Folder informativo

LIV DIAGNOSTICS
I NFORMATIVO
Introdução
Nesta Edição
Introdução
Hormônios Esteróides na Saliva
Neste informativo buscamos levar informações
Coletas das Amostras Salivares
especializadas e técnicas aos nossos médicos e parceiros
Métodos Analíticos para Hormônios Salivares
sobre análises hormonais na saliva.
Diferenças Analíticas (Sangue x Urina x Saliva)
Historicamente,
as
primeiras
análises
em
fluidos
salivares foram realizadas em 1980, porém foram
Hormônios dosados na Saliva
Envio de Amostras salivares ao Laboratório
Resultados & Laudos
deixadas de lado na prática médica passando a serem
mais comumente usadas em pesquisas clinicas. A partir
de 1995, juntamente com o conceito de medicina
Coleta das Amostras de Saliva
preventiva, as análises salivares tornaram-se populares
As amostras de saliva são obtidas por procedimento simples,
nos USA e agora cada vez, no Brasil.
Logo, é fundamental que o médico ou pesquisador
sejam amplamente informados de suas aplicações e
cientes das possíveis diferenças geradas pelos diferentes
métodos
analíticos
para
que
possam
interpretar
não invasivo, livre de estresse da venopunção, podendo ser
realizadas por pessoas não treinadas ou na própria
residência do paciente (4-9).
Para coleta das amostras salivares, não é necessário jejum,
observando-se apenas o cuidado de não escovar os dentes
adequadamente os resultados de seus pacientes.
pelo menos 15 minutos antes da coleta ou ainda evitar a
Hormônios Esteróides na Saliva
coleta no dia em que o paciente se submeteu a tratamento
odontológico.
Os Hormônios Esteróides são moléculas de baixo peso
Faze-se importante salientar que algumas medicações
molecular (250-350 Da) com estruturas químicas muito
principalmente, corticoides podem interferir nos resultados
semelhantes e não são espécies-específicas. São resistentes
das análises e recomenda-se fazer o uso de medicações
ao calor e, portanto, estáveis à temperatura ambiente por
somente após a coleta da saliva pela manhã.
mais de 72 horas e refrigeradas por até 7 dias.
Devido à praticidade da coleta das amostras salivares estas
As concentrações destes hormônios na saliva são da ordem
podem ser coletadas várias vezes ao dia e a noite, o que
de nanomoles (nmol/L) ou picomoles por litro (pmol/L).
permite a avaliação dinâmica da secreção dos hormônios
Para sua dosagem são necessários ensaios muito sensíveis e
livres.
devido à semelhança estrutural dos esteroides, é necessário
As medidas dos esteróides salivares independem da taxa de
ainda, o uso anticorpos monoclonais altamente específicos.
fluxo de saliva (2,3).
Nas análises na saliva são determinadas a fração livre e
Como
biologicamente ativa dos hormônios (2-10%), isto é,
temperatura ambiente estas podem ser transportadas ao
quantidade de hormônios disponíveis para as células
laboratório pelo correio ou pelo portador, sem nenhuma
realizarem suas funções, diferentemente das análises no
perda da atividade dos hormônios (10).
sangue que determinam os hormônios totais (livres e
conjugados as proteínas de transporte).
Devido a este fator é que podem ser encontrados valores
dentro da normalidade nos exames de sangue e os
pacientes apresentarem inúmeros sintomas de deficiência,
sendo possível apenas serem diagnosticados pelo exame de
saliva
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as
amostras
salivares
são
muito
estáveis
em
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Análises Hormonais na Saliva
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Métodos Analíticos para Hormônios Salivares
A medida precisa da concentração dos hormônios na saliva
pode ser realizada por diferentes métodos analíticos uma vez
que estes apresentam boa correlação com as amostras de
sangue (Figura1). No entanto, alguns métodos apresentam
ap
algumas restrições, principalmente relacionadas ao sua
sensibilidade e especificidade. O método mais comumente
utilizado é o Radioimunoensaio (RIE), devido a sua alta
sensibilidade e especificidade, o que permite determinar
com precisão hormônios de peso molecular muito baixo na
faixa de nanogramas (10-9) e picogramas (10-12). Na técnica
de
Radioimunoensaio
utilize-se
anticorpos
monoclonais
específicos conjugados com radioisótopos para quantificar os
ensaios. O isótopo mais utilizado é o Iodo 125, fator que
Figura1.Correlação dos níveis de cortisol sérico e salivar
requer do laboratório algumas medidas operacionais especiais
algumas vantagens, porém muitas restrições. Dentre as
como: maior investimento em biossegurança, profissionais
vantagens estão a simplicidade, rapidez , baixo custo e
altamente qualificados e registro na CNEN (Comissão Nacional
a possibilidade de automação. Contudo dentre as
de Energia Nuclear) (Figura 2)
desvantagens estão as reações cruzadas, possiveis
Devido a estes fatores operacionais muitos laboratórios optam
interferentes das amostras salivares (mucinas que
por técnicas que empregam métodos não isotópicos, como o
podem interferer na cor
co da reação) a instabilidade de
Enzimaimunoensaio (ELISA).
