Teste topográfico do tetrazólio Tem o objetivo de avaliar o potencial

Teste topográfico do tetrazólio
Tem o objetivo de avaliar o potencial de vigor e a viabilidade de lotes de
sementes de plantas forrageiras utilizando o cloreto de 2, 3,5 trifenil tetrazólio. O
sal de tetrazólio é um indicador oxidante-redutor que nas partes vivas das
sementes adquire uma coloração vermelho-carmim, não difusível denominada de
formazan. Um ou mais dos sistemas das desidrogenases parecem estar
envolvidos na reação (Jensen, 1951,
Smith, 1951, 1952). Substâncias
intermediárias são produzidas servindo de substrato para as enzimas, enquanto
que os íons de hidrogênio são transferidos para o sal de tetrazólio (Delouche et
al., 1976).
Preparo da solução
Pesar 3,63 g de KH2PO4 mais 9,47 g de Na2HPO4. 2H2O e diluir em um litro
de água destilada-deionizada. Acrescentar 1 grama da solução de 2,3,5 trifenil
tetrazólio. Manter a solução preparada em vidro de cor escura e em ambiente de
geladeira.
Preparo das sementes para a coloração
Primeiramente, as sementes deverão ser colocadas para embeber durante
16 horas em água destilada-deionizada. Se possível retirar as estruturas
protetoras daquelas sementes cuja presença de lema e pálea ou do tegumento
venham a dificultar a absorção de água. Após a embebição, cortar as gramíneas
longitudinalmente de modo a expor o eixo embrionário. Sementes de Glycine
javanica L. possuem uma camada de células parenquimáticas logo abaixo do
tegumento e que não permitem a difusão da solução. Deve ser retirada para que
haja melhor desempenho do teste. Deve-se cuidar com respeito a outras espécies,
pois o fenômeno não deve ser isolado.
Coloração
Fazer a imersão de quatro repetições de 100 sementes em solução de 0.1 %
de cloreto de 2,3,5 trifenil tetrazólio e colocar para reagir dentro de uma câmara
úmida com 40 ºC. O período necessário para a coloração é de aproximadamente
2 horas. Para aquelas pessoas que são iniciantes na execução do teste deve ser
feito um acompanhamento do tempo de coloração até atingir a cor rósea,
indicando as partes vivas das sementes. Em gramíneas, ficará colorido o embrião
(eixo + cotilédone). Uma coloração vermelha intensa indicará altas taxas
respiratórias e é um indicativo de deterioração. Regiões de atividade respiratória
intensa, como o são as extremidades de radículas, também apresentam intensa
coloração. Deve-se cuidar para que não haja má interpretação.
Avaliação
Serão consideradas como germináveis, todas as sementes que tiverem
coloração rósea ou até vermelho não intenso no eixo embrionário e no cotilédone.
Toda vez que a região do mesócotilo (veja figura 3A) estiver branca, a semente
será considerada não germinável.
A literatura não é muito extensa a respeito de métodos de avaliações para
cada espécie de gramínea e leguminosa tropical. Existem sugestões de mapas
para Panicum maximum Jacq. e as regras são gerais para todas as gramíneas. De
modo que é mais prudente usar o método só para estimar a viabilidade. A
reprodutibilidade do teste deixa muito a desejar e não deve ser usado como um
padrão para a comercialização.