de dissertação em pdf - Pós

Universidade Federal da Bahia
Escola de Medicina Veterinária
Mestrado em Medicina Veterinária Tropical
TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES EM NOVILHAS BOS TAURUS X BOS
INDICUS TRATADAS COM GnRH NO MOMENTO DA INOVULAÇÃO.
DANILO FRANCISCO CAMPOS PEREIRA
Salvador - Bahia
2009
DANILO FRANCISCO CAMPOS PEREIRA
TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES EM NOVILHAS BOS TAURUS X BOS
INDICUS TRATADAS COM GnRH NO MOMENTO DA INOVULAÇÃO.
Dissertação apresentada à Escola
de
Medicina
Veterinária
da
Universidade Federal da Bahia,
como requisito para a obtenção
do título de Mestre em Ciência
Animal nos Trópicos, na área de
Reprodução Animal.
Orientador: Prof. Dr. Antonio de Lisboa Ribeiro Filho
Salvador – Bahia
2009
ii
FICHA CATALOGRÁFICA:
PEREIRA, Danilo Francisco Campos
Transferência de Embriões em Novilhas Bos taurus X Bos indicus
tratadas com GnRH no momento da inovulação
/Danilo F. C. Pereira --Salvador: UFBA/Escola de Medicina Veterinária,
2009.
64 f: il.
Orientador: Antonio de Lisboa Ribeiro Filho
Dissertação (mestrado) – UFBA/ Escola de Medicina
Veterinária/Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos, 2009.
1. GnRH 2. Corpo Lúteo
3. Qualidade do embrião 4. Concepção 5. Receptoras I. Ribeiro Filho,
Antônio de Lisboa. II. Universidade Federal da Bahia/ Escola de
Medicina Veterinária III Título.
iii
TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES EM NOVILHAS BOS TAURUS x BOS
INDICUS TRATADAS COM GnRH NO MOMENTO DA INOVULAÇÃO
DANILO FRANCISCO CAMPOS PEREIRA
Dissertação defendida e aprovada para obtenção do grau de Mestre em Ciência Animal nos
Trópicos.
Salvador, 30 de junho de 2009.
Comissão Examinadora:
__________________________
Prof. Dr. Antonio de Lisboa Ribeiro Filho
Orientador
__________________________
Prof. Dr. Antonio Jorge Del Rey
__________________________
Dr. Max Vitória Resende
iv
Aos meus pais Reinaldo e Dora, à minha
noiva Lívia e às minhas irmãs Isa e
Júlia.
Dedico.
v
AGRADECIMENTOS
Em primeiro lugar agradecer a Deus pelo dom da vida e sabedoria.
Meus pais pela formação, não medindo esforços para este feito, sou eternamente
grato.
Lívia, noiva, companheira, colega agradeço por todo esse tempo.
Minhas irmãs, pela amizade, apoio e compreensão.
À minha sogra Aderlina, a cunhada Cecília e seu marido Fábio, meus sinceros
agradecimentos.
Ao Prof. Dr. Antônio de Lisboa Ribeiro Filho pela orientação, oportunidade,
amizade, paciência, dedicação aos ensinamentos e por acreditar no meu potencial.
Ao Prof. Dr. Marcos Chalhoub pela grata convivência e ensinamentos nesse
período.
As colegas Dr. Alexandre Floriani, pesquisador da EMBRAPA , e sua noiva MsC.
Katlen Dressen, pela amizade cultivada desde o período de estágio supervisionado de 2006.
À Intervet-Schering, através da Daniela Coutinho, por disponibilizar os hormônios
necessários para realização deste experimento.
À Agropecuária Chapadão por ceder o espaço e os animais necessários para o
experimento
À Universidade Federal da Bahia (UFBA) e à Escola de Medicina Veterinária.
Aos estagiários e amigos Luana, Alexandra, Leandro, Carolina, Ernesto e Jurandir
pela amizade e convívio marcantes para vida.
À Capes pelo apoio financeiro na qual contribuiu para conclusão da pós-graduação
À todos meu respeito e gratidão.
vi
“Não basta ensinar ao homem uma especialidade,
porque se tornará assim uma máquina utilizável e
não uma personalidade. É necessário que adquira
um sentimento, um senso prático daquilo que vale
a pena ser empreendido, daquilo que é belo, do
que é moralmente correto.”
Albert Einstein
vii
ÍNDICE
LISTA DE TABELAS....................................................................................................
ix
LISTA DE FIGURAS.....................................................................................................
x
LISTA DE ABREVIATURAS.......................................................................................
xi
RESUMO......................................................................................................................... xiii
SUMARY..........................................................................................................................
xiv
1 INTRODUÇÃO GERAL............................................................................................
1
2 REVISÃO DE LITERATURA...................................................................................
3
2.1. Fisiologia ovariana bovina.........................................................................................
3
..........................................................................................
2.2. Prostaglandina F2α (PGF2α).....................................................................................
11
........................................................................
2.3. Reconhecimento materno da gestação e o bloqueio da luteólise...............................
15
..................................................................................................
2.4. Transferência de embriões e mortalidade embrionária..............................................
17
.................................
2.5. GnRH e seus análogos, importância na performance reprodutiva.............................
20
3 ARTIGO CIENTÍFICO..............................................................................................
23
1.Introdução......................................................................................................................
24
2.Material e Métodos........................................................................................................
26
2.1. Animais e local do experimento................................................................................
26
......................................................................................................................
2.2. Delineamento experimental.......................................................................................
26
.......................................................................................................
2.3. Protocolo de superovulação das doadoras.................................................................
27
..................................................................................................................
2.4. Protocolo de sincronização das receptoras................................................................
28
................................................................................................................
2.5.Coleta das estruturas embrionárias.............................................................................
29
.........................
2.6. Diagnóstico de gestação............................................................................................
29
..............................................................................................
viii
2.7. Análise estatística......................................................................................................
29
...................................................................
3 Resultados e Discussão..................................................................................................
30
4 Conclusão......................................................................................................................
35
5 Referências Bibliográficas.............................................................................................
36
4 CONSIDERAÇÕES GERAIS....................................................................................
39
5 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................................
39
ix
LISTA DE TABELAS
Tabela 1-
Média e desvio padrão do tamanho relativo do corpo lúteo (CL) e qualidade 29
embrionária (QEMB) nas receptoras no momento da inovulação
Tabela 2-
Taxa de concepção geral de receptoras de embrião.
Tabela 3-
Taxa de concepção de receptoras de embrião do grupo-controle e grupo- 34
GnRH de acordo com a qualidade do CL no momento da inovulação.
30
x
LISTA DE FIGURAS
Figura 1Figura 2-
Esquema representativo do mecanismo de controle da reprodução (eixo 6
hipotalâmico-hipofisário-gonadal) em fêmeas bovinas
Rota para biosíntese de Progesterona nas célula luteal genérica.
9
Figura 3-
Modelo proposto para as rotas de segundo mensageiro envolvidos na 10
regulação das SLCs e LLCs.
Figura 4-
Diagrama experimental do uso um análogo de GnRH em receptoras bovinas 26
no momento da inovulação de embriões.
.
xi
LISTA DE SÍMBOLOS E ABREVIATURAS
AMPc
µm
BE
Ca++
CE
CG
CL
CLa
COX
CT
DAG
E2
eCG
ET-1
FD
FGF – I
FGF – II
FS
FSH
GH
GnRH
GTP
hCG
HDL
IA
IATF
IETS
IGF – I
IGF – II
IM
INF- τ
LDL
LH
LLC
mg
MHz
ml
MOET
OT
- Adenosina 3´, 5´- monofosfato cíclico
- micrometro
- Benzoato de estradiol
- Íon cálcio
- Células Endoteliais
- Células da granulosa
- Corpo Lúteo
- Corpo Lúteo acessório
- Enzima Cicloxigenase
- Células da teca
- Diacilglicerol
- Estradiol
- Gonadotrofina Coriônica Equina
- Endotelina-1
- Folículo Dominante
- Fator de crescimento fibroblasto I
- Fator de crescimento fibroblasto II
- Folículo Subordinado
- Hormônio Folículo Estimulante
- Hormônio do Crescimento
- Hormônio Liberador de Gonadotrofinas
- Guanosina Trifosfata
- Gonadotrofina Coriônica Humana
- Lipoproteína de alta densidade
- Inseminação Artificial
- Inseminação Artificial em Tempo Fixo
- International Embryo Transfer Society
- Fator de crescimento semelhante a insulina I
- Fator de crescimento semelhante a insulina II
- Intra-muscular
- Interferon-τ
- Lipoproteína de baixa densidade
- Hormônio Luteinizante
- Large luteum cell
- miligrama
- Megahertz
- mililitro
- Transferência de embriões por múltiplas ovulações
- Ocitocina
xii
OTR
P4
- Receptor de ocitocina
- Progesterona
PAGs
PBR
PGD2
- Gliciproteínas associadas a prenhez
- Receptor benzodiazepínico tipo periférico
- Prostaglandina D2.
PGE2
- Prostaglandina E2.
PGF2α
PGHS
PGs
PLA2
- Prostaglandina F2α
- Enzima prostaglandina G/H sintase
- Prostaglandinas
- Enzima fosfolipase A2
RNAm
SLC
STAR
TE
TNF-α
UI
VEGF A
- Ácido Ribonucléico mensageiro
- Pequena célula luteal
- Proteína de regulação aguda da esteroidogênese
- Transferência de Embriões
- Fator de necrose tumoral alfa
- Unidades Internacionais
- Fator de crescimento endotelial vascular A
xiii
PEREIRA, D.F.C. Transferência de Embriões em Novilhas Bos taurus X Bos indicus
tratadas com GnRH no momento da inovulação. Salvador, Bahia, 2009. 64 p. Dissertação
(Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos) - Escola de Medicina Veterinária,
Universidade Federal da Bahia, 2009.
RESUMO
Um dos fatores que afetaria a taxa de concepção é a produção de progesterona pelo corpo
lúteo (CL), que está diretamente relacionado com o tamanho do mesmo. O análogo de
GnRH pode incrementar a secreção de progesterona através da formação do CL acessório.
