2013 - IPTSP

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS
INSTITUTO DE PATOLOGIA TROPICAL E SAÚDE PÚBLICA
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA TROPICAL E SAÚDE
PÚBLICA
TAMÍRIS AUGUSTO MARINHO
INFECÇÃO PELO VÍRUS DA HEPATITE B EM CATADORES DE MATERIAIS
RECICLÁVEIS EM GOIÂNIA, GOIÁS
Goiânia
2013
TERMO DE CIÊNCIA E DE AUTORIZAÇÃO PARA DISPONIBILIZAR AS TESES E
DISSERTAÇÕES ELETRÔNICAS (TEDE) NA BIBLIOTECA DIGITAL DA UFG
Na qualidade de titular dos direitos de autor, autorizo a Universidade Federal de
Goiás (UFG) a disponibilizar, gratuitamente, por meio da Biblioteca Digital de Teses e
Dissertações (BDTD/UFG), sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº
9610/98, o documento conforme permissões assinaladas abaixo, para fins de leitura,
impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir
desta data.
1. Identificação do material bibliográfico:
2. Identificação da Tese ou Dissertação
Autor (a):
Tamíris Augusto Marinho
E-mail:
[email protected]
Seu e-mail pode ser disponibilizado na página?
[X] Dissertação
[X]Sim
[ ] Tese
[ ] Não
Vínculo empregatício do autor
Agência de fomento:
Universidade Federal de Goiás
Conselho
Nacional
de Sigla:
CNPq
Desenvolvimento
Científico
e
Tecnológico
Brasil
UF: GO
CNPJ:
33.654.831/0001-36
Infecção pelo vírus da hepatite b em catadores de materiais recicláveis em Goiânia-Goiás.
País:
Título:
Palavras-chave:
HBV, hepatite B, prevalência HBV, catadores de materiais recicláveis.
Título em outra língua:
Infection of hepatitis B virus among recyclable waste collectors in GoiâniaGoiás.
Palavras-chave em outra língua:
HBV, hepatites B, prevalence HBV, recyclabe wastw collectors
Área de concentração:
Microbiologia
Data defesa: (dd/mm/aaaa)
11/01/2013
Programa de Pós-Graduação:
Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical e Saúde Pública
Orientador (a):
Regina Maria Bringel Martins
E-mail:
[email protected]
Co-orientador (a):*
E-mail:
*Necessita do CPF quando não constar no SisPG
3. Informações de acesso ao documento:
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[
] NÃO1
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O sistema da Biblioteca Digital de Teses e Dissertações garante aos autores, que os
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receberão procedimentos de segurança, criptografia (para não permitir cópia e extração de
conteúdo, permitindo apenas impressão fraca) usando o padrão do Acrobat.
__________________________
Assinatura do (a) autor (a)
1
Data:11/04/2013
Neste caso o documento será embargado por até um ano a partir da data de defesa. A extensão deste
prazo suscita justificativa junto à coordenação do curso. Os dados do documento não serão
disponibilizados durante o período de embargo.
Dados Internacionais de Catalogação na Publicação na (CIP)
Marinho, Tamíris Augusto.
Infecção pelo vírus da hepatite B em catadores de
materiais recicláveis em Goiânia-Goiás [manuscrito] /
Tamíris Augusto Marinho. - 2013.
xv, 96 f. : il., figs, tabs.
Orientadora: Profª. Drª. Regina Maria Bringel Martins
Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal de Goiás,
Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública, 2013.
Bibliografia.
Inclui lista de figuras, abreviaturas, siglas e tabelas.
Apêndices.
TAMÍRIS AUGUSTO MARINHO
INFECÇÃO PELO VÍRUS DA HEPATITE B EM CATADORES DE MATERIAIS
RECICLÁVEIS EM GOIÂNIA, GOIÁS
Dissertação de Mestrado apresentada ao
Programa de Pós-Graduação em Medicina
Tropical e Saúde Pública da Universidade
Federal de Goiás para obtenção do
Título de Mestre em Medicina Tropical
e Saúde Pública.
Orientadora: Profª. Drª. Regina Maria Bringel Martins
Este trabalho foi realizado com o auxílio financeiro do Conselho Nacional de
Desenvolvimento Científico e Tecnológico/CNPq - processo: 557382/2009-2 e da
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás/FAPEG - PP/SUS
Goiânia
2013
iii
Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical e Saúde Pública
da Universidade Federal de Goiás
BANCA EXAMINADORA DA DISSERTAÇÃO DE MESTRADO
Aluna: Tamíris Augusto Marinho
Orientadora: Profª. Drª. Regina Maria Bringel Martins
Membros:
1. Profª. Drª. Regina Maria Bringel Martins
2. Profª. Drª. Sheila Araújo Teles
3. Profª. Drª. Márcia Alves Dias de Matos
Data: 11/01/2013
iv
DEDICATÓRIA
Dedico este estudo aos catadores de materiais recicláveis que trabalham todos os dias na
construção de um mundo sustentável;
Aos meus avós por me ensinarem as melhores lições de vida;
Aos meus queridos pais, Sandra e Pedro, por acreditarem sempre nos meus sonhos e por
me amarem incondicionalmente;
As minhas irmãs, Tássia e Thaís, minhas primeiras professoras e amigas, obrigada por
serem as melhores companheiras que já tive;
Ao meu bem, Helberte, pelo carinho, apoio e gentileza nos momentos em que me
dedicava completamente a esse projeto.
v
AGRADECIMENTOS
Agradecer a realização desse sonho é um momento muito especial, afinal recebi tantas
bênçãos divinas nesse caminho... sempre mediadas por amigos maravilhosos e
oportunidades incríveis de aprendizado. A minha gratidão é imensurável, afinal,
compartilhar essa vitória é o melhor agradecimento que eu poderia dar a todos vocês:
A Deus por me conceder mais uma vida, e com ela esse momento único de crescimento,
obrigada meu Pai por sua infinita misericórdia;
À minha orientadora, Prof. Dra. Regina Maria Bringel Martins, por me orientar na
iniciação científica durante quatro anos de graduação e me oferecer a oportunidade de
ingressar no mestrado, não medindo esforços para o sucesso do nosso estudo. Obrigada
por tantas oportunidades, você será sempre a minha referência de competência
profissional;
À Profa. Dra. Carmen Luci Rodrigues Lopes, por ter sido tão parceira e amiga. Ofereceu
todo suporte na realização desse projeto, uma pessoa admirável, sempre disposta a ajudar
com carinho e delicadeza, características de sua personalidade amável;
À Profa. Dra. Sheila Araújo Teles, minha professora na gradução e em disciplinas do
mestrado, um grande exemplo de profissional, como docente, pesquisadora e enfermeira,
obrigada em especial pelo apoio na análise estatística dos dados deste estudo;
À Prof. Dra. Megmar Aparecida dos Santos Carneiro, que sempre presente no Laboratório
de Virologia, me ensinou grandes lições de vida, um exemplo de professora, pesquisadora,
mãe e mulher;
À Prof. Dra. Márcia Alves Dias de Matos, por ser sempre tão competente... faltam-me
palavras para conseguir agradecer tudo que aprendi com você, obrigada pelos
ensinamentos sobre filogenia molecular, por ser tão disposta e solícita em relação a todas
as minhas dúvidas. Você é um grande exemplo, uma mulher forte, batalhadora e humilde,
que venceu todos os obstáculos e hoje é uma vencedora;
vi
Aos professores Sandra Brunini, Ruth Minamisava, Divina Cardoso, Fabíola Fiaccadori,
Menira Souza, André Kipnis e Jõao Bosco, por me ensinarem conhecimentos valiosos nas
disciplinas da pós-graduação;
À toda equipe do Laboratório de Virologia: Nádia Rúbia, Aline Garcia, Ágabo, Aline
Pereira, Renata, Andréia, Dulce, Kamilla, Láiza, Laura, Lyriane, Fernanda, Marina,
Matheus, Nara, Viviane, Pollyanne, Thaís e Tássia. Obrigada por me ensinarem o
significado da palavra equipe! Por todo apoio, desde colaboração nas coletas,
processamento dos dados e dicas literárias brilhantes. Quando as dificuldades
apertaram... vocês enxugaram as minhas lágrimas, seguraram na minha mão e me
ajudaram a seguir em frente... tenho certeza de que a nossa história não acaba aqui, afinal
amigos leais como todos vocês eu levarei para sempre em meu coração! Ainda viveremos
grandes momentos juntos!
Aos meus pais, por me amarem tanto! Por serem tão carinhosos comigo! Obrigada por
fazerem de suas filhas sempre prioridade, por abdicarem de suas realizações pessoais e
fazerem das minhas vitórias, suas vitórias! Obrigada por me oferecerem um lar, valores
morais e todo suprimento para que um dia fosse eu capaz de andar com as minhas
próprias pernas!
Às minhas irmãs Tássia e Thaís, por cuidarem de mim desde pequenininha, sempre tão
amorosas! Vivemos juntas os melhores momentos da minha infância e com vocês aprendi
a ser uma pessoa menos egoísta e a cultivar valores familiares. Obrigada por me fazerem
acreditar que o tempo apenas amadurece um amor verdadeiro!
Aos meus avós, Maria Helena e Dagobert Augusto, pelos ensinamentos sobre família e
pelo amor que me dedicaram desde o meu nascimento! Foi seguindo o exemplo de vocês
que aprendi mais sobre perseverança e lutar pelos meus sonhos;
Ao meu bem, Helberte Fernandes Freitas, por me aceitar exatamente como sou, por
incentivar a minha carreira, e sem nehuma cobrança pessoal aceitar as minhas escolhas
que sacrificaram alguns de nossos momentos... Você é um homem maravilhoso! Obrigada
por me escolher para ser sua companheira nessa vida!
vii
Às minhas amigas da faculdade Érika, Juliana, Letícia, Pat, Fabiane, Loanny, Queiliene,
Déborah e Layz, vivemos momentos incríveis juntas durante cinco anos de convivência e
mesmo cada uma seguindo o seu caminho ainda permanecemos unidas! E as minhas
amigas de infância Zilda e Marcela, sempre tão queridas! Foram muitos anos de apoio e
amizade!
À Coordenação, corpo docente e funcionários do Programa de Pós-Graduação em
Medicina Tropical e Saúde Pública do Instituto de Patologia Tropical e Saúde
Pública/UFG, pela dedicação, comprometimento e paciência em todas as etapas deste
trabalho;
À Incubadora Social da UFG, em especial o coordenador Fernando A. F. Bartholo, por
confiar no trabalho e ética do nosso grupo de estudos, pela disponibilidade em nos
apresentar cada uma das cooperativas de materiais recicláveis em Goiânia-GO e nos
apoiar em todos os momentos necessários;
Aos funcionários e professores da Faculdade de Enfermagem que me acolheram e me
ensinaram os valores mais nobres sobre enfermagem, docência e pesquisa;
À banca do exame de qualificação, composta pelas professoras, Dra. Sheila Araújo Teles,
Dra. Márcia Alves Dias de Matos e Dra. Menira Borges de Lima Dias e Souza, por
aceitarem contribuir cientificamente com este estudo;
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e a Fundação
de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás (FAPEG), pelo apoio financeiro.
viii
SUMÁRIO
ÍNDICE DE FIGURAS ............................................................................................................ x
ÍNDICE DE QUADROS E TABELAS ..................................................................................xi
RESUMO .............................................................................................................................. xii
SUMMARY ......................................................................................................................... xiii
1. INTRODUÇÃO ................................................................................................................... 1
1.1 Breve Histórico ........................................................................................................................... 1
1.2 Vírus da Hepatite B ..................................................................................................................... 2
1.2.1 Classificação e estrutura do vírus da hepatite B ................................................................... 2
1.2.2 Variabilidade do HBV .......................................................................................................... 6
1.2.3 Replicação viral .................................................................................................................... 8
1.3 Aspectos Clínicos, Patogenia e Tratamento da Infecção pelo HBV ......................................... 10
1.4 Diagnóstico Laboratorial da Infecção pelo HBV ...................................................................... 13
1.5 Epidemiologia da Infecção pelo HBV....................................................................................... 18
1.5.1. Transmissão do vírus da hepatite B ................................................................................... 18
1.5.2. Distribuição da infecção pelo HBV................................................................................... 19
1.5.3. Distribuição dos genótipos ................................................................................................ 23
1.6 Prevenção e Controle da Infecção pelo HBV ............................................................................ 25
1.7 Hepatite B e Catadores de Materiais Recicláveis ...................................................................... 27
2. JUSTIFICATIVA ................................................................................................................. 30
3. OBJETIVOS ......................................................................................................................... 31
3.1 Objetivo Geral ........................................................................................................................... 31
3.2 Objetivos Específicos ................................................................................................................ 31
4. METODOLOGIA ................................................................................................................. 32
4.1 Delineamento, Local e População do estudo............................................................................. 32
4.2 Entrevista e Coleta de sangue.................................................................................................... 32
4.3 Testes Sorológicos .................................................................................................................... 33
4.3.1 Detecção do HBsAg ........................................................................................................... 33
ix
4.3.2 Detecção de anti-HBc total ................................................................................................ 34
4.3.3 Detecção de anti-HBs ......................................................................................................... 34
4.3.4 Detecção do HBeAg ........................................................................................................... 34
4.3.5 Detecção de anti-HBe......................................................................................................... 35
4.4 Testes Moleculares .................................................................................................................... 36
4.4.1 Extração do HBV-DNA ..................................................................................................... 36
4.4.2 Reação em cadeia da polimerase (PCR)............................................................................. 36
4.4.3 Eletroforese em gel de agarose........................................................................................... 37
4.5 Sequenciamento de Nucleotídeos.............................................................................................. 37
4.5.1 Amplificação das amostras................................................................................................. 37
4.5.2 Purificação dos produtos da PCR ....................................................................................... 38
4.5.3 Sequenciamento da região S .............................................................................................. 38
4.5.4 Análise das sequências ....................................................................................................... 40
4.6 Análise dos Dados ..................................................................................................................... 40
5. RESULTADOS ..................................................................................................................... 42
5.1 Características da população estudada ...................................................................................... 42
5.2 Marcadores sorológicos do HBV em catadores de materiais recicláveis .................................. 44
5.3 Fatores de risco associados à infecção pelo HBV ..................................................................... 45
5.4 Detecção dos marcadores HBeAg/anti-HBe, HBV-DNA e características de risco dos
indivíduos HBsAg positivos............................................................................................................ 48
5.5 Infecção oculta pelo vírus da hepatite B ................................................................................... 49
5.6 Caracterização molecular das amostras HBV-DNA positivas .................................................. 50
6. DISCUSSÃO ........................................................................................................................ 51
7. CONCLUSÕES .................................................................................................................... 56
8. CONSIDERAÇÕES FINAIS ................................................................................................. 57
9. REFERÊNCIAS .................................................................................................................... 58
x
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1 - Representação esquemática da estrutura do vírus da hepatite B .......................... 3
Figura 2 - Micrografia eletrônica mostrando a partícula completa (A) e subpartículas (B)
do HBV .................................................................................................................................. 3
Figura 3 - Representação esquemática do genoma do HBV com as ORFs: Pré-S/S, Précore/core, P e X ..................................................................................................................... 5
Figura 4 - Subtipos sorológicos do HBV .............................................................................. 6
Figura 5 - Árvore filogenética com os oito genótipos do HBV (A-H) .................................. 7
Figura 6 - Esquema do ciclo replicativo do HBV ................................................................. 9
Figura 7 - Perfil sorológico da hepatite B aguda ................................................................. 17
Figura 8 - Perfil sorológico da hepatite B crônica ............................................................... 17
Figura 9 - Prevalência da infecção pelo HBV em crianças de 5-9 anos, 2005 .................... 21
Figura 10 - Prevalência da infecção pelo HBV em adultos de 19-49 anos, 2005 ............... 21
Figura 11 - Distribuição geográfica dos genótipos do HBV ............................................... 24
Figura 12 - Árvore filogenética da região S do HBV, incluindo os 3 isolados dos catadores
de materiais recicláveis de Goiânia-GO e 19 sequências do GenBank (número do acesso e
o país de origem estão indicados) ........................................................................................ 50
xi
ÍNDICE DE QUADROS E TABELAS
Quadro 1 - Prevalência da infecção pelo HBV em estudos realizados na região metropolitana de
Goiânia-GO..........................................................................................................................................23
Quadro 2 - Sequência dos primers utilizados na PCR-1 e PCR-2.......................................................37
Quadro 3 - Reagentes utilizados na pré-mistura da reação..................................................................39
Quadro 4 - Primers para sequenciamento............................................................................................39
Tabela 1 - Características sóciodemográficas de 431 catadores de materiais recicláveis em Goiânia,
Goiás...................................................................................................................................................43
Tabela 2 - Prevalência dos marcadores sorológicos para hepatite B em 431 catadores de materiais
recicláveis de Goiânia, Goiás.............................................................................................................44
Tabela 3 - Fatores de risco associados à infecção pelo HBV em catadores de materiais recicláveis em
Goiânia-GO........................................................................................................................................46
Tabela 4 - Análise multivariada dos fatores de risco associados à infecção pelo HBV em catadores de
materiais recicláveis de Goiânia-GO..................................................................................................47
Tabela 5 - Marcadores HBeAg, anti-HBe e HBV- DNA nos catadores HBsAg reagentes...............48
xii
RESUMO
O vírus da hepatite B (HBV) continua a ser uma das principais causas de doença hepática
em todo o mundo, apesar dos programas de vacinação implementados ao longo da última
década. Estima-se que 2 bilhões de indivíduos já foram expostos ao HBV e mais de 240
milhões estão cronicamente infectados em todo mundo. Os indivíduos com hepatite B
crônica apresentam risco elevado para o desenvolvimento de cirrose hepática e carcinoma
hepatocelular. Catadores de materiais recicláveis vivem em condições sociais e ambientais
precárias. Atualmente, existem poucos dados sobre a infecção pelo HBV nesta população.
