trabalho

2.001 Consequências cardiovasculares e renais em camundongos deficientes
em fator de cresimento placentário
Zavan, B. , Aasa, K. L. , Wong, P. G. , Ventura, N. M. , Tse, M. , Pang, S. , Carmeliet, P. , Croy, B.
A. , Paffaro Jr, V. A. ,
Depertamento de Biologia Celular, Tecidual e do De - Unifal-MG
Department of Biomedical and Molecular Sciences - Queen?s University
Department of Oncology - University of Leuven
Introducao:
Complicações gestacionais como a pré-eclâmpsia estão relacionadas com o aumento da incidência
de doenças cardiovasculares (CV) pós-parto tanto para mães quanto para os filhos. Mulheres com
essa complicação gestacional apresentam níveis de fator de crescimento placentário (PGF) abaixo
do normal, entretanto, não se sabe se baixos níveis de PGF aumentam o risco de doenças CV.
Objetivos:
Avaliar se a deficiência de PGF limita a adaptação CV durante o período gestacional tardio
contribuindo para o aumento do risco de complicações cardiovasculares. Avaliar se a adaptação
renal frente ao desafio hemodinâmico gestacional está comprometida nesses animais.
Metodos:
Foi realizado o acompanhamento da pressão arterial dos camundongos (C57BL/6 com 60 dias e 20
a 22g) Pgf+/+ e Pgf-/- (n=5/grupo) por pletismografia de cauda e da função cardiovascular por
ultrassonografia antes e durante a gestação (em diferentes dias gestacionais). Após essa análise
foi feita a coleta e pesagem do coração e rins normalizados pelo comprimento da tíbia, e realizada
análise histológica e morfométrica desses órgãos. Além disso, foi analisada a expressão de genes
com ação cardioprotetora, entre eles Nos3 e Nos2 (Óxido Nítrico Sintase endotelial e induzível
respectivamente), no coração por RT-qPCR e também verificado os níveis de PGF no sangue pelo
método de ELISA. A comparação dos resultados entre os grupos foi feita pelo teste Two-way
ANOVA e comparações específicas pelo teste de Bonferroni. Para a análise morfométrica e de
ELISA foi aplicado o teste de T de Student e One-way ANOVA respectivamente. Todos os estudos
foram realizados após aprovação do comitê de ética e em conformidade com as diretrizes do
Canadá (Croy-2013-006-Or-A8).
Resultados:
Camundongos Pgf-/- apresentaram maior pressão arterial (PA) no início (131±2mmHg) e final da
gestação (131±5mmHg) com um maior intervalo de queda (24±3mmHg) da PA após o período da
implantação do blastocisto quando comparado com o controle (115±3mmHg, 117±4mmHg e
6±3mmHg respectivamente). Menor débito cardíaco materno (13±1ml/min) e volume sistólico
(36±2ml) foram observados após o meio da gestação dos animais knockout quando comparados
com animais controle (24±2ml/min e 47±2ml respectivamente). Além disso, esses animais não
apresentaram o aumento no peso do ventrículo esquerdo (VE) naturalmente observado em B6
(10mg de aumento) no final da gestação. A expressão gênica de Nos3 e Nos2 no VE foi maior nos
animais Pgf-/- (160% e 220% respectivamente) durante o período mediano da gestação, sugerindo
uma ação compensatória em um coração hipertenso pela falta de PGF. Foram observadas
anomalias estruturais glomerulares e hipertrofia renal em camundongos Pgf-/- não gestantes,
durante a gestação e pós-parto.
Conclusão:
A deficiência de PGF limita adaptações fisiológicas e estruturais do sistema CV e Renal durante a
gestação de camundongos. O presente estudo revela novas funções do PGF na gestação
enfatizando a importância desse fator na adaptação cardiovascular materna elucidando um dos
sintomas da pré-eclâmpsia em humanos. Além disso sugere estudos futuros para verificar se
restituição do PGF pode ser empregado como protetor cardiovascular em pacientes com tal
complicação gestacional.
Apoio Financeiro:
A deficiência de PGF limita adaptações fisiológicas e estruturais do sistema CV e Renal durante a
gestação de camundongos. O presente estudo revela novas funções do PGF na gestação
enfatizando a importância desse fator na adaptação cardiovascular materna elucidando um dos
sintomas da pré-eclâmpsia em humanos. Além disso sugere estudos futuros para verificar se
restituição do PGF pode ser empregado como protetor cardiovascular em pacientes com tal
complicação gestacional.
Comitê de Ética:
Croy-2013-006-Or-A8
2.002 Produção de ROS e os sistemas antioxidantes no envelhecimento
Cardíaco.
Ribeiro, J. P. , Barreto, T. O. , Gomes, A. A. L. , Miranda, A. S. , Cruz, J. S. , Gioda, C. R. ,
Fisiologia Cardiovascular - FURG
Departamento de Bioquímica e Imunologia - UFMG
Departamento de Fisiologia e Farmacologia - UFMG
Introducao:
O envelhecimento é um processo biológico caracterizado por uma progressiva deterioração nas
funções fisiológicas que comprometem a capacidade do organismo em manter a homeostase.
Sabe-se que o estresse oxidativo está diretamente associado às diferentes patologias cardíacas e
que a predisposição e a incidência de algumas doenças aumentam com o decorrer dos anos. Desta
forma, este trabalho buscou contribuir com informações que permitam o entendimento dos
mecanismos que são comprometidos durante o processo de envelhecimento celular cardíaco.
Objetivos:
Avaliar a produção de ROS, atividade e expressão de sistemas antioxidantes como superóxido
dismutase e catalase em células cardíacas de camundongos jovens (3 meses) e envelhecidos (± 1
ano).
Metodos:
Este projeto foi aprovado pelo comitê de Ética da UFMG com número de protocolo 48/2012. A
atividade e a expressão da SOD e catalase e os níveis de ROS foram realizados conforme Am J
Physiol Heart Circ Physiol 298:H2039, 2010. Foram utilizados camundongos machos C57BL/6
pesando ± 30g com 3 meses e um ano de idade. Os dados foram representados como média ±
DPM. A comparação entre os grupos foram realizadas com one way ANOVA usando o teste de
Tukey.
Resultados:
As imagens de microscopia confocal demonstraram em porcentagem de fluorecência, que a
produção de superóxido em cardiomiócitos de camundongos envelhecidos foi de aproximadamente
57% enquanto que nos jovens foi de 41%. Os níveis de peróxido de hidrogênio em cardiomiócitos
foi de aproximadamente 78% em camundongos envelhecidos e em jovens de aproximadamente
57%. A atividade enzimática da superóxido dismutase total foi menor em camundongos
envelhecidos (n=5, 0,273 ± 0,075U/mg de proteínas) quando comparados aos jovens (n=5, 0,378 ±
0,126U/mg de proteínas), p<0,05. Onde a expressão da SODMn estava aumentada em
camundongos envelhecidos (n=3, 1,737± 0,849U/mg de proteínas) quando comparados aos jovens
(n=3, 0,779± 0,251U/mg de proteínas), p<0,05 e a expressão da SODCu/Zn não foi alterada
significativamente em camundongos jovens (n=3, 0,783± 0,35U/mg de proteínas) em relação ao
grupo de camundongos envelhecidos (n=3, 1,00± 0,38U/mg de proteínas) . A atividade enzimática
da catalase foi maior em camundongos envelhecidos (n=5, 0,281± 0,09 detaE/min/mg de proteínas)
quando comparados aos jovens (n=5, 0,148 ± 0,015 detaE/min/mg de proteínas) p<0,05, onde sua
expressão também se demonstrou aumentada em camundongos envelhecidos (n=3, 1,883± 0,709
detaE/min/mg de proteínas) em relação aos jovens (n=3, 0,960± 0,175 detaE/min/mg de proteínas)
p<0,05.
Conclusão:
O processo de envelhecimento cardíaco aumentou a produção de superóxido e peróxido de
hidrogênio e aumentou a atividade e expressão de enzimas antioxidantes.
Apoio Financeiro:
O processo de envelhecimento cardíaco aumentou a produção de superóxido e peróxido de
hidrogênio e aumentou a atividade e expressão de enzimas antioxidantes.
Comitê de Ética:
48/2012
2.003 ENVOLVIMENTO DO NÚCLEO DO TRATO SOLITÁRIO COMISSURAL NA
MANUTENÇÃO DA HIPERTENSÃO RENOVASCULAR EM RATOS.
Melo, M. D. R. . , Gasparini, S. , Menani, J. V. , Colombari, D. S. A. , Colombari, E. ,
Fisiologia e Patologia - Faculdade de Odontologia - UNESP
Fisiologia - EPM / UNIFESP
Introducao:
A hipertensão renovascular afeta cerca de 4-6% da população de hipertensos, principalmente em
idosos. Um importante modelo experimental de hipertensão renovascular é o modelo dois rins, 1
clipe (2R1C), que apresenta alta atividade do sistema renina-angiotensina, aumento da atividade
simpática e diminuição da sensibilidade do barorreflexo. O sistema nervoso central parece ter um
papel chave no desenvolvimento e manutenção de diferentes modelos de hipertensão. A inibição
específica do subnúcleo comissural do núcleo do trato solitário (NTSc) com GABA promove
redução da pressão arterial e da atividade simpática em ratos espontaneamente hipertensos, mas
não em ratos normotensos. (Sato et al., 2002). Entretanto, até o momento o papel do NTSc na
manutenção da hipertensão renovascular ainda não está estabelecido.
Objetivos:
Verificar o efeito da inibição do NTSc na manutenção da hipertensão renovascular 2R1C.
Metodos:
Foram utilizados ratos Holtzman (peso inicial 150-180 g), os quais tiveram um clipe de prata
implantado ao redor da artéria renal esquerda para induzir hipertensão 2R1C (n = 4). Ratos com
cirurgia fictícia foram utilizados como controles normotensos (NT; n = 4). Após 6 semanas, a
pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca (FC) foram registradas antes e após
microinjeções de salina (NaCl 0,15 M, 60 nl) ou isoguvacina (20 mM; 60 nl - agonista gabaérgico)
no NTSc de animais anestesiados com uretana (1,4 g/kg de peso corporal; i.v). Os protocolos
experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da FOAr
(processo 05/2014)
Resultados:
A PAM basal no grupo 2R1C foi maior do que nos ratos NT (2R1C: 159 ± 12, vs. NT: 115 ± 3
mmHg, p < 0,05), enquanto a FC basal foi semelhante nos dois grupos (362 ± 27, vs. 365 ± 10
bpm, respectivamente). Não houve alteração significativa da PAM após injeção de salina no NTSc
de ambos os grupos (NT: -1 ± 1, vs. 2R1C: - 8 ± 5 mmHg). Entretanto, 10 min após a injeção de
isoguvacina 20 mM no NTSc houve acentuada redução da PAM nos animais 2R1C (-26 ± 8, vs. NT:
-8 ± 1 mmHg, p<0,05). Essa redução da PAM perdurou por todo o período experimental (-20 ± 4,
vs. NT: -9 ± 2 mmHg, aos 40 min; p<0,05). Não houve alterações significativas da FC após injeção
de salina ou isoguvacina no NTSc em ambos os grupos.
Conclusão:
A inibição da atividade neuronal no NTSc com a administração do agonista gabaérgico reduziu a
PAM nos animais 2R1C, mostrando que o NTSc contribui para a manutenção da hipertensão
renovascular.
Apoio Financeiro:
A inibição da atividade neuronal no NTSc com a administração do agonista gabaérgico reduziu a
PAM nos animais 2R1C, mostrando que o NTSc contribui para a manutenção da hipertensão
renovascular.
Comitê de Ética:
processo 05/2014
2.004 ASSOCIAÇÕES ENTRE OS POLIMORFISMOS -514C>T E -250G>A DO
GENE LIPC E MODIFICAÇÕES NA ATIVIDADE DA LIPASE HEPÁTICA:
ALTERAÇÕES FÍSICO-QUÍMICAS DA PARTÍCULA DE HDL.
Vieira, I. C. , Zago, V. H. S. , Parra, E. S. , Panzoldo, N. B. , Alexandre, F. , Vendrame, F. , Quintão,
E. C. R. , Scherrer, D. Z. , Faria, E. C. ,
Departamento de Patologia Clinica - UNICAMP
Laboratório de Lípides - USP
Introducao:
A lipase hepática (LH) é uma enzima chave do metabolismo das lipoproteínas plasmáticas, capaz
de hidrolisar triglicérides e fosfolípides, possibilitando o remodelamento das lipoproteínas de alta
densidade (HDL). Os polimorfismos -514C>T e -250G>A do gene da LIPC foram previamente
associados à deficiência da LH, tornando-a uma reguladora positiva da concentração plasmática de
HDL.
Objetivos:
Investigar as relações dos polimorfismos de nucleotídeo único (SNP do inglês single nucleotide
polymorphism) -514C>T (rs1800588) e -250G>A (rs2070895) com a atividade da LH, parâmetros
bioquímicos e características físico-químicas da HDL em uma amostra populacional brasileira
representativa (n=303).
Metodos:
Foram selecionados voluntários normolipidêmicos e assintomáticos (F= 153, M= 150; 19-75 anos)
do Projeto Temático FAPESP (nº 2006/60585-9), aprovado pelo Comitê de Ética da instituição. O
DNA genômico foi extraído de sangue venoso periférico utilizando técnicas padronizadas e os
SNPs foram detectados por TaqMan® SNP OpenArray® Genotyping Platform (Applied
Biosystems). Colesterol plasmático (C), triglicérides e HDL-C foram determinados em sistema
automatizado Modular Analytics EVO P (Roche). O tamanho das partículas de HDL-C foram
mensuradas no equipamento Nanotrac Particle Size Analyzer (Microtrac, USA). A atividade da LH
foi avaliada por método radiométrico em amostras de plasma pós-heparina. As análises estatísticas
foram realizadas usando SPSS 16.0 (SPSS Inc., USA) e SAS 9.2 (SAS INC., USA).
Resultados:
Em análises comparativas (p<0,05), a presença do alelo T do SNP -514C>T (CC, n=129; CT+TT,
n=158) mostrou uma diminuição de 16,4% da atividade da LH (CC, 6787±4056; CT+TT,
5658±3583nmoles FL/mL/h) e aumento do tamanho (CC, 7,8±0,6; CT+TT, 8±0,6nm) e volume de
HDL (CC, 142±35; CT+TT, 151±35μ3), além de aumento de 10% da concentração de HDL-C
(CC, 54±22; CT+TT, 60±22mg/dL). Nas análises de regressão linear, a presença do alelo T
mostrou associar-se a maiores concentrações de HDL-C (p=0,0082) e tamanho de HDL (p=0,0157)
e com menor valor de atividade de LH (p=0,0043) do que em sua ausência. As análises
comparativas do SNP -250G>A (GG, n=124; GA+AA, n=161) mostraram que a presença do alelo A
diminui em 17,3% a atividade da LH (GG, 6844±4092; GA+AA, 5657±3564; p=0,007) e aumenta o
tamanho (GG, 7.8±0.6; GA+AA, 8±0) e o volume da HDL (GG, 142±35, GA+AA, 151±35) com
aumento de 10% na concentração de HDL-C (GG, 54±21; GA+AA, 60±22). Em análises de
regressão linear a presença do alelo A mostrou associar-se a maior concentração de HDL-C
(p=0,0115) e tamanho de HDL (p=0,0234) e com menor valor de atividade da LH (p=0,0038) do que
em sua ausência.
Conclusão:
Os polimorfismos -514C>T (rs1800588) e -250G>A (rs2070895) no gene LIPC são associados de
forma semelhante com a diminuição da atividade da LH e com o aumento de parâmetros
físico-químicos da HDL, tais como concentração, volume e tamanho, nesta amostra populacional.
Apoio Financeiro:
Os polimorfismos -514C>T (rs1800588) e -250G>A (rs2070895) no gene LIPC são associados de
forma semelhante com a diminuição da atividade da LH e com o aumento de parâmetros
físico-químicos da HDL, tais como concentração, volume e tamanho, nesta amostra populacional.
Comitê de Ética:
nº 120/2007
2.005 EXERCÍCIO FÍSICO REDUZ O ESTADO INFLAMATÓRIO DE LESÕES
ATEROSCLERÓTICAS EM CAMUNDONGOS HIPERCOLESTEROLÊMICOS
ALIMENTADOS COM DIETA HIPERLIPÍDICA.
