Dengue • Sorologia para Dengue IgG, IgM e antígeno NS1 • CHKV • PCR qualitativo para Chikungunya • Sorologia para Chikungunya • ZIKV • PCR para Zika vírus Sorologia para Zika Vírus IgG e IgM quantitativos