Portanto, o objetivo geral do presente estudo foi investigar o perfil epidemiológico da
infecção pelo HBV em uma população de catadores de materiais recicláveis em GoiâniaGO. Estudo transversal realizado com 431 indivíduos recrutados nas 15 cooperativas de
reciclagem em Goiânia-GO. Todos os participantes foram entrevistados e suas amostras de
soro testadas para os marcadores sorológicos do HBV. As amostras HBsAg e anti-HBc
positivas foram submetidas à detecção do HBV-DNA pela reação em cadeia da
polimerase, e genotipadas por sequenciamento da região S. A prevalência global da
infecção por HBV foi de 12,8% (IC 95%: 9,8-16,2). A análise multivariada dos fatores de
risco mostrou que idade superior a 40 anos e uso de drogas ilícitas foram
independentemente associados à infecção pelo HBV. O DNA viral foi detectado em 2/3
amostras HBsAg positivas e em 1/52 amostras anti-HBc reagentes, resultando, assim, em
um índice de infecção oculta pelo HBV de 1,9%. Os genótipos A (subgenótipo A1), D
(subgenótipo D3) e F (subgenótipo F2) foram identificados. Apenas 12,3% da população
mostrou evidência sorológica de vacinação prévia contra hepatite B. Estes achados
evidenciam a necessidade de programas de saúde pública voltados para os catadores de
materiais recicláveis, incluindo a vacinação contra hepatite B.
xiii
SUMMARY
Hepatitis B virus (HBV) remains a major cause of liver disease worldwide despite
vaccination programs implemented over the last decade. Worldwide, it is estimated that 2
billion people are infected with HBV and that more than 240 million are chronically
infected. Patients with chronic hepatitis B are at risk for developing liver cirrhosis and
hepatocellular carcinoma. Recyclable waste collectors have a lifestyle that is characterized
by unfavorable social and environmental factors. There is currently very little data on HBV
infection in this population. Therefore, the aim of the present study was to investigate the
epidemiological profile of HBV infection in a population of recyclable waste collectors in
Goiânia-GO. A cross-sectional survey was carried out with 431 individuals who were
recruited in all 15 recycling cooperatives in Goiânia-GO. All individuals were interviewed,
and their serum samples were tested for the presence of HBV serological markers. HBsAg
and anti-HBc-positive samples were tested for HBV-DNA by polymerase chain reaction,
and were genotyped by sequencing of the S region. The overall HBV prevalence infection
was 12.8% (95% CI: 9.8-16.2). A multivariate analysis of risk factors showed that age >40
years and illicit drug use were independently associated with HBV infection. HBV-DNA
was detected in 2/3 HBsAg-positive samples, and in 1/52 anti-HBc-reactive samples,
resulting in an occult HBV infection rate of 1.9%. HBV genotypes A (subgenotype A1), D
(subgenotype D3) and F (subgenotype F2) were identified. Only 12.3% of this population
showed serological evidence of previous hepatitis B vaccination. These findings highlight
the need of public health programs to recyclable waste collectors, including the hepatitis B
vaccination.
1. INTRODUÇÃO
1.1 Breve Histórico
As hepatites virais constituem as infecções que ocorrem no fígado, causadas por
cinco agentes hepatotrópicos: vírus da hepatite A (HAV) (Feinstone et al. 1973), vírus
da hepatite B (HBV) (Dane et al. 1970), vírus da hepatite C (HCV) (Choo et al. 1989),
vírus da hepatite D (HDV) (Rizzetto et al. 1977) e vírus da hepatite E (HEV) (Balayan
et al. 1983). O sinal que indica hepatite é a icterícia, uma coloração amarelo-alaranjada
de pele, conjuntivas e mucosas gerada por elevados níveis de bilirrubina no soro
(Hollinger 1996).
Eventos epidêmicos envolvendo icterícia foram relatados por Hipócrates antes
da era Cristã, e evidenciados no fim do século XIX (Hollinger 1996, Hollinger & Liang
2001, Fonseca 2010). Em 1885, Lurman descreveu a transmissão de um possível agente
causador de hepatite por via parenteral em trabalhadores de um estaleiro, após
vacinação contra varíola preparada com “linfa” humana na cidade de Bremen na
Alemanha (Lurman 1885 apud Hollinger 1996).
A partir do século XX, surtos de hepatite foram associados ao uso de
medicamentos injetáveis e à coleta de sangue (MacCallum 1972, Fonseca 2010). Em
1942, foi sugerida transmissão parenteral de um possível agente, responsável por uma
forma epidêmica de hepatite que afetou 28.585 militares americanos, culminando em 62
óbitos. O referido surto ocorreu após a aplicação de um lote específico da vacina contra
febre amarela estabilizada com soro humano (Krugman 1989, Reuben 2002).
Posteriormente, foi observada uma frequência elevada de hepatite aguda em indivíduos
transfundidos com plasma humano fresco, seco ou sangue total (Morgan & Williamson
1943).
MacCallum, em 1947, designou o termo “hepatite B” para uma infecção de
longo período de incubação e de transmissão por produtos sanguíneos e outros fluidos
corporais (MacCallum et al. 1947). Em 1967, Krugman et al. confirmaram a existência
do agente proposto por MacCallum, e o denominaram de hepatite soro homóloga (MS2)
(Krugman et al. 1967 apud Fonseca 2010). O termo “hepatite B” foi aprovado pelo
2
Comitê de Hepatites Virais da Organização Mundial de Saúde (OMS 1977), sendo
atualmente ainda utilizado.
Blumberg et al. (1965) identificaram, em uma amostra de soro de um aborígine
australiano, um antígeno que reagia especificamente com um anticorpo presente no soro
de um paciente hemofílico denominando-o “antígeno Austrália” – AU. Em 1968,
observou-se que o AU (posteriormente denominado de antígeno de superfície do vírus
da hepatite B ou HBsAg) era encontrado exclusivamente no soro de pacientes com
hepatite B (Prince 1968, Okochi & Murakami 1968, Hollinger 1996). A sua
identificação possibilitou um avanço significativo nas pesquisas sobre essa hepatite
(Bayer et al. 1968, Almeida et al. 1969).
Em 1970, foi identificada a partícula viral completa do HBV, por microscopia
eletrônica, denominada inicialmente partícula de Dane (Dane et al. 1970).
1.2 Vírus da Hepatite B
1.2.1 Classificação e estrutura do vírus da hepatite B
O vírus da hepatite B pertence à família Hepadnaviridae e ao gênero
Orthohepadnavirus (ICTV 2011). A partícula viral completa ou vírion possui 42 nm de
diâmetro (Figura 1). Externamente, apresenta um envelope contendo as proteínas L
(large), M (middle) e S (small) constituindo o HBsAg. Internamente, a partícula é
formada por um nucleocapsídeo icosaédrico de aproximadamente 30 nm de diâmetro,
composto pela proteína do core, ou antígeno do core (HBcAg), que envolve o DNA
viral e a enzima DNA polimerase/transcriptase reversa (Hollinger 1996, Bruss 2007,
Liang 2009).
3
Figura 1 - Representação esquemática da estrutura do vírus da hepatite B
Fonte: http://people.rit.edu/japfaa/infectious.html (modificada)
Partículas subvirais incompletas, esféricas e tubulares, também são secretadas
pelos hepatócitos. Essas partículas lipoprotéicas possuem aproximadamente 22 nm de
diâmetro (Figura 2), sendo identificadas no sangue de indivíduos infectados pelo HBV,
em uma concentração 10.000 vezes maior que os vírions (Simon et al. 1998, Gilbert et
al. 2005, Liang 2009).
B
A
Figura 2 - Micrografia eletrônica mostrando a partícula completa (A) e subpartículas (B)
do HBV
Fonte: http://www.sciencephoto.com/drlindastannard,uct/sciencephotolibrary
4
O HBV possui um genoma extremamente compacto composto por DNA circular
de fita parcialmente dupla com aproximadamente 3.200 pares de bases (pb). A fita
menor, denominada incompleta, apresenta polaridade positiva e sentido de leitura 5’
para extremidade 3’. A fita maior, denominada completa, possui polaridade negativa ou
L (-) sendo complementar ao RNA pré-genômico. A forma circular da molécula de
DNA do HBV é mantida por meio do pareamento de bases das terminações 5´ de ambas
as fitas (Liang 2009, Doo & Ghany 2010). O HBV apresenta em seu genoma quatro
sequências abertas de leitura (Open Reading Frame - ORF): As regiões Pré-S/S, Précore/core, P e X (Figura 3), que codificam as proteínas virais, e quatro promotores, que
regulam a atividade gênica (Ngui et al. 1999, Seeger & Mason 2000, Hatzakis et al.
2006).
A primeira ORF é a Pré-S/S, que codifica as proteínas de superfície,
denominadas L, M e S, as quais são sintetizadas a partir dos códons de iniciação das
regiões Pré-S1, Pré-S2 e S, respectivamente, e apresentam o mesmo códon de
terminação no final da região S. Essas proteínas desempenham um importante papel na
indução da imunidade contra o HBV, sendo componentes imunogênicos de superfície
desse vírus (Heermann et al. 1987, Hourvitz et al. 1996, Le Seyec et al. 1998, Hollinger
2007).
A região Pré-core/core, segunda ORF, apresenta dois códons de iniciação
responsáveis por codificar a proteína do core (HBcAg) e a proteína “e” (HBeAg),
ambos induzem a produção de anticorpos específicos (anti-HBc e anti-HBe,
respectivamente). A proteína do core, uma fosfoproteína de 21 Kda, é responsável pela
montagem do nucleocapsídeo, sendo importante na etapa de empacotamento do RNA
pré-genômico. O HBeAg é um peptídeo solúvel codificado pelas regiões pré-core/core,
que é processado e secretado pelas células hepáticas, sendo considerado um importante
marcador de replicação viral. Esse antígeno é encontrado durante a infecção aguda ou
nos portadores crônicos, podendo induzir tolerância imunológica e, consequentemente,
o desenvolvimento de hepatite crônica (Milich et al. 1990, Baumert et al. 1996,
Hatzakis et al. 2006, Kay & Zoulim 2007, Liang 2009).
A terceira ORF, região X, codifica a proteína multifuncional HBxAg, que tem
ação de ativadora transcricional, sendo capaz de modificar a expressão de genes da
célula hospedeira e impedir o reparo do DNA, o que explicaria o aumento de mutações
5
celulares importantes. Além disso, a mesma pode interferir na atividade da proteína p53,
que apresenta função supressora de tumor e ativadora de apoptose, podendo, assim,
propiciar evolução para cirrose ou carcinoma hepatocelular (HCC) nos pacientes
cronicamente infectados (Henkler et al. 1995, Kramvis & Kew 1998, Zhang et al. 2001,
Bouchard et al. 2004, Wei et al. 2010).
A última ORF, região P ou Pol, é a maior (aproximadamente 75% da extensão
do genoma viral) e se sobrepõe às demais, codificando a polimerase viral. Essa
apresenta quatro domínios: (1) amino-terminal, que atua como proteína terminal ou
primase, necessária para o início da síntese da fita de DNA de polaridade negativa; (2)
espaçadora, que não tem função bem definida; (3) transcriptase reversa, responsável
pela transcrição do RNA pré-genômico em DNA e (4) carboxi-terminal, que exibe
atividade de ribonuclease H (RNAse H), participando da degradação do RNA prégenômico (Seeger & Mason 2000, Block et al. 2007, Liang 2009).
Pré-S1
Pré-S2
S
C
P
Pré-core/core
X
Figura 3 - Representação esquemática do genoma do HBV com as ORFs: Pré-S/S, Précore/core, P e X
Fonte: Neuveut et al. (2010) (modificada)
6
1.2.2 Variabilidade do HBV
Subtipos sorológicos
Estudos realizados no início dos anos 70 identificaram variações antigênicas no
HBsAg, definidas por dois pares de determinantes alélicos mutuamente exclusivos, d/y
e w/r, que juntamente com o determinante “a”, resultaram em quatro diferentes subtipos
sorológicos do HBV: adw, ayw, adr e ayr (Le Bouvier 1971, Bancroft et al. 1972).
Ainda, a identificação do subdeterminante w (w1-w4) e do determinante q (q+/q-)
permitiu uma classificação mais ampla em nove subtipos sorológicos: adw2, adw4, ayw1,
ayw2, ayw3, ayw4, adrq+, adrq- e ayr (Figura 4) (Couroucè et al. 1976, Couroucè-Pauty
et al. 1978, 1983).
Figura 4 - Subtipos sorológicos do HBV
Fonte: Adaptada de Kidd-Ljunggren et al. (1994)
Genótipos
A divergência de mais de 8%
na sequência genômica completa do HBV
permitiu a identificação de oito genótipos, classificados de A a H (Figura 5) (Okamoto
et al. 1988, Norder et al. 1992, 1993, 1994, Naumann et al. 1993, Stuyver et al. 2000,
Arauz-Ruz et al. 2002, Kubarnov et al. 2010). Foram identificados no Vietnã isolados
do HBV que apresentaram divergências em relação aos genótipos conhecidos, sendo
sugerida a denominação de genótipo I (Huy et al. 2008, Tran et al. 2008, Yu et al.
7
2010). Posteriormente, o “genótipo J” foi identificado por Tatematsu et al. (2009) em
pacientes do Japão. Entretanto, esses novos genótipos do HBV têm sido questionados,
necessitando ainda de novos estudos para a classificação definitiva dos mesmos
(Kubarnov et al. 2010).
Figura 5 - Árvore filogenética com os oito genótipos do HBV (A-H)
Fonte: Kramvis et al. (2005) (modificada)
A caracterização dos genótipos tem relevância em relação aos aspectos clínicos
da doença, pois os mesmos influenciam na terapia antiviral, bem como na progressão da
doença hepática. Além disso, apresentam importância epidemiológica, elucidando a
dinâmica da infecção e transmissão do HBV (Chu & Lok 2002, Kao 2002, Schaefer
2005).
Subgenótipos
Os genótipos podem, ainda, serem divididos em subgrupos que apresentam
diferenças de 4% a 8% dentro do mesmo grupamento genotípico, denominados
subgenótipos, sendo as diferenças menores que 4% conhecidas como clades. Os
8
subgenótipos
são
designados
por
letras
alfabéticas,
seguidas
de
números
correspondentes (Kramvis et al. 2005).