Objetivou-se com este estudo avaliar a taxa de concepção de receptoras de embriões
tratadas com um análogo de GnRH, no momento da inovulação, em relação a qualidade do
corpo lúteo e qualidade do embrião. Utilizou-se 272 receptoras de embrião, selecionadas de
acordo com a qualidade do corpo lúteo (1- pequeno, 2- médio e 3- grande) à palpação
transretal. Os embriões inovulados foram selecionados de acordo com a IETS, e somente os
viáveis (1- excelente, 2- bom e 3- regular) foram transferidos. Assim os grupos
experimentais foram divididos de acordo com a qualidade do corpo lúteo, CL1-GnRH,
CL2-GnRH, CL3-GnRH e seus respectivos controles (CL-C). Na análise estatística
utilizou-se estudo de dispersão de frequência, e para tanto empregou-se o teste do Quiquadrado (χ2), um dos pacotes estatísticos do programa SAS. A taxa de concepção das
receptoras de embrião em relação à qualidade do CL foram 43,31 e 41,38%, 56,52 e
46,67%, e 46,03 e 42,82% para CL1-C e CL1-GnRH, CL2-C e CL2-GnRH, e CL3-C e
CL3-GnRH, respectivamente. Não houve diferença estatística (p>0,05) entre as variáveis
avaliadas segundo a qualidade de CL. Portanto, não houve influência da administração de
um análogo de GnRH na taxa de concepção de receptoras de embrião, no momento da
inovulação.
Palavras-chave: GnRH, corpo lúteo, qualidade do embrião, concepção, receptoras.
xiv
PEREIRA, D.F.C. Embryo transfer in heifers Bos taurus X Bos indicus tratadas with GnRH
at the time of transfer. Salvador, Bahia, 2009. 64 p. Dissertation (Master of Animal Science
in Tropical) - School of Veterinary Medicine, Federal University of Bahia, 2009.
SUMMARY
One of the factors that may affect the conception rate is the progesterone production by the
corpus luteum (CL), which is directly related to the its size. The GnRH analogue may
increase the secretion of progesterone through the formation of an accessory CL. The
objective of this study was to evaluate the conception rate of the embryo recipients treated
with an analogue of GnRH, at the time of transfer, regarding the corpus luteum (CL)
quality. It was used 272 embryos recipients crossbred, selected according to the corpus
luteum of quality (1 - small, 2 - medium and 3 - large) to transrectal palpation. The
embryos were selected according to the IETS and only viable (1 - excellent, 2 - good 3 regular) was transferred. Thus the experimental groups were divided according to the CL
quality, CL1-GnRH, CL2-GnRH, CL3-GnRH and their respective controls (CL-C).
Statistical analysis was used to study the frequency dispersion, and is used for both the Chisquare (χ2), statistical package SAS. The conception rate of recipients of embryo for CL
quality were 43.31 and 41.38%, 56.52 and 46.67% and 46.03 and 42.82% for CL1-C and
CL1-GnRH , CL2-C and CL2-GnRH and CL3-C and CL3-GnRH, respectively. There was
no statistical difference (p>0,05) between the variables evaluated according to CL. So there
was no influence of the administration of a GnRH analogue in the conception rate of the
recipient embryo at the time of transfer.
Keywords: GnRH, corpus luteum, quality of the embryo, conception, recipients.
1
1. INTRODUÇÃO GERAL
O Brasil, maior exportador de carne e detentor do maior rebanho bovino comercial do mundo,
vem se firmando como potência pecuária no cenário mundial. Isso pode ser verificado também
na crescente utilização das biotecnologias da reprodução, produção in vitro de embriões (PIVE)
e transferência de embriões por múltiplas ovulações (MOET), desde o ano de 2001
(FERNANDES; OBA, 2007).
Segundo Viana;Camargo (2007), enquanto a maioria dos países demonstraram uma tendência
de estabilização ou até mesmo retração na utilização das biotecnologias da reprodução, o Brasil
e países da Ásia, especialmente a China, aumentaram sua utilização de forma expressiva de
2002 à 2006. Vale também salientar, que na pecúaria nacional a maioria do embriões
transferidos foram oriundos de PIVE e ainda segundo os mesmos autores, isso representaria um
valor de 196.663 embriões enquanto apenas 69.886 embriões foram oriundos de MOET, no
período de 2006.
Acompanhando todos esses avanços, surgem as necessidades de se estabelecerem pesquisas
voltadas para melhorar o aproveitamento das potencialidades reprodutivas dos animais, assim
como as doadoras e receptoras de embriões. Estas são consideradas parte limitante da utilização
das biotécnicas devido aos índices de prenhez abaixo do ideal. A média na taxa de concepção
de embriões oriundos de MOET situa-se em torno de 55% (FERNANDES, 1999), enquanto a
taxa de concepção de embriões de PIVE tem grande variação, de 20 a 60% aos 60 dias
(VARAGO et al., 2008)
Essa reduzida eficiência reprodutiva de receptoras de embriões está ligada principalmente às
falhas no processo do reconhecimento materno da gestação. Essas falhas podem estar
relacionadas aos fatores nutricionais, estresse calórico, anormalidades cromossômicas do
2
embrião, sincronia doadora-receptora e concentrações plasmáticas de progesterona nas
receptoras. Em bovinos, uma insignificante proporção de infertilidade tem sido sido atribuída ao
funcionamento inadequado do corpo lúteo (CL). O inadequado funcionamento do CL, também
chamado de deficiência lútea ou disfunção lútea, é caracterizado por ciclo estral de duração
normal e baixa concentração periférica de progesterona. Umas deficiência na secreção desse
esteróide poderia contribuir para perdas embrionárias (FONSECA et al., 2001). Segundo Mann;
Lamming (1999), a concentração de progesterona maternal não pode ser considerada como fator
determinante absoluto de perdas embrionárias precoce, pois o sucesso ou a falha na gestação
depende também de outros fatores.
Diversos estudos demonstram a necessidade de se manter concentrações plasmáticas de
progesterona dentro da normalidade ou até aumentadas para melhorar as sinalizações maternofetal para o reconhecimento da gestação. Sendo assim, estratégias utilizando análogos de
Hormônio Liberador de Gonadotrofina (GnRH), Gonadotrofina Coriônica Equina (eCG) e
Gonadotrofina Coriônica Humana (hCG) com intuito de modular a dinâmica folicular,
melhorar a função do corpo lúteo original e possibilitar a formação de um corpo lúteo acessório
têm sido utilizadas para incrementar a taxa de concepção de receptoras de embriões
(RODRIGUES et al., 2003, CHAGAS e SILVA et al., 2005; NASSER et al., 2005).
Segundo Baruselli et al. (2000) a área do CL influencia a concentração plasmática de P4 e a taxa
de concepção de receptoras de embrião bovino Bos taurus indicus x Bos taurus taurus. Desta
forma avaliar o efeito do tratamento com GnRH em receptoras de embriões com classificação
prévia de CL seria bastante interessante, já que as menores taxas de concepção se devem às
receptoras com CLs pequenos, ou seja, de qualidade regular. Em virtude de ausência de
pesquisas nesse sentido, objetivou-se com este trabalho avaliar a influência da administração de
um análogo de GnRH, no momento da inovulação, na taxa de concepção de receptoras de
embriões bovinos, com CL previamente classificado.
3
2. REVISÃO DE LITERATURA
2.1. Fisiologia ovariana bovina
O processo de foliculogênese, crescimento e maturação folicular, tem início com a formação de
folículos durante a vida fetal, ou seja, as fêmeas já nascem com um determinado número de
folículos primordiais nas suas gônadas que compõe o estoque de folículos formados durante a
fase fetal e que vão se desenvolver durante sua vida (GONÇALVES; FIGUEIREDO;
FREITAS, 2008).
O ciclo estral é o ritmo funcional dos órgãos genitais femininos que se estabelece a partir da
puberdade. Compreende as modificações cíclicas que ocorrem na fisiologia e na morfologia dos
órgãos genitais assim como no perfil dos hormônios relacionados. É caracterizado por um
período entre dois estros, mais ou menos regulares e duração média de 21 dias, variando de 17 a
25 dias em fêmeas bovinas, havendo similaridade entre taurinos e zebuínos (SIROIS;
FORTUNE, 1988). Esses ciclos ovarianos são expressos por padrões de proliferação celular,
diferenciação e transformação que acompanham o desenvolvimento folicular e formação e
regressão do corpo lúteo. As gonadotrofinas e o hormônio do crescimento são reguladores
primários da maturação folicular final e função do corpo lúteo (SCHAMS; BERLAHA, 2004).
Segundo Ginther et al. (1989), o processo contínuo de crescimento e regressão de folículos
antrais que leva ao desenvolvimento do folículo preovulatório no ovário é conhecido como
dinâmica folicular. O desenvolvimento do ciclo estral e consequente crescimento folicular é
regulado por mecanismos endócrinos e neuroendócrinos principalmente os hormônios
hipotalâmicos, hipofisários (gonadotrofinas) e os ovarianos (esteróides), deste modo, requer um
delicado balanceamento entre as complexas interações hormonais, podendo ser denominados de
mecanismos de “feedback”.
4
A dinâmica folicular ocorre por meio de ondas de crescimento e cada onda possui três fases:
recrutamento, seleção e dominância folicular. A maioria das fêmeas bovinas possuem um
padrão de duas a três ondas foliculares (SIROIS; FORTUNE, 1988), porém eventualmente
podem ser observados animais com uma, quatro ou cinco ondas foliculares (VIANA, et al.,
2000; EVANS, 2003).