alguns reagentes e mais passivel a erros operacionais
As análises hormonaiss salivares realizadas por ELISA (Enzyme-
(Figura 3).
linked Immunosorbent Assay) baseiam-se na imobilização de
Atualmente outros médodos analíticos estão sendo
um dos componentes, em fase sólida, e na utilização de um
testados
conjugado ligado a uma enzima. Como o substrato forma um
Imunofluorescencia e a Espectrometria de Massa.
produto colorido, a alteração de cor é mon
monitorada
visualmente
ou
por
meio
de
espectrofotômetro
para
este
tipo
de
análise
como
a
MAPHERSON, R.A.,
que
relaciona a quantidade de substância dosada à intensidade
de cor.
Devido as caracteristicas do ensaio enzimático para as
análises de hormônios saliva, o método de ELISA traz
Figura 3 – Ensaio ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)
Figura 2– Radioimunoensaio (RIE) (Laboratório e Kit Analitico)
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Análises Hormonais na Saliva
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“A técnica de Radioimunoensaio apresenta
precisão, alta sensibilidade e especificidade
para determinação de hormônios de baixo
peso molecular, na ordem de nanograma (109) e picogramas (10-12).”
Figura 4. Estrutura química de estrógenos naturais e sintéticos.
das células vermelhas e desta forma os hormonios são
Diferenças Analíticas
removidos antes mesmo da análise.
Este fenómeno foi
descrito por Frank Z. Stanczyk. Isto ocorre principalmente
Sangue x Urina x Saliva
com a progesterona e em menor grau com os outros
hormônios. Nos testes sorológicos de progesterona nos
Hormônios no Sangue
pacientes em terapia hormonal transdérmica, não são
observados o aumento nos níveis de progesterona mesmo
Exames de sangue são comumente usados para determinar
os níveis de hormônios pela maioria dos médicos. Os exames
hormonais no sangue determinam a quantidade total de
hormônios (livres e conjugados).
Este tipo de teste é
atualmente considerado como o menos preciso de todos os
métodos disponíveis. Os testes sorológicos são incapazes de
distinguir os hormônios na forma ligada às proteínas
carreadoras (forma inativa do hormônio) da sua forma livre
e biologicamente ativa. Os testes sorológicos representam
apenas uma estimativa aproximada dos níveis hormonais, o
pode levar o clinico ao diagnóstico inadequado, uma vez que
os níveis hormonais séricos, na maioria das vezes estão
dentro dos limites de normalidade, porém quando os níveis
depois de semanas de aplicação, já nos testes de saliva
saliva,
niveis aumentados de progesterona podem ser detectados
após duas horas do seu uso. Estudos clínicos realizados pela
Academia Americana de Anti-Envelhecimento em mais de 300
pacientes demonstrou que todos os pacientes cujos níveis
hormonais foram considerados em níveis ótimos por testes
sangüíneos, apresentavam em níveis excessivamente altos de
progesterona com base nos testes de saliva.
As doses
utilizadas para alcançar ótimos níveis séricos foram muito
maiores do que as doses fisiológicas para atingir os níveis
ótimos nos testes de saliva. Em todos os casos as doses dos
pacientes foram reduzidas até que fossem atingidos os niveis
ótimos pelo testes de saliva.
de hormônios livres e ativos são testados e que as
deficiências são identificadas. Além disso, os resultados das
análises no soro refletem apenas a quantidade de hormônios
fora das células e não refletem os níveis de hormonios
disponíveis para as células e tecidos alvos cumprir sua
função fisiologica.
Outro fator importante, é que ao monitorar os níveis
hormonais quando o paciente está em terapia hormonal com
transdérmicos (creme/gel) as análises séricas não menos
precisas ainda, isto porque o hormônio exógeno é absorvido
através da pele para corrente sanguinea. Já no sangue estes
se ligam às membranas dos glóbulos vermelhos, a fim de
minimizar as interações desfavoráveis com o meio aquoso
ligando assim a camada lipoproteica uma vez que a maioria
dos hormônios tem afinidades pelas gorduras. Assim, quando
coletada a amostra de sangue e o material é centrifugado
centrifugado,
para liberação do soro ou plasma, ocorre a precipitação dos
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Figura 6. Amostras da coleta de sangue
sangu e separação do soro
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Análises Hormonais na Saliva
Hormônios na Urina 24 horas
A determinação de hormônios em urina de 24 horas é um dos
Ao final deste informativo há uma lista de inúmeras publicações
métodos mais precisos, mais difíceis e mais caros. Contudo,
que comprovam que o teste de saliva é superior aos exames de
os testes hormonais em urina de 24 horas apresentam uma
sangue e referências sobre a validação do mesmo.