Assim, alguns genótipos são divididos em subgenótipos, tais como: A (A1 - A7),
B (B1 - B9), C (C1 - C12), D (D1 - D8) e F (F1 - F4) (Norder et al. 2004, Huy et al.
2006, Kramvis et al. 2008, Mulyanto et al. 2009, 2011, Abdou Chekaraou et al. 2010,
Kurbanov et al. 2010, Hübschen et al. 2011, Thedja et al. 2011).
Estudos adicionais são necessários haja vista que alguns subgenótipos
identificados são ainda considerados provisórios, os quais apresentam uma pequena
divergência nucleotídica em relação a outros, podendo ser considerados clades de um
mesmo subgenótipo (Kurbanov et al. 2010).
1.2.3 Replicação viral
O ciclo replicativo do HBV está esquematizado na Figura 6. A adsorção e
penetração da partícula viral ocorrem nos hepatócitos do hospedeiro; entretanto, esses
mecanismos não estão totalmente esclarecidos. Acredita-se que a proteína L possua sítio
de reconhecimento para adsorção do vírus a um receptor localizado na superfície da
célula alvo (Hollinger 2007). Após a interação vírus-célula, ocorre a penetração por
endocitose. O vírus perde seu envoltório, liberando o nucleocapsídeo contendo DNA,
que atravessa os poros nucleares chegando ao núcleo celular (Kann et al. 1997, Beck &
Nassal 2007).
O HBV-DNA, já no interior do núcleo, é convertido em um DNA de fita dupla
circular covalentemente fechado (cccDNA - covalently closed circular) pela ação da
DNA polimerase (Beck & Nassal 2007), que em seguida serve de molde para a
transcrição do pgRNA (3,5 Kb), essencial para replicação, e de outras moléculas de
mRNA viral (0,7; 2,1 e 2,4 Kb). Essa transcrição ocorre por ação da enzima celular
RNA polimerase II (Gonçales Jr 2002, Ganem & Prince 2004, Beck & Nassal 2007,
Levrero et al. 2009, Liang 2009).
As fitas de mRNA são transportadas para o citoplasma e traduzidas em proteínas
virais de superfície, core, polimerase e X. No citoplasma, o nucleocapsídeo é formado
pela montagem do pgRNA juntamente com a DNA polimerase/transcriptase reversa.
Inicia-se então a transcrição do pgRNA dentro do nucleocapsídeo viral, formando a
9
primeira fita de cadeia longa (negativa) do DNA viral. Durante ou após a síntese dessa
fita, o pgRNA é degradado pela ação enzimática da RNAse H da polimerase e, por ação
da DNA polimerase, ocorre a síntese da fita positiva ou incompleta do DNA viral
(Gonçales Jr 2002, Ganem & Prince 2004, Beck & Nassal 2007, Hollinger 2007,
Levrero et al. 2009).
Posteriormente, o nucleocapsídeo adquire o envelope no retículo endoplasmático
rugoso. Em seguida, os vírions são liberados dos hepatócitos. Contudo, algumas
moléculas de DNA são transportadas de volta ao núcleo, podendo ser convertidas em
cccDNA, resultando na persistência viral intracelular (Seeger & Mason 2000, Ganem &
Prince 2004, Beck & Nassal 2007). Segundo Hollinger et al. (2007) ocorre a produção
de aproximadamente 1011 moléculas/dia durante a replicação viral, sendo que durante o
pico da replicação essa taxa pode aumentar de 100 a 1000 vezes.
Liberação
Entrada
Receptor
RE
Endocitose
Síntese fita (+)
Montagem
Citoplasma
Núcleo
Síntese fita (-)
cccDNA
Encapsidação
Transcrição
Tradução
Figura 6 - Esquema do ciclo replicativo do HBV
Fonte: Neuveut (2010) (modificada)
10
1.3 Aspectos Clínicos, Patogenia e Tratamento da Infecção pelo HBV
A hepatite B é uma das mais comuns e graves doenças infecciosas devido à alta
morbidade e mortalidade, pois a infecção pode ocasionar doença hepática aguda e
crônica, incluindo cirrose hepática e carcinoma hepatocelular (HCC) (Kao & Chen
2002, Chang 2007, Chang & Lewin 2007, Liang 2009). Cerca de dois bilhões de
indivíduos foram expostos, e aproximadamente 240 milhões são portadores crônicos do
HBV em todo o mundo. Estima-se que 600 mil indivíduos morram a cada ano devido a
consequências agudas ou crônicas da hepatite B (OMS 2012a).
A infecção aguda pelo HBV pode ser assintomática ou sintomática. A forma
sintomática apresenta-se de duas formas: benigna (curso da doença longo, com
recuperação completa do dano hepático) e grave ou fulminante. De acordo com a
evolução da doença, a hepatite aguda pode ser classificada em quatro fases: período de
incubação, fase prodrômica ou pré-ictérica, fase ictérica e fase convalescente (Focaccia
2002, Chang 2007).
O período de incubação varia de 45 a 180 dias. A fase prodrômica é
caracterizada por sintomas inespecíficos, similares aos da gripe, como febre baixa,
fadiga, anorexia, mialgia, náuseas e vômitos, dores abdominais, dentre outros (Hollinger
1996, Befeler & Di Bisceglie 2000, Gonçales Jr 2002, Chang 2007).
Na fase ictérica, há o surgimento de colúria devido o aumento dos níveis de
bilirrubina no sangue; causando acolia fecal e coloração amarelada das mucosas da
conjuntiva (esclerótica) e pele, situação clinicamente reconhecida em 20% dos pacientes
infectados. Os níveis séricos de bilirrubina (principalmente da fração direta) e
aminotransferases (aspartato aminotrasferase - AST e alanina aminotrasferase - ALT)
encontram-se elevados, sendo que as últimas estão associadas à presença de lesões
hepáticas. Geralmente, essa fase dura cerca de 20 dias, e se manifesta após 10 dias do
início dos sintomas em aproximadamente 85% dos casos (Molner & Meyer 1940,
Zuckerman 1965, Mendonça & Vigani 2006, Chang 2007).
A fase de convalescença dura em média de 20 a 30 dias, apresentando melhora
progressiva da sintomatologia clínica, com lenta diminuição da hepatoesplenomegalia,
bem como da icterícia e dos sintomas dispépticos, além da eliminação viral (Mendonça
& Vigani 2006).
11
Já a hepatite fulminante é marcada pela evolução rápida para insuficiência
hepática, presença de encefalopatia hepática, icterícia, coagulopatia e níveis elevados de
aminotransferases. A mesma apresenta um alto índice de mortalidade, manifestando-se
em 1% dos indivíduos com hepatite B aguda (Inoue et al. 1998, Petrosillo et al. 2000,
Carey 2009).
A evolução para infecção crônica pelo HBV depende de fatores como idade de
aquisição da infecção, contínua replicação do HBV e resposta imune do paciente. A
cronicidade por esse vírus acomete 5-10% dos adultos expostos ao HBV na vida adulta.
Já dentre as crianças infectadas no primeiro ano de vida, 90% se tornam portadoras
crônicas e, dentre aquelas infectadas entre um a quatro anos de idade, 30-50%
desenvolvem hepatite B crônica (De Franchis et al. 1993, Maruyama et al. 1993,
Maddrey 2001, Jung & Pape 2002, Chang 2007, OMS 2012a).
Alguns fatores podem influenciar a progressão da doença hepática nos
indivíduos com hepatite B, dentre eles, sexo (masculino), consumo de álcool, história
familiar de HCC, infecção na infância pelo HBV, soropositividade para o HBeAg e
genoma viral (cccDNA), bem como a presença de coinfecção por outros vírus
hepatotrópicos (Baffis et al. 1999, Mendonça & Vigani 2006, Nwokediuko 2011, ElSerag 2012). Ainda, a cronicidade da infecção pode aumentar a chance do
desenvolvimento de cirrose e carcinoma hepatocelular (Kew 1998, Arbuthnot & Kew
2001, Feitelson & Lee 2007, Negro 2011).
A infecção pelo HBV é responsável por induzir dano tecidual de gravidade
variável, não gerando efeito citopático direto nas células hepáticas (Ferrari et al. 2003,
Chang & Lewin 2007). O dano ao tecido hepático inicia-se com estimulação da resposta
imune celular e humoral do hospedeiro contra antígenos virais específicos, presentes na
superfície das células infectadas pelo vírus (Ferrari et al. 2003, Mello & Alves 2006).
Em relação a imunidade celular, há lise das células infectadas por linfócitos T
citotóxicos CD8+, responsáveis pela resposta direcionada contra múltiplos epítopos do
core, da polimerase e das proteínas do envelope do HBV (Rehermann et al. 1996,
Rapicetta et al. 2002, Ganem & Prince 2004, Vierling 2007). Porém, a destruição
celular não é a única estratégia capaz de eliminar o HBV (Ferrari et al. 2003). Por meio
de mecanismos não-citolíticos, os linfócitos T citotóxicos liberam citocinas como
interferon-gama (IFN-) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-) no fígado, que atuam
12
na proteção antiviral, regulando a replicação do HBV sem destruir a célula infectada.
Dessa forma, o IFN- inibe a expressão gênica do vírus, sendo o principal responsável
pelo recrutamento e ativação de células da resposta imune inata no fígado, como
macrófagos e células natural killer. Outro mecanismo envolve a resposta imune
humoral, onde linfócitos B produzem anticorpos específicos, responsáveis por formar
um complexo com as partículas virais livres, prevenindo a infecção de hepatócitos
susceptíveis (Rapicetta et al. 2002, Ferrari et al. 2003, Ganem & Prince 2004, Inchauspé
& Michel 2007).
A infecção oculta, uma forma peculiar de infecção crônica, é caracterizada
principalmente, pela persistência do HBV-DNA em indivíduos que apresentam
negatividade para o HBsAg. Essa manifestação da hepatite B está relacionada à
persistência do cccDNA no fígado e a uma forte supressão da replicação viral e da
expressão gênica (Conjeevaram & Lok 2001, Raimondo et al. 2007, Hollinger & Sood
2010, Larrubia et al. 2011, Raimondo 2012).
O mecanismo da infecção oculta pelo HBV não foi totalmente elucidado.
Algumas hipóteses têm sido sugeridas, como mutações nas regiões S, core e X,
integração do genoma viral ao do hospedeiro, formação de imunocomplexos, alteração
do padrão da resposta imune, superinfecção e infecção mista com interferência de
variantes do HBV (Ferreira 2000, Lok 2004, Fonseca 2007, Lledó et al. 2011, Romero
et al. 2011, Raimondo et al. 2012).
Nota-se o impacto da infecção oculta em diferentes contextos clínicos, podendo
ser transmitida por transfusões de sangue e transplante de fígado, causando formas
clássicas de hepatite B nos indivíduos infectados. Em pacientes imunossuprimidos
(principalmente por imunoterapia ou quimioterapia), pode haver a reativação e
desenvolvimento de hepatite aguda com curso clínico mais grave. Evidências sugerem
evolução para cirrose, bem como para carcinoma hepatocelular. Nos coinfectados com o
HCV, alguns autores evidenciaram também progressão para fibrose e alteração das
enzimas hepáticas (Liu & Kao 2007, Matsuoka et al. 2008, Selim et al. 2011, Fuente et
al. 2011, Wong et al. 2011, Shi et al. 2012).
O tratamento da infecção causada pelo HBV visa reduzir o risco de progressão
da doença hepática e de seus desfechos primários, especificamente cirrose,
hepatocarcinoma
e,
consequentemente,
o
óbito.
Desfechos
substitutivos
ou
intermediários, tais como o nível de HBV-DNA, de enzimas hepáticas e marcadores
13
sorológicos, estão validados e têm sido utilizados como parâmetros para inferir a
probabilidade de benefícios da terapêutica em longo prazo, haja vista que a supressão da
replicação viral de maneira sustentada e a redução da atividade histológica diminuem o
risco de cirrose e do hepatocarcinoma (Papatheodoidis et al. 2002, Coffin & Lee 2009,
Marcelim et al. 2009, BRASIL 2011b).
Os indivíduos com infecção aguda não necessitam de tratamento antiviral
específico, tendo em vista que cerca de 90% dos adultos é curado espontaneamente em
um período de aproximadamente três meses. Aos pacientes com hepatite B fulminante,
recomenda-se o transplante de fígado (EASL Jury 2003, Chang & Lewin 2007, Pérez
2007, Beckebaum et al. 2009, Shiffman 2010).
Há duas categorias de antivirais usadas no tratamento da hepatite B: agentes
imunoregulatórios (o interferon alfa convencional e o interferon alfa-peguilado) e os
análogos de nucleosídeos (lamivudina, entecavir e telbivudina) ou de nucleotídeos
(adefovir e tenofovir) que atuam inibindo a transcrição reversa do HBV (Xu & Chen
2006, Chang & Lewin 2007, Pawlotsky et al. 2008, Coffin & Lee 2009).
No Brasil, o protocolo terapêutico para infecção crônica do HBV do Ministério
da Saúde indica os seguintes fármacos: interferon-alfa, interferon-alfa peguilado,
lamivudina, tenofovir, entecavir e adefovir, nas seguintes situações clínicas: 1)
Indivíduos virgens de tratamento, HBeAg reagentes, não cirróticos, 2) Indivíduos
virgens de tratamento, HBeAg não reagentes, não cirróticos, 3) Indivíduos virgens de
tratamento, cirróticos, HBeAg reagentes ou não reagentes, 4) Pacientes experimentados
com antivirais (resistência aos antivirais) e 5) Situações especiais (hepatite viral crônica
B em crianças e coinfecções HBV-HDV, HBV-HIV e HBV-HCV (BRASIL 2011b).
1.4 Diagnóstico Laboratorial da Infecção pelo HBV
A infecção causada pelo HBV pode ser diagnosticada por testes sorológicos
capazes de detectar a presença dos marcadores específicos, como antígenos (HBsAg e
HBeAg) e anticorpos (anti-HBs, anti-HBe e anti-HBc), bem como pela pesquisa do
DNA viral utilizando técnicas da biologia molecular (Gonçales & Cavalheiro 2006,
Gonzales & Salinas 2009). Ainda, a avaliação hepática pode ser realizada pela dosagem
de bilirrubinas, fosfatase alcalina, gama-glutamiltransferase (-GT), AST e ALT,
indicadoras de dano hepatocelular (Fonseca 2007, Liang 2009, Liaw & Chu 2009). A
14
evolução da doença pode ser acompanhada também por meio do exame histológico da
biópsia hepática, avaliando a inflamação e necrose, além do dano relativo à fibrose e ao
carcinoma hepatocelular (Yun-Fan & Chia Ming 2009).
O HBsAg, primeiro marcador sérico detectado na infecção pelo HBV, pode estar
presente antes do início dos sintomas e, geralmente surge por volta da quarta semana
após a exposição ao vírus (Figura 7). Nos pacientes em que ocorre a recuperação da
infecção, os títulos de HBsAg declinam, desaparecendo dentro de cinco a seis meses.
Após esse período, há o desenvolvimento de anticorpos específicos para esse antígeno
(anti-HBs), cuja presença indica recuperação clínica e imunidade ao HBV (Hollinger
1996, Ferreira 2000, Badur & Akgün 2001, Khouri & Santos 2004, Shiffman 2010).
O HBcAg é detectado somente nos hepatócitos infectados, não sendo, portanto,
encontrado no soro dos pacientes. No entanto, rotineiramente, detecta-se os anticorpos
direcionados contra ele (anti-HBc). O marcador anti-HBc
IgM
normalmente
é
detectável no início dos sintomas, aparecendo pouco depois do HBsAg e desaparecendo
com a resolução da infecção. Já o anti-HBc total (IgG) persiste por toda a vida, sendo
considerado o marcador de exposição ao HBV (Ferreira 2000, Badur & Akgün 2001,
Gonçales & Cavalheiro 2006, Hatzakis et al. 2006, Chevaliez & Pawlotsky 2008,
Shiffman 2010).