Rentz, T. , Wanschel, A. , Dorighello, G. G. , Gil, E. L. , Oliveira, H. C. F. ,
Departamento de Biologia Estrutural e Molecular - UNICAMP
Introducao:
Aterosclerose é uma doença progressiva crônica caracterizada pelo acúmulo de macrófagos
repletos de colesterol na parede arterial. Sabe-se que o exercício físico é eficaz na redução do
tamanho de lesões avançadas caracterizadas por acúmulo lipídico.
Objetivos:
O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência do exercício físico no balanço nitroso/redox e
na inflamação das lesões ateroscleróticas iniciais.
Metodos:
No presente estudo (aprovado pela Comissão de Ética da UNICAMP, protocolo n°3002-1),
camundongos machos deficientes do receptor de LDL, com 8 semanas de idade, foram submetidos
ao treinamento em esteira por 8 semanas ou permaneceram sedentários. Ambos os grupos foram
alimentados com dieta rica em gordura (60% de lipídeos). Após a intervenção, as aortas torácicas
foram coletadas para a avaliação da expressão de marcadores inflamatórios, oxidativos e
nitrosativos através de imunofluorescência. A área de lesão foi mensurada após coloração com Oil
Red por quantificação da imagem (Image J).
Resultados:
Os animais exercitados tiveram uma redução de 54% na área de lesão (p=0,0001), e na expressão
de macrófagos CD68+ do subtipo inflamatório M1 e dos seus marcadores MCP-1 (monocyte
chemoattractant protein-1) e Interleucina-1β. Esses macrófagos mostraram ainda uma
significativa redução na expressão do marcador de estresse do retículo GADD-153. O treinamento
físico também reduziu o estresse nitrosativo evidenciado pela redução na quantidade de
3-nitrotirosina observada nas lesões dos animais treinados em comparação aos sedentários.
Conclusão:
Nossos resultados demonstram que o exercício físico durante o desenvolvimento inicial da placa
aterosclerótica leva a mudanças rápidas e benéficas de tamanho, composição celular e estado
inflamatório da placa.
Apoio Financeiro:
Nossos resultados demonstram que o exercício físico durante o desenvolvimento inicial da placa
aterosclerótica leva a mudanças rápidas e benéficas de tamanho, composição celular e estado
inflamatório da placa.
Comitê de Ética:
Comissão de Ética da UNICAMP,
2.006 Efeitos da quitridiomicose sobre a função cardíaca de Physalaemus
albonotatus e Xenopus laevis
Salla, R. F. , Rizzi, G. M. , Ribeiro, L. R. , Alves, L. M. L. M. , Lambertini, C. , Lima, A. B. C. ,
Silva-zacarin, E. C. M. , Abdalla, F. C. , Kalinin, A. L. , Toledo, L. F. , Costa, M. J. ,
Departamento de Biologia - UFSCar
Departamento de Biologia - UNICAMP
Departamento de Ciências Fisiológicas - UFSCar
Introducao:
Associada ao declínio das populações de anfíbios em todo o mundo a quitridiomicose é uma
doença emergente que vem preocupando as comunidades científicas. Sabe-se que o fungo
Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) afeta o equilíbrio hidroeletrolítico dos animais infectados, o
que pode levá-los à morte por parada cardíaca em casos graves de infecção.
Objetivos:
Nesse sentido, considerando os possíveis efeitos da infecção pelo Bd sobre a função cardíaca dos
anuros e que a susceptibilidade à quitridiomicose varia entre as espécies é que o presente estudo
comparou os efeitos da infecção pelo Bd entre duas espécies de anuros (Physalaemus albonotatus
vs Xenopus laevis ).
Metodos:
Para tanto, foi realizada a infecção dos animais com a cepa LFT021 (durante 1 semana) e após a
eutanásia analizou-se a função cardíaca in loco através da freqüência cardíaca (exposição do
pericárdio e contagem visual dos batimentos) e da massa ventricular relativa (massa ventricular
como uma porcentagem da massa corpórea) e in vitro (aquisição de registros pelo AQCAD - AVS
Projetos).
Resultados:
Os P. albonotatus infectados apresentaram uma bradicardia (116 ± 2 bpm) quando comparado ao
grupo controle ( 136 ± 3 bpm), enquanto, o que pode ser um efeito direto da desregulação osmótica
sobre a modulação da frequência cardíaca no tecido marcapasso. Analisando-se a massa
ventricular relativa, houve uma atrofia (P <0,05) no músculo cardíaco dos P. albonotatus infectados(
0,188 ± 0,004%) quando comparados aos seus controles ( 0,263 ± 0,005%), o que pode ser uma
consequência de letargia e anorexia causada pela infecção. A análise dos registros da força de
contração dos P. albonotatus também apresentou-se reduzida (~ 40%) com relação aos controles.
Para X. laevis não houve alterações na frequência cardíaca in loco entre o grupo infectado (84 ± 6
bpm) e o grupo controle (84 ± 6 bpm), porém observou-se uma hipertrofia nos infectados, (Massa
ventricular relativa Bd: 0,19 ± 0,02; CT: 0,10 ± 0,01 %), o que demonstra uma maior tolerância da
espécie è infecção, além de uma estratégia de manter o débito cardíaco frente à infecção. A força
de contração de X. laevis não foi alterada frente a infecção, corroborando uma maior tolerância da
espécie ao Bd.
Conclusão:
Os biomarcadores de função cardíaca são de extrema importância para a compreensão da
susceptibilidade e dos mecanismos de tolerâncias desempenhados por diferentes espécies,
especialmente no que diz respeito às espécies nativas brasileiras, consideradas mais susceptíveis.
Apoio Financeiro:
Os biomarcadores de função cardíaca são de extrema importância para a compreensão da
susceptibilidade e dos mecanismos de tolerâncias desempenhados por diferentes espécies,
especialmente no que diz respeito às espécies nativas brasileiras, consideradas mais susceptíveis.
Comitê de Ética:
protocolo 022/2010
2.007 Estudo do efeito do estrógeno no processo de envelhecimento vascular:
participação da COX 1.
Costa, T. J. , Dantas, A. P. , Jimenez-altayo, F. , Fortes, Z. B. , Akamine, E. H. , Vila, E. , Carvalho,
M. H. C. ,
Farmacologia, Terapèutica i Toxicologia - UAB
Institut Clinic del Torax (Aterosclerosis y Enferm - IDIBAPS
Farmacologia - ICB-USP
Introducao:
O envelhecimento é um processo fisiológico associado ao aumento da morbidade e mortalidade
cardiovascular mesmo na ausência de fatores de risco. Ao longo desse processo de
envelhecimento observa-se diversas modificações estruturais e funcionais vasculares que podem
gerar enfermidades. Dentre as enfermidades o Acidente Vascular Encefálico (AVE) representa a
terceira causa-morte e a primeira causa de incapacidade física e cognitiva no mundo. Nas
mulheres, não podemos descartar que o aumento do risco de doenças cardiovasculares pode estar
associado não somente ao envelhecimento, mas também à diminuição da produção endógena de
hormônios sexuais. Apesar disso, poucos estudos avaliam a funcionalidade dos vasos cefálicos no
processo de envelhecimento feminino.
Objetivos:
Avaliar o papel do estrógeno endógeno no processo de envelhecimento vascular em carótidas
comum utilizando o modelo murino de senescência acelerada (SAMP8) e seu controle resistente à
senescência (SAMR1).
Metodos:
Os procedimentos foram aprovados pelo “Comité Étic d’Experimentació Animal
– Universidad de Barcelona (272/12). Foram utilizadas fêmeas SAMR1 e SAMP8 com 24
semanas de idade e cada uma das linhagens foram divididas em dois grupos: falsa-operadas
(grupo SHAM) e ovariectomizadas (grupo OVX). Sessenta dias após a ovariectomia, curvas
concentração-efeito (CEE) foram realizadas à fenilefrina (PHE), agonista α-adrenérgico (0,1
nM - 10 uM), na ausência ou presença de tempol (100 mM), sequestrador de espécies reativas de
oxigênio (EROs), e NS398 (10 mM) e SC 560 (10 mM), inibidor seletivo da ciclooxigenase (COX) 1
e 2, respectivamente. Os resultados foram expressos como % da contração induzida pelo cloreto
de potássio (50 mM) . Os resultados são apresentados como média ± EPM. As análises estatísticas
foram realizadas utilizando-se análise de variância (ANOVA) de uma via, seguida pelo teste de
Tukey. “n” representa o número de animais. Os valores foram considerados
estatisticamente significativos quando p<0,05.
Resultados:
A resposta máxima (Rmax) nos anéis de carótidas isolados foi maior no grupo SAMP8-SHAM
(123,3±24%; n=11) comparando-o com aquela do grupo SAMR1-SHAM (87,2±20%; n=24). O
procedimento de OVX não alterou a Rmax no grupo SAMR1-OVX (85,3±24%, n=17), mas reduziu a
Rmax no grupo SAMP8-OVX (88,8±11%; n=7). Nas fêmeas SAMR1, o tempol não alterou a Rmax
no grupo SHAM, mas reduziu em 40% a Rmax no grupo OVX (52,5±13%; n=5). Os inibidores
seletivos para COX1 e COX2 não alteraram a Rmax nas fêmeas SAMR1-SHAM e SAMR1-OVX.
Nas fêmeas SAMP8, o tempol reduziu em 16% a Rmax nas fêmeas SHAM (100,7±15% n=5), e
20% nas OVX (71,6±12% n=7). O inibidor da COX1 reduziu em 70% a Rmax nas fêmeas SHAM
(40,0±23% n=3) e não alterou nas OVX. O inibidor da COX 2 não exerceu nenhum efeito na Rmax
nos dois grupos experimentais.
Conclusão:
Nossos resultados indicam que o estrógeno endógeno contribui para o processo de envelhecimento
nas fêmeas SAMP8 aumentando a resposta à PHE por liberação de prostanóides derivados da
COX1.
Apoio Financeiro:
Nossos resultados indicam que o estrógeno endógeno contribui para o processo de envelhecimento
nas fêmeas SAMP8 aumentando a resposta à PHE por liberação de prostanóides derivados da
COX1.
Comitê de Ética:
272/2
2.008 MIOCÁRDIO DE PEIXE COMO MODELO PARA ESTUDO DE NOVOS
FÁRMACOS: EFEITOS DA ALTERNAGINA-C, UMA PROTEÍNA EXTRAÍDA DO
VENENO DA SERPENTE URUTU
Monteiro, D. A. , Kalinin, A. L. , Araujo, H. S. S. , Rantin, F. T. ,
Departamento de Ciências Fisiológicas - UFSCar
Introducao:
A alternagina-C (ALT-C) é uma proteína tipo desintegrina purificada do veneno bruto da serpente
urutu (Rhinocerophis alternatus) capaz de promover a angiogênese de pele lesada de rato in vivo e
a migração e proliferação de células endoteliais in vitro. As doenças cardiovasculares são as
principais causas de morte na população brasileira e a descoberta de moléculas capazes de
estimular angiogênese tem causado crescente interesse na aplicação terapêutica.
Objetivos:
O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da ALT-C sobre a contratilidade cardíaca do
peixe traíra, Hoplias malabaricus, em normóxia e durante a hipóxia. Estudos prévios em nosso
laboratório evidenciaram que o manejo de cálcio no interior do miócitos de traíra é semelhante
àquele exibido por mamíferos, como o coelho e cobaias.
Metodos:
Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de
Animais da UFSCar. Exemplares adultos de ambos os sexos, foram divididos em 2 grupos
experimentais: grupo alternagina-C (ALT-C, n = 21) que recebeu ALT-C , via intra-arterial, na
concentração de 0,5 mg/kg de massa corpórea e grupo controle (Ct, n = 12) que recebeu injeção de
salina. Após 7 dias, os peixes foram sacrificados para a remoção do coração e preparo de tiras
ventriculares para o registro, in vitro, da força de contração isométrica (Fc) e das taxas de
contração e relaxamento. Os registros foram obtidos em diferentes frequências de estimulação em
normóxia (2% CO2; 98% O2), em hipóxia (2% CO2; 3% O2; 95% N2) e posterior reoxigenação. O
índice de capacidade de bombeamento cardíaco (CBC) foi calculado multiplicando-se a Fc pela
frequência. Os dados foram analisados com teste t-Student para identificar diferenças entre os
grupos Ct e ALT-C e análise de variância Anova One-way complementada pelo pós-teste de Tukey
para a identificação de alterações dentro de um mesmo grupo ao longo dos incrementos sucessivos
na frequência.
Resultados:
Em normóxia, o tratamento com a ALT-C causou um aumento significativo (p<0,05) na Fc (80%),
nas taxas de contração (102%) e de relaxamento (130%) e na CBC (352%). Ao longo da hipóxia,
os peixes tratados com ALT-C também apresentaram valores significativamente maiores da Fc
(81%) e das taxas de contração (68%) e relaxamento (62%) em relação ao grupo Ct, além de
serem
capazes
de
suportarem
frequências
máximas
de
estimulação
mais
elevadas.
Simultaneamente, as tiras ventriculares dos peixes tratados com ALT-C foram capazes de manter
constantes os valores de Fc ao longo da hipóxia e posterior reoxigenação, enquanto que o
miocárdio isolado dos peixes do grupo Ct sofreu redução progressiva e significativa (30%) da Fc
após 15 min de hipóxia e a reoxigenação subsequente não restabeleceu seus valores ao nível
verificado no início da hipóxia.
Conclusão:
A ALT-C promove efeitos inotrópicos e cronotrópicos positivos capazes de melhorar a resistência
do miocárdio aos efeitos deletérios da hipóxia. Assim, a ALT-C pode apresentar potencial ao
protótipo de fármaco em terapia relacionada a diversas doenças cardíacas.
Apoio Financeiro:
A ALT-C promove efeitos inotrópicos e cronotrópicos positivos capazes de melhorar a resistência
do miocárdio aos efeitos deletérios da hipóxia. Assim, a ALT-C pode apresentar potencial ao
protótipo de fármaco em terapia relacionada a diversas doenças cardíacas.
Comitê de Ética:
CEUA/UFSCar (#049/2012).
2.009 Comparison of Dyslipidemias and cardiovascular risk in different primary
immunodeficiencies: Ataxia Telangiectasia, Common Variable
Immunodeficiency (CVID) and X-linked agammaglobulinemia (XLA)
Vieira, D. G. , Andrade, I. G. A. , Silva, R. , Costa-carvalho, B. T. , Sarni, R. O. S. , Hix, S. ,
Morfologia e Fisiologia - FMABC
Pediatria - UNIFESP
Departamento de Nutrição - UNIFAL
Introducao:
Ataxia telangiectasia (AT) is an autossomic recessive neurodegenerative disease characterized by
higher cancer risk, immunodeficiency in addition to higher oxidative stress. Common Variable
Immunodeficiency (CVID) and X-linked agammaglobulinemia (XLA) are primary immunodeficiencies
(IDP`s) classified as antibody deficiencies resulting in hypogammaglobulinemia. In a similar fashion
as other chronic diseases, IDPs may be associated with inflammatory and endocrine disorders, and
the exacerbation of oxidative stress.
Objetivos:
Evaluate and compare the lipid profile of ataxia telangiectasia patients with CVID and XLA patients
and with healthy controls in order to assess their cardiovascular risk.
Metodos:
A cross-sectional study was performed with 13 AT patients (12 boys) and 22 controls (20
boys) (mean age 14.6 y). In parallel a cross-sectional study was performed with CVID (n=18) and
XLA (n=6) (mean age 32.1 y, both genders) and 12 controls (mean age age 29.3 y, both genders).
The Immunology Clinic of the Pediatric Department of UNIFESP/EPM attended patients from both
studies. The participants were submitted to nutritional assessment. Total cholesterol and fractions
(LDL-c, HDL-c, VLDL-c and Non HDL-c), C-reactive protein (CRP), tumor necrosis factor alpha
(TNF-alpha) were measured. The Ethical Research Committee of UNIFESP approved the Projects
(0823/11 and 0570/11). Statistical analysis was performed using SPSS18,0 and SPSS 20.0.
