6- Clula neoplstica - Moodle @ FCT-UNL

Biologia Celular
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Célula Neoplásica
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aulas práticas
6- Célula neoplásica
Marcado por um crescimento anormal. Só existe em mecanismos
pluricelulares porque exige confronto.
Tumor – a divisão celular anormal provoca a formação de massas celulares
estranhas.
Cancro – série de alterações que fazem com que as células se dividam
infinitamente (descontrolo celular).
Tumores:
1.
Benigno – (divisão finita) formação de massa celular não evasiva (não
afecta os outros tecidos adjacentes).
2.
Maligno – divide-se infinitamente e formam-se outros, separando-se
dessas células- mães; há células que migram por meio da corrente
sanguínea; Emite metásteses (células que se separam do tumor inicial
e que são levadas pela corrente sanguínea, originando tumores
secundários).
3.
Monoclonal – tem origem a partir de um único gene (monoclonal), na
grande maioria.
1ºrio – permanece no local
2ºrio – expande-se a outros pontos do organismo
Transferência – é o processo pelo qual o gene normal passa a alterado.
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Célula Neoplásica
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Propriedades
1. Crescimento
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fibroblasto divide-se 12x antes de morrer (cél. Normal)
-
fibroblasto divide-se infinitamente (Cél. Cancerosa)
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perda de inibição por contacto
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perda de afinidade
2. Alteração da morfologia celular e do citosqueleto
- desorganização do citosqueleto e perda de forma
3. Alteração Nuclear
O núcleo aumenta de volume obrigando à retracção do citoplasma. No
núcleo podem ocorrer:
Trissomias – 3 cromossomas para dada característica
Translocações – troca incorrecta de material genético entre
cromossomas
4. Alterações Metabólicas
- a via mais afectada é a glicólise, ocorrendo uma superprodução de lactato
(EFEITO DE WARBURG), pelo que a célula tem que depois converter em ác.
pirúvico para que este entre na mitocôndria, o que representa um gasto
brutal de energia.
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5. Alteração da superfície celular
São reduzidos fortemente:
-
glicolípidos;
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glicoproteínas;
-
glicosaminoglicanas
A membrana fica mais susceptível à
entrada de substâncias estranhas
(glicocálice)
-
Altera a permeabilidade
Agentes que provocam o cancro
1. Físicos - radiações
2. Químicos – todos os químicos são cancerígenos
3. Biológicos – Raws, vírus que provoca cancro nas galinhas
*Agentes Mutagénicos directos – causam alterações na estrutura do DNA:
-
dimetilnitrosamina;
proflavina
* Agentes Mutagénicos indirectos – não se conhecem os seus efeitos
-
nitratos, são convertidos em nitrosaminas
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Teste de Ames
Testar a eficácia e potencialidade de um determinado produto químico
como agente mutagénico.
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1.0 - Fixação
1. 0.1 - Tipos de fixação:
a) Química – uso de reagentes que fixam o material.
b) Física – envolve o arrefecimento rápido do material biológico.
1.0.2 - Objectivos:
-
Preservar células e seus constituintes;
-
Preservar a actividade enzimática para impedir autolise.
1.1 – Fixação Química
1.1.1 – Características de um bom fixador:
-
Inactiva os sistemas enzimáticos;
-
Mantém insolúvel os componentes da estrutura celular;
-
Altera parcialmente as características de permeabilidade selectiva
das membranas;
-
Reforça as estruturas com o mínimo de danos;
-
Altera o índice de refracção elevando a capacidade das estruturas
(nem todos o fazem).
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Técnicas em MET
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1.1.2 – Fixadores usuais:
1.1.2.1
a)
– Aldeídos (dão melhores imagens e são os mais utilizados)
Formaldeído (monoaldeído) – reage mais lentamente, mas é
incorporado rapidamente o que
provoca a autolise das células.
b) Glutaraldeído (dialdeído) – causa mais danos e tem uma velocidade de
penetração menor; tem capacidade de se
ligar com os polipeptidios; também reage
com os glícidos OH (hidratos de carbono)
Hemacetal
Os aldeídos são pré-fixadores, pelo que a sua utilização deve ser feita, em
locais de tamanho reduzido, pH neutro e temperaturas baixas.
Mais utilizado:
Tem 2 grupos reactivos para a molécula, a reacção é mais lenta, mas a
preservação é melhor, e nunca é dado à célula directamente.
Por vezes utilizamos tampões para retardar a reacção, pois têm pH neutro
e não alteram a reacção. Os mais utilizados são:
-
Fosfato;
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Tri-maleato;
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Cacodifato
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Técnicas em MET
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Existem dois fosfolípidos com os quais o glutaraldeído reage são eles:
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Fosfotidilserina;
-
Fosfotidilatanolamina
Os aldeídos reagem com os grupos reactivos funcionais (amino, amida,
fenoxili, tiol, inudazol) das proteínas através de 2 etapas distintas e
consecutivas.