Sob influência do Hormônio Folículo Estimulante (FSH), um “pool” de pequenos folículos
antrais são recrutados e iniciam o crescimento até atingirem em torno de 4 mm de diâmetro
(dias 1 a 2 do ciclo estral). Após o declínio do FSH e cerca de 2 a 3 dias do ciclo estral, poucos
folículos do recrutamento original continuam o crescimento até que somente um único folículo
(folículo dominante; FD) é selecionado enquanto os demais tornam-se estáticos e sofrem atresia
via apoptose (folículos subordinados). O FD recém selecionado demonstra capacidade de
crescimento e estereoidogênese, especificamente aumentando a secreção de estradiol (E2),
mesmo em baixos níveis de FSH. Após a seleção, o FD cresce mais que os outros folículos
ovarianos (de 8,5 mm ao final da seleção para 12 a 20 mm), sendo responsável pela alta
secreção de E2 que manterá baixas as concentrações de FSH, previnindo uma outra onda de
crescimento. Não é comum que o primeiro FD continue o crescimento e síntese de E2 por mais
de 3 a 4 dias, pois a presença de um corpo lúteo (CL) ativo no ovário e secreção de progesterona
(P4) regula negativamente o padrão de pulsos de Hormônio Luteinizante (LH) e o FD
dependente de LH também se torna atrésico. O declínio da secreção de E2 no dia 6 promove
uma perda de dominância entre os dias 7 e 8 causando outro aumento transitório de FSH,
emergência de uma nova onda folicular e seleção de um novo FD enquanto o antigo FD regride.
Se a luteólise ocorre durante o período de dominância do segundo FD, este poderia ovular,
entretando, se o CL está ainda ativo suprimindo a frequência de pulso de LH, o mesmo sofreria
atresia (MIHM, et al., 2002). Ao se desenvolver, o FD secreta quantidades crescentes de E2, que
por retroalimentação positiva sobre o hipotálamo, desencadeia a liberação de GnRH e o
consequente pico de LH, promovendo a ovulação. Vale ressaltar que o folículo dominante
somente ovula na ausência de um CL ativo no ovário, ou seja, quando em condições de baixa
progesteronemia (GINTHER et al., 1989; LUCY, 1992). Após a ovulação e por ação do LH, as
células foliculares se luteinizam, formando o corpo lúteo (MILVAE et al., 1996). Na espécie
5
bovina o crescimento do CL é extremamente rápido, que segundo Bertran et al. (2006) é
resultante do crescimento, diferenciação, reorganização e luteinização das células da teca e
granulosa remanescente do folículo ovulatório (Figura 1).
Acredita-se também que outros moduladores tais como a inibina e o fator de crescimento
semelhante a insulina tipo I (IGF-I),
encontrados em maiores quantidades no folículo
dominante, são responsáveis por exercer ação negativa sobre o eixo hipotalâmico-hipofisário,
suprimindo o crescimento folicular pela inibição da secreção de FSH (FORTUNE et al., 2001;
MIHM et al., 2002).
Durante o crescimento folicular a síntese de E2 é resultante de um trabalho coordenado entre as
células foliculares da teca (CT) e granulosa (CG). O modelo de esteroidogênese mais aceito foi
proposto por (FORTUNE; QUIRK, 1988). Nesse modelo a ligação do LH aos receptores
existentes nas células da teca estimula a atividade da enzima P450 17α-hidroxilase, que atua na
conversão da pregnenolona em androstenediona, sendo as células da granulosa incapazes de
realizar tal conversão. A androstenediona é metabolizada em 17-β-estradiol (E2) pela enzima
P450 aromatase, presente exclusivamente nas células da granulosa.
6
HIPOTÁLAMO
GnRH
Feedback negativo
da inibina na
secreçao de FSH
“Feedback”
positivo
do estradiol
ADENOHIPÓFISE
FSH
“Feedback”
negativo da
progesterona
LH
Folículo
OVÁRIO
Luteólise
Crescimento
Luteinização
PGF2α
Maturação
Estrógeno
Comportamento
do estro
Ovulação
Alterações
de estro
Ocitocina
Alterações
ÚTERO
Progesterona
Alterações
progestacionais
Figura 1. Esquema representativo do mecanismo de controle da reprodução (eixo
hipotalâmico-hipofisário-gonadal) em fêmeas bovinas (PTASZYNSKA, 2003).
O folículo possui uma camada avascular de células granulosas envolvidas por uma membrana
basal, uma camada da teca interna e outra de teca externa. A ovulação nos mamíferos é
semelhante ao processo inflamatório e ocorre durante os primeiros estágios de luteinização que
é iniciado pelo pico pré-ovulatório de LH. Durante este processo a membrana basal do folículo
se rompe e o oócito, junto com o fluído folicular são eliminados, criando uma cavidade para o
desenvolvimento do CL a partir de células da teca e granulosa que invadem a cavidade folicular
(HAYASHA et al., 2006), onde crescem (hipertrofia) e se dividem (hiperplasia), formando as
pequenas células luteais (SLC – Small Luteal Cells) e as grandes células luteais (LLC – Large
Luteal Cells), respectivamente. Estas transformações das células da teca e granulosa é referida
como luteinização e representa o estágio final de desenvolvimento dessas células.
7
O CL é uma estrutura glandular transitória que tem a capacidade de sintetizar vários hormônios,
principalmente a progesterona (P4). A cada ciclo estral as células esteroidogênicas luteais,
sintetizam e liberam P4 na circulação sistêmica com o objetivo de iniciar um processo de
quiescência na contratilidade do miométrio e desenvolvimento glandular do endométrio. Essas
modificações propiciam um meio uterino adequado para o desenvolvimento de um ou mais
conceptos, dependendo da espécie. É um tecido heterogêneo, além de células endoteliais (CE),
LLC e SLC, o mesmo é composto por fibroblastos, células de músculo liso e do sistema imune
(WILTBANK, 1994; FIELDS; FIELDS, 1996; SCHAMS; BERLAHA, 2004).
A SLC se caracterizam por medirem menos que 20 µm, liberarem baixas concentrações de P4 e
serem responsivas ao LH, já as LLC medem de 20 a 30 µm, produzem altas quantidades de P4 e
não serem responsivas ao LH. Um estudo avaliou a porcentagem das LLC e SLC entre os dias 3
a 5, 10 a 12, 15 a 18 e 19 a 20 do ciclo estral e determinou porcentagens de 1,6, 5,1, 4,5 e 2,2%
para as LLC e de 98,3, 95, 95,4 e 97,7% para as SLC, respectivamente. Observaram que as LLC
mesmo presentes em pequena porcentagem ocupam aproximadamenre 70% da área total do CL
e secretam 85% da P4 produzida pelo CL. Evidenciaram que algumas SLC são transformadas
em LLC em corpos lúteos maduros. A reorganização celular, objetivando o preparo das células
luteais para a síntese crescente de P4 ao longo do ciclo estral, também foi caracterizada por uma
diminuição na expressão das enzimas que convertem P4 em E2 (P450 17α-hidroxilase e P450
aromatase), por um aumento na expressão das enzimas necessárias para a conversão do
colesterol em P4 (P450scc e a 3β-HSD) e aumento das proteínas transportadoras de colesterol
para o interior da membrana mitocondrial (FORTUNE; QUIRK, 1988; NISWENDER et al.,
2000).
A regulação da formação do CL pode estar direta ou indiretamente ligada à fatores de
crescimento voltados para a geração de uma nova rede de vasos sanguíneos (angiogênese) pela
migração e proliferação das CE de vasos pré-existentes. Os fatores de crescimento mais
importantes parecem ser o fator de crescimento endotelial vascular A (VEGF A), os fatores de
8
crescimento semelhantes à insulina (IGF-I e IGF-II) e o fator de crescimento fibroblástico
(FGF-I e FGF-II) (SCHAMS; BERLAHA, 2004).
O decréscimo de IGF-I plasmática, gera uma redução no tamanho do CL em animais com
deficiência de receptores para o hormônio do crescimento (GH), isso porque esse hormônio é o
responsável pela liberação de IGF-I. Esse efeito negativo sobre o CL se deve ao fato de que o
IGF-I é responsável por incrementar a síntese de progesterona em cultivo de células luteais
(CHASE et al., 1998). Além disso, após a indução da luteólise há um significativo aumento de
IGF-I plasmática, isso porque a redução da P4 estimula a produção de RNAm para IGF-I, esse
mecanismo seria uma tentativa do organismo de conter a rápida redução da P4 e com isso salvar
a gestação (HASTIE; HARESIGN, 2006).
O substrato para a produção de P4 é o colesterol, sintetizado principalmente pelo fígado e
transportado para tecidos esteroidogênicos nas formas de lipoproteínas de alta densidade (HDL)
e baixa densidade (LDL) e os ésteres de colesterol. Essas lipoproteínas constituem as fontes
mais comuns de disponibilidade de colesterol para a produção dos hormônios esteróides no CL.
A captura da LDL pelas células esteroidogênicas luteais ocorre por endocitose, uma via bastante
eficiente que contribui para captura de grande quantidade de colesterol, pois cada molécula de
LDL disponibiliza aproximadamente 2.500 moléculas de colesterol. O HDL extracelular
encontra-se conjugado às proteínas do plasma, tal complexo se liga à membrana celular
promovendo o transporte do HDL para dentro da célula. O colesterol disponível no citosol da
célula é utilizado como substrato para a esteroidogênese. O colesterol é transportado para a
membrana mitocondrial por proteínas específicas. Na membrana mitocondrial interna o
colesterol interage com a enzima P450scc transformando-se em pregnenolona. Esta é
transportada para o retículo endoplasmático liso e por ação da enzima 3β-HSD é convertida em
P4 (Figura 2; NISWENDER et al., 2000; AYAD et al., 2007).
9
Figura 2. Rota para biosíntese de Progesterona na célula luteal genérica. Três fontes de
colesterol podem ser usadas como substrato: (1) proteína de baixa densidade (LDL); (2)
proteína de alta densidade (HDL); ou a hidrólise de estoques de ésteres de colesterol pela
colesterol esterase (CE). O colesterol livre é transportado para a mitocôndria aparentemente
com o envolvimento de elementos do citoesqueleto e proteínas carreadoras de esterol. O
colesterol é transportado para o interior da membrana mitocondrial, e este processo parece
envolver a proteína esteroidogênica regulatória aguda (StAR), receptores benzodiazepínicos
periférios e endozepinas. O colesterol é convertido em pregnenolona pela citocromo P450 (4),
transportado para o exterior da mitocôndria e é convertido a progesterona pela 3β-HSD (5) que
está presente no retículo endoplasmático liso. A progesterona deixa a célula, aparentemente, por
difusão. ACAT: acetil coenzima A; colesterol aciltransferase (NISWENDER, 2002).