Resultados:
Despite the fact that AT patients had a statistically lower Body Mass Index BMI (median: 15,9 kg/m2
p 0,037) and height (median: 1,4 m p 0,042) compared to controls BMI (median 17,8 kg/m2) and
height (median 1,6 m), they had a lower lean body mass index (median 12,9 kg/m2 p=0,003) than
controls (median 15,9 kg/m2). Patients with CVID and XLA showed no difference in anthropometric
measurements compared to controls. AT patients had statistically higher and inadequate cholesterol
levels (median 179 mg/dL (130,0-290,00) p =0,038) compared to control cholesterol levels (median
153,5 mg/dL). AT patients also had statistically higher and inadequate triglyceride levels (median
91,0 mg/dL (61,0-256,0) p=0,005) compared to control cholesterol levels (median 65,5 mg/dL). In
addition they showed statistically significant higher levels of LDL-c (119 mg/dL, p= 0,003), VLDL-c
(18,0 mg/dL p= 0,004), Non HDLc (141,0 mg/dL p= 0,001;), and lower levels of HDL-c (41,0 mg/dL
p= 0,008). Patients with CVID and XLA showed only differences in HDL-c concentrations (43,0±17,5
mg/dL p 0,025) in comparison to normal controls (57,5±16,0 mg/dL), but had a higher inflammatory
profile as evidenced by higher CRP (1,58 mg/dL (0,02-13,4), p 0,008) and TNF-alpha (10,5 pg/mL,
(4,77-32,0) p <0,001) values, not found in AT patients.
Conclusão:
AT patients have a lower lean body index and higher cardiovascular risk as evidenced by higher
cholesterol and triglycerides levels and fractions, in particular higher levels of Non HDLc associated
with lower levels of HDLc, while CVID and XLA patients despite not having differences in
anthropometric parameters have lower levels of HDL-c and higher inflammatory markers (TNF-alpha
and CRP). This is the first time that lipid alterations are described in AT, CVID and XLA patients as
far as we know. The improvement in treatment protocols had a positive impact on patient survival
raising the concern of the development of other chronic diseases such as cardiovascular disease.
Apoio Financeiro:
AT patients have a lower lean body index and higher cardiovascular risk as evidenced by higher
cholesterol and triglycerides levels and fractions, in particular higher levels of Non HDLc associated
with lower levels of HDLc, while CVID and XLA patients despite not having differences in
anthropometric parameters have lower levels of HDL-c and higher inflammatory markers (TNF-alpha
and CRP). This is the first time that lipid alterations are described in AT, CVID and XLA patients as
far as we know. The improvement in treatment protocols had a positive impact on patient survival
raising the concern of the development of other chronic diseases such as cardiovascular disease.
Comitê de Ética:
2.010 Papel dos núcleos dorsomedial e paraventricular do hipotálamo na
resposta hipertensiva induzida pelo bloqueio dos receptores 5-HT3 na área
septal medial.
Rodrigues, L. S. U. , Ferreira, H. S. , Perrone, C. F. , Andrade, J. M. , Fregoneze, J. B. ,
Biorregulação - UFBA
Ciências da Vida - UNEB
Introducao:
Dados prévios do laboratório demonstram que o bloqueio dos receptores 5-HT3 na área septal
medial (ASM), induz uma resposta hipertensiva. Além disso, a ondansetrona , um antagonista dos
receptores 5-HT3, injetado na ASM promove aumento da expressão de Fos em áreas cerebrais
relacionadas com o controle cardiovascular, incluindo o núcleo dorsomedial (DMH) e núcleo
paraventricular (PVN) do hipotálamo.
Objetivos:
No presente estudo, investigamos o efeito da lesão do PVN e DMH nas respostas pressora
induzida por injeções de ondansetrona na ASM.
Metodos:
Ratos Wistar (280-300) foram submetidos à cirurgia estereotáxica e receberam injeção de ácido
ibotênico (1 mg/0.2 mL) no DMH ou PVN seguido de implante de cânula guia na ASM. Um cateter
foi inserido na artéria carótida para registar a pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca
(FC) 24 horas antes dos experimentos.
Resultados:
Ratos com lesão fictícia do DMH e do PVN que receberam injeção de ondansetrona na ASM
apresentaram aumento na PAM (21,9 ± 3,0 mmHg, n= 7). A resposta hipertensiva promovida pelo
bloqueio dos receptores 5-HT3 na ASM foi inibida pela lesão no DMH (MAP: 5 ± 3 mm Hg; n= 8) e
no PVN (MAP : 5 ± 3 mm Hg; n= 6). A FC não foi alterada por injeções de ondansetrona na ASM,
tanto nos grupos com lesões fictícias (28 ± 20 bpm) quanto nos grupos com lesão no DMH (25 ± 8
bpm) ou no PVN (8 ± 27 bpm).
Conclusão:
Os resultados sugerem que a conexão anatômica entre MSA, DMH e PVN é importante para a
resposta hipertensiva induzida pelo bloqueio dos receptores 5-HT3 no ASM.
Apoio Financeiro:
Os resultados sugerem que a conexão anatômica entre MSA, DMH e PVN é importante para a
resposta hipertensiva induzida pelo bloqueio dos receptores 5-HT3 no ASM.
Comitê de Ética:
CEUA-ICS-UFBA# 025/2012
2.011 Efeitos de um programa de treinamento físico sobre a capacidade
funcional aeróbia e sua relação com o polimorfismo I/D do gene da ECA em
pacientes com doença arterial coronariana
Kunz, V. C. , Tamburus, N. Y. , Salviatti, M. , Rebelo, A. C. S. , Silva, E. , Verlengia, R. ,
Pós Graduação - UNASP-EC
Departamento de Fisioterapia - UFSCar
Departamento de Ciências da Saúde - UNIMEP
Introducao:
A relação do polimorfismo I/D do gene da ECA com os efeitos do treinamento físico tem sido
estudada em diferentes amostras populacionais, com resultados ainda controversos.
Objetivos:
O objetivo do estudo foi investigar a influência do treinamento físico aeróbio intermitente (TFAI) em
voluntários com doença arterial coronariana (DAC) que apresentam o polimorfismo I/D do gene da
ECA no ganho de capacidade funcional aeróbia.
Metodos:
A amostra foi composta por 20 homens (54±8 anos) com DAC confirmada por cinecoronariografia.
Os mesmos e classificados como homozigotos para os alelos D e I ou heterozigotos (ID) no teste
de genotipagem. Todos os participantes do estudo faziam uso de medicamentos para controle da
DAC,
como
hipolipêmicos
(84%),
anti-hipertensivos(69%),
betabloqueadores
(75%)
e
antiplaquetários (100%). Após 30 dias do procedimento de angioplastia e com autorização médica
os voluntários foram submetidos ao teste cardiopulmonar (TCP) submáximo, antes (AT) e após
(PT) um programa de TFAI. O TFAI é considerado de intesidade moderada, uma vez que foi
realizado em potências de 70%, 80%, 100% e 110% Watts do nível do limiar de anaerobiose
ventilatório (LAV), numa frequencia de 3 vezes/semana, por um período de 16 semanas,
considerando todas as respostas hemodiâmicas dos voluntários, par aprogressão do treinamento.
Análise estatística: Teste Anova one way, com α=5%.
Resultados:
As frequências do alelo D e do alelo I dos voluntários foram 52,5% e 47,5%, respectivamente. Os
portadores
dos
genótipos
DD
apresentaram
os
seguintes
valores
para
as
variáveis
cardiorrespiratórias no período AT e PT, respectivamente: frequência cardíaca (FC bpm)=
118.6±15.6 e 118.6±15.6, pressão arterial sistólica (PAS mmHg)= 179.4±16.5 e 169.4±18.4,
pressão arterial diastólica (PAD mmHg)= 94.8±10.0 e 93.3±5.0, consumo de oxigênio expresso por
VO2(mL/kg-1/min-1)= 14.5±2.7 e 16.4±2.9, potências (watts)= 83.8±20.4 e 102.2±32.0 e ventilação
(VE (L/min))= 27.7±7.7 e 35.5±12.5. Já os portadores do genótipo DI apresentaram as seguintes
resultados no período AT e PT: FC (bpm)= 107.1±11.8 e 106.2±16.2, PAS (mmHg)= 175.8±23.3 e
165.8±11.1, PAD (mmHg)= 92.0±8.4 e 84.0±5.5, VO2(mL/kg-1/min-1)= 15.3±4.5 e 17.8±4.5,
potências (watts)= 84.3±28.5 e 100.6±27.8 e VE (L/min)= 32.8±5.8 e 37.8±7.0. Os portadores do
genótipo II apresentaram as seguintes resultados no período AT e PT: FC (bpm)= 102.5±15.6 e
109.7±14.3, PAS (mmHg)= 168.0±16.0 e 163.0±14.8, PAD (mmHg)= 90.0±8.9 e 83.3±10.3,
VO2(mL/kg-1/min-1)= 13.4±1.9 e 18.7±2.2, potências (watts)= 78.8±14.6 e 114.7±26.4 e VE
(L/min)= 28.6±5.7e 39.1±9.7. Entre os portadores do genótipo DD, DI e II, antes e após o TFAI não
foram observadas diferenças nos valores das variáveis cardiorrespiratórias (p>0,05). Na análise
comparando AT e PT, as variáveis VO2(mL/kg-1/min-1), potência (Watts) e VE (L/min) foram
maiores e PAD (mmHg) foi menor após o TFAI.
Conclusão:
O TFAI foi capaz de melhorar a capacidade funcional no LAV, independente da característica
genotípica. Por outro lado, não houve associação entre o polimorfismo I/D do gene da ECA e o
desempenho aeróbio para os voluntários com DAC.
Apoio Financeiro:
O TFAI foi capaz de melhorar a capacidade funcional no LAV, independente da característica
genotípica. Por outro lado, não houve associação entre o polimorfismo I/D do gene da ECA e o
desempenho aeróbio para os voluntários com DAC.
Comitê de Ética:
Este trabalho foi avaliado e aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Humana, da
Universidade Metodista de Piraricaba, SP (UNIMEP).
2.012 EFFECTS OF SHORT-TERM FORMALDEHYDE EXPOSURE IN RAT
HEART
Sampaio, J. S. , Campos, K. K. D. , Martins, T. L. , Lima, W. G. , Bezerra, F. S. ,
Department of Biological Sciences (DECBI) - Federal University of OuroPreto (UFOP)
Introducao:
Formaldehyde is considered toxic and carcinogenic by The International Agency for Research on
Cancer (IARC). It is a highly water soluble compound which facilitates its absorption through the
respiratory tract.The most frequent contact with this compound occurs by inhalation.
Objetivos:
This study aimed at evaluating inflammatory process and oxidative effects caused to heart in
animals exposed to different concentrations of formaldehyde.
Metodos:
The study was approved by the Commission of Ethics in the Use of Animals of the Federal
University of OuroPreto (CEUA 2011/01). Male Fischer rats (n = 28, adults, 180 – 200 grams)
were divided in four groups: control (GC), exposed to ambient air and three groups with the following
formaldehyde solutions: 1% (FA1), 5% (FA5) and 10% (FA10). An ultrasonic nebulizer (Ultra-Relief
Inhaler Multipower - Unique Group) coupled to a chamber was used to produce air suspension,
containing 1%, 5% and 10% formaldehyde solution during twenty minutes, three times per day
during five days. Twenty four hours after the last exposure, the animals were euthanized and the
heart was collected for analysis of oxidative damage (reactive substances to thiobarbituric acid TBARS) and activity of antioxidant enzyme catalase, as well as quantitative histological analysis of
the cellular influx to evaluate if the exposure to formaldehyde increase the influx of inflammatory
cells. The normal distribution of each variable was evaluated using the Kolmogorov–Smirnov
test and was expressed as means ± SEM. For comparison among groups, one-way ANOVA
followed by the Tukey post-test was performed (p < 0.05).
Resultados:
The analysis of lipid peroxidation (nmol/mg protein) in heart showed an increase in FA10 (0,35
±0,07) in relation to FA5 (0,17 ± 0,03), FA1(0,18 ± 0,03) and CTR (0,19 ± 0,02). There was a
reduction of enzyme activity (U /mg protein) in FA10 (0,61± 0,08) and FA5 (0,54 ± 0,04) compared
to FA1 (0,88±0,05) and CTR (0,93±0,07). We observed an increase in the number of inflammatory
cells (cell/mm2) in FA1 (150.3 ± 3.7), FA5 (137.6 ± 4.6) and FA10 (137.1 ± 5.9) compared to the
CTR (99.04 ± 2.5). Regarding the relative weight of the organs, there was no significant difference
between groups.
Conclusão:
Exposure to different concentrations of formaldehyde solution increased the numbers of
inflammatory cells to the heart as well as redox imbalance. However, other analyzes, such as
activity of others antioxidant enzymes, will be conducted to understand the mechanisms associated
with exposure to formaldehyde.
Apoio Financeiro:
Exposure to different concentrations of formaldehyde solution increased the numbers of
inflammatory cells to the heart as well as redox imbalance. However, other analyzes, such as
activity of others antioxidant enzymes, will be conducted to understand the mechanisms associated
with exposure to formaldehyde.
Comitê de Ética:
CEUA 2011/01
2.013 INVESTIGAÇÃO DOS EFEITOS VASCULARES DAS FRAÇÕES DAS
FOLHAS DE TOCOYENA BULLATA (RUBIACEAE).
Carmo, P. L. , Valentim, T., Leal, I. C. R., Muzitano, M. F., Raimundo, J. M., Ramos, R. G. ,
Laboratório Integrado de Pesquisa - UFRJ campus Macaé
Introducao:
A hipertensão arterial sistêmica (HAS) é o principal fator de risco para doenças cardiovasculares,
sendo essas a principal causa de morte em todo o mundo. O controle da HAS pode ser promovido
pelo relaxamento da musculatura lisa vascular, com o uso de vasodilatadores. Para algumas
espécies da família Rubiaceae já foram descritas ações cardiovasculares. O extrato etanólico da
raiz de Morinda citrifolia, por exemplo, tem efeito vasodilatador (BCM Complement Altern. Med.
10;2, 2010) e o extrato metanólico da raiz tem ação antioxidante (Food Chem. 78;227,2002). O
extrato aquoso de caule da Mitragyna inermis, também da família Rubiaceae, possui ação
hipotensora, cardioinotrópica positiva além de aumentar o fluxo sanguíneo coronariano (J.
Ethnopharmacol. 93;345,2004). Tocoyena bullata é uma espécie encontrada no Parque Nacional
da Restinga de Jurubatiba (RJ), que ainda não possui suas atividades farmacológicas estudadas.
Objetivos:
Investigar o efeito vasodilatador das frações das folhas de T. bullata em aortas de ratos.
Metodos:
O protocolo experimental foi aprovado pelo CEUA/CCS-UFRJ, sob protocolo MACAÉ01. A
atividade vasodilatadora das frações das folhas de T. bullata foram investigadas em aortas isoladas
de ratos Wistar machos de 3 a 4 meses (220-280
g). Os animais foram anestesiados e
eutanasiados para dissecção da aorta torácica. Os anéis de aorta foram preparados para registro
de tensão isométrica sendo posicionados em hastes experimentais em cubas verticais preenchidas
com solução Krebs-Henseilet continuamente oxigenada com mistura carbogênica (95% O2/5%
CO2), à 37ºC. A contratura do músculo liso vascular foi induzida com 10 µM de fenilefrina, seguida
da exposição a concentrações cumulativas das frações hexânica, diclorometânica, em acetato de
etila ou butanólica (1-300 μg/ml). Foram utilizados anéis de aorta com endotélio, sendo este
considerado íntegro quando o relaxamento induzido por acetilcolina (10 µM) fosse superior a 80%.
Foi utilizado o teste de análise de variância One-way - ANOVA, seguido do teste de Dunnett (Prism
5.0), sendo as diferenças consideradas estatisticamente significativas quando P< 0,05.
Resultados:
A fração em acetato de etila das folhas de T. bullata (n= 4) provocou relaxamento vascular dos
anéis de aorta com endotélio de forma dependente da concentração, sendo este de 20,8 ± 8,1 %
na concentração de 300 μg/ml (P<0,05). A fração diclorometânica (n= 3) apresentou um feito
bifásico, sendo observado relaxamento significativo de 12,0 ± 2,6 % e 13,2 ± 1,5 % nas
concentrações de 10 e 30 μg/ml (P<0,05), respectivamente, seguido de contração nas
concentrações de 100 e 300 μg/ml.
Conclusão:
Estes resultados indicam que as frações em acetato de etila e diclorometânica das folhas de T.
bullata provocam relaxamento vascular em aortas com endotélio. Os efeitos vasculares das demais
frações das folhas de T. bullata ainda estão sendo avaliados.
