Resumo - Esalq

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA E MELHORAMENTO DE PLANTAS
LGN 5799 – Seminários em Genética e Melhoramento de Plantas
Departamento de Genética
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ESTRATÉGIAS MOLECULARES PARA OBTENÇÃO
DE FUNGOS TRANSGÊNICOS
Pós-graduanda: Ana Paula de Souza Pallu Tozadori
Orientadora: Aline Aparecida Pizzirani-Kleiner
Os fungos são organismos extremamente importantes, contribuem na agricultura
(controle biológico, micorrizas e biopesticidas); no ambiente (biodegradação e tratamento
biológico de efluentes); na produção de alimentos (proteína microbiana, fungos comestíveis,
produtos fermentados e bebidas alcoólicas) e metabólitos (hormônios de crescimento de
plantas); na indústria farmacêutica (hormônios sexuais masculinos e antibióticos); na atividade
enzimática (produção de enzimas de interesse industrial e na biotransformação). Além dos
benefícios existem fungos tóxicos, causadores de doenças em seres humanos, plantas e animais,
bem como aqueles associados à deterioração de alimentos armazenados. A grande importância
dos fungos, aliada à vasta diversidade desses organismos (sendo conhecida aproximadamente
5% de um total de 1.500.00 espécies estimadas), gera grande potencial de exploração e estudos,
levando a busca por novas tecnologias. Grande parte dos estudos de Biologia Molecular
depende do uso de estratégias de transformação genética. Pode-se dizer que a transformação
genética é uma etapa essencial da pesquisa moderna dos fungos e é de grande importância
também para o melhoramento de espécies de importância biotecnológica.
Em decorrência do exposto, o número de estratégias de obtenção de fungos transgênicos
tem aumentado nos últimos anos, abrindo caminho para análises moleculares mais detalhadas.
Os primeiros trabalhos relacionados à transformação de fungos iniciaram no final da década dos
70 com a transformação de protoplastos de linhagens de S. cerevisae (Hinnen et al., 1978), e do
fungo Neurospora crasa (Case et al., 1979). Doravante, os trabalhos com transformação de
fungos passaram a ser crescente. Atualmente as estratégias utilizadas são capazes de realizar
tanto a mutagênese insercional aleatória, como também a mutagênese dirigida. A mutagênese
dirigida permite a realização da superexpressão de um ou mais genes, ou também o
silenciamento gênico, seja ele parcial ou completo. As técnicas utilizando protoplastos,
Agrobacterium tumefaciens e biobalística permitem a superexpressão de um gene tanto por
integração heteróloga ou por recombinação homóloga dependendo da técnica usada e da
construção dos vetores de transformação. Estes vetores geralmente são plasmídios contendo o
cassete de transformação. As técnicas baseadas no RNA são capazes de realizar o silenciamento
gênico por meio de regulação pós-transcricional do mRNA. O silenciamento gênico parcial
pode ser conseguido com a utilização do RNA antisense e RNA de interferência; já o
silenciamento completo é possível utilizando a interrupção do gene em vetores que permitam a
recombinação homóloga, via ribozimas e transposons. Não existe regra geral entre as estratégias
e as diferentes espécies de fungos. Há necessidade de otimizar cada método para cada espécie
de fungo estudada, assim como a escolha do método depende do objetivo a ser atingido e da
disponibilidade da técnica no local de trabalho.
O aumento na quantidade e eficiência das estratégias moleculares na obtenção de fungos
transgênicos contribui para o sucesso da transformação de muitos fungos, além de abrir
caminho para a transformação de fungos que ainda não possuem um sistema eficiente de
transformação.
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