Segundo Niswender (2002), três proteínas essenciais estão envolvidadas no transporte do
colesterol para a membrana mitocondrial, sendo elas: a proteína de regulação aguda da
esteroidogênese
(StAR;
“Steroidogenic
Acute
Regulatory
Protein”),
o
receptor
10
benzodiazepínico tipo periférico (PBR) e a endozepina, uma ligante natural da PBR. A StAR se
ligaria ao colesterol no citoplasma e o transportaria para a membrana mitocondrial externa. O
PBR conjugaria com esse colesterol realizando o transporte para membrana mitocondrial
interna. A endozepina também parece estar envolvida na regulação da taxa de transporte do
colesterol para a membrana interna e no papel inicial dos efeitos estimulatório da Proteína
Kinase A (PKA) sobre a esteroidogênese.
O transporte do coletesterol para a membrana mitocondrial é dependente da fosforilação da
proteína StAR e PBR. Elas possuem dois sítios de fosforilação, um fosforilado pela PKA e
outro pela Proteína Kinase C (PKC). A ligação do LH a receptores específicos nas SLC estimula
a fosforilação da StAR e do PBR pela PKA, favorecendo o aumento no transporte de colesterol.
Em contrapartida a ligação do LH a receptores específicos nas LLC não aumenta a secreção de
progesterona. Assim, o LH parece modular a síntese de P4 não pelo aumento na expressão de
enzimas esteroidogênicas mas por facilitar a disponibilidade e o transporte de colesterol do
citoplasma para a membrana mitocondrial. Durante a luteólise, a protaglandina F2α (PGF2α)
exerce um efeito contrário ao LH na célula luteal, pois estimula a fosforilação da StAR pela
PKC, contribuindo para a redução no transporte do colesterol para a membrana mitocondrial e
causando um influxo de cálcio (Ca++) levando à degeneração celular (Figura 3; NISWENDER,
2002).
11
Figura 3. Modelo proposto para as rotas de segundo mensageiro envolvidos na regulação das
SLCs e LLCs. Nas pequenas células luteais, a adesão do LH ao seu receptor ativa a rota de
proteína quinase A – segundo mensageiro, que estimula a síntese de progesterona. A ativação
farmacológica da PKC inibe a síntese de progesterona nas pequenas células luteais, embora os
fatores que ativem a PKC não estão elucidados. Nas grandes células luteais, a adesão do LH aos
seus receptores não aumentam as concentrações intracelulares de cAMP ou o aumento da
síntese de progesterona. A adesão da PGF2α aos seus receptores, ativam a PKC, que apresenta
efeito inibitório para a síntese de progesterona e causam influxo de Ca++ permitindo a
degeneração celular. AC: adenilato ciclase; DAG: diacilglicerol; Gp: proteína G que causa a
estimulação da fosfolipase C; Gs: proteína G que causa a estimulação da adenilato ciclase; IP3:
inositol 1,4,5-trifosfato; PIP2: fosfatidilinositol 4,5-bifosfato; PLC: fosfolipase C
(NISWENDER, 2002).
2.2. Prostaglandina F2α (PGF2α)
As prostaglandinas são consideradas compostos ecosanóides bioativos derivados de ácidos
graxos com 20 carbonos, que desempenham funções por ações parácrinas e autócrinas em
12
diversos órgãos e tecidos do organismo. O ácido aracdônico (AA) é armazenado na forma de
fosfolipídios da membrana celular, e é o principal precursor das PGs. A primeira etapa
envolvendo a formação das PGs é a liberação hidrolítica do AA mediado pelos membros da
família das enzimas fosfolipase A2 (PLA2), que se ligam aos fosfolipídios de membrana, sendo
o Ca++ essencial nesse processo, não para a atividade enzimática, mas para a ligação com os
fosfolipídios de membrana e a ativação da proteína kinase C (PKC), que juntos fosforilam
PLA2 que cliva o AA. A membrana nuclear e o retículo endoplasmático liso são os principais
locais para o metabolismo do AA iniciado pelas PLA2 em células ativadas. Esses são os
principais locais para ação da enzimas ciclooxigenases (COX) e algumas sintases terminais.
Após o processo de liberação, os AA são convertidos em PGH2 pela ação da prostaglandina
G/H sintase (PGHS), que também é conhecida como COX, e está situada na superfície luminal
do retículo endoplasmático e membrana interna e externa do envoltório nuclear. Após a
biossíntese da PGH2 , esta é convertida em PGF2α pela ação PGF sintetase. Assim como as
outras PGs, a PGF2α também é liberada imediatamente após sua síntese e não são armazenadas
(GOFF, 2004).
As ações das PGs são de extrema importância nas funções reprodutivas das fêmeas. Dentre
essas funções estão a ovulação, luteólise, estabelecimento e manutenção da prenhez e parto
(BANU et al., 2005).
É de amplo conhecimento que a PGF2α é o principal fator luteolítico in vivo em bovinos
(SILVIA et al., 1991; THATCHER et al., 2001) e a distinção entre mudanças funcionais e
estruturais faz-se necessário para entender o processo como um todo. As LLCs provavelmente
respondem ao sinal luteolítico, mas as comunicações entre LLCs e SLCs, bem como entre
células luteais e não luteais, parecem ser requeridas para a regressão completa se proceder
(FERNANDES; FIGUEIREDO, 2007). Dentre as não luteais, as células endoteliais e seus
produtos, como a endotelina-1 (ET-1) são necessárias para a manifestação dos efeitos
luteolíticos da PGF2α. Essa proteína é um potente vasoconstritor, inibe atividade
esteroidogênica, reduz o fluxo sanguíneo durante a luteólise inicial pela constrição arteriolar,
13
leva a hipóxia, e, por conseguinte a apoptose celular. A ET-1, que revestem os vasos
sanguíneos, apresenta receptores específicos nas LLCs e SLCs (MILVAE, 2000).
Segundo Korzekwa et al. (2008), os mecanismos que induzem a regressão luteal incluem a
redução na síntese de P4, a diminuição da expressão de receptores de hormônios luteotrópicos, a
redução na captação de colesterol pelas células, a inibição do transporte através das células e/ou
em toda membrana mitocondrial, a inibição da expressão e atividade das enzimas
esteroidogênicas, que são requeridas para a biossíntese de P4 e finalmente, o aumento da
concentração de cálcio (Ca++) livre em ambos tipos de células luteais esteroidogênicas.
Durante o período de luteólise em ovinos, a ocitocina (OT) desempenha um papel fundamental,
entretanto em bovinos, depois de estudos utilizando o CAP-527 (antagonista para o receptor de
OT) antes e durante o período de luteólise, a fase luteínica e o ciclo estral não foram alterados.
Assim, pode-se sugerir que em bovinos, que a OT desempenha um papel facilitador e não
essencial para o desencadeamento da luteólise, modulando a amplitude dos pulsos de PGF2α
durante a luteólise (KOTWICA et al., 1999; OKUDA; MIYAMOTO; SKARZINKY, 2002).
Em ruminantes, aproximadamente 98% da PGF2α produzida pelo útero é metabolizada em 13,
14-diidro-15-ceto-prostaglandina F2α (PGFM) na primeira passagem pelos pulmões. A PGFM
possui uma meia-vida de oito minutos na circulação periférica. A PGF2α, PGE ou ambas são
carreadas pela vias vasculares endometriais para o ovário e transportada para a artéria ovariana
através do caminho veno-arterial local denominado de plexo útero-ovariano (BANU et al.,
2005).
De modo geral, o processo de luteólise se dá pela liberação de OT da neurohipófise, que
estimula a liberação de PGF2α pelo endométrio e esta por sua vez, desencadeia a liberação de
OT pelo CL, que promove a liberação de PGF2α endometrial, caracterizando um sistema de
14
retroalimentação positiva. Neste modelo, a luteólise tem início devido ao aumento do número de
receptores para OT (OTR) no endométrio, induzido principalmente pelo E2. De fato,
demonstrou-se com uma série de estudos in vivo que o E2 é capaz de estimular a expressão de
receptores endometriais de OT (BERTAN et al., 2006). Segundo Goff (2004), o tratamento in
vivo com E2 induz um aumento inicial na expressão de OTR, porém se o tratamento é
continuado por vários dias, diminui a concentração de OTR, ou seja, o E2 causa um aumento da
expressão de OTR por um curto período, porém esse efeito não pode ser mantido por mais de 2
dias.
De acordo com Banu et al. (2003), foi evidenciada a existência de uma proteína transportadora
de PGF2α em fêmeas bovinas. Essa proteína interage com a PGF2α, transportando-a pelas vias
vasculares do endométrio para o ovário. No endométrio a expressão do RNAm para tal proteína
foi baixo entre os dias 1 e 9, moderado entre os dias 10 a 15 e máximo entre 16 e 18 do ciclo
estral, coincidindo com a luteólise.
É bem determinado que a PGF2α não induz a luteólise nos primeiros cinco dias do ciclo estral,
quando o CL está na fase inicial de desenvolvimento. Essa carência de responsividade do CL
não é atribuída a uma deficiência de receptores, pois os mesmos estão expressos. Sugere-se
então, sugerir que existe uma incompleta vascularização do CL ou incompleta diferenciação dos
mecanismos degenerativos nas células luteais (FERNANDES; FIGUEIREDO, 2007).