Apoio Financeiro:
Estes resultados indicam que as frações em acetato de etila e diclorometânica das folhas de T.
bullata provocam relaxamento vascular em aortas com endotélio. Os efeitos vasculares das demais
frações das folhas de T. bullata ainda estão sendo avaliados.
Comitê de Ética:
2.014 BLOCKADE OF CATALASE REDUCES ARTERIAL PRESSURE IN
2-KIDNEYS, 1-CLIP HYPERTENSIVE RATS.
Lauar, M. R. , De Luca Jr, L.A., de Paula, P. M. , Colombari, D. S. A. , Colombari, E. , Menani, J. V. ,
Department of Physiology and Pathology, Dentistry School - Araraquara/SP - UNESP
Introducao:
Previous studies have shown that the increase of endogenous hydrogen peroxide (H2O2) with the
administration of the catalase inhibitor 3-amino-1,2,4-triazol (ATZ) intravenously acutely reduced
mean arterial pressure (MAP) in renal hypertensive rats.
Objetivos:
In the present study, we investigated the effects of chronic subcutaneous (sc) administration of ATZ
on arterial pressure and fluid balance in 2-kidneys, 1-clip (2K1C) hypertensive rats.
Metodos:
Male Holtzman rats (initial weight 150-180 g, n=4-7/group) received a silver clip around the left renal
artery to generate 2K1C hypertension. Four weeks after the renal surgery, when the hypertension
was well established, a polyethylene tubing (PE-10 connected to a PE-50) was inserted into the
abdominal aorta through the femoral artery to record MAP and heart rate (HR) in unanesthetized
freely moving rats for the next 9 days (control baseline MAP and HR in the first 2 days and daily ATZ
or saline treatment in the next 7 days). Another group of 2K1C hypertensive rats were housed in
metabolic cages for measurements of daily water and food intake and renal excretion for 14 days
(control measurements in the first 5 days and daily ATZ or saline treatment in the next 9 days).
Resultados:
The sc injections of ATZ (600 mg/kg/day) significantly reduced MAP in 2K1C hypertensive rats
(ATZ: 137 ± 12, vs. saline: 181 ± 9 mmHg on the 7th day of treatment, p < 0.05), without changing
HR (ATZ: 429 ± 17, vs. saline: 430 ± 16 bpm). Daily water and food intake and renal excretion were
not modified by the treatment with sc ATZ.
Conclusão:
In conclusion, the results show that chronic treatment with ATZ reduced MAP in renovascular
hypertensive rats, without changing body fluid balance or HR. The results suggest that the increase
of endogenous H2O2 availability decreases the activity of the pressor mechanisms, reducing blood
pressure in 2K1C hypertensive rats.
Apoio Financeiro:
In conclusion, the results show that chronic treatment with ATZ reduced MAP in renovascular
hypertensive rats, without changing body fluid balance or HR. The results suggest that the increase
of endogenous H2O2 availability decreases the activity of the pressor mechanisms, reducing blood
pressure in 2K1C hypertensive rats.
Comitê de Ética:
Proc. CEUA n° 09/2013
2.015
Oxidative stress and blunted L-arginine-induced nitric oxide synthesis in
hypertensive patients
Rocha, H. N. M. , Rocha, N. G. , Garcia, V. P. , Cardoso, I. R. C. , Amaral, T. A. G. , Silva, G. M. ,
Barbosa, T. C. , Fernandes, I. A. , Nobrega, A. C. L. , Secher, N. H. , Vianna, L. C. ,
Department of Physiology and Pharmacology - Fluminense Federal University
Department of Anaesthesiology - University of Copenhagen
Faculty of Physical Education - UnB
Introducao:
Defective L-arginine–nitric oxide pathways and/or redox homeostasis are related to an
impaired endothelium-dependent vasodilation in hypertension.
Objetivos:
We determined the effects of exogenous L-arginine infusion on NO synthesis, metalloproteinase-9
(MMP-9) activity, and oxidative stress in hypertensive patients.
Metodos:
Blood samples were drawn from nine hypertensive (HT, 49±3yr) and five normotensive men (CT,
43±6yr) before, during and after 30-minute intravenous infusion of L-arginine (30g). Serum NO
(NO analyzer) and MMP-9 activity (gelatin zymography) were measured. Thiobarbituric acid reactive
substances (TBARS) were quantified as a proxy of oxidative stress.
Resultados:
At baseline, NO (CT 0.45±0.05 vs. HT 0.42±0.31, P=0.65) and MMP-9 activity (CT 0.92±0.19 vs. HT
0.90±0.13, P=0.93) were similar between groups, while TBARS were higher in HT (CT, 4.88±0.70
vs. HT 6.73±0.53, P=0.047). During L-arginine infusion, NO increased only in CT (Baseline,
0.45±0.05 vs. Infusion, 0.60±0.07, P=0.02) and it was different between groups (CT, 0.60±0.07 vs.
HT, 0.40±0.04, P<0.01). MMP-9 activity decreased similarly in both groups (CT Baseline 0.92±0.19
vs. Infusion 0.65±0.14, P=0.049; HT Baseline, 0.90±0.13 vs. Infusion 0.64±0.09, P<0.01). The
L-arginine infusion induced-change (Δ Infusion-Baseline) on NO was negatively associated
with baseline systolic blood pressure (r=-0.71, P<0.047), and with MMP-9 activity change (r=-0.69,
P=0.04) in HT. After infusion, NO and MMP-9 activity returned to baseline levels. Yet, MMP-9
activity (Δ Post infusion-Baseline) tended to be higher in HT (CT -27.16±10.74 vs. HT
0.37±8.30; P=0.068). Only HT group increased TBARS after the infusion (Infusion 6.02±0.49 vs.
Post-infusion 7.58±0.57, P<0.01) and it was different between groups (CT 5.38±0.76 vs. HT
7.58±0.57, P=0.02).
Conclusão:
Preliminary findings indicated that hypertensive patients presented impaired NO synthesis in
response to L-arginine infusion and a late increase in oxidative stress.
Apoio Financeiro:
Preliminary findings indicated that hypertensive patients presented impaired NO synthesis in
response to L-arginine infusion and a late increase in oxidative stress.
Comitê de Ética:
(CAAE 01634412.9.0000.5243).
2.016 EFEITO DO TECIDO ADIPOSO PERIVASCULAR SOBRE A REATIVIDADE
VASCULAR DE RATOS INFARTADOS
Fontes, M. T. , Couto, G. K. , Rossoni, L. V. ,
Departamento de Fisiologia e Biofísica - USP
Introducao:
Dados da literatura têm demonstrado a capacidade anticontrátil do tecido adiposo perivascular
(PVAT), entretanto na presença de algumas doenças cardiovasculares, como a hipertensão arterial,
o diabetes e a obesidade, este efeito é perdido. Em modelos de infarto do miocárdio (IM)
observa-se a existência de alterações na função vascular, as quais são atribuídas a ajustes na
função endotelial e do músculo liso vascular (MLV). Entretanto, ainda não se tem relato do papel do
PVAT nos ajustes de reatividade vascular pós-IM.
Objetivos:
Avaliar a influência do PVAT na reatividade vascular da aorta de ratos submetidos ao IM.
Metodos:
Sob aprovação do comitê de ética n° 071, folha 104, livro 02 (ICB/USP), ratos Wistar (250 ± 20g)
foram submetidos à cirurgia de ligadura da artéria coronária descendente anterior, resultando em
animais infartados (IM, N=8) e falsos operados (SHAM, N=9). Após 12 semanas, sob anestesia, foi
realizado o cateterismo cardíaco para avaliar a hemodinâmica do ventrículo esquerdo (VE) [pressão
sistólica do VE (PSVE), pressão diastólica final do VE (PDfVE) e primeira derivada de pressão pelo
tempo positiva (dP/dt+) e negativa (dP/dt-)]. A área de infarto (AI) foi avaliada por planimetria e a
razão dos pesos úmidos do ventrículo direito (VD), ventrículo esquerdo (VE) e pulmão (PU)
corrigido pelo comprimento da tíbia (T) foram mensuradas. Anéis da aorta torácica com endotélio,
na presença (+) e na ausência (-) do PVAT, foram montados em um banho de órgãos para medida
da tensão isométrica e curvas concentração-resposta à fenilefrina (FEN, 10-9–10-5M),
agonista α1-adrenérgico, foram realizadas. Os resultados estão apresentados como média ±
erro padrão. Análise estatística: teste-t de Student ou ANOVA quando apropriado (p <0,05 * vs.
SHAM; # vs. PVAT).
Resultados:
A AI correspondeu a 38,0 ± 1,4% do VE. A PSVE e a dP/dt+ reduziram após 12 semanas de IM
(PSVE; SHAM: 136,0 ± 1,5 vs. IM: 119,2 ± 5,0 mmHg*; dP/dt+; SHAM: 7420,1 ± 399,8 vs. IM:
5906,1 ± 416,0 mmHg*), já a PDfVE estava aumentada pós-IM (PDfVE; SHAM: 5,7 ± 0,5 vs. IM:
13,2 ± 1,7 mmHg*) e a dP/dt- não se alterou. As razões VD/T e PU/T estavam aumentadas pós-IM
(VD/T; SHAM: 4,9 ± 0,2 vs. IM: 12,4 ± 1,2 mg/mm*; PU/T; SHAM: 46,1 ± 3,5 vs. IM: 79,8 ± 7,9
mg/mm*), já a razão VE/T não foi alterada. A resposta máxima (Rmax) contrátil induzida pela FEN
foi maior em anéis de aorta sem PVAT dos animais IM quando comparado aos SHAM (Rmax;
SHAM/PVAT-: 10,5 ± 0,45 vs IM/ PVAT-: 11,8 ± 0,38 mN/mm*). Porém, na presença do PVAT, o
aumento da resposta contrátil à FEN na aorta dos IM foi amplificado quando comparado a condição
anteriormente citada (Rmax; SHAM/PVAT+: 7,6 ± 0,42 vs. IM/PVAT+: 11,8 ± 0,57 mN/mm*); uma
vez que a presença do PVAT reduziu a contração à FEN nas aortas dos SHAM (Rmax;
SHAM/PVAT-: 10,5 ± 0,45 vs. SHAM/PVAT+: 7,6 ± 0,42 mN/mm#) e não modificou a mesma nas
aortas pós-IM (Rmax; IM/PVAT-: 11,8 ± 0,38 vs. IM/PVAT+: 11,8 ± 0,57 mN/mm).
Conclusão:
Os resultados confirmam o efeito anticontrátil do PVAT sobre a reatividade vascular em aorta de
animais saudáveis e sugerem a presença de uma disfunção do PVAT pós-IM, sugerindo que a
disfunção do PVAT seja um mecanismo adicional à disfunção endotelial e do MLV para o aumento
de contratilidade observado pós-IM.
Apoio Financeiro:
Os resultados confirmam o efeito anticontrátil do PVAT sobre a reatividade vascular em aorta de
animais saudáveis e sugerem a presença de uma disfunção do PVAT pós-IM, sugerindo que a
disfunção do PVAT seja um mecanismo adicional à disfunção endotelial e do MLV para o aumento
de contratilidade observado pós-IM.
Comitê de Ética:
2.017 Ação do veneno das espécies de sapos Rhaebo guttatus e Rinnela
marina em aorta de ratos Wistar
Tomazelli, C. A. , Nascimento, M. , Mota, G. A. , Souza, S. L. B. , Debiasi, B. W. , Rodrigues, D. J. ,
Nascimento, A. F. , Nascimento, R. A. L. , Junior, G. M. V. , Sugizaki, M. M. , Bomfim, G. F. ,
Departamento de Farmácia - UFMT
Introducao:
As secreções da pele de anfíbios representam rica fonte de substâncias como peptídeos,
alcaloides, bufadienolídeos, aminas biogênicas e proteínas (Toxicon 72;2013, 43–51). Os
sapos das espécies Rhinella marina e Rhaebo guttatus são comumente encontrados no Mato
Grosso e já foi descrito a composição química de seus venenos, sendo o veneno do R. marina rico
em telocinobufagina, marinobufagina, bufalina e resibufogenina, enquanto R. guttatus apresenta
apenas marinobufagina (Toxicon 72; 2013, 43–51). Ambos venenos são ricos em
bufadienolídeos, sendo que trabalhos publicados já descreveram que esse tipo de substâncias
apresentam propriedades angiogênicas (Life Sci. 60, 127–134. 1997), anti hipertensivas
(Exp. Biol. Med.231; 2006, 215–220), imunossupressoras (Int. Immunopharmacol. 1; 2001,
119–134.), anti tumorais (Toxicon 72;2013, 43–51) e inotrópicas positivas (Eur. J.
Pharmacol.239; 1993, 223–226). No entanto, apesar dessas ações já descritas, pouco se
sabe a respeito da ação vasoativa e do efeito na reatividade vascular desses compostos.
Objetivos:
Nosso objetivo foi verificar a ação vasoativa dos venenos dos sapos R. marina e R. guttatus, que
são ricos em bufadienolídeos, em aorta de ratos Wistar.
Metodos:
O projeto segue normas dos Princípios Éticos na Experimentação Animal do Colégio Brasileiro de
Experimentação Animal (COBEA) e foi aprovado pelo Comitê de Ética (23108.019254/11-0). Doze
ratos machos Wistar foram eutanasiados para a dissecação da aorta torácica. Anéis do vaso, com e
sem endotélio, foram colocados em banho de órgãos isolados com solução de Krebs Henseleit a
37° C, e aerado com O2 95% e CO2 5%, pH 7,4. Curvas concentração resposta para fenilefrina
(10-9 M a 10-5 M) na ausência e presença do veneno dos sapos R. guttatus (0,2 μg/ml,pré
incubado por 30 minutos) e R. marina (0,7 e 7 μg/ml, pré incubado por 30 min) foram
realizadas. Os resultados foram analisados no GraphPrisma usando a análise estatística ANOVA
de uma via.
Resultados:
Observamos a diminuição tanto na resposta Rmax quanto na pD2 nas curvas de concentração
resposta para fenilefrina na presença do R. marina com endotélio (Rmax e pD2: fenilefrina controle,
3,56±0,26 e 7,13±0,12 g; 0,7 μg/mL do veneno 1,47±0,22 e 6,07±0,21 g; e 7 μg/mL do
veneno 2,11±0,32 e 5,8±0,15 g) e sem endotélio (Rmax e pD2: fenilefrina controle, 4,94±0,48 e
8,25±0,06 g; 0,7 μg/mL 2,36±0,34 e 7,51±0,15 g; e 7 μg/mL 1,84±0,46 e 6,6±0,31 g) . A
pré-incubação com veneno da R. guttatus não modificou a curva para fenilefrina. Não foi observada
alterações nas respostas vasodilatadoras para acetilcolina e nitroprussiato de sódio na presença de
ambos venenos.
Conclusão:
O veneno do sapo R. marina apresentou propriedades anti-contráteis independentes do endotélio
em aorta de ratos Wistar, por demonstrar diminuição da resposta contrátil à fenilefrina na presença
do veneno. Não foi observado nenhum efeito vasoativo no veneno do R. guttatus. Dessa forma os
bufadienolídeos presentes no veneno do R. marina que não se encontram no R. guttatus são os
responsáveis pela ação anti-contrátil observada.
Apoio Financeiro:
O veneno do sapo R. marina apresentou propriedades anti-contráteis independentes do endotélio
em aorta de ratos Wistar, por demonstrar diminuição da resposta contrátil à fenilefrina na presença
do veneno. Não foi observado nenhum efeito vasoativo no veneno do R. guttatus. Dessa forma os
bufadienolídeos presentes no veneno do R. marina que não se encontram no R. guttatus são os
responsáveis pela ação anti-contrátil observada.
Comitê de Ética:
23108.019254/11-0
2.018 MODIFICATIONS ON THE NEURONAL CONTROL OF MESENTERIC
VASCULAR TONE IN OFFSPRING DIABETIC RATS: MECHANISMS INVOLVED.
Queiroz, D. B. , Sastre, E. , Caracuel, L. , Blanco-rivero, J. , Balfagon, G. , Xavier, F. E. ,
Dept de Fisiologia e farmacologia - UFPE
Departamento de Fisiología - UAM
Introducao:
Adverse environmental conditions during crucial periods of development may cause profound
structural and biochemical changes in the body, resulting in modifications that in that later in life can
become threats to health. Actually, there are few studies that examine the effects of maternal
diabetes on vascular function of offspring in adulthood. Especially as regards the participation of
perivascular innervation in the programming of cardiovascular diseases.
