efeito da exposição ao cobre na expressão de genes

XII Congresso Brasileiro de Ecotoxicologia
25 a 28 de setembro de 2012
Porto de Galinhas – PE
EFEITO DA EXPOSIÇÃO AO COBRE NA EXPRESSÃO DE GENES ENVOLVIDOS NO
SISTEMA DE DEFESAS ANTIOXIDANTES E NO DESENVOLVIMENTO EM
EMBRIÕES DE Danio rerio
Fábio M. Tarouco1; Lais M. de Aguiar1; Luis F. F. Marins1,2; Carlos E. da Rosa1,2
1
[email protected] (Universidade Federal do Rio Grande - FURG, Rio Grande, RS)
[email protected] (Universidade Federal do Rio Grande - FURG, Rio Grande, RS)
1,2
[email protected] (Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas – Fisiologia Animal Comparada Universidade Federal do Rio Grande - FURG, Rio Grande, RS)
1,2
[email protected] (Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas – Fisiologia Animal
Comparada - Universidade Federal do Rio Grande - FURG, Rio Grande, RS)
1
Durante o desenvolvimento embrionário, ocorrem intensa divisão e diferenciação celular, e nesse período os
organismos são mais vulneráveis a exposição a contaminantes. O objetivo do trabalho é determinar os efeitos
do cobre na expressão de genes de algumas enzimas envolvidas no desenvolvimento embrionário (DE) e
também no sistema de defesas antioxidantes (SDA) do peixe Danio rerio (CYPRINIFORMES). Logo após a
desova, os ovos foram separados em um tempo máximo de 1 hora e sua contagem e viabilidade determinada
sob microscopia ótica. Em seguida foram expostos ao cobre (0,009 µg/L) pelos tempos 24 e 72 h, a uma
temperatura de 28 ºC ± 1 ºC, com o meio renovado a cada 24 horas. Um grupo controle foi mantido sob as
mesmas condições. Após, a exposição pelos tempos mencionados, foi feita a extração do RNA total de pools de
20 ovos (n=5) utilizando reagente TRIzol, em seguida o RNA extraído foi quantificado, sendo em seguida
efetuada a confecção dos cDNAs. Estes foram utilizados para a análise da expressão gênica através da técnica
de PCR-Tempo Real, utilizando primers específicos para os genes: duas isoformas da superóxido dismutase
(SOD1 e SOD2) e catalase (CAT), envolvidos no SDA e os genes: MyoD, Myogenina, Sonic hedgehog
(Shha) e neurogenina, envolvidos no DE, sendo o gene EF1α utilizado como normalizador. Os genes
relacionados ao DE não tiveram suas expressões alteradas em relação ao grupo controle tanto no tempo 24h
quanto no tempo 72h. Com relação aos genes do SDA, o gene da CAT apresentou uma indução de 12,3±25,3
vezes (p<0,05) no tempo 24h no grupo exposto ao cobre. No tempo 72 horas a CAT foi novamente induzida
4,7±2,4 vezes (p<0,01) e a SOD1 teve um aumento na expressão de 2,3±0,7 vezes (p<0,05). É importante
salientar que a concentração de cobre empregada é 1000x inferior aquela permitida pela legislação
(CONAMA 357) para água doce Classe 1. Podemos concluir que a exposição ao cobre na concentração de
0,009 µg/L causa alterações nos níveis normais da expressão de alguns genes envolvidos no SDA do peixe
Danio rerio, indicando uma provável situação de estresse oxidativo.
Palavras-chave: Cobre, desenvolvimento, expressão gênica
Fomento: FAPERGS (Processo – ARD/FAPERGS 2009 – 0903525), PIBIC-CNPq, PROBIC-FAPERGS.
Sociedade Brasileira de Ecotoxicologia (SBE)
Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)
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