Existem ainda, evidências da participação do sistema imune na luteólise. No modelo de
regressão estrutural do CL em ruminantes, segundo Meidan; Milvae; Weiss (1999), as células
endoteliais apresentam receptores para a PGF2α e quando estimuladas pela PGF2α promovem o
recrutamento e a migração de monócitos para o CL. A migração e maturação dos macrófagos é
acompanhada pela ativação da fator de necrose tumoral α (TNFα) que ligado a seu receptor
específico presente na maioria das células que constituem o CL desencadeando a apoptose. As
células imunológicas produzem citocinas que podem modificar a síntese de P4 e prostaglandinas
15
pelas células luteais. Podem apresentar também efeito citotóxicos diretos, e as células mortas
são fagocitadas por macrófagos. Também, fatores secretados pelas células luteais podem servir
como quimiostáticos para as células imunes, aumentando ou suprimindo suas funções (PATE,
1996).
2.3. Reconhecimento materno da gestação e o bloqueio da luteólise
Entende-se por placentação a forma como as membranas associadas ao embrião ou feto se
desenvolvem e se ligam ao endométrio. Nos ruminantes artiodáctilos (bovinos, caprinos, ovinos
e cervídeos) a placentação é do tipo sinepiteliocorial quanto as camadas teciduais da barreira
materno-fetal, um processo de implantação levemente invasivo, em que seis camadas teciduais,
endotélio materno, tecido conjuntivo materno, epitélio materno, trofoblasto, tecido conjuntivo
embrionário e endotélio embrionário, estabelecem limites entre as circulações fetal e materna.
Observa-se que a evolução quanto ao tipo de placentação nas espécies mamíferas tem
determinado o mecanismo pelo qual o concepto deve sinalizar sua presença a mãe. Associada à
placentação,
desenvolve-se
a
implantação
embrionária,
processo
determinante
no
estabelecimento da comunicação materno embrionária em cada espécie (HAFEZ;HAFEZ, 2004;
MARQUES et al., 2007).
A implantação do embrião junto ao útero materno é uma adaptação embrionária associada com
a viviparidade, requerida para sustentar a nutrição e proteção do concepto durante a gestação e o
reconhecimento materno se dá no período pré-implantação (MARQUES et al., 2007).
A sinalização entre o concepto e o organismo materno é importante para vários aspectos da
prenhez. O embrião é capaz de interferir na fisiologia materna já no início da prenhez (GOFF,
2002). Essa capacidade de sinalização, pelo qual o concepto libera uma substância capaz de
bloqueiar a secreção de PGF2α e assim manter a síntese e liberação da P4, prolongando o
período funcional do CL. De acordo com Santos et al. (2004), a progesterona é essencial para o
16
orquestramento do ambiente histotrófico e para a nutrição do concepto, sendo o mais importante
efeito da P4 o bloqueio da luteólise, pois é determinante no aumento do desenvolvimento do
concepto. A P4 também inibe a luteólise pela diminuição da sensibilidade dos receptores de OT.
Binelli; Thatcher (1999) afirmaram que durante o período crítico, as células epiteliais do
endométrio seguem uma programação pré-estabelecida para liberar pulsos luteolíticos de
PGF2α a menos que o concepto envie sinais anti-luteolíticos apropriados para bloquear a
secreção de PGF2α.
A principal substância secretada pelo concepto para o reconhecimento materno da gestação é
uma glicoproteína produzida pelas células mononucleadas da trofoectoderme, ou seja, são
secretadas pelo trofoblasto, inibindo assim a secreção pulsátil de PGF2α (THATCHER et al.,
2001; SANTOS et al., 2004; AYAD et al., 2007). Essa substância denominada de interferon- τ
(INF- τ) tem seu mecanismo de ação baseado na supressão da expressão dos receptores
endometriais para a OT e também a competição pelos sítios de ligação desses mesmos
receptores, culminando na inibição da síntese de PGF2α (DEMMERS et al., 2001), e além
disso, o INF- τ causa produção de proteínas pelas glândulas uterinas, que acredita-se ser
importante para a sobrevivência embrionária pré-implantação (SENGER, 1999) .
Nos bovinos observa-se a secreção de INF- τ por volta do sétimo dia de gestação, atingindo pico
máximo entre os 14° e 18°, além disso essa produção de INF- τ se faz necessária para que o
blastocisto evolua da forma esférica para a tubular, num rápido alongamento, com a formação
das membrana embrionárias antes mesmo da implantação. Assim o reconhecimento materno é
estabelecido por meio de mecanismo bioquímicos, morfológicos e fisiológicos (MARQUES et
al., 2007).
Segundo Ayad et al. (2007), uma maior concentração de P4 poderia promover um ambiente
uterino mais adequado para o desenvolvimento embrionário, resultando em um maior concepto
17
e que produz mais proteínas trofoblásticas, tais como o INF- τ e as glicoproteínas associadas a
prenhez (PAGs), que diferente do INF- τ atinge a circulação maternal e estão sendo usadas para
diagnósticos de prenhez.
De acordo com Fields; Fields (1996), a concentração plasmática de P4 durante a fase luteal,
afetou o volume das secreções uterinas, a taxa de desenvolvimento do concepto e a capacidade
do concepto de sintetizar INF- τ. Foi também demonstrado por Kerbler et al. (1997) uma
tendência para a elevação na síntese de INF- τ pelo concepto oriundo de novilhas tratadas com
hCG e que concentrações plasmáticas de P4 estiveram positivamente correlacionadas com a
síntese de INF- τ pelo embrião, sugerindo que maiores concentrações maternas de P4 podem
propiciar uma ambiente mais adequado para o desenvolvimento do mesmo.
2.4. Transferência de embriões e mortalidade embrionária
O período embrionário é definido como período que compreende desde a concepção até os
estágios finais da diferenciação celular, por volta de 42 dias na espécie bovina. Esse período é
seguido pelo período fetal, que se encerra com o término da gestação. Estudos realizados na
década de 70 permitiram a observação de que os principais desafios biológicos para o
estabelecimento da prenhez nos rebanhos bovinos ocorre no período embrionário,
especialmente, entre os dias 15 e 19 após a fecundação, período que posteriormente foi
designado como “período crítico” (BINELLI et al., 2001).
Segundo Goff (2002), a importância do período crítico está relacionada a alta incidência de
perdas embrionárias, que provocam decréscimo na eficiência reprodutiva do rebanho e causam
impacto econômico. Em vacas leiteiras a média na taxa de nascimento por inseminação situa-se
em torno de 55%, indicando assim uma perda embrionária e fetal em torno de 40%, sendo que
normalmente a taxa de fertilização situa-se em 90% (GÁBOR et al., 2008). A taxa de concepção
de receptoras de embriões situa-se em torno de 50% em protocolos de transferência de embriões
18
(TE) convencional, variando conforme fatores relacionados com qualidade morfológica do CL
avaliado (CHALHOUB et al., 2007; RIBEIRO FILHO et al., 2007; SILVA et al., 2007),
qualidade embrionária (SANTANA, et al., 2007), estágio de desenvolvimento embrionário
(PORTELA et al., 2007), intervalo entre a coleta e a inovulação (FEITOSA et al., 2008) e
morfologia da cérvix, do tonus uterino e do local de deposição do embrião (RODRIGUES et al.,
2008).
As doenças caracterizadas por hipertermia e/ou aquelas que se instalam no ambiente uterino
reduzem a sobrevivência embrionária e fetal. O momento de grande susceptibilidade aos vários
agentes infecciosos coincide com a perda da zona pelúcida pelos embriões, ou seja entre 8 e 9
dias após a fertilização. Apesar da importância das doenças infecciosas, a maioria, cerca de 70%
da mortalidade embrionária têm origem não infecciosa (CHRISTIANSON, 1992).
Vários fatores não infecciosos podem influenciar direta ou indiretamente a taxa de
sobrevivência embrionária após TE, como anormalidades cromossômicas, efeito da doadora,
estádio e qualidade dos embriões transferidos, método e local de transferência, sincronia
doadora-receptora, estado nutricional, concentrações séricas de P4 da receptora e estresse
calórico (GALIMBERTI et al., 2001).
Bovinos que não apresentam problemas de parto e se matém em um estado nutricional
adequado, normalmente voltam a ciclar 50 dias pós-parto. A nutrição é fator chave em todos os
aspectos da reprodução e principalmente para receptoras de embrião. O escore de condição
corporal (escala 1 a 5; 1, extremamente magro; 5, extremamente gordo) influencia a taxa de
concepção em receptoras de embrião, com resultados significativamente melhores em animais
com escore 2 e 3 (53 e 55% respectivamente) em relação ao escore 1 (44%) e resultados
intermediários com escore 4 ou maior (47%) (LOONEY et al., 2006).
19
Segundo Portela et al. (2007), as taxas de concepção para mórula compacta, blastocisto inicial e
blastocisto foram, respectivamente, 47,55%, 54,79% e 54,46%. Santana et al. (2007)
demonstraram que as taxas de concepção de embriões de qualidade excelente, boa e regular
diferem significativamente, com resultados de 55%, 41,25% e 39,32% respectivamente. Esses
dados corroboram com estudos realizados por Mann; Lamming, (1999), pois o embrião inicia a
produção de INF- τ quando a blastocele é formada, além do que, embriões de qualidade
excelente e boa produzem maior quantidade de INF- τ quando comparados com embriões de
pior qualidade.
Looney et al. (2006) observaram taxas de concepção maiores em receptoras de embriões que
tiveram seu estro coincidindo com a doadora ou 12 a 24 h antes quando comparadas com
receptoras que demonstraram estro 12 h após a doadora. Rodrigues et al. (2007) também
demonstraram a influência da sincronia doadora-receptora sobre as taxas de concepção de
receptoras, sendo estas 43,6%, 41,5% e 37,6% para embriões invulados no D0, D+1 e D-1
respectivamente, não havendo diferença estatística entre o embriões D0 e D+1.