A lisina é um a.a. com o qual o glutaraldeído reage preferencialmente.
Os aldeídos têm uma afinidade particular para as proteínas.
1.1.2.2 – Tetróxido
anticoagulante
de
Ósmio
(OSO4)
Fixador
e
agente
Têm as seguintes funções :
-
Fixação de lípidos, em particular os ácidos gordos insaturados (os
saturados não são reactivos), da membrana celular;
Fosfotidiletanolamina
Fosfolípidos
Fosfotidilseria
-
Contrastação, porque é muito reactivo com os lípidos essencialmente
com os ácidos gordos;
-
Estabilização das proteínas e protecção das mesmas da coagulação
(provocado pela adição posterior de desidratantes)
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1. Oxidação da dupla ligação através do OsO4 formando-se um monéster
cíclico.
2. O monoéster é facilmente hidrolizado formando-se em diol e ácido
ósmico.
3. O monoéster pode ainda, reagir com o diol originando um diéster estável.
Monoéster + Diol
biológico)
⇒ Diéster (que confere contraste ao material
Gluta – Fix
/ Pré-fix
Ósmio – Post-Fix
/ Fix
1.1.3 – Factores que afectam a qualidade da fixação
e incubação
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Concentração e velocidade de penetração da solução fixadora;
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Osmolaridade;
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Técnicas em MET
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pH e temperatura;
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Duração e modo de fixação;
-
Dimensão das secções.
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2- Desidratação
Utiliza-se Acetona e Etanol:
Efectua-se por série ascendente : aumento gradual da concentração do
desidratante.(25%-505-100%)
Acetona – bom solvente lípidico, embora provoque desidratações
deficientes (altamente higroscópica).
Etanol – também é bom solvente lípidico, mas pode reagir com resíduos
do ósmio, resultando um precipitado fino que mancha a
preparação. LAVAGEM É MUITO IMPORTANTE.
3- Infiltração / Impreganação
Utiliza-se resinas, porque conferem :
-
dureza;
-
resistência;
-
durabilidade
Do material biológico
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aulas práticas
Antes de dar a resina ás células temos que as habituar aos seus
componentes (é natural que antes deste processo as células sirvam um
banho de óxido-propileno).
1º Óxido – propileno (2 banhos 15 min cada)
2º Óxido – propileno com resina
3º Óxido – propileno com 4 banhos de resina
Maior
concentração
de resina
4º Resina pura
Araldite (3)
Resinas
Epon (3)
DDSA (8)
endurecedor
DMp-30 (3 gotas) acelerador
Só podemos chegar à resina pura se os cortes estiverem todos no fundo,
caso contrário não.
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Técnicas em MET
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aulas práticas
1º Coloca-se uma gota de resina;
2º Depois o material;
3º Por fim preenche-se o restante.
É necessário fazer uma legenda adequada, faz-se com papel vegetal. No
fim vai à estufa.
Obtemos:
Só prestam os corte finos ( os que têm cor entre o dourado e o branco)
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Técnicas em MET
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aulas práticas
Se não fosse um bom trapézio, por ex.: um quadrado, estes não formariam
uma boa série ficando todos em cima uns dos outros.
Agora e já à superfície da água, vamos apanhar os cortes com a ajuda de
uma grelha de ouro e com uma pinça de relojoeiro.
Encosta-se a grelha aos cortes, afunda-se levemente e vira-se ao
contrário a grelha, assim obtemos os cortes da secção com o papel de filtro
retira-se o excesso de água.
Antes de ir ao M.Óptico
Ainda na grelha faz-se outro passo a contrastação do material.
4- Contrastação
Contraste entre diferentes estruturas principalmente fosfolípidos e
àcidod nucleicos. A contrastação aumenta o poder contrastante do material.
São utilizados metais pesados como o acetato de uranilo.
Imersão inf a 1 mm (min/hora) (dias ou semanas)
Fixação
Perfusão (20-45 min)
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Técnicas em MET
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aulas práticas
Agora sim já pode ir ao M. Óptico
CHEN e OUL (1983)
LEONS (1991,1993)
LOGIN e DROREK (1994)
Estes foram os primeiros indivíduos que começaram a introduzir o método
de microondas. A utilização das microondas tem como objectivo diminuir o
processo de fixação para minutos, preservando as estruturas, fazendo uma
retenção de lípidos e proteínas insolúveis.
Parâmetros que nunca se devem ultrapassar num processo de microondas:
-
tempo: 30/60 s (nunca mais);
-
temperatura: 50-55ºC;
-
localização adequada do material biológico na microondas;
-
recipiente H2O – para absorver o excesso de radiações das microndas
Economia de tempo como a utilização das microondas
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Teórica
Teórica
1Bactérias aeróbias e mitocôndrias. Semelhanças que
apoiam a Teoria Endossimbiótica.
