obtenção de amostras de rna mensageiro para análise quantitativa

C.3.2 - Biologia Molecular
Obtenção de amostras de RNA mensageiro para análise quantitativa dos valores de
expressão de genes candidatos para características de eficiência alimentar em Nelore
Raízza R. I. M. Santana¹*, Kamila de O. da Rosa², Andressa de O. Lima3, Polyana C. Tizioto4, Priscila S. N. de
Oliveira4, Wellison J. da S. Diniz5, Marcela M. de Souza3, Maurício A. Mudadu7, Luiz L. Coutinho6, Gerson B.
Mourão6, Luciana C. de A. Regitano7
1. Estudante de IC da Universidade Federal de São Carlos – UFSCar* [email protected]
2. Mestre em Genética e Melhoramento Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, UNESP,Jaboticabal, SP
3. Doutoranda do programa de Pós -graduação em Genética e Evolução da Universidade Federal de São Carlos- UFSCar.
4.Pós – doutoranda da Embrapa Pecuária Sudeste- CPPSE, São Carlos/SP
5. Mestrando da Pós- graduação em Genética e Evolução da Universidade Federal de São Carlos - UFSCar.
6. Departamento de Ciência Animal, Universidade de São Paulo, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (Esalq-USP)
7. Pesquisadora da EMBRAPA Pecuária Sudeste- CPPSE, São Carlos SP
Palavras Chave: bovinocultura, eletroforese, integridade do RNA.
Introdução
O aumento da competitividade por áreas para a produção
de grãos e cana-de-açúcar exige, cada vez mais,
eficiência no sistema de criação da bovinocultura para
corte (POLL et al., 2013). Dessa forma, o melhoramento
genético pode contribuir para aumentar essa eficiência e
tornar a bovinocultura de corte mais competitiva. Diante
desse contexto, estudos que visam analisar a variação de
expressão de genes candidatos para eficiência alimentar
pode contribuir para o melhor entendimento dos
processos biológicos e em programas de melhoramento
animal. O objetivo deste trabalho foi analisar a qualidade
e pureza do RNA extraído de 83 bovinos da raça Nelore, a
fim de permitir caracterizar a expressão de genes
candidatos, em fígado bovino, para posterior relação entre
o padrão de expressão de genes e as medidas de
eficiência alimentar.
Resultados e Discussão
As amostras de RNA foram submetidas ao gel de agarose
a fim de observar a nitidez do RNA ribossomal 28S e 18S,
o qual é indicativo da integridade do RNA.
Posteriormente, a integridade do RNA foi visualizada
utilizando Agilent Bioanalyzer 2100, mediante um
eletroferograma no qual dois picos bem definidos de RNA
ribossomal 28S e 18S são visualizados (Figura 1).
Figura 2: Resultado da integridade do RNA pelo equipamento Agilent
Bioanalyzer 2100. * RIN: RNA Integrity Number
.As
amostras foram utilizadas com sucesso na síntese de
cDNA e posterior análise comparativa da expressão de
genes candidatos pela técnica de PCR em tempo real,
mostrando e quantificando assim a expressão dos genes
em cada ciclo da PCR. O gene RGS2 obteve melhor
amplificação e expressão como exemplificado na Figura 3
Figura 3: Padrão de amplificação das 11 amostras de cDNA para o gene
alvo
RGS2
Figura 1: Eletroferograma mostrando a relação de intensidade dos RNA
ribossomais 28 e 18S.
Conclusões
As quantidades obtidas, assim como os valores de pureza
e integridade do RNA foram satisfatórios, permitindo
assim a investigação da associação dos valores de
expressão
dos
genes
candidatos.
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Dessa forma, o equipamento determinou o índice “RNA
Integrity Number” (RIN) que varia de 1 a 10, sendo valores
acima de cinco favoráveis à realização de ensaios de
PCR. Os valores de RIN encontrados estão apresentados
na Figura 2 e demostram a integridade das amostras
analisadas (Figura 3).
Poll H. L; et al; Anuário brasileiro da pecuária ; Editora Gazeta; Santa Cruz
(2013).
Agradecimentos
A UFSCar, a Embrapa e ao CNPq.
67ª Reunião Anual da SBPC