O aumento da concentração de progesterona na circulação com o intuito de melhorar a taxa de
concepção tem sido estudada por vários pesquisadores porém, a administração de agentes
luteotrópicos durante o ciclo estral tem produzido diferentes resultados sobre a taxa de
concepção, como é caso da administração de gonadotrofina coriônica equina (eCG). Nogueira et
al. (2004) demonstraram que atualmente existe um declínio na taxa de concepção em receptoras
de embriões que receberam 400 ou 600 UI de eCG comparado com o grupo controle quando
administrado eCG 2 dias antes da PGF2α (dias 7 a 12 do ciclo estral) e Solano et al. (2004)
observaram que existe uma grande variação na concentração plasmática de P4 em receptoras de
embriões gestantes, desde 0,58 a 16 ng/mL, indicando que a P4 no dia da TE não pode estar
correlacionada com a taxa de gestação. Entretanto Bó et al. (2002) relataram uma melhoria na
taxa de concepção de receptoras com múltiplos CLs e com concentração plasmática de P4
aumentada induzida pela administração de eCG na emergência da onda folicular. A onda
folicular foi sincronizada com implante de P4 e administração de estradiol, passados 5 dias
20
foram administrados eCG e PGF2α, remoção do implante no dia 8, estradiol no dia 9, e TE em
tempo fixo no dia 17. Baruselli et al. (2001) demonstraram que o tratamento com eCG quatro
dias antes do estro aumentou o número de ovulações, a P4 plasmática, e a taxa de concepção em
receptoras Bos indicus cruzadas sincronizadas com implantes de P4, benzoato de estradiol, e
PGF2α e embriões transferidos sem detecção de estro.
Apesar das controvérsias entre várias pesquisas realizadas, estratégias para solucionar os
problemas relacionados com a manutenção e/ou elevação de concentração plasmática de P4
ainda são bastante abordadas em recentes pesquisas. Incluem nesse contexto a utilização de
Flunixin Meglumine (FREITAS, 2007) e também a administração de análogos de GnRH em
programas de IATF e TE (BARTOLOME et al., 2005).
2.5. GnRH e seus análogos, importância no desempenho reprodutivo
A reprodução é um fator crítico para a manutenção e aumento da eficiência produtiva e entender
o mecanismo que controla as funções reprodutivas em animais domésticos é de suma
importância. O GnRH assume importância como uma molécula chave para o controle da
reprodução, sendo liberado no portal dos vasos hipofisários, regulando assim a síntese e
secreção das gonadotrofinas, FSH e LH (SCHNEIDER et al., 2006; SZENCI et al.,2006;
OKAMURA; OHKURA, 2007).
O primeiro tratamento com GnRH é destinado para indução da ovulação do folículo dominante
e com isso provocar uma emergência de uma nova onda folicular. Entretanto a ovulação não
ocorre com frequência em resposta ao primeiro tratamento com GnRH; aproximadamente 50%
de vacas de corte tratadas com GnRH ovularam. Isso acontece provavelmente devido ao
diâmetro do folículo no momento da administração do GnRH, que está relacionado à expressão
de receptores de LH nas células da granulosa. A expressão de receptores ocorre no momento do
21
desvio folicular, aproximadamente 3 dias após a emergência da onda folicular, quando o
folículo dominante já atingiu 8,5 mm de diâmetro (COLAZO et al., 2008).
Diversos análogos de GnRH (Buserelina, Gonadorelina, Fertirelina, dentre outros) têm sido
sintetizados quimicamente, e nos bovinos as principais utilizações desses hormônios estão
relacionadas com a sincronização de estro e luteinização de folículos em programas de TE e
IATF. Neste caso é administrado com o intuito de modular o padrão de desenvolvimento
folicular, prolongando a vida útil do corpo lúteo, e/ou também induzindo a formação de CL
acessório (CLa); diminuindo a secreção de estradiol, reduzindo a intensidade do mecanismo
luteolítico, ou seja, constituindo-se em alternativas que contribuem para melhorar as chances do
embrião manter-se viável, produzindo INF- τ necessário para o reconhecimento materno da
gestação (WILLARD et al. 2003).
A maioria dos protocolos elaborados para aumentar a taxa de prenhez em vacas inseminadas
artificialmente ou em receptoras de embrião teve por objetivo a otimização da função luteínica
por meio de uma única aplicação de um único agente luteotrófico. Entretanto em razão das
mudanças metodológicas e das circunstâncias específicas de cada estudo, nem sempre o uso de
agentes luteotróficos causou aumento na taxa de prenhez, embora promovam a elevação da
progesteronemia (MACHADO et al., 2006)
Segundo Galimberti et al. (2001), a aplicação do agonista de GnRH (Buserelina) quatro dias
após a inovulação não modificou a taxa de gestação em novilhas e/ou vacas receptoras de
embriões. Portanto, o uso de um agonista de GnRH pode ou não incrementar a taxa de gestação
em programas de TE e IATF, considerando que envolve uma complexa interação entre embrião,
ambiente uterino e CL. Muitas vezes a P4 é suficiente em criar um ambiente uterino adequado
para o embrião, porém o mesmo não consegue responder com a produção de INF- τ suficiente
para bloquear os mecanismos luteolíticos, ou pelo contrário, a secreção de P4 está abaixo do
22
ideal, o que também é determinante para o fracasso da gestação, pois o embrião secreta o INF- τ
em condições inadequadas de P4 (MACHADO, 2005).
23
3 - ARTIGO CIENTÍFICO
Transferência de embriões em novilhas Bos taurus X Bos indicus tratadas com GnRH no
momento da inovulação
Embryo transfer in heifers Bos taurus X Bos indicus treated with GnRH at the time of transfer
PEREIRA, Danilo F. Campos1, VASCONCELOS, Lívia Vieira1, CHALHOUB, Marcos2,
FEITOSA, Leandro3, RODRIGUES, Alexandra Soares3, PINHEIRO, Luana Machado3,
RIBEIRO FILHO, Antonio de Lisboa2
1
Médico (a) Veterinário (a) Mestrando (a) em Ciência Animal nos Trópicos – EMEV/UFBA
Médico Veterinário – Prof. Adjunto do Departamento de Patologia e Clínicas – EMEV/UFBA
3
Graduando (a) de Medicina Veterinária - EMEV/UFBA
2
e-mail para correspondência: [email protected]
RESUMO
Objetivou-se com este estudo avaliar a taxa de concepção de receptoras de embriões tratadas
com um análogo de GnRH, no momento da inovulação, em relação a qualidade do corpo lúteo.
Utilizou-se 272 receptoras de embrião, selecionadas de acordo com a qualidade do corpo lúteo
(1- pequeno, 2- médio e 3- grande) à palpação transretal. Os embriões inovulados foram
selecionados de acordo com a IETS, e somente os viáveis (1- excelente, 2- bom e 3- regular)
foram transferidos. Assim os grupos experimentais foram divididos de acordo com a qualidade
do corpo lúteo, CL1-GnRH, CL2-GnRH, CL3-GnRH e seus respectivos controles (CL-C). Na
análise estatística utilizou-se estudo de dispersão de frequência, e para tanto empregou-se o teste
do Qui-quadrado (χ2), um dos pacotes estatísticos do programa SAS. A taxa de concepção das
receptoras de embrião em relação à qualidade do CL foram 43,31 e 41,38%, 56,52 e 46,67%, e
46,03 e 42,82% para CL1-C e CL1-GnRH, CL2-C e CL2-GnRH, e CL3-C e CL3-GnRH,
respectivamente. Não houve diferença estatística entre as variáveis avaliadas segundo a
qualidade de CL. Portanto, não houve influência da administração de um análogo de GnRH na
taxa de concepção de receptoras de embrião, no momento da inovulação.
Palavras-chave: GnRH, concepção, transferência de embriões, receptoras
24
SUMMARY
The objective of this study was to evaluate the conception rate of the embryo recipients treated
with an analogue of GnRH, at the time of transfer, regarding the corpus luteum (CL) quality. It
was used 272 embryos recipients crossbred, selected according to the corpus luteum of quality
(1 - small, 2 - medium and 3 - large) to transrectal palpation. The embryos were selected
according to the IETS and only viable (1 - excellent, 2 - good 3 - regular) was transferred. Thus
the experimental groups were divided according to the CL quality, CL1-GnRH, CL2-GnRH,
CL3-GnRH and their respective controls (CL-C). Statistical analysis was used to study the
frequency dispersion, and is used for both the Chi-square (χ2), statistical package SAS. The
conception rate of recipients of embryo for CL quality were 43.31 and 41.38%, 56.52 and
46.67% and 46.03 and 42.82% for CL1-C and CL1-GnRH , CL2-C and CL2-GnRH and CL3-C
and CL3-GnRH, respectively. There was no statistical difference between the variables
evaluated according to CL. So there was no influence of the administration of a GnRH analogue
in the conception rate of the recipient embryo at the time of transfer.
Keywords: GnRH, conception, embryo transfer, recipients
1- INTRODUÇÃO
A rentabilidade de propriedades produtoras de leite e carne está diretamente dependente da
eficiência reprodutiva, pois esta afeta a produção leiteira e o número de nascimento de bezerros
(SANTOS et al., 2004) sendo que a prenhez é o sucesso resultante, seja pela transferência de
embriões (TE), inseminação artificial (IA) ou monta natural das fêmeas bovinas. Dois
mecanismos contribuem para essa eficiência: o efeito luteotrópico do hormônio luteinizante
(LH) sobre o corpo lúteo (CL) bovino no aumento da progesterona (P4) plasmática e a
prevenção da luteólise que ocorre por meio da liberações de prostaglandina F2α (PGF2α)
devido a estimulação dos receptores de ocitocina do endométrio pela ocitocina secretada pelo
CL. Esses receptores aumentam a concentração na metade da fase luteal a medida que os
folículos aumentam a secreção de estradiol (E2). Este também exerce efeito negativo via
mecanismos antiluteotrópicos na manutenção de baixas concentrações de LH no diestro
(SMITH; GRIMMER, 2002).
25
Todavia o estabelecimento da prenhez depende do funcionamento efetivo do sistema de
comunicação endócrina entre a unidade materna e o embrião. O desenvolvimento do embrião
depende da qualidade do embrião e de um adequado ambiente uterino em que o mesmo se
desenvolve. O principal hormônio que controla o ambiente uterino é a P4 e sua concentração
plasmática maternal está vinculada ao desenvolvimento inicial do embrião (MANN et al.,
2003).