Objetivos:
The present study was designed to analyze the effect of in utero exposure to maternal diabetes on
sympathetic and nitrergic function in superior mesenteric artery (SMA).
Metodos:
Diabetes was induced in female Wistar rats by a single injection of strepzotocin (50mg/kg body
weight) on day 7 of pregnancy. De-endothelized vascular rings from 6-month-old offspring from
control (O-CR) and diabetic rats (O-DR) were used. Vasomotor responses to electrical field
stimulation (EFS), noradrenaline (NA), and nitric oxide (NO) donor sodium nitroprusside (SNP) were
studied. Neuronal nitric oxide synthase (nNOS) and phospho-nNOS (P-nNOS) expressions were
studied, and NA, ATP and NO releases were determined.
Resultados:
blood pressure was significantly increased in 6-month old O-DR animals compared with
age-matched
O-CR.
the
vasoconstrictor
response
to
EFS
was
increased
in
O-DR
animals.Phentolamine decreased this vasoconstrictor response more strongly in O-DR rats.
L-NAME increased vasoconstrictor response to EFS more strongly in O-DR than in O-CR segments.
vasomotor responses to NA or SNP were not modified in our expperimental conditions.NA, ATP and
NO released were increased in segments from O-DR. nNOS expression was not modified, while
P-nNOS expression was increased in O-DR.
Conclusão:
The results show an augmented sympatic and nitrergic innervation function in SMA from O-DR
animals. the net effect produces an increase on EFS-induced contraction in these animals. These
effects may contribute to the increased blood pressure in offspring of diabetic rats.
Apoio Financeiro:
The results show an augmented sympatic and nitrergic innervation function in SMA from O-DR
animals. the net effect produces an increase on EFS-induced contraction in these animals. These
effects may contribute to the increased blood pressure in offspring of diabetic rats.
Comitê de Ética:
23076.031785/2012-26
2.019 INFLAMMATORY ASPECTS RELATED TO CARDIAC HYPERTROPHY
INDUCED BY T3
Takano, A. P. C. , Moriscot, A. S. , Barreto-chaves, M. L. M. ,
Anatomia - USP
Introducao:
It is well established that several structural and contractile genes of the heart are responsive to
triiodothyronine (T3). Additionally, previous results of our group showed that proinflammatory genes
can also be stimulated by high levels of that hormone in cardiac tissue. In this context, calgranulin A
also known as S100A8 is a protein associated with cardiac contractility and inflammatory response
regulation.
Objetivos:
In order to explore the effect of T3 upon cardiac inflammatory context, this study evaluated a
cytokine secretion profile and speculated whether calgranulin A could be involved in hypertrophic
process induced by T3.
Metodos:
All animal experimentation and protocols were approved by Institute of Biomedical Sciences/
University of São Paulo Ethical Committee for Animal Utilization (protocol n. 030/ fls.126/ l. 2 CEUA). For in vivo experiments, adult male Wistar rats weighing 200-250 g were randomized into
control group and hyperthyroid group (i.p. injections of T3, 7 μg/ 100g body weight/ day for 14
days). Serum levels of thyroid hormones, heart weight to body weight ratio (HW/BW), and
hemodynamic parameters were assessed to validate experimental hyperthyroidism. Serum levels of
23 inflammatory cytokines were measured and analyzed with the Bio-Plex system. We also
analyzed mRNA and protein expression of calgranulin A by real time PCR and western blot,
respectively. In vitro experiments were performed by using primary cultures of neonatal rat (1 to 2
day old) ventricular cardiomyocytes. The cells were treated with T3 (10 nM) or maintained in DMEM
(control cells) for 24 h for analysis of mRNA expression of calgranulin A. Also, cells were transfected
with siRNA for calgranulin A or with a nonspecific siRNA control followed by treatment with T3 for
evaluation of mRNA expression of brain natriuretic peptide (BNP), a typical fetal gene upregulated
during cardiac hypertrophy. Data were presented as mean ± SD and were analyzed using t test or
one-way ANOVA and Tukey multiple comparisons test. Values of p<0.05 were considered
statistically significant.
Resultados:
The increased HW/BW ratio (47% in relation to control, n=10) as well as the reduced levels of serum
T4 confirmed the hyperthyroidism state of this group (0.9±0.3ug/dl, n=10) compared to control group
(5.4±1.5 ug/dl, n=10). Furthermore, systolic blood pressure and heart rate were increased in
hyperthyroid group at the end of treatment (155.4±6.4 vs. 132.6±8.0 mmHg and 612.3±16.2
vs. 492.2±33.3 beats/min, n=8 for both groups and parameters analyzed). In relation to cytokines
profile, there were increased serum levels of IL-1a, RANTES, GRO-KC and MIP-3a in treated
animals (the complete table containing the values ??of all measured cytokines will be shown in the
poster). In addition, calgranulin A was significantly up-regulated by T3 treatment in cardiac tissue as
well as in cardiomyocytes (150%, n=7 and 67%, n=4 respectively, in relation to control conditions).
The specific inhibition of that protein prevented the cardiomyocyte hypertrophy as confirmed by
reduced levels of BNP mRNA levels of the transfected cells in comparison to T3 treated cells
(control cells: 100%, T3 treated cells: 176%, siRNA+ T3 cells: 66%, n=4).
Conclusão:
Our data demonstrated an important participation of calgranulin A on cardiac hypertrophy stimulated
by T3 and additional experiments are being conducted to better understand this question.
Altogether, the findings indicate directions for further investigations concerning an apparent T3
influence on mechanisms related to inflammatory context in the heart.
Apoio Financeiro:
Our data demonstrated an important participation of calgranulin A on cardiac hypertrophy stimulated
by T3 and additional experiments are being conducted to better understand this question.
Altogether, the findings indicate directions for further investigations concerning an apparent T3
influence on mechanisms related to inflammatory context in the heart.
Comitê de Ética:
protocolo n.030, fls.126, l.2
2.020
REDUÇÃO DAS LESÕES ATEROSCLERÓTICAS EM COELHOS TRATADOS
COM O QUIMIOTERÁPICO CARMUSTINA ASSOCIADO À NANOEMULSÃO
LIPÍDICA (LDE).
Daminelli, E. N. , Marabini, A. E. , Freitas, F. , Maranhão, R. C. ,
Laboratório de Metabolismo de Lípides - InCor - HCFMUSP
Introducao:
A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica e proliferativa que tem início quando fatores de
risco alteram o endotélio vascular. As partículas da nanoemulsão lipídica LDE concentram-se em
sítios inflamatórios e de intensa proliferação celular, como acontece nas lesões ateroscleróticas. A
carmustina, um fármaco antiproliferativo usado na quimioterapia do câncer, não foi ainda explorado
no tratamento da aterosclerose. Em trabalhos anteriores, mostrou-se que a associação com a LDE
reduz drasticamente a toxicidade da carmustina, o que já foi demonstrado em pacientes com
câncer avançado.
Objetivos:
O propósito do estudo é avaliar se a carmustina associada à LDE pode promover o efeito
antiproliferativo nas lesões ateroscleróticas induzidas em coelhos.
Metodos:
O presente estudo foi aprovado pelo comitê de ética em experimentação animal do Instituto do
Coração HC-FMUSP sob o protocolo de pesquisa no 216/10. Dezoito coelhos da raça New
Zealand, pesando 3,0 Kg, receberam dieta rica em colesterol a 1% por 8 semanas para induzir
aterosclerose. Depois de 4 semanas, 9 animais foram tratados semanalmente com LDE-carmustina
endovenosa (4mg/Kg) durante 4 semanas e 9 coelhos foram tratados semanalmente com 6mL de
salina endovenosa por 4 semanas. No final deste período os animais foram sacrificados e as aortas
foram coletadas. A extensão das lesões foi estimado por planimetria com assistência de software
específico. Macrófagos, células de músculo liso, expressão de receptores de lipoproteínas [LDL
receptor (LDLr) e “scavenger receptor class B1” (SR-B1)] e citocinas inflamatórias
[interleucina-1β (IL-1β) e fator de necrose tumoral-α (TNF-α)] na camada
íntima foram quantificadas por imunohistoquímica.
Resultados:
O grupo tratado com LDE-carmustina apresentou redução macroscópica de 90% das lesões
ateroscleróticas nas aortas dos coelhos em comparação com o grupo controle (0,07±0,05% versus
0,84±0,10%,
p<0,0001,
respectivamente).
As
análises
microscópicas
mostraram
que
a
porcentagem de imunomarcação para macrófagos na área das lesões ateroscleróticas do grupo
tratado com LDE-carmustina foi 77% menor em comparação ao grupo controle (14,16±9,32%
versus 62,54±14,90%, respectivamente, p<0,0001). O grupo LDE-carmustina também reduziu a
presença de células de músculo liso na camada íntima em 68% comparado ao grupo controle
(7,18±6,87% versus 22,24±10,33%, respectivamente, p<0,01). O mesmo grupo mostrou redução
de 89% na expressão protéica dos receptores de lipoproteínas LDLr (5,30±8,01% versus
46,90±9,26%, respectivamente, p<0,0001) e 74% de SR-B1 (11,91±12,26% versus 45,89±17,33%,
respectivamente, p<0,001), quando comparados ao grupo controle. A expressão protéica de
citocinas inflamatórias também foi menor no grupo tratado com LDE-carmustina. A diminuição da
IL-1β foi de 89% (5,47±5,25% versus 50,21±12,37%, respectivamente, p<0,0001) e da
TNF-α foi de 83% (5,54±5,95% versus 32,54±10,29%, respectivamente, p<0,0001) quando
comparado ao grupo controle.
Conclusão:
O tratamento da aterosclerose induzida em coelho com LDE-carmustina resultou em marcante
redução das lesões na aorta, da proliferação e invasão da íntima por macrófagos e células
musculares lisas, características da doença, além dos fatores inflamatórios. Tendo em vista que,
associada à LDE, a carmustina tem baixa toxicidade, a nova preparação LDE-carmustina tem
grande potencial para a terapêutica das doenças cardiovasculares de natureza aterosclerótica.
Apoio Financeiro:
O tratamento da aterosclerose induzida em coelho com LDE-carmustina resultou em marcante
redução das lesões na aorta, da proliferação e invasão da íntima por macrófagos e células
musculares lisas, características da doença, além dos fatores inflamatórios. Tendo em vista que,
associada à LDE, a carmustina tem baixa toxicidade, a nova preparação LDE-carmustina tem
grande potencial para a terapêutica das doenças cardiovasculares de natureza aterosclerótica.
Comitê de Ética:
216/10
2.021 ALTERAÇÕES NO BALANÇO OXIDATIVO DO TECIDO CARDÍACO DE
RATOS MACHOS SUBMETIDOS A SUPERNUTRIÇÃO.
INTERAMINENSE, M. V. , Pedroza, A. A. S. , Braz, G. R. F. , Sousa, S. M. , LAGRANHA, C.J.,
Núcleo de Educação Física e Ciências do Esporte - UFPE
Introducao:
Estudos evidenciam que o efeito da supernutrição pós- natal em ratos ocasiona excesso de peso
induzindo uma obesidade precoce acompanhada de suas complicações. A supernutrição ocasiona
as alterações metabólicas desencadeando assim as doenças crônico-degenerativas tais como
hipertensão, diabetes entre outras. O coração é um dos órgãos mais afetados pela supernutrição
podendo induzir ou até aumentar a pressão pois, o estresse oxidativo pode prejudicar o
relaxamento do endotélio vascular, aumentando assim a atividade contrátil. Entretanto, ainda são
poucos os estudos que avaliam o efeito da supernutrição no balanço oxidativo cardíaco, avaliando
assim o desequilíbrio entre o aumento de oxidantes e a diminuição dos mecanismos de defesas
antioxidantes no tecido cardíaco.
Objetivos:
Avaliar o balanço oxidativo no tecido cardíaco aos 30 dias de vida de ratos que sofreram
supernutrição no período crítico de desenvolvimento (lactação). Para tal analisou-se a produção de
Malondialdeído (MDA), quantificação das enzimas antioxidantes Superóxido dismutase (SOD),
Catalase (CAT), Glutationa-S-transferase (GST) e as concentrações de Glutationa reduzida (GSH).
Metodos:
Foram utilizados ratos machos da raça Wistar recém nascidos distribuídos randomizadamente de
acordo com as mães. Para induzir a supernutrição a prole foi reduzida para 3 filhotes por mãe, e o
grupo controle foi mantido com nove filhotes por mãe de acordo com (MARTINS et al. Journal of
endocrinology, 198, 591-598, 2008). Após o desmame tanto o grupo supernutrido(GS) quanto o
controle (GC) receberam dieta comercial de laboratório durante o mesmo período. Aos trinta dias
de vida os ratos foram sacrificados por decapitação, o tecido cardíaco foi coletado para as
seguintes análises bioquímicas: dosagem de MDA através da metodologia da Substância Reativa
ao Ácido Tiobarbitúrico (TBARS), atividades enzimáticas da SOD, CAT e GST e concentrações de
GSH. Os dados foram expressos em média ± erro padrão da média (EPM), e analisados pelo teste
t-student, com significância de 5%. Os procedimentos utilizados para manejo e cuidado animal
estão de acordo com as normas do comitê brasileiro de experimentação animal e aprovados pela
comissão de ética da UFPE, Processo 23076.017806/2014/62.
Resultados:
A supernutrição no período pós-natal induziu alteração no balanço oxidativo dos ratos machos.Foi
visto que o MDA no (GS) foi maior em relação ao (GC)(S=12.55±1.57;C=9.88±0.82 nmol/mg
proteína;P= 0.021).Em relação às enzimas antioxidantes, houve uma diminuição significativa na
atividade da SOD no (GS)(S=47.10±6.08;C=84.99±12.62U/mg proteína;P=0.022)em relação ao
grupo
controle.
Já
a
CAT
não
apresentou
diferença
significativa
entre
os
grupos(S=3.86±0.69;C=4.33±0.67 U/mg proteína; P= 0.634).Em relação a GST houve uma
diminuição significativa no (GS)em relação ao (GC)(S=5.40±1.30;C=15.45±3.81U/mg proteína;
P=0.036).
Em
relação
a
GSH
houve
uma
tendência
a
redução
no
(GS)(S=0.07±0.008±C=0.11±0.02uM/mg proteína;P=0.067).
Conclusão:
Nossos resultados sugerem que a supernutrição altera o balanço oxidativo por diminuir a atividade
de enzimas antioxidantes no tecido cardíaco de ratos machos, e aumenta assim o risco para o
surgimento de doenças cardiovasculares.
Apoio Financeiro:
Nossos resultados sugerem que a supernutrição altera o balanço oxidativo por diminuir a atividade
de enzimas antioxidantes no tecido cardíaco de ratos machos, e aumenta assim o risco para o
surgimento de doenças cardiovasculares.
Comitê de Ética:
23076.017806/2014/62
2.022 EFEITO DA ANGIOTENSINA 1-7 NO MODELO DE HIPERTROFIA
CARDÍACA INDUZIDA POR HORMÔNIO TIREOIDIANO
Senger, N. , Santos, R. A. , Chaves, M. L. M. B. ,
Departamento de Anatomia - USP
Departamento de Fisiologia e Biofísica - ICB-UFMG
Introducao:
Diversos trabalhos do nosso grupo demonstraram que elevados níveis de hormônios tireoidianos
(HT) são responsáveis por promoverem alterações no sistema cardiovascular, resultando em um
processo hipertrófico via Sistema Renina-Angiotensina (SRA), principalmente devido à ação do
peptídeo Angiotensina II (Ang II). Por outro lado, a Angiotensina (1-7) (Ang 1-7), um peptídeo
também sintetizado a partir do SRA, apresenta ações antiarrítmicas e anti-hipertróficas,
correspondendo, portanto, a um importante braço contra-regulatório dentro do SRA.
Objetivos:
Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar possível papel terapêutico da
administração de Ang1-7 na prevenção dos efeitos cardiovasculares induzidos pelo tratamento com
hormônio tireoidiano, em ratos Wistar adultos tratados durante 28 dias.