Outro antígeno que surge no início da fase aguda é o HBeAg, cuja presença está
associada à replicação viral e infecciosidade. Porém, na sua ausência pode haver
replicação viral, pois mutações na região pré-core ou no promotor do core impedem a
síntese desse antígeno. Em resposta ao HBeAg,
anticorpos anti-HBe são detectados,
indicando a diminuição de replicação viral. Durante a infecção aguda, esses anticorpos
associam-se à uma provável resolução espontânea da infecção (Ferreira 2000, Badur &
Akgün 2001, EASL Jury 2003, Gonçales & Cavalheiro 2006, Chevaliez & Pawlotsky
2008, Shiffman 2010).
A presença do DNA viral no soro do paciente ocorre dentro de poucos dias após
o início da infecção, sendo considerado o marcador mais confiável de infecção presente,
além de ser um parâmetro importante para decisões terapêuticas e monitoramento da
resposta ao tratamento. Durante a infecção aguda, os níveis do HBV-DNA aumentam,
atingindo um pico e, em seguida, ocorre o declínio progressivo desse marcador, sendo
que o seu desaparecimento indica infecção aguda espontaneamente resolvida. Métodos
moleculares sensíveis podem detectar o HBV-DNA de 10 a 20 dias antes da detecção do
15
HBsAg (EASL Jury 2003, Pawlotsky 2003, Diaz & Mendonça 2006, Gonçales &
Cavalheiro 2006, Shiffman 2010).
Técnicas moleculares que detectam o DNA viral, como a PCR - reação em
cadeia da polimerase, são amplamente empregadas para o diagnóstico da infecção pelo
HBV. Além disso, a pesquisa quantitativa (detecção da carga viral), por meio da técnica
de PCR em tempo real, vem sendo utilizada para verificar a evolução da infecção (Van
Deursen et al. 1998, Ferreira 2000, Pawlotsky 2003, Valsamkis 2007, Seto et al. 2011).
Ainda, métodos de genotipagem do HBV, como amplificação por PCR com
primers genótipo-específicos, RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism análise do polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição), hibridização
após PCR (LiPA) e sorotipagem, bem como o sequenciamento do genoma viral têm
sido utilizados (Valsamakis 2007, Seto et al. 2011).
A infecção crônica da hepatite B pode ser diagnosticada pela persistência do
HBsAg por seis meses ou mais, podendo ainda, ser detectados os marcadores anti-HBc
total e HBeAg ou anti-HBe (Figura 8) (Ferreira 2000, Liang 2009, Liaw & Chu 2009).
Diferentes padrões sorológicos e níveis séricos do HBV-DNA relacionam-se
com as fases de desenvolvimento da infecção crônica (EASL Jury 2003, Pawlotsky
2003, Liaw & Chu 2009). A primeira é definida como fase de imunotolerância. Essa
fase ocorre comumente após a transmissão perinatal, sendo caracterizada pela presença
sérica do HBsAg (por um período superior a 6 meses), HBeAg, altos títulos de HBVDNA (105-10 cópias por mL), ALT em níveis normais ou discretamente elevados, lesão
hepática histológica mínima e curso assintomático. Sugere-se que a função primordial
do HBeAg seria a de induzir ao portador do HBV (HBsAg reagente) o estado de
imunotolerância. Nos indivíduos expostos ao HBV na infância, a fase de
imunotolerância pode permanecer por uma a quatro décadas. No entanto, quando os
adultos se infectam pelo HBV, não é observada essa fase. Os pacientes que apresentam
a referida fase são considerados de baixo risco de progressão para cirrose hepática e
hepatocarcinoma (Lok & McMahon 2001, Raimondo et al. 2003, Mendonça & Vigani
2006, Fonseca 2007, Elgouhari et al. 2008, Liaw & Chu 2009).
A segunda fase, denominada de imunoativa, caracteriza-se pela presença no soro
do HBeAg (HBV selvagem) ou anti-HBe (HBV selvagem residual ou mutante précore). Essa fase ocorre após a transmissão horizontal entre crianças ou na fase adulta, e
16
também tardiamente entre pessoas que adquiriram a infecção pelo HBV por transmissão
vertical, iniciando logo após a fase de imunotolerância. Elevados níveis da ALT e de
HBV-DNA e doença hepática ativa observada na biópsia caracterizam essa fase.
Pacientes com hepatite B crônica HBeAg positivos podem apresentar soroconversão
espontânea para anti-HBe, com elevação da ALT. Após soroconversão, observa-se
níveis normais da ALT e títulos do HBV-DNA menores que 1000 UI/mL
(103 cópias/mL) (Lok & McMahon 2001, Raimondo et al. 2003, Mendonça & Vigani
2006, Fonseca 2007, EASL 2009, Liaw & Chu 2009, McMahon 2010).
Na terceira fase, conhecida como portador inativo do HBV, nota-se a presença
no soro do HBsAg, anti-HBe, títulos baixos ou indetectáveis do HBV-DNA, ALT
normal, lesão histológica hepática mínima, curso assintomático e de bom prognóstico.
Muitos dos portadores inativos do HBV (70% a 90%) permanecem inativos por toda a
vida. Um adicional de 10% a 20% dos portadores inativos apresentam fenômenos de
reversão, caracterizado pelo reaparecimento do HBeAg, acompanhado usualmente de
elevação da ALT em razão do processo de reativação inflamatória do fígado. Um
número bem menor de portadores inativos do HBV desenvolve hepatite B crônica antiHBe positiva (hepatite crônica residual pelo HBV selvagem), que se caracteriza por
elevação dos níveis das aminotransferases, título de HBV-DNA maior que 20000 UI/L
(>105 cópias m/l) e doença hepática ativa (histológica). Todavia, o curso clínico e as
sequelas de hepatite crônica pelo HBV selvagem ou mutante variam de indivíduo para
indivíduo (Lok & McMahon 2001, Fattovich 2003, Gonçales & Gonçales Jr 2006,
Mendonça & Vigani 2006, Fonseca 2007, Liaw & Chu 2009).
A reativação da infecção pode ser considerada a quarta fase de infecção pelo
HBV, caracterizando-se pelo reaparecimento da atividade necroinflamatória do fígado
nos portadores inativos do HBV ou naqueles com o diagnóstico de infecção resolvida
(infecção prévia pelo HBV, sem sinais virológicos, bioquímicos ou evidência
histológica de doença ativa viral) (Lok & McMahon 2001, Fonseca 2007, EASL 2009,
Liaw & Chu 2009).
17
Sintomas
HBeAg
anti-HBe
anti-HBc Total
Título
anti-HBc IgM
HBsAg
anti-HBs
0
4
8
12
16
20
24
28
32
36
52
100
semanas após a exposição
Figura 7 - Perfil sorológico da hepatite B aguda
Fonte: CDC – http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/slideset (modificada)
HBeAg
anti-HBe
HBsAg
Título
anti -HBc Total
anti -HBc IgM
0
4
8
12
16
20 24
28 32
36
52
Anos
semanas após a exposição
Figura 8 - Perfil sorológico da hepatite B crônica
Fonte: CDC – http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/slideset (modificada)
18
1.5 Epidemiologia da Infecção pelo HBV
1.5.1. Transmissão do vírus da hepatite B
As vias de trasmissão do HBV incluem a vertical, sexual e parenteral/percutânea
(Hou et al. 2005, Kwon & Lee 2011). Embora o HBsAg tenha sido encontrado em
diversos fluidos corporais, apenas o soro, sêmen e saliva têm demostrado ser
infecciosos (Alter 2003). O HBV é estável em superfícies ambientais por mais de sete
dias (Bond et al. 1981), podendo consequentemente ocorrer a transmissão indireta do
vírus por objetos contaminados. O risco de transmissão é maior quando o nível do
HBV-DNA é elevado no soro, principalmente em pacientes HBeAg reagentes (Alter et
al. 1976, Alter et al. 2003, Elgouhari et al. 2008, Shiffman 2010, Kwon & Lee 2011).
A via vertical caracteriza-se pela transmissão do HBV durante a gestação
(transplacentária), no momento do parto (contato com sangue/líquido amniótico
contaminado) e após o mesmo (Jonas et al. 2009).
Já a disseminação do HBV pela via sexual permite classificar a hepatite B como
doença sexualmente transmissível (DST). Esse modo de transmissão ocorre,
principalmente em regiões de baixa prevalência, entre adolescentes e adultos com
comportamentos de risco, como múltiplos parceiros sexuais, não uso ou uso ocasional
de preservativos e história de outras DSTs (Alter 2003, Hou et al. 2005, Carey 2009,
Lee & Park 2010, Shiffman 2010, Franco et al. 2012).
A via parenteral/percutânea tem o sangue ou produtos sanguíneos com o HBV
como fonte de contaminação. Pessoas com risco de infecção por essa via são pacientes
que necessitam de transfusões sanguíneas (hemodialisados, hemofílicos e portadores de
neoplasias), além de profissionais de saúde e usuários de drogas ilícitas, principalmente,
as injetáveis. Ainda, aplicação de piercing, tatuagem e prática de acupuntura com
materiais contaminados representam atividades de risco para aquisição do HBV (Teles
et al. 2002, Ferreira et al. 2009, Shiffman 2010, Niederhauser 2011, OMS 2012b). Essa
infecção pode ocorrer também pelo compartilhamento de objetos cortantes de uso
pessoal (lâmina de barbear, escova de dente, alicate de manicure, etc) (Hou et al. 2005,
Lavanchy 2008, Elgouhari et al. 2009, Shiffman 2010, Mu et al. 2011).
19
1.5.2. Distribuição da infecção pelo HBV
Ott et al. (2012) publicaram uma revisão sistemática da literatura sobre a
epidemiologia global da infecção pelo HBV, baseada em 396 estudos de prevalência do
HBsAg. Para ilustrar esses dados, dois mapas sobre a prevalência da infecção pelo HBV
em crianças 5-9 anos (Figura 9) e em adultos de 19-45 anos (Figura 10) são
apresentados.
Em áreas de endemicidade elevada para infecção pelo HBV (prevalência do
HBsAg maior ou igual a 8%), a transmissão vertical ocorre, principalmente, no período
perinatal ou na infância. Essas regiões são consideradas subdesenvolvidas e apresentam
uma densidade populacional elevada, como a África Subsaariana, sendo que sua parte
ocidental teve, em 1990, a maior prevalência específica por idade no mundo,
alcançando até 12% de positividade para o HBsAg entre as crianças e adolescentes até
19 anos. Embora, tenha havido uma diminuição em 2005, a região continua a ter
endemicidade alta, principalmente, em indivíduos do sexo masculino (Ott et al. 2012).
Nas regiões de endemicidade intermediária, a prevalência do HBsAg varia de 27%. O leste da Ásia apresentou a maior prevalência para o HBV e não houve mudanças
significativas entre 1990 e 2005. No geral, a endemicidade permaneceu intermediária
alta nessa região, principalmente, em indivíduos do sexo masculino. No sul da Ásia,
cerca de 3% da população até 45 anos de idade foi HBsAg positiva, com redução da
prevalência nos indivíduos mais velhos (prevalência baixa em 2005). Ao contrário de
outras regiões, no sudeste asiático, houve uma forte redução na prevalência do HBsAg
entre 1990 e 2005, especialmente na faixa etária de 0-14 anos, com prevalência de 1,21,4%. Nos países com renda elevada, incluindo o Japão, República da Coreia e
Cingapura também houve redução significativa, sendo a endemicidade considerada
intermediária, com uma prevalência de aproximadamente 4% (Ott et al. 2012).
As ilhas do Pacífico e a região da Oceania eram endêmicas em 1990, atingindo
um índice para o HBsAg de cerca de 10% em homens com idade de 10-34 anos. A
diminuição na prevalência levou a uma mudança para endemicidade intermediária alta
nas faixas etárias com até 54 anos, e de endemicidade intermediária em adultos mais
velhos (Ott et al. 2012).
A soroprevalência do HBsAg mostrou ser baixa na Europa Ocidental,
particularmente em mulheres, cuja prevalência foi abaixo de 2% entre 1990-2005. No
20
entanto, nesse período, um aumento em ambos os sexos foi observado, o que provocou
uma mudança na endemicidade para intermediária baixa em homens jovens, em 2005, e
uma diminuição na prevalência em indivíduos mais velhos. Na Europa Central, a
prevalência em lactentes e meninas diminuiu de 6% para 3%. Em contraste, os países do
leste Europeu não mostraram uma forte redução na prevalência do HBsAg nas idades
mais jovens. Nas Europas Central e Oriental, a idade 0-9 anos continua a ser a mais
afetada pela infecção HBsAg (Ott et al. 2012).
Em países com renda elevada na América do Norte (Canadá e Estados Unidos),
a prevalência declinou em ambos os sexos e em todas as idades, entre 1990 e 2005. A
maior positividade para o HBsAg foi em crianças do sexo masculino com idade entre 04 anos (2,14%), e a menor (cerca de 1%) nos indivíduos com mais de 65 anos, em 2005
(Ott et al 2012).
Na América Latina, notou-se uma forte diminuição da prevalência do HBsAg
entre 1990 e 2005. Na região tropical, a endemicidade passou de intermediária para
baixa, onde meninos de 0-9 anos tiveram a maior prevalência da região (endemicidade
intermediária), superior a 5% em 1990, e de 1,6% em 2005. Da mesma forma, a
prevalência na região central declinou pela metade neste período, e em adultos, foi
considerada como de baixa endemicidade em 2005. Outras regiões da América Latina,
como os Andes e América do Sul, mostraram uma diminuição da prevalência com a
idade e uma endemicidade intermediária (Ott et al. 2012).
21
Figura 9 - Prevalência da infecção pelo HBV em crianças de 5-9 anos, 2005
Fonte: Ott et al. (2012) (modificada)
Figura 10 - Prevalência da infecção pelo HBV em adultos de 19-49 anos, 2005
Fonte: Ott et al. (2012) (modificada)
22
No Brasil, um inquérito de base populacional realizado nas capitais brasileiras
mostrou uma prevalência para o marcador HBsAg de 0,37% (IC 95%: 0,25-0,50), sendo
de 0,05% (IC 95%: 0,01-0,10) na faixa etária de 10 a 19 anos e de 0,6% (IC 95%: 0,410,78) para a faixa de 20 a 69 anos. A prevalência global (anti-HBc), também referente
ao conjunto das capitais do Brasil, foi de 7,4% (IC 95%: 6,8-8,0). O percentual de
expostos ao HBV na faixa etária de 10 a 19 anos foi de 1,1% (IC 95%: 0,9-1,4) e de
11,6% (IC 95%: 10,7-12,4) para o grupo de 20 a 69 anos. Em todas as regiões,
verificou-se um aumento da positividade do anti-HBc total com a idade. Em relação ao
gênero, os homens apresentaram maior probabilidade de exposição em todas as regiões
e no Distrito Federal, exceto na Região Norte. Observou-se um maior risco de
exposição ao HBV nos indivíduos com piores condições socioeconômicas, exceto na
Região Sudeste. A transmissão sexual foi relevante nas Regiões Norte, Nordeste,
Centro-Oeste e Sul, sendo que, nessa última, a transmissão sanguínea também se
destacou (BRASIL 2011a).
Índices variáveis de prevalência da infecção pelo HBV têm sido observados nas
diferentes populações estudadas em Goiânia-GO (Quadro 1).