Muitos estudos relataram que o fator mais importante no reconhecimento e manutenção da
gestação em vacas é o interferon tau (INF- τ). Kerbler et al. (1997) demonstraram uma
tendência para a elevação na síntese de interferon pelo concepto oriundo de novilhas tratadas
com hCG e que as concentrações plasmáticas maternas de progesterona estiveram positivamente
correlacionadas com a síntese de interferon tau pelos conceptos, sugerindo que maiores
concentrações maternas de progesterona podem propiciar uma ambiente mais adequado para o
desenvolvimento do embrião.
Desta forma há necessidade de se manter concentrações plasmáticas de progesterona dentro da
normalidade ou até aumentadas para melhorar as sinalizações feto-maternal para o
reconhecimento da gestação. Sendo assim, estratégias utilizando análogos de Hormônio
Liberador de Gonadotrofina (GnRH), Gonadotrofina Coriônica Equina (eCG) e Gonadotrofina
Coriônica Humana (hCG) com intuito de modular a dinâmica folicular, melhorar a função do
corpo lúteo original e possibilitar a formação de um corpo lúteo acessório tem sido utilizada
para incrementar a taxa de concepção de receptoras de embriões (RODRIGUES et al., 2003,
CHAGAS e SILVA et al., 2005; NASSER et al., 2006).
Segundo Baruselli et al. (2000) a área do CL influencia a concentração plasmática de P4 e a taxa
de concepção de receptoras de embrião bovino Bos taurus indicus x Bos taurus taurus. Desta
forma avaliar o efeito do tratamento com GnRH em receptoras de embriões com classificação
26
prévia de CL seria bastante interessante, já que as menores taxas de concepção se devem às
receptoras com CLs pequenos, ou seja, de qualidade regular. Em virtude de ausência de
pesquisas nesse sentido, objetivou-se com este trabalho avaliar a influência da administração de
um análogo de GnRH, no momento da inovulação, na taxa de concepção de receptoras de
embriões bovinos, com CL previamente classificado.
2. MATERIAL E MÉTODOS
2.1. Animais e local do experimento
Foram utilizadas 272 receptoras mestiças Bos taurus taurus X Bos taurus indicus e Bos taurus
indicus oriundas de propriedades localizadas na chapada Diamantina, no Estado da Bahia,
durante o período de 2007/2008. Esses animais foram previamente avaliados por exames
ginecológicos e sanitários, receberam as vacinas obrigatórias e contra as principais doenças
reprodutivas. Foram mantidos a pasto com água e sal mineralizado a vontade.
2.2. Delineamento experimental
Os embriões implantados foram oriundos de colheitas de embriões em doadoras da raça Nelore
(animais puros e com registro na Associação Brasileira de Criadores de Zebu).
No dia da transferência, os ovários das receptoras foram avaliados por palpação por via retal ou
examinados por ultrasonografia utilizando-se um aparelho de ultrasom Pie-Medical (Falco 100)
com transdutor linear de 5MHz, para detectar a presença do corpo lúteo (CL). Estes então foram
classificados em: CL1 – pequeno, CL2 – médio e CL3 – grande. Esta classificação levou em
27
consideração o tamanho relativo do CL, em comparação ao tamanho do ovário. Receptoras que
não tiveram tecido luteal ou um CL com pelo menos 3 mm foram retiradas do experimento. No
momento da inovulação as receptoras foram divididas em seis grupos experimentais: CL1 (n
=26), CL1-GnRH (n =29), CL2 (n =46), CL2-GnRH (n=45), CL3 (n =63), CL3-GnRH (n=63).
Nos grupos com GnRH foram administrados 100µg de um análogo do GnRH Acetato de
Fertirelina (Fertigen®, Schering Plough Coopers, Brasil) por via intramuscular e os demais
grupos receberam 2mL de solução salina a 0,9% também por via intra-muscular logo após a
inovulação dos embriões (Figura 4).
272 Receptoras
Classificação do CL
CL 1
s/ GnRH
CL 2
c/ GnRH
s/ GnRH
CL 3
c/ GnRH
s/ GnRH
c/ GnRH
Figura 4. Diagrama experimental do uso um análogo de GnRH em receptoras bovinas no
momento da inovulação de embriões.
2.3. Protocolo de superovulação das doadoras
Em estágio aleatório do ciclo estral, no dia denominado como Dia 0, as doadoras tiveram a onda
folicular sincronizada por um dispositivo intravaginal de progesterona (DIB®, Shering Plough,
São Paulo, Brasil) associado a 2mg de Benzoato de Estradiol i.m. (Gonadiol®, Shering Plough,
28
São Paulo, Brasil). A superestimulação ovariana foi realizada com 250UI de FSH extraído de
hipófise suína (Pluset®, Hertape-Calier, São Paulo, Brasil) em oito doses decrescentes i.m. de
12 em 12 horas, a partir do Dia 4. No Dia 6 pela manhã, administrou-se 500µg de Cloprostenol
i.m. (Ciosin®, Shering Plough, São Paulo, Brasil). Os dispositivos foram retirados no Dia 7, 24
horas após a aplicação do Cloprostenol. As ovulações foram induzidas com administração de
100µg de Acetato de Fertirelina i.m. (Fertigen®, Shering Plough, São Paulo, Brasil) realizadas
no Dia 8 pela manhã. As inseminações foram executadas em tempo fixo 12 e 24 horas após a
indução das ovulações, utilizando-se sêmen criopreservado adquirido em central produtora de
sêmen.
2.4. Protocolo de sincronização das receptoras
A preparação das receptoras para inovulação começou no Dia 0, quando as mesmas receberam
um dispositivo intravaginal de progesterona (DIB®, Shering Plough, São Paulo, Brasil)
associado a 2mg de Benzoato de Estradiol i.m. (Gonadiol®, Shering Plough, São Paulo, Brasil).
No Dia 5 foram tratadas com 300UI de eCG i.m. (Novormon®, Shering Plough, São Paulo,
Brasil) e 500µg de Cloprostenol i.m. (Ciosin®, Shering Plough, São Paulo, Brasil). No Dia 8 os
dispositivos intravaginais foram retirados e no Dia 9 os animais receberam 1mg de Benzoato de
Estradiol i.m. (Gonadiol®, Shering Plough, São Paulo, Brasil). Os embriões foram transferidos
à fresco no 17º dia do protocolo de sincronização. Anteriormente a cada inovulação, os mesmos
procedimentos referentes à limpeza, assepsia e anestesia realizados nas doadoras foram
conferidos às receptoras.
2.5. Coleta das estruturas embrionárias
As coletas das estruturas foram efetuadas de 6,5 a 7 dias após a primeira inseminação artificial.
Anteriormente a cada colheita, foi procedida a limpeza e assepsia da região perineal das
29
doadoras com água e álcool a 70%, respectivamente. Também foi realizada a anestesia epidural,
com o objetivo de diminuir o peristaltismo e desconforto dos animais durante o procedimento.
A recuperação dos embriões foi realizada pelo método não cirúrgico por meio da lavagem do
útero com DPBS (Embriocare®, Cultilab, Campinas, Brasil) aquecido a 37°C. Imediatamente
após as colheitas os embriões foram transferidos para uma solução de manutenção e cultura
contendo 0,4% de BSA (Embriocare Solução de Manutenção®, Cultilab, Campinas, Brasil),
logo após, foram classificados conforme seu estágio de desenvolvimento e qualidade de acordo
com os padrões adotados pela Sociedade Internacional de Transferência de Embriões
(STRINGFELLOW; SEIDEL, 1998), apenas aqueles classificados em estádio de 4 a 7 (mórula,
blastocisto inicial, blastocisto e blastocisto expandido, respectivamente) e qualificados entre 1 a
3 (excelente, regular e pobre) foram envasados em palhetas de 0,25mL e transferidos.
2.6. Diagnóstico de gestação
Os embriões foram transferidos por meio do método não cirúrgico. O diagnóstico de gestação
foi realizado aos 35 dias pós inovulação por meio de ultrassonografia transretal, utilizando-se
um aparelho de ultrassom Pie-Medical com transdutor linear de 5,0 MHz.
2.7. Análise estatística
Para se comparar a taxa de concepção entre as características avaliadas utilizou-se dispersão de
frequências, empregando-se o teste de qui-quadrado (χ2), por meio do programa estatístico
Statistical Analysis System (SAS) - versão 6 (1996).
30
3- RESULTADOS E DISCUSSÃO
Com a finalidade de se estudar a homogeneidade dos grupos, algumas variáveis como qualidade
do corpo lúteo (QLCL) e qualidade embrionária (QEMB) foram analisadas. Os dados
concernentes a estas características utilizadas como parâmetros de controle entre os grupos
experimentais encontram-se na Tabela 1.
Tabela 1. Média e desvio padrão do tamanho relativo do corpo lúteo (CL) e qualidade
embrionária (QEMB) nas receptoras no momento da inovulação.
N° de
*CL(1-3)
**QEMB (1-4)
animais
Média ± (SD)
Média ± (SD)
Com GnRH
137
2,26± 0,77
1,44 ± 0,66
Controle
135
2,25 ± 0,78
1,43 ± 0,66
272
2,25 ± 0,77
1,43 ± 0,66
TRATAMENTOS
TOTAL
*CL - Tamanho do CL - 1-Pequeno, 2-Médio, 3-Grande.
**1- Excelente/Bom; 2- Regular; 3- Pobre; 4- Morto/Degenerado.
Uma adequada diferenciação e desenvolvimento do CL é essencial para uma sincronização entre
embrião e útero, assim como uma suficiente secreção de P4 é crítica para manutenção dos
mecanismos antiluteolíticos. Assim a identificação correta da presença do corpo lúteo, bem
como do seu status funcional é importante para o sucesso do manejo reprodutivo e essencial no
processo de seleção de receptoras
antes da transferência de embriões (GARCIA;
SALAHEDDINE, 2000).