Metodos:
Para isso, ratos Wistar adultos (n=7) foram submetidos a injeções diárias de T3 (20x dose
fisiológica) durante 28 dias. Paralelamente, os animais receberam (ou não) infusão contínua de Ang
1-7 (24µg/Kg/hr) durante os mesmos períodos experimentais, sendo portanto, divididos em 4
grupos experimentais (Controle (C), tratados com T3 (T3), tratados com T3 e Ang1-7 (Ang1-7+T3) e
tratados apenas com Ang1-7 (Ang1-7)). Os parâmetros morfológicos foram verificados pela massa
cardíaca e pelo diâmetro dos cardiomiócitos (mediante lâminas histológicas coradas com
Hematoxilina-Eosina). Para confirmação do estado hipertireoideo foram dosados os níveis séricos
dos HT por radioimunoensaio. Todos os procedimentos obedeceram às normas estabelecidas pela
Comissão de Ética no Uso de Animais do ICB/USP (n0 030/12/CEUA). Os resultados foram
analisados e comparados utilizando-se a Análise de Variância (ANOVA) Two way, sendo aceitos
como estatisticamente significativos os valores com p<0.05. Os resultados obtidos foram descritos
em média ± erro-padrão.
Resultados:
As
dosagens
séricas
de
T3
livre
(Controle:0,66±0,04mg/dL;
T3:1,28±0,26mg/dL;
Ang1-7+T3:1,91±0,25mg/dL; Ang1-7:0,54±0,13mg/dL) e T4 total (Controle:3,12±0,29mg/dL;
T3:0,33±0,13mg/dL; Ang1-7+T3:0,34±0,11mg/dL; Ang1-7:3,95±0,29mg/dL) confirmaram o estado
hipertiroideo dos animais. Em relação aos parâmetros morfológicos, a administração de HT foi
responsável por promover hipertrofia cardíaca, observada tanto pelo significativo aumento da razão
peso do coração/comprimento da tíbia (29,02%), como pelo aumento no diâmetro dos
cardiomiócitos (8,84±0,36µm no grupo T3 versus 5,88±0,15µm no Controle), os quais não foram
influenciados pelo tratamento com Ang-1-7 (Ang1-7+T3: 8,01±0,31µm; Ang1-7: 6,5±0,31µm).
Conclusão:
O tratamento com Ang1-7 não preveniu ou atenuou os efeitos cardiovasculares promovidos pelo
T3. O possível efeito do tratamento com Ang1-7 será avaliado em outros parâmetros funcionais
cardíacos, como no desenvolvimento de arritmias cardíacas, uma vez que a Ang 1-7 apresenta
ações antiarrítmicas, que poderiam contrabalancear a ação arrítmica do HT.
Apoio Financeiro:
O tratamento com Ang1-7 não preveniu ou atenuou os efeitos cardiovasculares promovidos pelo
T3. O possível efeito do tratamento com Ang1-7 será avaliado em outros parâmetros funcionais
cardíacos, como no desenvolvimento de arritmias cardíacas, uma vez que a Ang 1-7 apresenta
ações antiarrítmicas, que poderiam contrabalancear a ação arrítmica do HT.
Comitê de Ética:
030/12/CEUA
2.023
Effects of acute intermittent hypoxia on sympathetic and expiratory activities in
rats.
Lemes, E. V. , Bassi, M. , Colombari, D. S. A., Colombari, E. , Zoccal, D. B. ,
Depto. de Fisiologia e Patologia - UNESP
Introducao:
The exposure to acute intermittent hypoxia (AIH) produces a long-lasting increase of phrenic
and sympathetic activities in anesthetized rats.
Objetivos:
In the present study we aimed to evaluate the effects of AIH on baseline expiratory motor activity
as
well
as
the role of
retrotrapezoid
nucleus
in the
AIH-induced
sympathetic
and respiratory changes.
Metodos:
In the present study was used the in situ working heart -brainstem preparations of juvenile rats,
conscious and urethane-anesthetized rats, exposed to AIH (10 x 5-7% O2 for 30 s, every 5 min).
Resultados:
In the in situ working heart -brainstem preparations of juvenile rats (n=4), AIH exposure (10
x 5-7% O2 for 30 s, every 5 min) increased baseline phrenic (Δ: 20±6%), abdominal
(Δ: 65±30%) and sympathetic (Δ: 89±48%) nerve activities (P<0. 05) that was
maintained for at least 60 min after the last hypoxic episode. In conscious adult rat s (n=9),
AIH evoked an increase in baseline arterial pressure (Δ: 7±2 mmHg), associated with
enhanced
sympathetic-
and
respiratory-related
variabilities
(P<0.
05).
In adult urethane-anesthetized rats with intact vagus (n=5), AIH increased baseline arterial
pressure
(Δ: 9±1
mmHg)
and
abdominal
muscle
contraction
amplitude
(Δ: 412±117%), which were reverted by pharmacological inhibit ion of retrotrapezoid
nucleus (P<0. 05).
Conclusão:
These data indicate that AIH promotes a sustained increase of expiratory activity, in addition to
inspiratory
and sympathetic
activities.
Moreover, AIH-induced sympathetic and expiratory
long-term facilitation may involve, at least in part, the activation of the retrotrapezoid nucleus.
Apoio Financeiro:
These data indicate that AIH promotes a sustained increase of expiratory activity, in addition to
inspiratory
and sympathetic
activities.
Moreover, AIH-induced sympathetic and expiratory
long-term facilitation may involve, at least in part, the activation of the retrotrapezoid nucleus.
Comitê de Ética:
protocolo 21/2012
2.024 Estudo da suscetibilidade de geração de arritmias ventriculares no
modelo de hipotireoidismo clinico induzido por propiltiouracilo (PTU)
Ruocco, M. J. F. , Calhi, G. M. , Casis, O. , Medei, E. H. ,
CCS - UFRJ
Departamento de Fisiologia - EHU
Introducao:
O hipotireoidismo clínico é uma doença causada pela síntese inadequada do seu hormônio, mesmo
diante uma estimulação excessiva do hormônio estimulador da tireoide (TSH). Esta doença provoca
grandes complicações no organismo, dentre elas no sistema elétrico cardíaco, provocando
alterações
eletrocardiográficas
diretamente
relacionadas
com
a
ocorrência
de
arritmias
potencialmente letais.
Objetivos:
Estudar a susceptibilidade da geração de arritmias cardíacas ventriculares no modelo animal de
hipotireoidismo clínico induzido pela administração de propiltiouracilo (PTU).
Metodos:
Foram utilizados ratos Wistar fêmeas separadas em dois grupos experimentais: grupo controle
(n=5) e grupo hipotireoideo (n=10). O hipotireoidismo foi induzido pela administração de PTU
(0,02%), dissolvido na água ingerida pelos animais durante um período de 6 semanas. O peso
corporal foi quantificado semanalmente ao longo do protocolo experimental. A função elétrica
cardíaca foi analisada mediante eletrocardiograma. No final do tratamento, após o sacrifício, o
coração foi extraído e pesado. Preparações de ventrículo esquerdo na região endocárdica foram
utilizadas para analise da função elétrica cardíaca in vitro, com registro de potencial de ação
mediante o método de microeletródio intracelular. Os registros foram feitos a diferentes frequências
de estimulação (FE): 300, 500, 800 e 1000 ms, enquanto para o análise de arritmias foi aplicado um
trem de pulso de 10 estímulos em FE de 200, 150 e 120 ms seguido de uma pausa de 5 segundos.
As analises estatísticas utilizadas foram: análise de variância ANOVA one e/ou two way com
aplicação do teste post-hoc de Bonferroni e Unpaired T-test (comparando todos os grupos) usado
para a comparação dos resultados envolvendo medidas repetidas utilizando o software GraphPad
Prism 5 (GraphPad Software®, EUA). A significância estatística estabelecida em todas as análises
será de P<0,05.
Resultados:
Os resultados mostram uma diminuição significativa do peso corporal dos ratos tratados com PTU a
partir da semana três, com contínua diminuição até a semana seis do tratamento (Semana 6: Ctrl:
234±6,4; PTU: 183±4,2; p?0,001). Ainda, tanto o peso dos corações quanto a relação peso
coração/peso corporal e peso coração/comprimento da tíbia dos ratos tratados foram
significativamente menores em relação aos ratos controle (Ctrl:0,42%±0,002% PTU:0,34%±0,010%
; p?0,0001 e Ctrl:0,26±0,004 g/cm PTU: 0,18±0,008 g/cm ;p?0,0001).
Os animais hipotireoideos
apresenta um bloqueio AV de primeiro grau (intervalo PR: Ctrl:46±1,03 ms PTU: 54,34±2,4 ms
;p?0,01). O intervalo RR (Ctrl: 159,60±6,7 ms PTU: 189,55±5,0 ms; p?0,01) assim como os
intervalos QT (Ctrl: 56,84±2,8 PTU: 89,35±3; p?0,001) e QT corrigido (QTc) (Ctrl: 142,8±7,7 ms
PTU: 207,8±7,8 ms; p?0,001) estavam aumentados no grupo tratado. Estes mesmos resultados
foram refletidos nos registros dos potenciais de ação os quais mostraram o aumento significativo na
duração ao 90% da repolarização (Ctrl: 58,07±3,4 ms PTU: 90,90±3,6 ms; p?0,0002). Nenhum dos
corações estudados mostrou arritmias ventriculares em nenhuma das frequências de estimulação
analisadas.
Conclusão:
O presente estudo demonstra que o modelo de hipotireoidismo induzido por PTU não apresentou
maior susceptibilidade a arritmias ventriculares do que o grupo controle, mesmo apresentando o
prolongamento dos intervalos QT e QTc assim como da duração do potencial de ação cardíaco.
Apoio Financeiro:
O presente estudo demonstra que o modelo de hipotireoidismo induzido por PTU não apresentou
maior susceptibilidade a arritmias ventriculares do que o grupo controle, mesmo apresentando o
prolongamento dos intervalos QT e QTc assim como da duração do potencial de ação cardíaco.
Comitê de Ética:
053/14
2.025 Efeito do tratamento crônico do metotrexato no remodelamento cardíaco
por infarto do miocárdio em ratos Wistar.
Lima, A. D. , Guido, M. C. , Salemi, V. M. C. , Melo, M. D. T. , Maranhão, R. C. ,
Laboratório de Metabolismo de Lípides - Incor
Unidade Clínica de Insuficiência Cardíaca - Incor
Introducao:
O infarto agudo do miocárdio (IAM) é acompanhado de remodelamento cardíaco que
frequentemente está associado à insuficiência cardíaca. Há evidências de que o tratamento com
anti-inflamatórios resultam em prevenção e reversão do remodelamento. O metotrexato (MTX) é um
composto antiproliferativo e imunosupressor amplamente utilizado no tratamento de várias
doenças, como câncer, artrite reumatóide, psoríase e outras. Entretanto, poucos estudos tem
demonstrado o efeito do MTX no sistema cardiovascular. Recentemente, mostramos que o
tratamento com MTX reduz lesões ateroscleróticas induzidas em coelhos.
Objetivos:
Investigar o efeito crônico do MTX sobre o remodelamento cardíaco em ratos submetidosao IAM,
levando em consideração a estrutura e função ventricular, a hipertrofia cardíaca, o processo
inflamatório e a fibrose miocárdica.
Metodos:
Ratos machos Wistar pesando entre 300-400 gramas (CEUA/FMUSP protocolo 271/12) foram
divididos em 3 grupos: 1) SH(N=12): ratos submetidos à cirurgia fictícia (sham) tratados com
solução fisiológica 2) IAM(N=5):ratos submetidos ao IAM tratados com solução fisiológica 3)
MTX(N=6):ratos submetidos ao IAM tratados com MTX na dose de 1mg/kg. O tempo de
seguimento foi de 6 semanas e os animais foram tratados 1 vez por semana intraperitonealmente.
A ecocardiografia foi realizada após 1 dia e ao final do seguimento. Após o sacrifício,avaliou-se o
peso relativo do coração, o tamanho do IAM e a morfometria da região remota do ventrículo
esquerdo (VE). Os dados foram expressos em média ± erro padrão e o teste ANOVA foi utilizado.
O nível de significância estatística foi estabelecido pelo valor de P<0,05.
Resultados:
A avaliação ecocardiográfica demonstrou que 1 dia após o infarto e ao final do seguimento, os
animais IAM e MTX apresentaram dilatação cardíaca, disfunção sistólica, hipocinesia septal e
aumento da massa do VE quando comparado a SH. O tamanho do IAM foi semelhante entre os
grupos IAM e MTX. Houve maior peso relativo do coração, do diâmetro dos miócitos, do número de
células inflamatórias e da fração de volume do colágeno entre os grupos IAM e MTX quando
comparado a SH. Não houve nenhuma diferença entre os grupos IAM e MTX.
Conclusão:
O tratamento crônico com MTX em doses utilizadas neste estudo, não contribui para a prevenção
funcional e estrutural do remodelamento cardíaco após IAM.
Apoio Financeiro:
O tratamento crônico com MTX em doses utilizadas neste estudo, não contribui para a prevenção
funcional e estrutural do remodelamento cardíaco após IAM.
Comitê de Ética:
CEUA/FMUSP protocolo 271/12
2.026 Efeito da obesidade sobre a expressão dos componentes do sistema
renina-angiotensina no tecido adiposo perivascular: diferença entre o tecido
adiposo branco e marrom
Inada, A. C. , Silva, R. N. O. , Eichler, R. S. , Akamine, E. H. ,
Farmacologia - ICB/USP
Introducao:
O tecido adiposo perivascular (PVAT) circunda os vasos sanguíneos e possui ação parácrina na
parede vascular. Dependendo do leito vascular, o PVAT pode ser classificado como tecido adiposo
marrom (aorta torácica) ou branco (artéria mesentérica), sendo que esse último se assemelha ao
tecido adiposo visceral, apresentando maior propensão à inflamação do que o marrom. Na
obesidade, o tecido adiposo visceral apresenta aumentada produção de mediadores inflamatórios e
infiltração de monócitos/macrófagos mediada pela proteína quimioatractante de monócitos
(MCP-1), bem como maior ativação do sistema renina-angiotensina (SRA).
Objetivos:
Considerando que a angiotensina II (Ang II), um peptídeo efetor do SRA, está envolvida em
processos de inflamação e disfunção endotelial, o objetivo do estudo foi avaliar o conteúdo de
RNAm dos componentes do SRA e do receptor de MCP-1 (CCR2) no PVAT de aorta torácica e
artérias mesentéricas de camundongos obesos.
Metodos:
O estudo teve aprovação da Comissão de Ética do ICB-USP (nº 94/2013). Camundongos machos
da linhagem C57BL/6 de 4 semanas de idade foram divididos em dois grupos: Obeso (OB), que
receberam ração hiperlipídica (5,4 kcal/g) durante 16 semanas; e Controle (CT), que receberam
ração padrão (3,8 kcal/g). A obesidade foi caracterizada pela massa corpórea. O conteúdo de
RNAm de angiotensinogênio, ECA1, ECA2 e do receptor CCR2 no PVAT da aorta (PAT) e de
artérias mesentéricas (MAT) foi analisado por PCR em tempo real. Os resultados foram
normalizados pelo conteúdo de RNAm da ciclofilina. Os resultados são mostrados como mean ±
SEM. A análise estatística foi realizada pelo teste t-Student e o nível de significância aceito foi
p<0,05.
Resultados:
A massa corpórea final (CT= 29,9 ± 0,6 g, n=14; OB= 42,0 ± 0,71 g, n=14; p<0,05) foi aumentada
no grupo OB. A expressão do RNAm do angiotensinogênio foi reduzida no MAT (CT=1,5±0,2, n=5;
OB= 0,5±0,2, n=5; p<0,05) e no PAT (CT= 1,3±0,3, n=8; OB= 0,5±0,1, n=8; p<0,05) do grupo OB.
A expressão de RNAm para a ECA1 foi maior no MAT do grupo OB (CT= 0,9±0,1, n=4; OB=
1,5±0,1, n=4; p<0,05), enquanto que no PAT não houve diferença entre os grupos. A expressão do
RNAm para ECA2 no MAT não diferiu entre os grupos CT e OB, enquanto que foi reduzido no PAT
do grupo OB (CT= 0,7±0,1, n=4; OB= 0,4±0,1, n=4; p<0,05). A expressão do RNAm do receptor
CCR2 foi maior em MAT do grupo OB (CT= 0,9±0,1, n=4; OB= 1,6 ± 0,2, n=4; p<0,05). Por outro
lado, a expressão do RNAm do receptor CCR2 no PAT não foi diferente entre os grupos.