23
Quadro 1 - Prevalência da infecção pelo HBV em estudos realizados na região
metropolitana de Goiânia-GO
Prevalência
N
HBsAg(%)
Global(%)
População feminina
475
-
6,1
Prisioneiros
201
-
26,4
Primodoadores
1033
-
12,8
83
4,8
16,9
Portadores de hanseníase institucionalizados
171
8,8
50,5
Azevedo et al. (1994)
Profissionais da saúde
625
2,3
23,4
Porto et al. (1994)
Crianças de/na rua
496
2
13,5
Cardoso et al. (1996)
Gestantes
1459
0,5
7,5
Borges et al. (1997)
Pacientes em diálise
175
13,7
63,4
Teles et al. (1998)
Pacientes em hemodiálise
282
12
56,7
Bastos (2000)
Pacientes com doenças falciformes
63
0
12,7
Lopes et al. (2001)
Profissionais de centros de diálise
152
0,7
24,3
Silva et al. (2002a)
Indivíduos com suspeita de hepatite
1396
14,5
50,7
Teles et al. (2002)
Pacientes em hemodiálise
536
5,8
-
Carneiro & Daher (2003)
Anestesiologistas
90
0
8,9
Costa et al. (2004)
Idosos residentes em asilos
195
0,5
32,3
Souza et al. (2004)
Portadores de doenças mentais
433
1,6
22,4
Tavares et al. (2004)
Hemofílicos
102
1,1
43,7
Silva et al. (2005b)
Profissionais de laboratório
648
0,7
24,1
Oliveira et al. (2006)
Escolares de baixa renda
644
0,6
5,9
Ferreira (2008)
Usuários de drogas ilícitas
422
0,7
14,7
Paiva et al. (2008)
Dentistas
680
0
6,0
Aires et al. (2012)
Pacientes com tuberculose com ou sem HIV
402
1,2
25,6
Referência
População
Cardoso et al. (1990)
Martelli et al. (1990)
Rosa et al. (1992)
Portadores de hanseníase em tratamento
ambulatorial
1.5.3. Distribuição dos genótipos
Os genótipos do HBV apresentam uma distribuição geograficamente distinta.
Assim, o genótipo A é prevalente nos Estados Unidos, partes da Europa e Índia, sendo
também encontrado nas Filipinas, regiões leste, sul e central da África. Os genótipo B e
C possuem distribuição geográfica semelhante, sendo detectados em populações no
sudoeste da Ásia, Austrália, Japão, China e Vietnã. O genótipo D encontra-se
distribuído no Mediterrâneo, Índia e oeste da Europa. O genótipo E é restrito à África
24
Ocidental, enquanto que o F circula nas Américas do Sul e Central e Polinésia. O
genótipo G foi inicialmente identificado em amostras provenientes da América do Norte
e parte da Europa e, finalmente, o genótipo H que circula nos Estados Unidos, México e
América Central (Figura 11) (Kay & Zoulim 2007, Dehesa-Violante & Nuñez-Nateras
2007, Mahtab et al. 2008, Jazayeri et al. 2010, Kew 2010, Kurbanov et al. 2010, Te &
Jensen 2010, Kao 2011).
No Brasil, estudos mostraram a circulação dos genótipos A, B, C, D, F e G.
Entretando, há predominância dos genótipos A, D e F (Mello et al. 2007, Ferreira et al.
2009, Matos et al. 2009, Santos et al. 2010, Alvarado-Mora 2011, Pinho et al. 2011,
Ramos et al. 2011, Scaraveli et al. 2011, Silva et al. 2011, Aires et al. 2012, Bertolini et
al. 2012, Carvalho et al. 2012, Dias et al. 2012, Matos et al. 2012).
Figura 11 - Distribuição geográfica dos genótipos do HBV
Fonte: Kurbanov et al. (2010)
25
1.6 Prevenção e Controle da Infecção pelo HBV
A prevenção da infecção pelo vírus da hepatite B é possível com mudanças
comportamentais referentes ao risco de transmissão parenteral, como o não
compartilhamento de objetos cortantes de higiene pessoal (escova de dente, lâmina de
barbear, alicates de unha, dentre outros) e de seringas/agulhas, além da triagem para o
HBV nos bancos de sangue e o esclarecimento sobre a impossibilidade de portadores do
HBV e daqueles que tiverem em risco recente de infecção de doarem sangue, órgãos,
tecidos ou sêmen. Outra importante medida é a adoção de práticas de biossegurança nos
estabelecimentos de saúde, bem como a orientação adequada dos funcionários em
relação ao uso de EPIs (Equipamento de Proteção Individual) e da imunoprofilaxia pósacidente (Ferreira & Silveira 2004, Hou et al. 2005, BRASIL 2006b, Van Herck 2008,
Kwon & Lee 2011, Niederhauser 2011).
A triagem sorológica dos doadores de sangue (HBsAg e anti-HBc em alguns
países) representa importante estratégia de prevenção. Ainda, alguns países incluíram a
detecção do HBV-DNA visando reduzir ainda mais o risco de infecção póstransfusional (Niederhauser 2011). A melhoria dos métodos utilizados para inativação
viral de hemoderivados é também medida importante para minimizar o risco de
transmissão do HBV (Hou et al. 2005, BRASIL 2006a). A triagem sorológica em
gestantes é recomendada no Brasil, fazendo parte do programa de pré-natal como item
da lista dos chamados “Testes da Mamãe”, bem como a profilaxia em recém-nascidos
de mães HBsAg reagentes (BRASIL 2008, Jonas 2009).
Para prevenção da transmissão sexual do HBV, destaca-se o aconselhamento em
relação ao uso de preservativo, evitar relação sexual com múltiplos parceiros, tanto
homo quanto heterossexuais, dentre outros (Van Herck et al. 2008, Liaw & Chu 2009).
A medida de prevenção mais eficaz e segura no controle da hepatite B é a
vacinação (Joshi & Kumar 2001, Lavanchy 2004, BRASIL 2005, 2006b, CDC 2007,
Kwon & Lee 2011). Disponibilizada a partir de 1982, a primeira geração de vacina
contra hepatite B, derivada de plasma de portadores do HBV, é composta por partículas
subvirais inativadas (Joshi & Kumar 2001, Shepard et al. 2006, Lee & Park 2010).
Com o avanço da tecnologia do DNA recombinante, houve o desenvolvimento
da vacina de segunda geração, composta pelo HBsAg recombinante purificado e
adsorvido a um adjuvante, que foi disponibilizada a partir de 1986 (Joshi & Kumar
26
2001, Koff 2003, Hou et al. 2005, CDC 2007). Administrada por via intramuscular, a
vacina contra hepatite B deve ser aplicada seguindo um esquema de três doses, com um
intervalo de um mês entre primeira e segunda dose, e a terceira deve ser administrada
seis meses após a primeira dose (0, 1 e 6 meses), sendo que a indução dos anticorpos
protetores ocorre em mais de 90% dos adultos e jovens sadios, e acima de 95% em
lactentes, crianças e adolescentes (Bruguera 2006, Shepard et al. 2006, Van Herck et al.
2008, Alavian et al. 2012).
A resposta vacinal é avaliada pela detecção do marcador anti-HBs, devendo
estar presente em níveis superiores ou igual a 10 mUI/mL. No entanto, a imunidade
pode persistir após o desaparecimento desses anticorpos ao longo dos anos. Tal
fenômeno é explicado pela memória imunológica, ocorrendo um booster com elevação
dos níveis de anti-HBs após exposição ao HBV. Por esse motivo, não se recomenda em
adultos imunocompetentes dose de reforço da vacina (Hou et al. 2005, Shepard et al.
2006, Van Herck et al. 2008, Aspinall et al. 2011, Alavian et al. 2012).
De acordo com a OMS, 177 países incluíram o esquema vacinal de três doses
contra hepatite B no calendário vacinal, diminuindo assim a incidência do HBV nesses
locais (OMS, 2010). No Brasil, essa vacina faz parte do Programa Nacional de
Imunização (PNI), sendo recomendada para recém-nascidos no primeiro dia de vida,
crianças, adolescentes e adultos com até 29 anos de idade. Para isso, em 2011, o
Ministério da Saúde ampliou em 163% o quantitativo de vacinas adquiridas contra
hepatite B – 83,2 milhões de doses (BRASIL 2010a, 2012a). Ainda, a vacina está
disponível em estabelecimentos de saúde para grupos específicos, independente de faixa
etária, como gestantes após o primeiro trimestre de gestação, trabalhadores da saúde,
bombeiros,
policiais
(militar, civil
e rodoviário), carcereiros (delegacias
e
penitenciárias), coletadores de lixo hospitalar e domiciliar, comunicantes sexuais de
portadores do HBV, doadores de sangue, homens e mulheres que mantêm relações
sexuais com pessoas do mesmo sexo, lésbicas, gays, bissexuais, travestis e transexuais,
pessoas reclusas (presídios, hospitais psiquiátricos, instituições de menores, forças
armadas, dentre outras), manicures, pedicures e podólogos, populações de
assentamentos/acampamentos e populações indígenas (BRASIL 2010b).
A “vacina recombinante brasileira”, produzida pelo Instituto Butantan, apresenta
uma boa imunogenicidade (Baldy et al. 2004, Oliveira et al. 2006, Junqueira et al.
2011). A partir do segundo semestre de 2012, o Ministério da Saúde recomendou que a
27
primeira dose da vacina monovalente seja administrada ao nascer (hepatite B), e as
doses subsequentes após 2, 4 e 6 meses em sua forma pentavalente (DTP: difteria,
tétano e coqueluche, Hib: Haemophilus influenzae tipo B e HB: hepatite B) (BRASIL
2012b).
Outra medida utilizada na prevenção da infecção pelo HBV é a imunoprofilaxia
passiva, pelo uso da imunoglobulina humana hiperimune anti-hepatite B (HBIG).
Comumente associada à vacinação, a HBIG é indicada para uso em recém-nascido cuja
mãe é HBsAg positiva, imediatamente após o parto ou até 12 horas após o nascimento
(Shiffman 2010). Outros casos indicados para profilaxia passiva são: após exposição
acidental com sangue HBsAg reagentes, após relação sexual com indivíduos HBsAg
reagentes, pacientes submetidos ao transplante hepático, bem como em profissionais
acidentados com material biológico contaminado com o HBV (BRASIL 2006b, CDC
2003, 2007).
1.7 Hepatite B e Catadores de Materiais Recicláveis
A reciclagem do lixo representa um papel importante na sociedade atual, já que
possibilita o reaproveitamento de materiais descartados trazendo benefícios ambientais.
Os catadores de materiais recicláveis catam e separam esses materiais presentes no lixo,
e os comercializam como fonte de renda e sobrevivência (Medeiros & Macêdo, 2006).
No Brasil, o número de catadores de materiais recicláveis cresceu nos últimos
anos, estima-se que já representem 1% da população economicamente ativa, ou seja,
mais de um milhão de pessoas, que otimizam esforços a favor da reciclagem, sendo que
esses trabalhadores exercem atividade laboral em quase todas as cidades do País (CDSUNB 2005).
Instituições não governamentais, na década de 90, apoiaram diversos encontros
dos catadores de materiais recicláveis em todo Brasil buscando o fortalecimento dessa
categoria profissional. Realizou-se, em 2001, o “1º Congresso Nacional de Catadores de
Materiais Recicláveis” e a “1ª Marcha da População de Rua” (Godoy 2005, Medeiros &
Macêdo 2006, Silva 2007, Costa 2008). Tais manifestações possibilitaram aos catadores
maior organização em nível regional, estadual e nacional, culminando na criação do
Movimento Nacional dos Catadores de Materiais Recicláveis (MNCR) (Silva 2007,
Costa 2008). Assim, no ano de 2002, os catadores de materiais recicláveis se
28
consolidaram como categoria profissional, sendo regulamentada e registrada na
Classificação Brasileira de Ocupações (CBO) (BRASIL 2010c).
Segundo Miura (2004), a dificuldade enfrentada pelos catadores não está
somente no reconhecimento legal da profissão, mas no seu direito às condições dignas
de trabalho e de vida, além da perspectiva estrita da sobrevivência. A atividade de
catador de material reciclável é entendida como fonte de dignidade e modo legítimo de
obter renda. No entanto, a inclusão desses profissionais no mercado de trabalho
apresenta alguns desafios. Entende-se que o catador de materiais recicláveis é incluído
por ter um trabalho, mas excluído pelo tipo de trabalho que realiza, isto é, trabalho
precário, realizado em condições insalubres, com elevado grau de periculosidade, sem
reconhecimento social, com riscos muitas vezes irreversíveis à saúde, e ausência de
direitos trabalhistas (Silva et al. 2002b, Medeiros & Macêdo, 2006, Cavalvante &
Franco 2007, Dall’Agnol & Fernandes 2007, Gutberlet & Baeder 2008).
Os catadores apresentam condições de moradia precárias, vivendo próximos aos
lixões, aterros sanitários ou periferias, e realizam a coleta nesses próprios locais, em
áreas residenciais ou nas associações/cooperativas onde trabalham (Godoy 2005, Silva
et al. 2005a). Assim, o catador vive em um universo de marginalidade e informalidade,
não sendo reconhecido como um agente de transformação ambiental (Godoy 2005,
Medeiros & Macêdo 2006, Costa 2008).
Os mais frequentes agentes presentes nos resíduos sólidos municipais e nos
processos dos sistemas de seu gerenciamento, capazes de interferir na saúde humana e
no meio ambiente são: agentes físicos (odor, poeira, vibração de equipamentos e visão
estética do ambiente), químicos (pilhas, baterias, óleos e graxas, pesticidas/herbicidas,
solventes, tintas, produtos de limpeza, cosméticos, remédios e aerossóis) e biológicos
(micro-organismos patogênicos em lenços de papel, curativos, fraldas descartáveis,
papel higiênico, absorventes, agulhas e seringas descartáveis, preservativos, resíduos de
pequenas clínicas, farmácias, laboratórios e hospitais misturados aos dos domicílios)
(Collins & Kennedy 1992, Catapreta & Heller 1999,
Ferreira & Anjos 2001,
Cavalvante & Franco 2007, Dall’Agnol & Fernandes 2007, Gutberlet & Baeder 2008).
Os catadores apresentam um baixo conhecimento referente aos riscos
relacionados à atividade que exercem, não possuindo uma visão real do risco causado
pelos agentes etiológicos. Desse modo, os catadores relatam informações acerca da
29
adversidade da catação do lixo a partir de experiências pessoais, observação dos colegas
de trabalho e relatos de casos vivenciados por amigos ou conhecidos, os quais
apresentaram eventos de adoecimento acarretando sintomas graves (Dall’Agnol &
Fernandes 2007, Ribeiro & Besen 2007).
A situação dos catadores ainda se agrava pelo fato da baixa adesão ao uso de
EPIs, como luvas e botas apropriadas, dentre outros (Gonçalves 2004, Porto et al. 2004,
Dall’Agnol & Fernandes 2007, Martins 2007, Ribeiro & Besen 2007, Rozman et al.
2008). Assim, os acidentes de trabalho são frequentes em catadores de materiais
recicláveis, devido à precariedade e falta de condições adequadas de trabalho. Esses
acidentes envolvem ferimentos com objetos perfurocortantes advindos do lixo, bem
como perdas de membros por atropelamentos, prensagem em equipamentos de
compactação e veículos automotores, além de mordidas de animais (cães, ratos) e
picadas de insetos (Poulsen et al. 1995, Ferreira & Anjos 2001, Porto et al. 2004,
Ribeiro & Besen 2007, Gutberlet & Baeder 2008).
Portanto, esses profissionais podem apresentar risco aumentado em adquirir
hepatite B, já que cortes e ferimentos são ocasionados pelo descarte inadequado de
materiais perfurocortantes, como vidro, seringa, agulha, lata e madeira (Velloso et al.
1997, 1998). Porto et al. (2004) verificaram que, dentre os acidentes mencionados por
catadores em um aterro metropolitano no Rio de Janeiro, destacaram-se os cortes com
vidros e perfurações com outros materiais, sendo hepatite uma das doenças referidas por
essa população. Foi realizada uma investigação sobre a infecção pelo HIV em catadores
de materiais recicláveis em Santos, São Paulo, na qual foi verificada uma prevalência
elevada (34,4%) para a infecção pelo HBV (Rozman et al. 2007, 2008).
30
2. JUSTIFICATIVA
A hepatite B representa um importante problema de saúde pública. Estima-se
que aproximadamente dois bilhões de indivíduos foram expostos ao HBV. Desses, 240
milhões são portadores crônicos em todo mundo e cerca de 600 mil indivíduos
cronicamente infectados morrem anualmente por complicações hepáticas relacionadas a
esse vírus (OMS 2012a). Diante disso, as investigações sobre comportamentos de risco
e estimativa da prevalência da hepatite B em grupos populacionais, como os catadores
de materiais recicláveis, contribuem para o rastreamento epidemiológico dessa infecção.
