Avaliação da Isomeria Cis – Trans e Tautomerismo na Droga

Sociedade Brasileira de Espectrometria de Massas – BrMASS
Natural and Synthetic Products
Avaliação da Isomeria Cis – Trans e Tautomerismo na Droga
Tacrolimo por Mobilidade Iônica Acoplada à Espectrometria
de Massas
Phellipe Honório Amaral1,2,*, Paulo C. P. Rosa3, Clécio Fernando Klitzke1,
Nelci Fenalt Hoehr2, Marcos Nogueira Eberlin1
*[email protected]
1
Laboratório Thomson de Espectrometria de Massas, Instituto de Química,
Universidade Estadual de Campinas – UNICAMP. 2Departamento de
Patologia Clinica, Faculdade de Ciencias Médicas, Universidade Estadual de
Campinas. 3Departamento de Ciências Exatas e da Terra, UNIFESP-Diadema.
Em 1984 pesquisadores da Fujisawa Pharmaceutical Co. isolaram de
Streptomyces tsukubaensis proveniente de uma amostra de solo o tacrolimo
(FK506). Este antibiótico macrolídeo com anel de 27 membros apresenta
propriedades terapêuticas e passou a ser utilizado no tratamento da dermatite
atópica, tornando-se os pioneiros no uso dos imunomoduladores tópicos (TIM's)
[1]. Tacrolimo foi o primeiro medicamento não esteróide aprovado para o
tratamento da dermatite atópica leve à grave. Por ser um imunossupressor
potente este fármaco passou também a ser utilizado em pacientes de
transplantes de órgãos. O tacrolimo em solução apresenta isomeria cis-trans
devido a rotação restrita na ligação N7-C8 da amida, sendo o isômero trans o
de maior atividade imunossupressora. Além desta isomeria esta substância
apresenta tautomerismo [2]. Inicialmente analisamos o tacrolimo (obtido de
formulações comerciais) por ESI (+) FT-ICR MS (LTQ FT Ultra Thermo Scientific,
Germany) através de infusão direta em metanol. Os espectros foram adquiridos com
100.000 de resolução em m/z 400 e erros de medida inferiores a 1 ppm para
determinação de fórmulas elementares inequívocas. Os principais sinais do espectro
são o tacrolimo na forma de aduto de amônio e aduto de sódio e os produtos da perda
de uma e duas moléculas de água Os estudos de de mobilidade iônica foram realizados
em um espectrômetro de massas Synapt HDMS (Waters, UK) com ESI (+). Utilizamos
N2 e CO2 como gases de mobilidade operados a pressões distintas e os parâmetros de
velocidade e altura da onda foram otimizados para cada condição experimental. As
melhores separações foram obtidas com CO2 como drift gas. O tacrolimo na forma de
aduto de sódio apresentou dois drift times característicos, sendo um minoritário. Este
sinal variou de 9 a 15% de área em relação ao sinal majoritário dependendo do
solvente e da adição de base. A maior intensidade deste segundo pico de drift time
característico foi obtida foi com a adição de metanol e hidróxido de amônio. Com a
adição de base observamos também um aumento na intensidade dos sinais de m/z
que representam os produtos da perda de uma e duas moléculas de água. Estas m/z
também apresentam dois drift times indicando claramente isomeria tanto do tacrolimo
quanto dos seus produtos de desidratação.
[1] Fleischer AB Jr, et al. J Am Acad Dermatol. 2002, 47, 562-570.
[2] Nakami Y, et al. Chromatographia 1995, 40, 253-258.
4º Congresso BrMass – 10 a 13 de Dezembro de 2011