Conclusão:
Os dados demonstram que os efeitos da obesidade sobre os componentes do SRA no PVAT
variam de acordo com o leito vascular. No MAT ocorre aumento da via que leva à formação de Ang
II, enquanto que no PAT ocorre redução da via que leva à formação de peptídeos, cujas ações se
contrapõem às ações da Ang II. Além disso, o aumento da expressão de receptor CCR2 em MAT
pode indicar maior número de monócitos/macrófagos infiltrados no MAT. No entanto, esses
resultados precisam ser confirmados com avaliação do conteúdo proteico dos componentes do
SRA e da detecção direta de macrófagos no MAT.
Apoio Financeiro:
Os dados demonstram que os efeitos da obesidade sobre os componentes do SRA no PVAT
variam de acordo com o leito vascular. No MAT ocorre aumento da via que leva à formação de Ang
II, enquanto que no PAT ocorre redução da via que leva à formação de peptídeos, cujas ações se
contrapõem às ações da Ang II. Além disso, o aumento da expressão de receptor CCR2 em MAT
pode indicar maior número de monócitos/macrófagos infiltrados no MAT. No entanto, esses
resultados precisam ser confirmados com avaliação do conteúdo proteico dos componentes do
SRA e da detecção direta de macrófagos no MAT.
Comitê de Ética:
nº 94/2013
2.027 INFLUÊNCIA DA DIETA NO EFEITO BENÉFICO DO EXERCÍCIO FÍSICO
NA FUNÇÃO VASCULAR DE CAMUNDONGOS KNOCKOUT PARA O RECEPTOR
DE LDL
Guizoni, D. M. , Krieger, M. H. , Davel, A. P. C. ,
Depto de Biologia Estrutural e Funcional - UNICAMP
Introducao:
A disfunção endotelial apresenta papel chave na aterogênese. Dentre seus fatores de risco
destaca-se o aumento da concentração plasmática de LDL; já o exercício físico retarda o
desenvolvimento da placa aterosclerótica e melhora o perfil lipídico de indivíduos com doença
coronariana. Trabalhos demonstram o desenvolvimento de disfunção endotelial e placa
aterosclerótica, assim como o efeito de terapias benéficas para estas alterações, utilizando-se
como modelo experimental camundongos knockout para o receptor de LDL (LDLr-/-) alimentados
com dieta rica em gordura. Entretanto, dietas tipo Western (DW) além de elevarem os níveis
plasmáticos de colesterol, causam hipertrigliceridemia e hiperglicemia, dificultando a análise dos
efeitos da hipercolesterolemia per se.
Objetivos:
Comparar a função endotelial em aorta de camundongos LDLr-/- alimentados ou não com dieta tipo
DW (1,25% de colesterol e 20% de gordura) e avaliar a influência do exercício físico neste
parâmetro.
Metodos:
(Comitê de Ética: 095-01) Camundongos LDLr-/- (n=30) e C57BL6/J (WT; n=10) com 12 semanas
foram divididos em 5 grupos: WT, LDLr-/-, LDLr-/-+DW; LDLr-/-exercitado (Ex), e LDLr-/- Ex+DW. O
treino foi realizado em esteira rolante, 1 h/dia, 5 dias/semana por 4 semanas. O protocolo de
treinamento foi definido por 60% da velocidade máxima (Vmax) após teste de esforço; o mesmo
teste foi realizado ao fim para comprovar a efetividade do treino. Ao final, os camundongos foram
pesados,
anestesiados
e
a
aorta
torácica
foi
isolada
para
realização
de
curvas
concentração-resposta à acetilcolina (ACh), ao nitroprussiato de sódio (NPS), à fenilefrina (FE) e ao
U46619, com a resposta máxima (Rmax) calculada. Alguns aneis foram incubados com inibidor da
óxido nítrico sintase (L-NAME). Dados expressos em média±EPM. Estatística: 2-way ANOVA
p<0,05: *vs. WT; #vs. LDLr-/-.
Resultados:
A Vmax mostrou que o treino foi efetivo nos grupos exercitados (WT= 19,4±1,1; LDLr-/-= 20,8±1,6;
LDLr-/-Ex= 29,2*±1,6; LDLr-/-+DW= 21,7±1,4; LDLr-/-Ex+DW= 26,1*±1,1m/min), mas o peso
corporal não foi modificado pelo Ex. Em aortas, a Rmax de relaxamento à ACh foi menor em
LDLr-/- comparado ao WT (WT= 94±1 e LDLr-/-= 83±2*%) e a DW reduziu ainda mais a Rmax à
ACh (LDLr-/-+DW= 79*#±2%). O Ex reverteu este efeito no LDLr-/-Ex (92±3%) e apenas atenuou a
disfunção endotelial no grupo LDLr-/-Ex+DW (85*±2%). O efeito do L-NAME no relaxamento à ACh
foi reduzido em LDLr-/- independente da dieta, indicando menor papel do NO em ambos, que só foi
revertido em LDLr-/-Ex. A Rmax de contração à FE foi reduzida nos grupos LDLr-/- e LDLr-/-+DW
comparado ao WT (WT= 76±6 LDLr-/-= 47*±7 e LDLr-/-+DW= 53*±3 %KCl 125mM); o Ex reverteu
essa resposta no grupo LDLr-/-Ex (76±9% KCl 125mM), mas não a alterou em LDLr-/-DW+Ex
(48±7*% KCl). A Rmax ao NPS e ao U46619 foi similar entre os grupos, assim como a resposta de
contração ao KCl 125 mM.
Conclusão:
Camundongos
LDLr-/-
apresentam
disfunção
endotelial
e
redução
da
contratilidade
α-adrenérgica em aorta, efeitos que são revertidos pelo treinamento físico. A administração
de dieta Western agrava a disfunção endotelial em LDLr-/- e atenua os efeitos protetores do
exercício na reatividade vascular. Este estudo sugere mecanismos aditivos de indução de disfunção
vascular na dislipidemia induzida pela deleção do LDLr-/- e dieta tipo Western.
Apoio Financeiro:
Camundongos
LDLr-/-
apresentam
disfunção
endotelial
e
redução
da
contratilidade
α-adrenérgica em aorta, efeitos que são revertidos pelo treinamento físico. A administração
de dieta Western agrava a disfunção endotelial em LDLr-/- e atenua os efeitos protetores do
exercício na reatividade vascular. Este estudo sugere mecanismos aditivos de indução de disfunção
vascular na dislipidemia induzida pela deleção do LDLr-/- e dieta tipo Western.
Comitê de Ética:
095-01
2.028 TRATAMENTO COM ANTICORPO ANTI–TLR4 REDUZ
REMODELAMENTO CARDÍACO DE RATOS ESPONTANEAMENTE
HIPERTENSOS (SHR) SEM ALTERAR A PRESSÃO ARTERIAL
Echem, C. , Bomfim, G. F. , Eichler, R. A. S. , Oliveira, M. A. , Akamine, E. H. , Fortes, Z. B. ,
Carvalho, M. H. C. ,
Farmacologia - ICB-USP
Medicina - ICS-UFMT
Introducao:
O remodelamento cardíaco é uma sequela comum da hipertensão arterial (HA). Sabe-se que na HA
há inflamação crônica de baixa intensidade e que esta pode contribuir para o desenvolvimento e
progressão do remodelamento cardíaco. Receptores do tipo Toll (TLRs) são receptores da
imunidade inata, cuja ativação induz produção de moléculas inflamatórias. Estudos recentes
relacionam TLRs e doenças cardiovasculares, evidenciando principalmente o TLR4, entretanto
pouco se sabe sobre sua participação no remodelamento cardíaco.
Objetivos:
Avaliar a participação do TLR4 no remodelamento cardíaco de ratos espontaneamente hipertensos
(SHR).
Metodos:
Os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética do ICB-USP sob número 145, folha 95,
livro 2. Foram utilizados ventrículos esquerdos (VE) de SHR (hipertensos) e Wistar (normotensos)
com 6 e 21 semanas de idade, nos quais foi avaliada a expressão proteica (UA) do TLR4 por
Western Blotting. Em outro grupo experimental, SHR e Wistar com 19 semanas de idade foram
tratados com anticorpo anti-TLR4 ou IgG inespecífico, por 15 dias via intraperitoneal e foram
aferidas a pressão arterial direta (mmHg) e frequência cardíaca (bpm) em animais acordados. A
área (µm²), diâmetro de cardiomiócitos (µm) e a deposição de colágeno (UA) nos VE foram
analisadas por histologia utilizando as colorações hematoxilina-eosina e picro-siris. A expressão
proteica (UA) de TLR4, MyD88, TNF-α, IL-1β e IL-6 no VE foi analisada por Western
Blotting. Para análise dos resultados utilizamos o teste ANOVA de duas vias ou teste
“t” de Student. Os resultados foram expressos como média±EPM e adotado nível de
significância p<0,05.
Resultados:
A expressão proteica (UA) de TLR4 foi maior no VE de animais hipertensos (SHR 21 semanas:
1,47±0,10 n=4) em relação aos pré-hipertensos (SHR 6 semanas: 0,74±0,10 n=4) e normotensos
(Wistar 6 e 21 semanas: 1,00±0,09 n=4 e 1,01±0,08 n=5). O tratamento de SHR com anti-TLR4
diminuiu a área (422,00±12,42µm² n=7), diâmetro de cardiomiócitos (17,50±0,87µm n=7) e
deposição de colágeno (32525±392 UA n=6) no VE em relação ao dos SHR IgG
(526,80±24,99µm²; 27,30±1,28µm e 50457±2727 UA n=4), sendo que nenhuma alteração foi
observada entre Wistar anti-TLR4 (393,70±26,77µm²; 22,90±0,66µm e 13744±2066 UA n=5) e
Wistar IgG (337,60±25µm²; 21,12±0,69µm e 13036±1005 UA n=5). É importante ressaltar que o
tratamento com anti-TLR4 não alterou a pressão arterial (mmHg) (SHR: Anti-TLR4 178,96±3,26 n=9
vs. IgG 174,83±4,20 n=5) (Wistar: Anti-TLR4 110,22±5,59 n=4 vs. IgG 113,52±3,21 n=5) e
frequência cardíaca (bpm) (SHR: Anti-TLR4 360,64±6,60 n=11 vs. IgG 367,65±25,41 n=5) (Wistar:
Anti-TLR4 335,37±11,68 n=4 vs. IgG 324,06±15,23 n=5). O tratamento de SHR com anti-TLR4
também reduziu no VE a expressão proteica (UA) de TLR4 (SHR: Anti-TLR4 0,78±0,08 n=7 vs. IgG
1,01±0,05 n=7), MyD88 (SHR: Anti-TLR4 0,58±0,06 n=10 vs. IgG 1,00±0,07 n=10), TNF-α
(SHR: Anti-TLR4 0,67±0,07 n=7 vs. IgG 0,87±0,05 n=8) e IL-1β (SHR: Anti-TLR4 0,48±0,06
n=10 vs. IgG 0,87±0,18 n=9), sem alterar IL-6 (SHR: Anti-TLR4 1,02±0,13 n=9 vs. IgG 0,99±0,24
n=8) em relação ao dos SHR IgG.
Conclusão:
O tratamento com anticorpo anti–TLR4 reduziu o remodelamento cardíaco de SHR adultos
sem alterar a pressão arterial. Isso se deve provavelmente à menor ativação da via de sinalização
desses receptores, resultando em redução no processo inflamatório do ventrículo esquerdo desses
animais.
Apoio Financeiro:
O tratamento com anticorpo anti–TLR4 reduziu o remodelamento cardíaco de SHR adultos
sem alterar a pressão arterial. Isso se deve provavelmente à menor ativação da via de sinalização
desses receptores, resultando em redução no processo inflamatório do ventrículo esquerdo desses
animais.
Comitê de Ética:
ICB-USP - Número 145, folha 95
2.029 EFFECTS OF NICOTINE MICROINJECTIONS IN THE COMMISSURAL
NUCLEUS OF THE SOLITARY TRACT ON SYMPATHETIC AND RESPIRATORY
ACTIVITIES
Furuya, W. I. , Bassi, M. , Colombari, E. , Zoccal, D. B. , Colombari, D. S. A. ,
Department of Physiology and Pathology - UNESP
Introducao:
Previous data from our laboratory have demonstrated that microinjection of acetylcholine in the
commissural nucleus of the solitary tract (cNTS) increases phrenic burst frequency and changes the
coupling pattern between thoracic sympathetic (tSN) and phrenic nerve (PN) activities, shifting the
maximum tSN activity from inspiratory (Insp) to post-inspiratory (Post-I) phase. Howerer, the
receptor subtype as well as the possible downstream pathways activated by acetylcholine in the
cNTS remain to be elucidated. In the present study, we performed microinjections of nicotine in the
cNTS and performed recording of hypoglossal (HN) and cervical vagus nerve (cVN) activities which
provides additional information about the activity of specific respiratory brainstem nuclei (JPhysiol
587:3539, 2009).
Objetivos:
To assess the effects of nicotine (nicotinic cholinergic agonist) microinjections in the cNTS on tSN,
PN, HN and cVN activities.
Metodos:
Decorticated arterially-perfused in situ preparations of juvenile male Holtzman rats (P28–38,
60-100 g, n=9-13) were used to evaluate the changes in tSN, PN, HN and cVN activities elicited by
microinjections of vehicle (Ringer solution, 60 nL) and nicotine (10 mM in 60 nL) in the cNTS. Data
were analyzed for 1 min following microinjections and the peak responses were considered. All data
are expressed as mean ± SEM. Statistical analyses were performed by applying two-way
repeated-measures ANOVA followed by Student–Newman–Keuls post hoc test.
Resultados:
Unilateral microinjection of nicotine in the cNTS increased tSN activity (17.7 ± 5.8 vs. vehicle 2.3 ±
2.2 %, p < 0.05), decreased inspiratory time (-14.4 ± 3.5 vs. vehicle 0.0 ± 0.1 %, p < 0.001) and an
increased expiratory time (124.2 ± 38.2 vs. vehicle -0.3 ± 2.7 %, p < 0.001), resulting in a decreased
PN frequency (-44.3 ± 6.6 vs. vehicle 1.0 ± 2.0 %, p < 0.001). PN amplitude also enhanced (30.7 ±
4.2 vs. vehicle 2.3 ± 1.7 %, p < 0.001) as well as the HN amplitude (68.6 ± 11.7 vs. vehicle 1.5 ± 2.5
%, p < 0.001). Nicotine microinjection also increased both inspiratory and post-inspiratory
components of cVN activity (64.9 ± 10.0 vs. vehicle -0.4 ± 2.7 %, p < 0.001). Heart rate was
diminished by nicotine in the cNTS (-16 ± 5 vs. vehicle -1 ± 1 bpm, p < 0.001).
Conclusão:
Our data suggest that the activation of nicotinic receptors in the cNTS promotes an excitatory
response on tSN, HN and cVN activities, associated with an inhibitory response on PN frequency.
These effects may be due to the activation of distinct pontine-medullary nuclei involved in the
modulation of sympatho-respiratory activity.
Apoio Financeiro:
Our data suggest that the activation of nicotinic receptors in the cNTS promotes an excitatory
response on tSN, HN and cVN activities, associated with an inhibitory response on PN frequency.
These effects may be due to the activation of distinct pontine-medullary nuclei involved in the
modulation of sympatho-respiratory activity.
Comitê de Ética:
Proc. CEEA no. 37/2010
2.030 DPCPX: ANTAGONISTA DO RECEPTOR A1 OU INIBIDOR DE ENZIMAS
QUE DEGRADAM MENSAGEIROS CELULARES?
Camara, H. , Rodrigues, J. Q. D. , Junior, E. D. S. , Jurkiewicz, A. ,
Farmacologia - UNIFESP
Introducao:
Os receptores purinérgicos são ativados pelo ATP e seus metabólitos, como adenosina (ADO). Em
concentrações milimolares a ADO e o ATP provocam parada da contração de átrios direitos (AD)
isolados de ratos, efeito mediado pelo receptor de adenosina A1 e, possivelmente, algum receptor
P2Y. A pré-incubação do antagonista seletivo dos receptores A1, 1,3-dipropyl-8-cyclopentylxanthine
(DPCPX), inibe a parada cardíaca, entretanto o efeito de sua incubação após o estabelecimento da
parada cardíaca não é descrita. Com frequência, episódios de hipóxia ou isquemia precedem a
parada cardíaca, elevando as concentrações extracelulares de ADO, o que pode indicar o papel
deste nucleotídeo na abolição dos batimentos cardíacos.