Acidentes com cortes e perfurações pelo contato com vidros, materiais ferrosos
pontiagudos, agulhas e seringas contaminadas durante a catação, dentre outros, têm sido
observados em catadores de materiais recicláveis (Porto et al. 2004, Rozman et al. 2008,
Siqueira & Moraes 2009); estando, portanto, essa categoria profissional vulnerável ao
contágio por agentes infecciosos (Porto et al. 2004, Gutberlet & Baeder 2008, Siqueira
& Moraes 2009).
Contudo, os estudos realizados sobre condições de saúde em catadores de
materiais recicláveis são escassos (Catapreta & Heller 1999, Porto et al. 2004,
Cavalcante & Franco 2007, Almeida et al. 2009, Siqueira & Moraes 2009), sendo a
prevalência estimada por Rozman et al. (2007, 2008), em Santos-SP, o único dado na
literatura sobre a infecção pelo HBV em catadores de materiais recicláveis.
Tendo em vista o risco aumentado desses profissionais em adquirir infecções,
como a hepatite B, e que, até o presente momento, são raras as investigações sobre essa
virose em catadores de materiais recicláveis, o presente estudo foi proposto visando
investigar o perfil epidemiológico da infecção pelo HBV nesta população em Goiânia.
Uma vez conhecidos os fatores de risco associados, a prevalência nesta população, além
de outros dados como os índices de imunização contra hepatite B e de infecção oculta
pelo HBV, bem como os genótipos virais circulantes, acredita-se que este estudo
contribuirá para o planejamento e implementação de medidas de prevenção e controle
voltadas
para
os
catadores
de
materiais
recicláveis.
3. OBJETIVOS
3.1 Objetivo Geral
 O presente projeto tem como objetivo geral investigar o perfil epidemiológico da
infecção pelo HBV em catadores de materiais recicláveis em Goiânia, Goiás.
3.2 Objetivos Específicos
 Estimar a prevalência da infecção pelo vírus da hepatite B em catadores de
materiais recicláveis em Goiânia-GO;
 Analisar os fatores associados a esta infecção;
 Investigar a ocorrência de infecção oculta pelo HBV nos indivíduos que foram
expostos a esse vírus (anti-HBc reagentes);
 Caracterizar as amostras virais, identificando-se os genótipos circulantes nesta
população;
 Verificar o índice de imunização contra hepatite B na população estudada,
considerando o marcador anti-HBs.
4. METODOLOGIA
4.1 Delineamento, Local e População do estudo
A presente investigação está inserida em um projeto de pesquisa maior,
denominado “Investigação das hepatites virais em catadores de materiais recicláveis em
Goiânia-GO, com ênfase nas condições de trabalho”.
O estudo caracteriza-se como de corte transversal, realizado nas 15 cooperativas
de catadores de materiais recicláveis, sendo 12 assistidas pela Prefeitura de Goiânia e
Incubadora Social da Universidade Federal de Goiás (UFG) e três em fase de
estruturação, localizadas em Goiânia-GO, no período de abril/2010 a maio/2011.
Houve uma reunião prévia entre os pesquisadores deste estudo e os dirigentes
das cooperativas, para esclarecimento dos objetivos desta investigação, bem como os
critérios de inclusão do estudo: possuir idade igual ou superior a 18 anos e estar
vinculado a uma das cooperativas de catadores de materiais recicláveis de Goiânia-GO.
Os catadores foram informados sobre os objetivos e procedimentos do estudo,
sendo os elegíveis (n=432) convidados a participar da investigação. Por motivo de
doença, apenas uma catadora se recusou a participar, sendo assim, a população do
estudo foi composta de 431 catadores de materiais recicláveis cooperados em GoiâniaGO.
O presente projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFG
(Protocolo nº 002/2010), em Goiânia-GO.
4.2 Entrevista e Coleta de sangue
Os indivíduos que consentiram em participar da investigação, mediante a
assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE), foram entrevistados
utilizando um questionário padrão sobre dados sociodemográficos (idade, sexo, raça,
estado civil, naturalidade, escolaridade, renda familiar, tempo de trabalho como catador
e profissão simultânea à catação de materiais recicláveis) e possíveis fatores de risco
(uso de drogas ilícitas, presença de tatuagem, história de transfusão sanguínea, cirurgia,
antecedente de prisão, sexo com múltiplos parceiros sem proteção, parceiro do mesmo
33
sexo, história de DST e acidente ocupacional com objeto perfurocortante do lixo)
associados à infecção pelo HBV, bem como vacinação prévia contra hepatite B.
Em seguida, foi coletada uma amostra de sangue (10 mL), por punção venosa,
utilizando seringa e agulha descartáveis. O sangue foi transportado pela equipe, em
caixa apropriada, até o Laboratório de Virologia (IPTSP/UFG), onde ocorreu a
centrifugação para a obtenção dos soros, os quais foram separados em duas alíquotas e
estocados a -20º C (alíquota para análise sorológica) e -70ºC (alíquota para análise
molecular).
4.3 Testes Sorológicos
Todas as amostras foram testadas para a detecção dos marcadores sorológicos
HBsAg, anti-HBc e anti-HBs pelo de ensaio imunoenzimático (ELISA) utilizando-se
reagentes comerciais. As amostras HBsAg reagentes foram testadas para os marcadores
HBeAg e anti-HBe por ELISA.
4.3.1 Detecção do HBsAg
O teste realizado (Hepanostika HBsAg Ultra, Biomérieux, Alemanha) consiste
em um ELISA baseado no princípio de sandwich. Resumidamente, na microplaca
sensibilizada com anticorpos anti-HBs monoclonais, foram adicionados o diluente de
amostra, as amostras e controles (negativo e positivo) em suas respectivas câmaras.
Após incubação, foi acrescentado o conjugado (anti-HBs marcado com peroxidase). A
placa foi novamente incubada e posteriormente lavada com tampão fosfato. Em seguida,
o substrato (peróxido de uréia) foi adicionado juntamente com o cromógeno
(tetrametilbenzidina - TMB). Após nova incubação, a reação foi interrompida pela
adição de ácido sulfúrico a 1N.
Conforme as instruções do fabricante, a leitura espectrofotométrica da reação foi
realizada em 450 nm. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram
absorbâncias maiores ou igual ao valor do cut-off, obtido pela média das absorbâncias
dos controles negativos + 0,040.
34
4.3.2 Detecção de anti-HBc total
O princípio da reação (Hepanostika anti-HBc Uni-Form, Biomérieux) baseou-se
na inibição competitiva onde cada câmara da placa foi revestida com HBcAg. As
amostras em teste e os controles negativo e positivo foram incubados juntamente com o
conjugado (constituído de anticorpos anti-HBc humanos ligados à enzima peroxidase) e,
em seguida, a placa foi lavada com o tampão fosfato. Posteriormente, foi adicionada a
solução substrato/cromógeno (tetrametilbenzidina/peróxido de uréia) e a reação
incubada. A mesma foi interrompida com ácido sulfúrico a 1N e a leitura
espectrofotométrica realizada em 450 nm. O valor do cut-off foi obtido pela fórmula:
0,25 (CNx + 3CPx), onde “CNx” é igual ao valor médio das absorbâncias dos controles
negativos e “CPx” ao dos controles positivos. Assim, foram consideradas amostras
positivas, aquelas que apresentaram absorbância menor ou igual ao valor do cut-off.
4.3.3 Detecção de anti-HBs
A detecção de anticorpos anti-HBs foi realizada pelo método imunoenzimático
qualitativo, tipo sandwich em microplacas sensibilizadas com HBsAg (ad e ay), (ETIAB-AUK-3, Diasorin, Itália). O tampão de incubação, amostras, controles (negativo e
positivo) e calibradores foram adicionados às suas respectivas câmaras, exceto no
branco. A placa foi incubada e, em seguida, lavada. Após a adição do conjugado
(HBsAg marcado com peroxidase, tampão Tris e albumina), a placa foi incubada
novamente. Realizada a lavagem, a mistura substrato/cromógeno foi adicionada, sendo
a placa mais uma vez incubada. Em seguida, a reação foi bloqueada pela ação de ácido
sulfúrico, e a leitura espectofotométrica (filtros de 450 nm e 630 nm) realizada.
Após a validação do teste, o cut-off foi definido pelo valor da absorbância média
do calibrador 1 (concentração 10 UI/L). As amostras com valores de absorbância
maiores ou iguais ao valor do cut-off foram consideradas positivas.
4.3.4 Detecção do HBeAg
A detecção do marcador HBeAg foi realizada por ELISA direto não competitivo
empregando-se reagentes comerciais (ETI-EBK PLUS, Diasorin). Na microplaca
35
sensibilizada com anticorpos monoclonais de camundongos contra o antígeno e do
HBV, foram adicionados o tampão de incubação, amostras, calibrador, controles
positivo e negativo. Após este procedimento, a placa foi incubada e, posteriormente,
lavada. Acrescentou-se o conjugado enzimático (anti-HBe de camundongo conjugado
com peroxidase) diluído e a placa foi novamente incubada. Em seguida, foi realizada a
lavagem, o substrato (peróxido de hidrogênio) foi adicionado juntamente com o
cromógeno (tetrametilbenzidina - TMB). Após nova incubação em temperatura
ambiente, a reação foi interrompida pela adição de ácido sulfúrico a 1N.
Conforme as instruções do fabricante, a leitura espectrofotométrica da reação foi
realizada em 450/630 nm. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram
absorvâncias maiores ou igual ao valor do cut-off, obtido pela média dos valores do
calibrador + 0,060 (após subtrair o valor da câmara correspondente ao branco do
substrato).
4.3.5 Detecção de anti-HBe
A detecção do marcador anti-HBe foi realizada por ELISA competitivo
utilizando-se reagentes comerciais (ETI-AB-EBK PLUS, Diasorin). Na microplaca
sensibilizada com anticorpos monoclonais de camundongos contra o antígeno “e” do
HBV, foram adicionados em todas as câmaras o tampão de incubação, amostras,
controles positivo e negativo, calibrador e uma solução contendo HBeAg recombinante
(os anticorpos da amostra competem com os anticorpos monoclonais pelo HBeAg).
Após este procedimento, a placa foi incubada e lavada. Posteriormente, o conjugado
enzimático (anti-HBe de camundongo conjugado com peroxidase) foi acrescentado e a
placa foi novamente incubada. Em seguida, foi realizada a lavagem e adicionou-se o
cromógeno/substrato. Após nova incubação em temperatura ambiente, a reação foi
interrompida pela adição de ácido sulfúrico a 1N.
Conforme as instruções do fabricante, a leitura espectrofotométrica da reação foi
realizada em filtro duplo de 450/630 nm. Foram consideradas positivas as amostras que
apresentaram absorbâncias maiores ao valor do cut-off, obtido pela média dos valores
do calibrador + 0,500 (após subtrair o valor da câmara correspondente ao branco do
substrato).
36
4.4 Testes Moleculares
4.4.1 Extração do HBV-DNA
As amostras HBsAg e/ou anti-HBc reagentes foram submetidas à extração do
ácido nucléico viral, realizada em duas etapas (Niel et al. 1994). A primeira consistiu na
adição de 250 L do soro em 80 L de solução de lise, sendo esta composta por solução
A (Tris 200 mM, SDS 1%, NaCl 700 mM, EDTA 20 mM e tRNA 0,1 mg/mL) e
solução B (proteinase K 2 mg/mL dissolvida em solução de CaCl2 0,36 mM; o pH final
foi ajustado para 9,0 utilizando o HCl). Os soros, juntamente com a solução de lise,
foram incubados por 4 horas a 37ºC. O DNA viral foi extraído pelo uso de
fenol/clorofórmio, centrifugado, e a fase superior transferida para tubos contento etanol.
Estes foram mantidos a –20ºC durante a noite.
A segunda etapa da reação, caracterizou-se pela centrifugação do material e a
formação de um precipitado, que em seguida foi lavado com etanol a 70%, seco e
ressuspenso em 30 L de água milliQ (auloclavada).
4.4.2 Reação em cadeia da polimerase (PCR)
Após a extração do DNA, o mesmo foi submetido a uma semi-nested PCR, para
amplificação relativa à região pré-S/S, que foi realizada em duas etapas (Motta-Castro
et al. 2005).
Para a primeira, denominada PCR-1, utilizou-se uma mistura contendo 1 pmol
dos primers PS1 e S2/S22 (Quadro 2) (Invitrogen), responsáveis pela amplificação do
fragmento de DNA do nucleotídeo 2826 a 841 do genoma; 0,2 mM de cada dNTP
(dATP, dTTP, dCTP, dGTP), 3 mM de Cloreto de magnésio (MgCl2) e 1 U de Taq
DNA polimerase, num volume final de 50 l. O HBV-DNA de cada amostra extraído
na fase anterior (2 L) foi misturado aos componentes descritos acima, e esta mistura
levada ao termociclador seguindo o programa: 94ºC por 3 minutos (desnaturação
inicial), 30 ciclos de 95ºC por 30 segundos, 52ºC por 40 segundos e 72ºC por 2 minutos
(desnaturação, anelamento e extensão, respectivamente) e 72ºC por 7 minutos
(alongamento final). O produto final esperado desta reação era de 1236 pares de bases
(pb).
37
A segunda etapa (PCR-2), foi realizada empregando-se os primers PS1 e SR
(Quadro 2) (Invitrogen), além dos mesmos componentes mencionados acima. O produto
da PCR-1 foi adicionado à nova mistura da reação e levado ao termociclador, seguindo
o programa: 94ºC por 3 minutos (desnaturação inicial), 30 ciclos de 94ºC por 20
segundos, 55ºC por 20 segundos e 72ºC por 1 minuto (desnaturação, anelamento e
extensão, respectivamente) e 72ºC por 7 minutos (alongamento final). O produto
esperado da PCR-2 era de 1099 pares de bases (pb).
Quadro 2 - Sequência dos primers utilizados na PCR-1 e PCR-2
Primers
Sentido
Sequência (5’  3’)
PS1
Sense
CCA TAT TCT TGG GAA CAA GA
S2
Anti-sense
GGG TTT AAA TGT ATA CCC AAA GA
S22
Anti-sense
GTA TTT AAA TGG ATA CCC ACA GA
SR
Anti-sense
CGA ACC ACT GAA CAA ATG GC
4.4.3 Eletroforese em gel de agarose
Ao gel de agarose preparado a 2% em tampão TBE (Tris-Borato EDTA), foi
acrescentado brometo de etídio em uma concentração final de 0,5 g/mL. Os produtos
obtidos durante a PCR-2 e o marcador de peso molecular (100 pb - Invitrogen) foram
misturados ao corante azul de bromofenol, aplicados ao gel e submetidos à eletroforese.
As bandas formadas durante a corrida foram visualizadas através de luz ultravioleta em
transluminador.
4.5 Sequenciamento de Nucleotídeos
4.5.1 Amplificação das amostras
As amostras HBV-DNA reagentes foram novamente amplificadas na região S
por uma semi-nested PCR, para o sequenciamento subsequente (Motta-Castro et al.
38
2008). A primeira PCR utilizou primers externos PS1, S2 e S22, nas mesmas condições
descritas na PCR-1, perfazendo um volume final de 50 µL. No entanto, a segunda PCR
foi realizada com os primers S1, S2 e S22 (Quadro 4), com volume final de 100 µL.
Para a amplificação, as amostras foram encaminhadas ao termociclador com o seguinte
programa: 94ºC por 3 minutos para desnaturação inicial, 30 ciclos de (95ºC por 30
segundos, 52ºC por 40 segundos, 72ºC por 2 minutos), finalizando com alongamento a
72ºC por 7 minutos.
4.5.2 Purificação dos produtos da PCR
Foram acrescentados cinco volumes de tampão PBI (tampão de ligação) a um
volume do produto da PCR, e homogeneizados em vórtex. Em seguida, colocou-se a
amostra na coluna QIAquick para ligar o DNA que foi centrifugado (aproximadamente
13.000 rpm) por 30-60 segundos e, logo após, o líquido do tubo coletor foi descartado.