grande inconveniência que é a sua própria de coleta. Coletar
urina de 24 horas, implica recolher todas as urinas de todas
Como Solicitar os Exames de Saliva
micções por um dia inteiro, sem que seja perdido nada de
volume, sob risco de vieses nos resultados. Outro fator
Os exames salivares podem ser solicitados pelo médico de
limitante é o armazenamento das coletas urinárias uma vez
forma isolada ou através de Perfis Hormonais (Hormonal
que mesmas devem ser mantidas sob refrigeração (não é
Feminino, Masculino, Menopausa, Andropausa, Envelhecimento,
pertimido uso de conservantes), durante todo periodo de
Stress, Sono, entre outros, de acordo com a necessidade
coleta,
clinica.
o
que
pode
trazer
certo
desconforto
e
constragimento ao paciente. Contudo, eliminando estes
problemas com a coleta, o teste urinário permite monitorar a
O kit para coleta de saliva poderá ser retirado no laboratório
terapia hormonal bioidêntica através da obtenção de uma
pelo paciente, familiar,amigo ou ainda ser enviado, para sua
média diária de seus níveis hormonais ao invés de um “ponto
casa, escritório ou empresa. O kit traz as instruções de coleta
específico” obtido no momento exato em que você fez a
impressas na sua embalagem, escritas de maneira didática e de
coleta de sangue ou da saliva .
fácil compreensão.
“Os testes sorológicos são incapazes de
distinguir os hormônios na forma ligada às
proteínas carreadoras (forma inativa do
hormônio) de sua forma livre e
biologicamente ativa.
Hormônios na Saliva
A análise hormonal na saliva mede a forma livre e,
biologicamente ativa de vários hormônios. Os testes na
saliva foi aprovado amplamente pela comunidade científica
por refletir de forma precisa os níveis hormonais presentes
no interior das células, onde a ação dos hormônios ocorrem,
enquanto que os exames de sangue medem os hormônios
fora das células.
A análise salivar hoje é considerada como padrão-ouro
para hormônios pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e
são amplamente utilizados pela NASA em suas pesquisas.
pesquisas
Apesar da recomendação da OMS, muitas vezes o método
ainda é
criticado e negligenciado por muitos médicos,
sendo que muitos ainda se recusam a solicitar os exames,
devido a falta de informação sobre as diferenças sobre
testes de sangue e saliva, levando-os geralmente a fazer
criticas sobre a validação dos testes salivares.
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Figura 5 – Kit de Coleta de Saliva
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Análises Hormonais na Saliva
Hormônios dosados na Saliva
Resultados
Muitos são os hormônios que podem ser determinados na
saliva tais como os hormônios esteróides, peptidicos e
algumas aminas. Dentre os quais podemos destacar:
Os laudos de resultados dos exames salivares são liberados de
10 a 15 dias depois da chegada do material no Laboratório ou
conforme o seu grau de complexidade.
Estrona (E1), Estradiol (E2), Estriol (E3), Progesterona,
Testosterona,
DHEA
(Dehidroepiandrosterona),
SDHEA
(Sulfato de DHEA, Androstenediona, 17OH-Progesterona
Laudos
(17 OHP), DHT (Diidrotestosterona), Melatonina, Insulina,
hGH, Grelina, PPY e Leptina, além de citocinas como: IL6,
Os laudos para as análises salivares são elaborado
elaborados com
IL2 e TNF-α, entre outras.
software específico que visam apresentar os resultados de
forma didática e de fácil interpretação. Cada resultado é
Envio das Amostras de Saliva
ao Laboratório
apresentado de forma descritiva e também gráfica de
acordo com a faixa etária do paciente. Este modelo de
As amostras de saliva deverão ser coletadas de acordo com as
laudo permite ainda que o próprio paciente possa
instruções do kit, salvo a necessidade de outra orientação
acompanhar a sua evolução no tratamento ou na resposta à
específica. Para cada horário de coleta há um tubo
terapêutica, fato que muito auxilia a adesão ao tratamento.
devidamente identificado em o paciente deverá anotar o
horário da coleta e o nome. Após o término das coletas o
material deve ser enviado diretamente para o laboratório
para análise. Devem acompanhar as amostras de saliva o
Formulário de Identificação do Paciente, médico solicitante
e os exames ou perfil a serem realizados e o Formulários de
Levantamento Indivudualizado de Sinais e Sintomas (LISS),
devidamente preenchido. Para o envio das amostras não é
necessário o envio das mesmas sob refrigeração, salvo
“Os laudos de exames salivares são
apresentados de forma descritiva e
também em gráficos de acordo com a
faixa etária do paciente.”
áquelas vindas de locais em que o SEDEX pode demorar mais
de 72 horas.
Nestes casos, as amostras devem ser
refrigeradas e enviadas acondicionadas em caixa de isopor
com gelo em gel.
Figura 7 – Diferentes tipos de laudos salivares conforme os perfis solicitados
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