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Obtenção de oligonucleotideos específicos para Detecção de Garlic
virus X no Brasil.
Hoffmann,M. I. M.; Oliveira, M. L.; Pavan M. A.; Krause-Sakate, R.
Faculdade de Ciência Agronômicas /UNESP – Departamento
[email protected]
de
Produção
Vegetal.
E-mail:
Palavras-chave: Garlic virus x, Allexivirus,oligonucleotídeos, RT PCR.
Introdução
Garlic virus x (GarV-X) é uma espécie do gênero
Allexivirus pertencente à família Alphaflexiviridae.
Os allexivirus podem ser transmitidos por ácaro
(Aceria tulipae) e principalmente pela propagação
vegetativa através dos bulbilhos, prática essa que
favorece o acúmulo de vírus. Sabe-se que as
plantas de alho são naturalmente infectadas por
uma mistura de vírus, incluindo os allexivirus. No
Brasil, Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarVB), Garlic virus C (GarV-C), Garlic virus D (GarV-D)
e Garlic mite-borne filamentous virus (GarMbFV) já
foram relatados (Nascimento et al., 2008). No
entanto, GarV-X ainda não havia sido detectado em
plantas de alho nas regiões produtoras do Brasil.
Objetivo
Obtenção de oligonucleotideos específicos para
detecção de Garlic virus x, através de técnicas de
RT-PCR.
Material e Métodos
- Plantas sintomáticas foram coletadas em regiões
produtoras de alho;
- Extração total de RNA pelo método de Bertheau et
al.,1998 ou pelo Kit- Total RNA Purification (Norgen);
- RT-PCR foram realizadas com um par de
oligonucleotideos específicos nomeado: CPXS2
(5´GCC TTC TGA AAA TGA CTT AG 3´) e CPXA1
(5´ CTA GGA TTT GCT GTT GGG 3´), designado
para amplificar a região parcial da capa proteica de
GarV-X e utilizado para uma detecção preliminar.
Resultados e Discussão
Dentre as plantas sintomáticas analisadas foi
possível através da técnica RT-PCR detectar
amostras positivas para GarV-X, nas regiões de São
Manuel/SP, Guarapuava/PR e Santa Juliana/MG. A
eficácia do teste foi confirmada através do
sequenciamento dos fragmentos amplificados. O
tamanho do fragmento capaz de amplificar a região
parcial codificadora da capa proteica de GarV-X é
de aproximadamente 554 bp.
XXIV Congresso de Iniciação Científica
Figura 1. Gel de agarose a 0,8% com reações de
RT-PCR para allexivirus utilizando oligonucleotideos
específicos para GarV-X. (M) Marcador 1 Kb Plus
DNA ladder; (1) Amostra positiva para GarV-X. (-)
Controle negativo. O tamanho do fragmento
amplificado foi 554 nucleotídeos.
Conclusões
Os oligonucleotideos específicos para região parcial
da capa proteica de GarV-X se mostrou eficiente na
detecção da espécie. Sendo esta não mais
considerada uma espécie de allexivirus exótica no
Brasil.
Agradecimentos
FAPESP e ao CNPQ.
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BERTHEAU, Y., D. et al. DNA amplification by polymerase chain
reaction (PCR). IN: PEROMBELON, M. C. M.; van der WOLFF. J. M.
Methods for the detection and quantification of Erwinia carotovora
subsp. atroseptica on potatoes. Scottish Crop Research Institute
Occasional Publication, 1998.
NASCIMENTO, R.J.; PIO-RIBEIRO, G., SANTOS, R. C., MELO
FILHO, P. A. Detecção de allexivirus em primórdios foliares de alho via
RT-PCR. Summa Phytopathologyca, Botucatu, v. 34, n. 3, p.267-269,
2008.