A coluna foi colocada novamente no tubo, acrescentando-se 0,75 mL de tampão PE
(tampão de lavagem), e centrifugando-se por 30-60 segundos. Finalmente, descartou-se
o líquido do tubo coletor e a coluna foi reposicionada no tubo e centrifugada por 1
minuto.
A coluna QIAquick foi colocada num tubo limpo de microcentrífuga de 1,5 mL,
e foram adicionados 30 µL de tampão EB (tampão de eluição) ao centro da membrana,
deixando em repouso por 1 minuto, centrifugou-se novamente, e o DNA armazenado a 20° C.
4.5.3 Sequenciamento da região S
O sequenciamento da região S do genoma do HBV foi realizado utilizando
BigDye Terminator versão 3.01 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Foster City,
CA, USA) e os primers específicos S1, S4, S7, S2 e S22. Em um tubo identificado, foi
feito a pré-mistura da reação, conforme os Quadros 3 e 4.
39
Quadro 3 - Reagentes utilizados na pré-mistura da reação
Pré – mistura da reação
Quantidade para 1 amostra
Água
6 µL
Tampão de sequenciamento 5X
3 µL
Primer 2 pmol
3 µL
BigDye
1 µL
TOTAL
13 µL
Quadro 4 - Primers para sequenciamento
Primer
Posição nt*
Sequência (5’ → 3’)
S1 (sense)
nt 124–143
CTT CTC GAG GAC TGG GGA CC
S2 (anti-sense)
nt 841–819
GGG TTT AAA TGT ATA CCC AAA GA
S22 (anti-sense)
nt 841–819
GTA TTT AAA TGG ATA CCC ACA GA
S4 (sense)
nt 416–436
TGC TGC TAT GCC TCA TCT TCT
S7 (anti-sense)
nt 676–656
TGA GCC AGG AGA AAC GGG CT
*Os nucleotídeos (nt) estão numerados no local de clivagem (EcoRI), localizado na
região pré-S2 (genoma completo 3221pb).
Foram distribuídos 13 µL da pré-mistura na placa de sequenciamento e 2 µL de
amostra de DNA puro em ambiente escuro e centrifugou-se (700 rpm por 1 min). A
placa tampada foi incubada no termociclador conforme o programa descrito abaixo.
95°C por 20 seg
25 Ciclos
50°C por 15 seg
60°C por 60 seg
4°C – finalizar
Após esta etapa, realizou-se a precipitação das amostras, adicionando 60 µL de
Isopropanol 65% (Merck) em cada poço. Em seguida, homogeneizou-se no vórtex (1
min), aguardando 20 minutos a temperatura ambiente no escuro. Logo após,
centrifugou-se por 45 minutos (4000 rpm) a 20°C. Posteriormente, foi descartado o
40
sobrenadante e acrescentados 250 µL de etanol a 60%, que foram centrifugados por 10
min (4000 rpm) a 20°C. O sobrenadante foi novamente descartado, e adicionados 100
µL de etanol a 60%, centrifugando-se por 10 minutos (4000 rpm) a 20°C. Descartou-se
o sobrenadante e realizou-se uma última centrifugação durante 1 minuto (500 rpm).
A placa foi levada ao termociclador no programa Secagem (95°C por 2 min).
Logo depois, foram adicionados 10 µL de formamida Hi Di (Applied Biosystems) em
cada câmara, e a placa incubada em termociclador no programa Desnaturação (5 min a
95°C). Retirou-se a placa do termociclador, e incubou-se em gelo por 2 minutos e
centrifugou-se (700 rpm por 1 min). Finalmente, a placa foi colocada no sequenciador
automático (ABI 3130, Applied Biosystems) para leitura dos eletroferogramas.
4.5.4 Análise das sequências
A partir da análise das sequências obtidas montou-se uma sequência consenso
das fitas sense e anti-sense utilizando o programa SeqMan II versão 5.01 (DNASTAR).
A identificação dos genótipos foi realizada pelo alinhamento das sequências consenso
de cada amostra com a utilização do programa Clustal X (Thompson et al. 1997) em
conjunto com sequências representativas dos genótipos do HBV (A-H) obtidas no
GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). A edição do alinhamento foi feita pelo
programa BioEdit (versão 7.1.3 - Ibis Biosciences, USA).
Utilizando-se o programa MEGA (Molecular Evolutionary Genetics Analysis)
versão 4 foi construída a árvore filogenética (Tamura et al. 2007). As análises foram
feitas pelo método Neighbor-Joining, modelo de substituição de nucleotídeos Kimura 2
parâmetros, e foi avaliada a robustez dos grupos filogenéticos utilizando bootstrap de
1025 repetições.
4.6 Análise dos Dados
Os dados coletados durante as entrevistas, bem como os resultados dos testes
sorológicos e moleculares, foram analisados empregando-se o programa EpiInfo versão
6.04 (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA). Prevalência e
estimativas de chance foram calculadas com intervalo de confiança de 95%. Fatores
associados à exposição ao HBV (positividade ao HBsAg e/ou anti-HBc) pela análise
41
univariada (p<0,10) foram analisados posteriormente por regressão logística por meio
do programa SPSS versão 11.0 for Windows. Valores de p<0,05 foram considerados
estatisticamente significantes. Os testes Qui-quadrado, Qui-quadrado para tendência e
exato de Fisher foram utilizados quando apropriados.
5. RESULTADOS
5.1 Características da população estudada
As características sociodemográficas de 431 catadores de materiais recicláveis
em Goiânia-GO são apresentadas na Tabela 1. A média de idade da referida população
foi de 36,9 anos (dp 13,6). Houve predomínio do sexo feminino, perfazendo um total de
62,4% da população. Quanto à raça, 49,9% declararam ser pardos, 28,8% pretos, 20,6%
brancos e 0,7% amarelos.
Em relação à naturalidade, 41,6% eram de Goiás, enquanto 58,4% informaram
ter nascido em outros estados da Federação. Ao estratificar a população considerando
estado civil, verificou-se que 48,7% dos entrevistados referiram ser casados ou viver em
união consensual, 39% solteiros e 12,3% viúvos ou separados.
Quase 30% dos entrevistados relatou menos de quatro anos de escolaridade,
39,5% de quatro a oito anos de estudo e 31% apresentaram escolaridade superior a oito
anos. Do total, 51,0% afirmaram renda entre um e dois salários mínimos, 43,0% inferior
a um salário mínimo e 6,0% entre três e cinco salários mínimos. Ainda, 52,7%
trabalharam como catador de materiais recicláveis há um ano ou menos, 36,4% de dois
a 10 anos e 10,9% há mais de 10 anos.
43
Tabela 1 - Características sociodemográficas de 431 catadores de materiais recicláveis
em Goiânia, Goiás
N
%
Feminino
269
62,4
Masculino
162
37,6
Branca
89
20,6
Preta
124
28,8
Parda
215
49,9
3
0,7
Goiás
178
41,6
Outro Estado
250
58,4
Solteiro
168
39,0
Casado/União consensual
210
48,7
Viúvo/ Separado
53
12,3
<4
127
29,5
4-8
170
39,5
>8
133
31,0
< 1 SM *
185
43,0
1-2 SM
220
51,0
3-5 SM
26
6,0
227
52,7
2-10
157
36,4
>10
47
10,9
Característica
Média de Idade (dp) 36,9 anos (13,6)
Sexo
Raça
Amarela
Naturalidade
Sem informação 3
Estado civil
Sem informação 3
Escolaridade (anos)
Sem informação 1
Média de escolaridade (6,1 anos)
Renda familiar
Tempo de trabalho como catador (anos)
≤1
Média de tempo de trabalho (3,95 anos)
dp: Desvio Padrão; * Salário mínimo
44
5.2 Marcadores sorológicos do HBV em catadores de materiais recicláveis
O marcador anti-HBc foi detectado isoladamente em 2,3% dos indivíduos
estudados. Este mesmo marcador associado ao HBsAg foi reagente em 0,7% e, quando
associado ao anti-HBs, esteve presente em 9,7% dos catadores (Tabela 2), resultando
em uma prevalência global de 12,8% (IC 95%: 9,8-16,2) para infecção pelo HBV. Em
53 (12,3%) catadores, verificou-se positividade isolada para o marcador anti-HBs,
indicando vacinação prévia contra hepatite B. A suscetibilidade ao HBV, caracterizada
pela ausência de qualquer marcador para a hepatite B, foi observada em 323 (74,9%)
catadores.
Tabela 2 - Prevalência dos marcadores sorológicos para hepatite B em 431 catadores de
materiais recicláveis de Goiânia, Goiás.
Categoria
Marcadores
Positivo
IC 95%
N
%
anti-HBc
10
2,3
1,2– 4,4
anti-HBc/HBsAg
3
0,7
0,2 – 2,2
anti-HBc/anti-HBs
42
9,7
7,2 – 12,8
Global
55
12,8
9,8 – 16,2
Imunes
anti-HBs
53
12,3
9,4 – 15,7
Suscetíveis
ausência de marcador
323
74,9
70,5 – 78,9
Infectados
IC: intervalo de confiança
45
5.3 Fatores de risco associados à infecção pelo HBV
A Tabela 3 apresenta a análise univariada dos fatores de risco associados à
infecção pelo HBV, com seus respectivos intervalos de confiança a 95%, em catadores
de materiais recicláveis de Goiânia-GO. Dentre os fatores analisados, aqueles que se
mostraram estatisticamente significativos pela análise univariada foram: idade,
escolaridade, antecedentes de prisão e de DST. Uso de drogas ilícitas (p=0,08) e sexo
sem proteção com múltiplos parceiros (p=0,05) apresentaram associação marginal.
Após análise multivariada (Tabela 4), verificou-se maior chance de aquisição da
infecção pelo HBV com o aumento da idade. Assim, os catadores com idade entre 41-50
anos apresentaram 8,9 (IC 95%: 2,4-32,1) vezes maior chance, de 51-60 anos possuíam
17,8 (IC 95%: 4,6-58,0) vezes maior chance e acima de 60 anos tiveram 38,5 (IC 95%:
8,5-174,7) vezes mais chance de adquirir HBV em relação aqueles com idade igual ou
inferior a 30 anos. Quanto ao uso de drogas ilícitas, os catadores que referiram ser
usuários tiveram 3,1 (IC 95%: 1,2-8,0) vezes mais chance de aquisição do HBV do que
os não usuários.
46
Tabela 3 - Fatores de risco associados à infecção pelo HBV em catadores de materiais
recicláveis em Goiânia-GO
Fator de risco
Idade (anos)
 30
31-40
41-50
51-60
> 60
Sexo
Feminino
Masculino
Escolaridade (anos)
>8
4-8
<4
Tempo de atividade como
catador (anos)
 1
2-10
>10
Acidente com objeto
perfurocortante do lixo
Não
Sim
Transfusão de sangue
Não
Sim
Cirurgia
Não
Sim
Tatuagem
Não
Sim
Uso de drogas ilícitas
Não
Sim
Antecedentes de prisão
Não
Sim
Sexo sem proteção com
múltiplos parceiros
Não
Sim
Parceiro mesmo sexo
Não
Sim
Antecedentes de DST c
Não
Sim
a
HBV
Positivo / Total b
%
Estimativa de
chance (IC 95%)a
4/127
10/107
13/68
18/55
10/21
3,1
9,3
19,1
32,7
47,6
1,0
3,2 (0,96-10,4)
7,3 (2,3- 23,3)
15,0 (4,8-47,0)
28,0 (7,5- 103,9)
0,04
< 0,01
< 0,01
< 0,01
30/235
25/143
12,8
17,5
1,0
1,4 (0,8-2,6)
0,21
7/103
19/155
29/119
6,8
12,2
24,4
1,0
1,9 (0,8-4,7)
4,4 (1,8-10,6)
0,15
0,01
27/195
20/140
8/43
13,8
14,3
18,6
1,0
1,0 (0,5-2,0)
1,4 (0,5-3,6)
0,90
0,42
28/197
27/179
14,2
15,1
1,0
1,1 (0,6-2,0)
0,80
46/329
9/48
14,0
18,8
1,0
1,4 (0,6-3,1)
0,38
20/174
35/204
11,5
17,2
43/307
12/71
14,0
16,9
1,0
1,2 (0,6-2,5)
0,53
40/307
15/71
13,0
21,1
1,0
1,8 (0,9-3,5)
0,08
38/310
16/65
12,3
24,6
1,0
2,3 (1,2-4,5)
0,01
26/223
29/155
11,7
18,7
1,0
1,7 (1,0-3,1)
0,05
50/338
4/22
14,8
18,2
1,0
1,3 (0,4-3,9)
0,66
35/286
20/78
12,2
25,6
1,0
2,5 (1,3-4,6)
0,03
1,0
1,6 (0,9-2,9)
P
0,12
IC: intervalo de confiança; bO denominador reflete o número de catadores que responderam a questão. Foram
excluídos os vacinados contra hepatite B (anti-HBs isolado); cDST: doença sexualmente transmissível
47
Tabela 4 - Análise multivariada dos fatores de risco associados à infecção pelo HBV em
catadores de materiais recicláveis de Goiânia-GO
Estimativa de chance (IC 95%)a
Fatores de risco
Não ajustada
Idade (anos)
 30
31-40
41-50
51-60
> 60
Sexo
Feminino
Masculino
Escolaridade (anos)
>8
4-8
<4
Uso de drogas ilícitas
Não
Sim
Antecedentes de prisão
Não
Sim
Sexo sem proteção com
múltiplos parceiros
Não
Sim
Antecedentes de DST
Não
Sim
a
b
Ajustada b
P
1,0
3,2 (0,96-10,4)
7,3 (2,3- 23,3)
15,0 (4,8-47,0)
28,0 (7,5- 103,9)
1,0
3,5 (1,0-12,4)
8,9 (2,4-32,1)
17,8 (4,6-68,0)
38,5 (8,5-174,7)
0,05
0,00
0,00
0,00
1,0
1,4 (0,8-2,6)
1,0
0,8 (0,4-1,9)
0,66
1,0
1,9 (0,8-4,7)
4,4 (1,8-10,6)
1,0
2,0 (0,7-5,3)
2,1 (0,8-5,6)
0,18
0,15
1,0
1,8 (0,9-3,5)
1,0
3,1 (1,2-8,0)
0,02
1,0
2,3 (1,2-4,5)
1,0
1,4 (0,5-3,4)
0,50
1,0
1,7 (1,0-3,1)
1,0
1,4 (0,6-3,2)
0,38
1,0
2,5 (1,3-4,6)
1,0
1,4 (0,7-3,0)
0,35
IC: intervalo de confiança; Estimativa de chance ajustada por: idade, sexo, escolaridade, uso de drogas
ilícitas, antecedentes de prisão, sexo sem proteção com múltiplos parceiros e antecedentes de doença
sexualmente transmissível (DST)
48
5.4 Detecção dos marcadores HBeAg/anti-HBe, HBV-DNA e características de
risco dos indivíduos HBsAg positivos
Os três catadores HBsAg positivos (Tabela 5) foram anti-HBe reagentes. O
HBV-DNA foi detectado em dois (CT- 43 e CT- 129) deles.
Tabela 5 - Marcadores HBeAg, anti-HBe e HBV-DNA nos catadores de materiais
recicláveis HBsAg reagentes
Catadores
HBeAg
Anti-HBe
HBV-DNA
CT- 43
-
+
+
CT- 90
-
+
-
CT- 129
-
+
+
Estes três catadores eram do sexo masculino. O primeiro (CT-43) tinha 40 anos
de idade e relatou acidente com material perfurocortante, múltiplos parceiros sexuais
(n=10) e antecedentes de DST. O segundo (CT-90) referiu ter 30 anos e história de
acidente com material perfurocortante, uso de drogas ilícitas, tatuagem, antecedentes de
prisão e múltiplos parceiros sexuais (n=10). O último (CT-129), com 52 anos, informou
uso de drogas ilícitas, antecedentes de prisão e múltiplos parceiros sexuais (n>100).