A seleção das receptoras para TE tem sido baseada na avaliação morfológica do CL pela
palpação transretal. Entretanto, a palpação do ovário somente, não é um método acurado de
diagnóstico, avaliação e previsão do estado funcional do CLs, sendo assim a ultrassonografia e
31
concentração de progesterona poderiam ser também utilizadas como alternativas para aumentar
a eficiência do diagnóstico (GARCIA; SALAHEDDINE, 2000).
A análise morfológica do embrião, antes da transferência, é o método mais comum para se
avaliar o potencial do mesmo para estabelecer e levar uma gestação a termo. O grau atribuído
leva em consideração várias características, incluindo a cor, homogeneidade e tamanho de
blastômero, granulação do citoplasma e grau de fragmentação do blastômero (SMITH;
GRIMMER, 2002).
No grupo-GnRH contendo 137 receptoras de embriões, foram observados um total de 60
animais prenhes (43,80%). No grupo-controle composto por 135 receptoras, foram observados
66 animais prenhes (48,89%). Não houve diferença (p>0,05) na taxa de prenhez; os resultados
estão representados na Tabela 2.
Tabela 2. Taxa de concepção geral de receptoras de embrião.
Taxa de concepção
TRATAMENTOS
N° de animais
N° (%)
Com GnRH
137
60 (43,80)
Controle
135
66 (48,89)
272
126 (46,32)
TOTAL
Não houve diferença (p>0,05) entre os tratamentos.
De acordo com os dados houve uma pequena redução, 5%, na taxa de concepção das receptoras
tratadas com GnRH, concordando com Fonseca et al. (2001) que observaram essa redução,
ficando aquém das expectativas, quando o GnRH foi administrado em receptoras de embrião no
quinto dia do ciclo estral. Segundo esse autor a taxa de gestação aos 60 dias foram 28,7% e
37,5% para o grupo tratado com GnRH (Gonadorelina) e grupo controle, respectivamente.
32
Os achados de Galimberti et al. (2001) ao administrarem GnRH (Buserelina) no quarto dia após
a inovulação e Nasser et al. (2005) ao administrarem GnRH no momento da inovulação estão de
acordo com os resultados deste experimento, pois não observaram diferença estatística entre o
grupo tratado com GnRH e o grupo controle.
Resultados obtidos também foram semelhantes aos encontrados por Howard et al. (2006),
porém os mesmos avaliaram a administração exógena de GnRH em vacas leiteiras cinco dias
após a IATF. Apesar de observarem aumento da concentração plasmática de progesterona, não
houve diferença estatística entre os grupos tratados com GnRH e controle.
Entretanto este estudo discorda de Rodrigues et al. (2003), que ao trabalhar com embriões
oriundos de FIV, demonstraram haver diferença estatística na taxa de concepção de receptoras
de embriões tratatadas com GnRH no momento da inovulação, sendo 42,2% e 51,2% para grupo
controle e grupo GnRH, respectivamente. A administração de Buserelina no dia 12 pós IA em
vacas leiteiras, causou um aumento de 12% nas taxas de gestação dos animais tratados em
relação ao grupo controle (BELTRAN et al., 2003).
Considerando-se os resultados observados, pode-se inferir que o aumento precoce da
concentração plasmática poderia ter gerado uma regulação inadequada de receptores de P4,
induzindo secreção de PGF2α e, consequentemente, uma luteólise prematura. Essa hipótese
explicaria a ocorrência de ciclos curtos em vacas, ovelhas e cabras (NOGUEIRA et al., 2004).
Outra hipótese seria que a maioria dos receptores de LH são expressos nas SLCs, e as mesmas
são transformadas em LLCs durante o desenvolvimento do CL. Uma administração de GnRH
no início da fase luteal pode resultar numa estimulação excessiva, provocar uma mudança
prematura das SLCs para LLCs e, em decorrência, uma redução dos receptores de LH
resultando em um decréscimo dos efeitos luteotrópicos do LH (BARTOLOME et al., 2005).
33
Farin; Farin (1995) obtiveram resultados semelhantes quando condições de alta concentração
plasmática de progesterona interferiram negativamente na taxa de prenhez de receptoras de
embriões, porém sem esclarecer tais relações.
De acordo com Santos et al. (2004), embora ainda não tenha sido estabelecido quais são os
níveis de progesterona necessários para determinar o sucesso da prenhez, a concentração de P4
nos dias 4 e 5 após a cobertura têm sido correlacionada positivamente com posterior
concentração de INF- τ do ambiente uterino no dia 16. Isso se deve ao fato de que a
progesterona tem papel fundamental na estimulação da secreção de proteínas endometriais e
fatores de crescimento muito importantes no período de reconhecimento materno da gestação.
Santos et al. (2004) afirmaram ainda que a P4 durante os primeiros 4 dias após a IA, no início
da fase do diestro, beneficiou a taxa de concepção e sobrevivência embrionária pois, aumentou
o desenvolvimento morfológico e atividade de biosíntese do concepto no dia 14.
Contudo Willard et al. (2003) reportaram os efeitos da administração de GnRH pós inseminação
sobre concentração sérica de progesterona e taxas de concepções em vacas de leite expostas ao
estresse térmico no verão. Os mesmos observaram aumento significativo na área do CL,
formação de CLa e concentração sérico de P4 nos grupos tratados com GnRH no D-5 e D11 pós
inseminação em relação ao grupo controle. Apesar disso, não houve diferença estatística
(p>0,05) em relação a taxa de concepção.
Solano et al. (2004) observaram que existe uma grande variação na concentração plasmática de
P4 em receptoras de embriões gestantes, desde 0,58 a 16 ng/mL, indicando que a P4 no dia da
TE pode não estar correlacionada com a taxa de gestação.
A taxa de concepção das receptoras de embriões com classificação prévia do CL
estão
representandos na Tabela 3. Nos grupos CL1 e CL1-GnRH, as taxas de concepções foram,
34
respectivamente, 43,31 e 41,38%. Nos grupos CL2 e CL2-GnRH foram 56,52 e 46,67% e nos
grupos CL3 e CL3-GnRH foram, respectivamente, 46,03 e 42,86%. Não houve diferença
(p>0,05) na administração de um análogo de GnRH na taxa de concepção das receptoras de
embriões de acordo com a qualidade do CL.
Tabela 3. Taxa de concepção de receptoras de embrião do grupo-controle e grupo-GnRH de
acordo com a qualidade do CL no momento da inovulação.
Taxa de concepção
TRATAMENTOS
N° de animais
N° (%)
CL1
26
11 (43,31)
CL1-GnRH
29
12 (41,38)
CL2
46
26 (56,52)
CL2-GnRH
45
21 (46,67)
CL3
63
29 (46,03)
CL3-GnRH
63
27 (42,86)
272
126 (46,32)
TOTAL
Não houve diferença (p>0,05) entre os tratamentos.
De acordo com Baruselli et al. (2000) a área do CL influencia a concentração plasmática de P4 e
a taxa de concepção de receptoras de embrião bovino Bos taurus indicus x Bos taurus taurus.
Segundo os autores CLs maiores proporcionaram maiores concentrações plasmáticas de P4 e
maiores taxas de concepção, ou seja, CLs que possuem maior área secretam maiores
quantidades de P4, o que pode ter efeito positivo no reconhecimento materno da gestação e,
consequentemente, na taxa de prenhez.
Chalhoub et al. (2007) demonstraram em pesquisa com 762 receptoras de embriões que
houveram diferença significativa na taxas de prenhez em relação à qualidade do CL avaliado,
sendo as maiores taxas de prenhez em receptoras avaliadas com corpo lúteo grande (execelente)
e médio (bom) em relação ao pequeno (ruim).
35
Rodrigues et al. (2003) demostraram que receptoras de embriões classificadas de acordo com o
tamanho do CL à palpação transretal diferiram estatísticamente quanto a taxa de prenhez
(embriões oriundos de FIV), tendo sido observados os melhores reultados para CLs grandes (as
taxas foram, respectivamente, 50,6, 47,3 e 31,4% para CLs grandes, médios e pequenos).
Assim a expectativa neste experimento era de que a administração de um análogo de GnRH
fosse melhorar a taxa de concepção das receptoras de embriões, principalmente àquelas que
apresentaram CL pequeno, ou seja, receptoras com CL de qualidade regular, porém não houve
melhora na taxa de concepção. Os autores de nenhuma forma avaliaram o efeito do análogo de
GnRH em relação a qualidade do CL, sendo assim este o primeiro trabalho nesse contexto.
Pode-se inferir que em rebanhos de fertilidade normal, desde que as concentrações de
progesterona atinjam patamares limiares ou adequados, incrementos nas concentrações desse
hormônio pode não ter efeitos significativos sobre a taxa de concepção (FONSECA et al.,
2001).
4- CONCLUSÃO
A adiministração de um análogo de GnRH em receptoras de embriões não incrementou a taxa
de concepção segundo à qualidade do corpo lúteo, sugerindo que não é necessário a
administração do fármaco em novilhas receptoras nestas condições experimentais.
36
AGRADECIMENTOS
Agradecemos à CAPES pelo apoio financeiro em forma de bolsa de estudo indispensável para
a realização deste trabalho e à Empresa Shering-Plough pela colaboração na doação dos
hormônios utilizados neste estudo.
5- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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4- CONSIDERAÇÕES GERAIS
Apesar da maioria dos estudos demostrarem que os CLs classificados como 1 são responsáveis
pelas menores taxas de concepção em um programa de TE, mesmo não havendo diferença
estatística, a expectativa deste estudo era que a administração de um análogo de GnRH poderia
incrementar a taxa de concepção nas receptoras com CL1 ao corrigir uma possível disfunção
luteal e também promover a formação de CLa. Isso não foi verificado e os resultados ficaram
aquém do esperado. Como não foi possível avaliar a formação de CLa, em virtude de condições
de manejo da propriedade em que os animais se encontravam, seria interessante em outros
estudos avaliar a responsividade das receptoras classificados com CL1 ao tratamento com
análogo de GnRH, e se as mesmas responderam com formação de CLa. Respondendo ao
tratamento, avaliar se houve incremento na taxa de concepção.
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