2-
O que é um protoplasto viável?
3-
Qual é a função da Parede Celular?
4Explica a compatibilidade da Parede Celular e do
Complexo de Golgi.
5-
O que são corpos proteícos?
6Em que organismo é que ocorre o armazenamento de
Malato?
7-
Explique o papel proteolítico do Golgi.
8-
Qual é o defeito de secreção do Golgi?
9-
O peroxissoma é muito antigo. Justifique.
10-
Qual é a utilidade do teste DAB?
11Explique os movimentos das células parenquimais dos
cromatóforos.
12-
Qual é a função das MAP’S?
13-
O que são riboforinas?
Teórica
14- Explique a passagem de cloroplasto a cromoplasto.
Alterações.
15-
Sistema de síntese de ATP da mitocôndria.
16- Onde se encontra a cardiolipina na mitocôndria e quais
as funções?
17- Lípidos e Hidratos de carbono. Vias metabólicas e
compartimentos em que ocorrem.
18- Como se terá passado de uma célula mais simples para
uma célula mais evoluída?
19-
O que aconteceu à parede bacteriana?
20- Os cloroplastos assemelham-se às cianobactérias.
Porquê?
21-
Porque folhetos é formada a Parede Celular?
22- Distinção entre as fibras da parede celular primária e
parede celular secundária.
23-
Diz qual a composição química da parede celular.
24-
Biogénese da parede celular.
25-
Onde é sintetizada a celulose?
Teórica
26- Quais as três grandes redes macromoleculares
consideradas na parede celular.
27-
Qual a função do citosqueleto?
28-
Qual a composição química do hialoplasma?
29- O hialoplasma funciona em cooperação com organitos.
Diz quais e que tipo de cooperação existe.
30-
Qual a origem dos microtúbulos e a sua constituição?
31-
Como se forma o fuso acromático?
32-
Como é composto um axonema?
33- Quando ocorrem anomalias nos braços de dineína, os
axonemas adquirem um funcionamento incorrecto. Quais as
patologia associadas?
34-
Quais são as funções secundárias do RER?
35- O RER remove proteínas seleccionadas do hialoplasma à
medidad que elas são sintetizadas, quais são estas proteínas?
36-
Qual a origem do aparelho de Golgi?
37-
Qual a sua estrutura?
38- Porque é que se formam sáculos se depois estes se
transformam novamente em vesículas?
39-
Quais as enzimas específicas da face trans?
Teórica
40-
O que entende por gigantismo mitocondrial?
41-
Qual a constituição das membranas mitocondrias?
42-
Funções da mitocôndria.
43-
Para o que é que as mitocôndrias utilizam O2?
44-
Funções dos lisossomas.
45-
O que são lisossomas 1º e 2º ?
46-
O que são OEP’S e coperonas?
Pratica
1-
Alterações metabólicas das células cancerosas.
2-
Agentes mutagénicos directos.
3-
Qual a importância do teste de Ames?
4-
Onde ocorre a hipersegmentação nuclear?
5-
Onde ocorrem os corpos de Dohel?
6- Quando não existem mitocôndrias onde é que os
eritrócitos vão buscar energia?
7-
Numa infecção viral como se altra a forma leucocitária?
8-
Inconvenientes do usos de desidratantes.
Teórica
9-
Três características de um bom fixador.
10- Porque é que o Tetróxido de Ósmio é um
anticontrastante?
11-
O que é um protoplasto e um protoplasto viável?
12- Quais os tipos de métodos de obtenção de protoplastos?
13- Para que duas células vegetais se possam fundir formando
híbridos, é necessário o quê? E quais os tipos de híbridos.
14- Quais as técnicas de fusão de protoplastos?
15- Quais as aplicações biotecnológicas da fusão de
protoplastos.
16- Quais os fixadores mais utilizados na fixação?
17- Quais as funções do Tetróxido de Ósmio?
18- Quais os factores que afectam a qualidade da fixação e
incubação?
19- Qual a utilidade das resinas?
20- Diz o que faz parte da constituição dos elementos
figurados
21- Indica os tipos de hemoglobina.
22- O que á a Anemia? Indica os tipos que conheces.
23- Quais as funções dos Eritrócitos?
Teórica
24- Qual a ultraestrutura das plaquetas?
25- Existem 2 tipos de Leucócitos, quais?
26- Caracteriza os neutrófilos.
27- Caracteriza os basófilos.
28- Caracteriza os Eosinófilos.
29- Caracteriza os monócitos.
30- Caracteriza os linfócitos.
31- Quais os diferentes tipos de linfócitos.
32- Quais as alterações sofridas na forma leucocitária numa
infecção bacteriana, na malária e na respiratória.
33- Indique as leucopatias que estudou.
34- Indica os tipos de tumor que existem.
35- Quais as propriedades do Cancro.