49
5.5 Infecção oculta pelo vírus da hepatite B
As amostras anti-HBc isoladas e anti-HBc/anti-HBs reagentes foram submetidas
à pesquisa do HBV-DNA, para determinar a presença de infecção oculta pelo HBV.
Uma amostra (CT-160, anti-HBc/anti-HBs reagente) apresentou positividade para o
DNA viral, resultando, assim, em um índice de infecção oculta de 1,9% (1/52) em
catadores de materiais recicláveis anti-HBc reagentes em Goiânia-GO.
O indivíduo portador de infecção oculta pelo HBV era do sexo feminino, com
idade de 42 anos e relatou acidente com material perfurocortante durante a catação.
50
5.6 Caracterização molecular das amostras HBV-DNA positivas
Pela árvore filogenética da região S do HBV (Figura 12), as três amostras HBVDNA positivas foram caracterizadas como dos genótipos A (subgenótipo A1), D
(subgenótipo D3) e F (subgenótipo F2).
CT43
AY344107 A1 Brasil
EU366129 A1 Argentina
91
EU859899 A2 Bélgica
AY344098 A2 Brasil
100
86
AB194951 A3 Camarões
AB064312 G Estados Unidos
AB014366 B Japão
X75665 C Japão
AB205191 E África
100
AB104712 D1 Egito
AB205126 D2 Japão
94
JF815643 D2 Brasil
99
CT129
JF815611 D3 Brasil
89
94
AB048702 D4 Austrália
AY090459 F1 Costa Rica
CT160
93
HM101130 F2 Brasil
AB036915 F3 Venezuela
AB166850 F4 Bolívia
AY090457 H Nicarágua
0.03
0.02
0.01
0.00
Figura 12 - Árvore filogenética da região S do HBV, incluindo os 3 isolados dos
catadores de materiais recicláveis de Goiânia-GO e 19 sequências do GenBank (número
do acesso e o país de origem estão indicados)
6. DISCUSSÃO
Este trabalho consiste na primeira investigação soroepidemiológica e molecular
da infecção pelo vírus da hepatite B em catadores de materiais recicláveis. Embora, o
presente estudo tenha sido conduzido em cooperativas/associações responsáveis pela
catação e separação dos materiais recicláveis, não representando, portanto, toda a
população de catadores, as informações obtidas neste estudo podem subsidiar o
desenvolvimento de estratégias de prevenção e controle da hepatite B voltadas para esta
população.
Após a análise das características sociodemográficas, observou-se que a média de
idade de 36,9 anos (dp 13,6) foi próxima às verificadas em Duque de Caxias-RJ (44
anos) (Porto et al. 2004) e em Santos-SP (42,4 anos) (Rozman et al. 2008). A maior
parte da população estudada foi constituída de indivíduos do sexo feminino. Dado
concordante com outros estudos realizados em catadores por Porto et al. (2004), em
Duque de Caxias-RJ, e Almeida et al. (2009), em Governador Valadares-MG. No
entanto, divergente de outras investigações conduzidas no Brasil por Silva et al.
(2005a), em Pelotas-RS, e Rozman et al. (2008), em Santos-SP. Segundo Porto et al.
(2004), a presença feminina é superior nas cooperativas sob alegação de que o trabalho
nas linhas de triagem (esteiras mecânicas operadas por catadores vinculados à
cooperativa) exigiria menor esforço físico do que na rampa (locais a céu aberto onde os
caminhões depositam o lixo a ser posteriormente espalhado e coberto com terra pelos
tratores). Esse fato pode explicar a predomonância de mulheres nas cooperativas de
catadores de materiais recicláveis em Goiânia.
A metade da população estudada apresentou-se como parda (49,9%). Dado
semelhante ao mostrado no estudo de Silva et al. (2005a), no qual 47,5% dos catadores
eram pardos. Em 2010, segundo o Censo do IBGE (2010) (Instituto Brasileiro de
Geografia e Estatística), o Brasil conta com uma população de 191 milhões de
habitantes, dos quais 91 milhões se autodeclararam brancos (47,7%), 15 milhões como
pretos (7,6%), 82 milhões como pardos (43,1%), 2 milhões como amarelos (1,1%) e
817 mil indígenas (0,4%). Assim, o índice de indivíduos pardos do presente estudo se
aproximou do verificado na população brasileira. Por outro lado, o percentual de
catadores brancos (20,6%) foi aproximadamente a metade do observado pelo Censo do
IBGE (2010), enquanto o de pretos (28,8%) foi quase quatro vezes maior.
52
Em relação à escolaridade, a maioria da população (69%) relatou até oito anos
de estudo, sendo a média de 6,1 anos. Poucos anos de estudo também foram verificados
nessa mesma população por outros autores (Porto et al. 2004, Silva et al. 2005a,
Alvarado-Esquivel et al. 2008, Rozman et al. 2008). Segundo o IBGE (2010), a média
de escolaridade da população acima de 10 anos de idade é de 7,2 anos em 2010; dado
ligeiramente superior ao observado neste estudo. A escolaridade baixa ou mediana dos
catadores pode representar um fator de exclusão do mercado de trabalho (Silva 2002b,
Magera 2003). Os poucos anos ou ausência de estudo, aliados a condição de viver da
catação, retratam que, para muitos trabalhadores, essa atividade constitui a única forma
de garantir a sobrevivência e possibilidade de inclusão no mercado de trabalho
(Medeiros & Macêdo 2006).
Quase a metade da população informou renda familiar inferior a um salário
mínimo (43,0%). A renda caracterizada como pouca e instável dos catadores foi
mostrada também em outros estudos (Gonçalves 2004, Porto et al. 2004, Silva et al.
2005a, Ribeiro & Besen 2007, Bossi 2008, Rozman et al. 2008, Kirchner et al. 2009).
De acordo com o IBGE (2010), o rendimento médio mensal dos domicílios particulares
permanentes foi de R$ 2.222,00, alcançando nas áreas urbana e rural R$ 2.407,00 e R$
1.051,00, respectivamente. Esses valores foram superiores aos informados pelos
indivíduos estudados, indicando, assim, que os catadores de materiais recicláveis
constituem uma população de baixa renda.
Ainda, a média de tempo de trabalho de 3,95 anos, sendo ligeiramente superior à
encontrada por Silva et al. (2005a) (3 anos) e inferior à verificada por Rozman et al.
(2008) (6,52 anos). O Programa Goiânia Coleta Seletiva, fundado em 2008, possibilitou
que todos os materiais recicláveis recolhidos pela Prefeitura fossem doados às
cooperativas e associações de catadores conveniadas ao Programa, o que representou
um aumento no número de cooperativas/associações nos últimos anos, atraindo assim
novos trabalhadores para essa atividade em Goiânia (Prefeitura de Goiânia 2009), fato
que pode justificar o pouco tempo de trabalho nas cooperativas relatado por quase a
metade da população deste estudo. Ainda, Ferreira (2005) considera a catação e
separação do lixo uma forma recente de obtenção de renda para os trabalhadores,
principalmente, após a globalização. Afinal, tais trabalhadores não possuíam habilidades
necessárias para atender ao novo mercado e se tornaram catadores de materiais
recicláveis.
53
A prevalência global da infecção pelo HBV estimada neste estudo de 12,8% (IC
95%: 9,8-16,2) foi superior à reportada em um inquérito brasileiro de base populacional
de 5,3% (IC 95%: 4,6-6,1) (Pereira et al. 2009). No entanto, foi menor do que à
observada no estudo realizado com 250 catadores de materiais recicláveis por Rozman
et al. (2008) de 34,4% (IC 95%: 28,5-40,2). Tal discrepância pode ser justificada pela
diferença entre a população deste estudo e a de catadores de Santos-SP, os quais eram
mais velhos e predominantemente homens. A média de tempo de trabalho dos catadores
em Santos-SP foi maior que em Goiânia-GO. Além disso, comportamentos de risco
relacionados à transmissão parenteral (10% dos catadores relataram uso de drogas
injetáveis) e sexual (50% referiram mais de 10 parceiros sexuais na vida) foram
ressaltados por Rozman et al. (2008). Ainda, Santos-SP é uma cidade portuária, sendo
que esse ambiente pode favorecer a marginalização de populações socialmente
excluídas como os catadores de materiais recicláveis (Lacerda et al. 1996, Etzel et al.
2001).
Dentre os fatores de risco associados a infecção pelo HBV, verificou-se, com
aumento da idade, maior chance de aquisição do vírus. A exposição ao HBV está
associada a comportamentos de risco adquiridos ao longo da vida, tanto relacionados à
transmissão sexual, como ao uso de drogas ilícitas (Bernabe-Ortiz et al. 2011, Matos et
al. 2012). Quanto ao uso de drogas ilícitas, os catadores que referiram ser usuários
tiveram 3,1 (IC 95%: 1,2-8,0) vezes mais chance de aquisição do HBV do que os não
usuários. O uso de drogas ilícitas foi descrito como fator de risco para aquisição do
HBV também em outros estudos (Oliveira et al. 2005, Sutton et al. 2006, Reimer et al.
2007, Tseng et al. 2007, Amesty et al. 2008, Ferreira et al. 2009).
Como referido, a via sexual tem sido apontada como uma das principais formas
de transmissão do HBV (Alter 2003, Kao 2011). Na análise univariada, a variável
antecedentes de DST (p=0,03) foi associada à infecção pelo HBV, e sexo sem proteção
com múltiplos parceiros foi marginalmente associado (p=0,05). Esses fatores foram
associados a essa infecção em outros estudos estudos realizados no Brasil (LewisXimenez et al. 2002, Ferreira et al. 2009, Pinho et al. 2011, Matos et al 2012).
A variável antecedentes de prisão também foi associada à infecção pelo HBV na
análise univariada (p=0,01). A prisão caracteriza-se como ambiente promíscuo, com
hábitos precários de higiene e uma população marginalizada (assassinos, traficantes e
54
usuários de drogas injetáveis) (Catalan-Soares et al. 2000, Adjei et al. 2008, Hennessey
et al. 2008, Stief et al. 2010, Saiz de la Hoya et al. 2011), condições que favorecem a
disseminação do HBV, assim como de outros agentes infecciosos (Miranda et al. 2004,
Strazza et al. 2007, Adjei et al. 2008, Nelwan et al. 2010, Keramat et al. 2011, MirNasseri et al. 2011).
Acidente com objeto perfurocortante do lixo, embora não tenha sido associado à
infecção pelo HBV, foi relatado por 47,6% (179/376) dos catadores. O risco biológico
que envolve a atividade da catação, associado à baixa escolaridade e inexperiência no
manuseio com materiais potencialmente contaminados revelam a importância de
atividades de educação em saúde para a população de catadores. A segregação correta
de cada tipo de lixo e investimentos na segurança ocupacional, com a disponibilização e
treinamento quanto ao uso de equipamentos de proteção individuais e coletivos,
representam medidas importantes para a qualidade de vida dos catadores de materiais
recicláveis (Cavalvanti & Franco 2007).
No Brasil, tendo em vista a diversidade populacional e de prevalência da
hepatite B, a identificação dos genótipos circulantes torna-se de grande relevância, pois
contribui para o conhecimento da epidemiologia do HBV no País. No presente estudo
foram identificados os genótipos A (subgenótipo A1), D (subgenótipo D3) e F
(subgenótipo F2), que é concordante com outras investigações realizadas no País
(Motta-Castro et al. 2005, 2008, Paraná & Almeida 2005, Mello et al. 2007, Sitnik et al.
2007, Bottecchia et al. 2008, Matos et al. 2009, Santos et al. 2010).
O HBV-DNA tem sido detectado na ausência do marcador HBsAg, perfil
denominado de infecção oculta (Ocana et al. 2011, Candotti et al. 2012). Neste estudo, a
prevalência de infecção oculta de 1,9% em catadores anti-HBc reagentes foi semelhante
à observada por Matos et al. (2009) (1,7%) em comunidade afrodescendente em Goiás,
utilizando os mesmos métodos sorológicos e moleculares. Vale a pena ressaltar a
possibilidade de transmissão da hepatite B, mesmo na ausência do marcador HBsAg,
nos pacientes com infecção oculta (Conjeevaram & Lok 2001, Raimondo et al. 2007,
Hollinger & Sood 2010, Larrubia et al. 2011, Raimondo 2012).
No Brasil, a vacinação contra a hepatite B foi introduzida no Programa Nacional
de Imunização (PNI) em 1988 e, atualmente, encontra-se disponível nos serviços de
saúde pública para faixas etárias específicas, como crianças e adultos com menos de 29
55
anos de idade, bem como para indivíduos com maior chance de exposição ou em casos
de acidente com materiais contaminados (BRASIL 2010a, BRASIL 2010b). Entretanto,
não especificamente para os catadores de materiais recicláveis. Neste estudo, observouse um alto índice de suscetibilidade para esta infecção, bem como o marcador anti-HBs
foi detectado isoladamente em apenas 12,3% da população estudada, sugerindo um
índice de imunização baixo contra hepatite B. De fato, apenas 29,8% (28/94) dos
catadores, que estavam na faixa etária que a vacina era disponibilizada pelo Ministério
da Saúde (até 24 anos), foram imunizados previamente.
O presente estudo mostra uma prevalência alta para o HBV quando comparada à
população urbana da Região Centro-Oeste (Pereira et al. 2009) e, por outro lado, um
índice baixo de imunização contra hepatite B. Estes dados, aliados aos comportamentos
de risco, demostram a necessidade de intervenções efetivas que visem à prevenção e o
controle da hepatite B nos catadores de materiais recicláveis, como a vacinação contra
hepatite B nos locais onde se concentram esta população, incluindo as cooperativas.
Tais ações refletirão em melhor qualidade de vida e de assistência a esses indivíduos.
7. CONCLUSÕES
 A prevalência global da infecção pelo vírus da hepatite B em catadores de
materiais recicláveis em Goiânia-GO de 12,8% é superior à encontrada no
inquérito de base populacional realizado em nossa região;
 Os fatores associados a esta infecção, idade maior ou igual a 40 anos e uso de
drogas ilícitas, sugerem transmissão sexual e parenteral do HBV;
 A presença de infecção oculta pelo HBV nos indivíduos anti-HBc reagentes,
com índice de 1,9%, evidencia a possibilidade de transmissão viral, mesmo na
ausência do marcador HBsAg;
 Os genótipos A (subgenótipo A1), D (subgenótipo D3) e F (subgenótipo F2) do
HBV foram identificados nos indivíduos infectados, corroborando os dados de
outros estudos publicados no Brasil;
 Apenas 12,3% da população foi positiva para o marcador anti-HBs
isoladamente, indicando, assim, um baixo índice de imunização contra hepatite
B nos catadores de materiais recicláveis em Goiânia-GO.
8. CONSIDERAÇÕES FINAIS
Após a realização dos testes no Laboratório de Virologia IPTSP/UFG, os
resultados sorológicos foram entregues nas cooperativas de maneira gradativa,
Orientamos quanto a importância da vacinação contra a hepatite B, e os indivíduos que
apresentaram positividade para o HBsAg foram aconselhados e encaminhados ao
Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA) da Secretaria Municipal de Saúde de
Goiânia-GO.
Além disso, um projeto de extensão foi realizado nas cooperativas de catadores
de materiais recicláveis, possibilitando atividades de educação em saúde, com ênfase no
uso dos EPIs. Para todos os catadores cooperados, foi entregue um kit de EPIs,
incluindo máscara, óculos, luvas e botas, com o intuito de estimulá-los ao uso adequado
desses equipamentos.
O desenvolvimento do presente estudo despertou a necessidade de uma
consciência ambiental, com incentivo ao gerenciamento de resíduos, bem como de
fortalecer o programa de coleta seletiva, e consequentemente as cooperativas de
catadores de materiais recicláveis. Finalmente, não podemos deixar de ressaltar o
aprendizado sobre as dificuldades e estigmas enfrentados pelos catadores em prol do
reconhecimento de sua categoria profissional, que é fundamental na sociedade, uma vez
que possibilita o reaproveitamento de materiais descartados trazendo benefícios
ambientais.
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