Objetivos:
Avaliar se o DPCPX é capaz de reverter a parada cardíaca produzida tanto pela ativação dos
receptores A1, quanto pela ativação de outro sistema receptor como o M2.
Metodos:
O AD isolado de ratos Wistar machos (Rattus novergicus, 4-6 meses, 350-450g) foram montados
em banho de órgãos isolados contendo solução de Krebs (37oC; pH 7,4) carbogenada (95% O2,
5% CO2). Os tecidos foram submetidos a uma tensão basal de 1.0 gf e expostos a ADO (1mM),
agonista dos receptores P1, CPA (0,3mM) e CHA (10µM), agonistas seletivos do receptor A1, CCh
(0,3µM) e ACh agonistas dos receptores M2 (0,1mM). Depois de estabelecida a parada cardíaca, o
DPCPX (10 µM) foi incubado por um período máximo de 10 minutos e foi verificado o retorno das
contrações espontâneas. Os procedimentos foram aprovados pelo comitê de ética em pesquisa
institucional (no 5001150214).
Resultados:
A ADO (1,0 mM), CPA (0,3mM), CHA (10,0 µM), ACh (0,1mM) e o CCh (0,3 µM), ao serem
aplicadas no AD isolado dos animais NWR, aboliram as contrações espontâneas atriais (0 bpm).
Concentrações menores e mais seletivas do DPCPX para o receptor A1 foram testadas (1,0 nM até
10,0 µM). Somente foi possível o retorno dos batimentos após aplicação da maior concentração. A
incubação de DPCPX 10 µM após a parada cardíaca produzida pelos agonistas devolveu as
contrações do átrio direito em menos de 10 minutos após sua aplicação, para todos os agonistas
utilizados (n≥3). Ao pré-incubar-se a ADO ou CPA com 0.1 µM de DPCPX por 30 minutos
observou-se que os agonistas não foram capazes de promover o fenômeno de parada cardíaca.
Assim, sugeriu-se que a reversão da parada cardíaca produzida pelos agonistas seletivos A1, bem
como pelos agonistas M2, pelo DPCPX (10,0 µM) é um fenômeno associado há outro efeito
farmacológico desta droga como, por exemplo, um efeito de inibir as fosfodiesterases aumentando
a quantidade de AMPc celular ativando a enzima PKA que promoverá a abertura dos canais de
Ca2+.
Conclusão:
O DPCPX reverte não apenas a parada cardíaca produzida pela ativação dos receptores A1, mas
também a parada provocada pela ativação do receptor M2. Estes resultados sugerem que o
DPCPX poderia retornar os batimentos cardíacos por um mecanismo que independe da sua ação
antagonista do receptor A1.
Apoio Financeiro:
O DPCPX reverte não apenas a parada cardíaca produzida pela ativação dos receptores A1, mas
também a parada provocada pela ativação do receptor M2. Estes resultados sugerem que o
DPCPX poderia retornar os batimentos cardíacos por um mecanismo que independe da sua ação
antagonista do receptor A1.
Comitê de Ética:
5001150214
2.031 In both genders, high rate unesterified cholesterol transfer to HDL in the
plasma can be protective against coronary artery disease.
Martinelli, A. E. M. , Sprandel, M. C. O. , Freitas, F. R. , Segre, C. A. , Laverdy, O. G. , Heub, W. A. ,
Maranhão, R. C. ,
Laboratório Metabolismo de Lípides - InCor
MASS - InCor
Introducao:
Background: New tools to test metabolic and functional aspects of HDL are important for the
understanding of HDL anti-atherogenic role and set up new coronary artery disease (CAD) markers.
Recently we developed an in vitro assay to assess the transfer of lipids to HDL, aprocess mediated
by transfer proteins (CETP and PLTP) that is crucial in HDL metabolism and reverse cholesterol
transport.
Objetivos:
Aim: The aim was verify the gender differences in lipid transfers in patients with CAD versus
non-CAD, since females are less prone to develop CAD than males.
Metodos:
Methods: 39 male and 29 female CAD patients and 38 males and 38 femaleswithout CAD, all
confirmed by cineangiography and age-paired, were enrolled. Fasting plasma samples were
incubated
with
a
donor
lipidic
nanoemulsion
labeled
with
3H-cholesterylesters
and14C-phospholipids or 14C-unesterifiedcholesterol and3H-triglycerides, for 1h at 37oC.
Radioactive lipids transferred to HDL were measured after chemical precipitation. This study was
approved by CAPEPesq of Medical School Hospital of University of São Paulo, number of protocol
0416/08.
Resultados:
Results: Both CAD males (CAD: 6.9±1.5%; n-CAD: 8.0±1.5%, p=0.002) and females (7.1±1.2% vs
8.5±1.6%, p=0.0002) showed diminished transfer to HDL of unesterified-cholesterol compared to
non-CAD of the same gender. Transfer of cholesteryl-esters was increased in CAD of both genders
whereas triglyceride transfer was diminished in CAD male and increased in CAD female, compared
to non-CAD. CETP mass was increased in CAD females compared to female non-CAD, but in
males it was equal between CAD and non-CAD. Regarding HDL lipid composition, both male and
female CAD showed increased cholesteryl-ester content compared with respective non-CAD,
whereas the unesterified-cholesterol content was diminished only in CAD males.
Conclusão:
Conclusion: Diminished unesterified cholesterol transfer to HDL observed in CAD patients of both
genders may impair cholesterol esterification that is key in reversecholesterol transportandoccurs
mainly in HDL. Increased triglyceride transfer in CAD women may affect HDL stability. Results can
offer new CAD markers.
Apoio Financeiro:
Conclusion: Diminished unesterified cholesterol transfer to HDL observed in CAD patients of both
genders may impair cholesterol esterification that is key in reversecholesterol transportandoccurs
mainly in HDL. Increased triglyceride transfer in CAD women may affect HDL stability. Results can
offer new CAD markers.
Comitê de Ética:
CAPEPesq 0416/08
2.032 Expression of lipoprotein receptors in mice submitted to exercise
training and statin treatment
Freitas, F. R. , Aptekmann, N. P. , Carvalho, P. O. , Stefani, R. M. , Irigoyen, M. C. , Maranhao, R.
C. ,
Laboratório de Metabolismo de Lípides - InCor - HCFMUSP
Laboratório de Hipertensão - InCor HCFMUSP
Introducao:
Introduction: It is well established that exercise training is a deterrent of cardiovascular disease.
Exercise training is consistently beneficial in improving the lipid profile, but effects on lipoprotein
receptors are largely unknown. Lipoproteins are removed from the plasma by receptors such as the
LDL-R, LRP-1 or SR-B1. In addition, drugs with action on lipidemia may also modulate the
expression of lipoprotein receptors.
Objetivos:
Objective: Our aim was to investigate the effects of exercise training on LDL-R, LRP-1 and SR-B1
gene and protein expression. Moreover, the statin effects on lipoprotein receptors expression were
also tested to clarify whether statin use has cooperative effects with exercise on receptor
expression.
Metodos:
Methods:Twenty-eight C57 BL/6 male mice were divided in 4 groups: Non-trained or Sedentary
(SED), Exercise Training (ET), Simvastatin (SV) and Exercise Training plus Simvastatin (ET+SV).
ET and ET+SV groups were exercised on a treadmill for 60 min/day for 5 days/week for 4 weeks.
SV and ET+SV groups received simvastatin (15mg/Kg BW/day) by gavage everyday for 4 weeks.
Liver and gastrocnemius muscle were collected for gene and protein expression analysis. Relative
gene and protein expressions were performed by quantitative real-time PCR using TaqMan
approach and immunohistochemistry, respectively. This study was approved by the CAPPesq of
Medical School of University of Sao Paulo (0099/09).
Resultados:
Results: Improvement of the physical capacity in trained mice was documented by the increase in
the % maximal running speed obtained by the treadmill test. In ET, SV and ET+SV groups, LDLR
gene expression was increased in liver (p=0.01) and in muscle (p=0.002), compared to SED group.
LDLR protein expression was decreased in liver in all three groups (p=0.01); in muscle it was equal
to SED in ET and ET+SV and diminished in SV (p=0.05). Both, in liver and in muscle, the LRP1
gene expression was not different among the groups. Protein expression of LRP1 in liver was only
decreased in SV group (p=0.0036), and in the muscle, it didn’t change. In liver, SR-BI gene
expression was decreased in all groups (p<0.001). SR-BI protein expression was only different in
ET+SV group (p=0.0279). In the muscle, SR-BI gene expression was equal in the four groups and
protein expression was undetectable.
Conclusão:
Conclusion: Both training and statin treatments had the ability to increase the gene expression of
LDLR in the liver and muscle and decrease that of hepatic SR-BI. This is an important issue, since
exercise training is one of the key tools to improve the cardiovascular and health in general and the
lipid regulation is part of the atherosclerosis paradigm.
Apoio Financeiro:
Conclusion: Both training and statin treatments had the ability to increase the gene expression of
LDLR in the liver and muscle and decrease that of hepatic SR-BI. This is an important issue, since
exercise training is one of the key tools to improve the cardiovascular and health in general and the
lipid regulation is part of the atherosclerosis paradigm.
Comitê de Ética:
CAPPesq 0099/09
2.033 New Insigths from Mechanical Activation of the Renin-Angiotensin
System
Vasques, E. C. , Leal, M. A. S. , Krieger, J. E. , Almeida, T. , Dornelas, N. M. , Barauna, V. G. ,
Departamento de Cardiologia Molecular - FM-USP/Incor
Departamento de Ciências Fisiológicas - DCF/UFES
Introducao:
In 2013 two different groups showed evidence for the AT1 receptor as a mechanotransducer of
shear stress and the role of its rapid internalization in endothelial cells (ECs). It has been
demonstrated that ACE can be phosphorylated on Ser1270 (cytoplasmic domain) at basal level
which is increased in response to ACE inhibitors treatment. It activates JNK pathway and results in
increased ACE expression. We have previously demonstrated that shear stress (SS) downregulates
ACE expression in endothelial cells but the mechanotransduction of this event is still unknown
Objetivos:
Thus, we want to investigate if ACE downregulation in response to SS is mediated by ACE
phosphorylation on Ser1270
Metodos:
Cell Culture of CHO cells, Flow-induced Shear Stress in cell culture plates; ACE activity by
fluorimetry method; ACE cloning; Gene reporter assay, Western Blotting;
Resultados:
By western blotting technique we showed that ACE phosphorylation decreases by 49±12% after 5
min, 52±9% after 30 min and 62±5% after 18h in response to SS (15 dynas/cm2) which was
accompanied by 23±8% decrease in JNK phosphorylation in CHO cells expressing wild-type ACE
(wtACE). On the other hand, SS did not decrease JNK phosphorylation in CHO cells. Using reporter
gene approach, we observed that SS decreased ACE promoter activity in wtACE cells (Static
100±7.2%; wtACE, 59.9±8.9%) but not in CHO cells or CHO expressing ACE without the
extracellular domain. Interestingly, wtACE cells treated with a JNK inhibitor (SP600125, 10nM or
20nM, 24h) showed decrease in ACE promoter activity (control, 100±4.3%; 10nM, 64±6.6%; 20nM
64.7±6.7%).
Conclusão:
In conclusion, we demonstrated that ACE has a key role on its own downregulation by SS which
involves JNK pathway. Our results suggest that ACE extracellular domain acts as a mechanosensor
and the cytoplasmic domain elicit the intracellular signaling by phosphorylation on Ser1270
Apoio Financeiro:
In conclusion, we demonstrated that ACE has a key role on its own downregulation by SS which
involves JNK pathway. Our results suggest that ACE extracellular domain acts as a mechanosensor
and the cytoplasmic domain elicit the intracellular signaling by phosphorylation on Ser1270
Comitê de Ética:
11/2014
2.034 PERFIL ANTIOXIDANTE EM MODELO DE SEPSE
Azevedo, M. R. , Pinho da Silva, L. , Pinho, J. F. , Cruz, J. S. , Barreto, T. O. ,
Bioquímica e Imunologia - UFMG
Fisiologia e Biofísica - UFMG
Introducao:
Sepse é condição clinica, caracterizada por uma intensa atividade inflamatória devido a uma
infecção sistêmica grave que possui altas taxas de mortalidade. A sepse está associada a
hipotensão e colapso cardiovascular sendo esta uma das complicações responsáveis pelo elevado
número de mortes. Sabe-se que as espécies reativas de oxigênio (ROS) são um dos mediadores
de danos celulares e ativação de respostas imune durante o processo inflamatório que podem estar
envolvidas com o colapso cardiovascular gerado pela sepse. Essas espécies reativas são capazes
de reagir com proteínas, lipídeos e ácidos nucléicos modificando suas estruturas e ocasionando
danos celulares. Os sistemas antioxidantes proporcionam um equilíbrio redox no organismo,
evitando danos causados pelos ROS. Quando ocorre um desequilíbrio entre a produção de ROS e
os sistemas de defesa antioxidantes, leva a um processo chamado estresse oxidativo.
Objetivos:
Com isso, este trabalho objetivou investigar o estresse oxidativo (níveis de peroxidação lipídica) e a
atividade das enzimas antioxidantes (catalase (CAT)) e superóxido dismutase (SOD)) no processo
inflamatório durante a sepse que pode contribuir para um melhor entendimento das causas dos
danos cardiovasculares associados à sepse.
Metodos:
Camundongos Balb C machos, com idade de 8 a 12 semanas, foram submetidos a uma ligação e
perfuração cecal, LPC (Sepse) ou apenas tiveram o seu ceco ligado (Sham). Após 6 horas da
cirurgia, os animais foram sacrificados e posteriormente o ventrículo esquerdo foi retirado para
análise da atividade das enzimas antioxidantes e os níveis de peroxidação lipídica. Todos os
procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal
(CETEA – 068/07) da Universidade Federal de Minas Gerais.
Resultados:
A atividade da SOD (U/mg de proteina) não se alterou nos animais sépticos quando comparados
aos animais do grupo Sham. (0,23 ± 0,07 vs 0,18 ± 0,03, n=6, p>0,05). Já a atividade da CAT
(ΔE/min/mg) foi menor nos animais sépticos quando comparados com os animais Sham
(0,069 ± 0,01 vs 0,15 ± 0,02, n=4, p<0,05). Com isso, os níveis de peroxidação lipídica foram
maiores nos animais sépticos quando comparados aos animais Sham (6,82 ± 0,26 vs 4,30 ± 0,14,
n=4, p<0,05). Os resultados foram comparados entre animais sépticos e Sham.
Conclusão:
O presente estudo indica que os animais sépticos possuem níveis aumentados de peroxidação
lipídica quando comparados aos animais SHAM, o que caracteriza um aumento do estresse
oxidativo. Isso pode ser explicado devido ao fato das enzimas antioxidantes não conseguirem
aumentar a sua atividade para combater as espécies reativas que estão sendo produzidas em
excesso em consequência do processo inflamatório associado à sepse e o consequente dano
cardiovascular.
Apoio Financeiro:
O presente estudo indica que os animais sépticos possuem níveis aumentados de peroxidação
lipídica quando comparados aos animais SHAM, o que caracteriza um aumento do estresse
oxidativo. Isso pode ser explicado devido ao fato das enzimas antioxidantes não conseguirem
aumentar a sua atividade para combater as espécies reativas que estão sendo produzidas em
excesso em consequência do processo inflamatório associado à sepse e o consequente dano
cardiovascular.
Comitê de Ética:
137/2012
2.035 ISOLAMENTO DE SUBSTÂNCIAS BIOATIVAS DO COGUMELO
AGARICUS BLAZEI PARA O TRATAMENTO DA HIPERTENSÃO ARTERIAL.
Canta, G. N. , Santos, E. A. , Regis, W. C. B. , Santos, R. A. S. , Lautner, R. Q. ,
Departamento de Medicina Veterinária - PUC Minas
Departamento de Bioquímica e Imunologia - UFMG
Departamento de Fisiologia e Biofísica - UFMG
Ciências Biológicas e da Saúde - PUC Minas
Introducao:
O Agaricus blazei é um cogumelo comestível de amplo uso popular no Japão. Vários trabalhos têm
evidenciado o fungo, de origem brasileira como antitumoral, antioxidante e imuno-potenciador.
Estudo recente demonstrou efeito anti-hipertensivo. Os possíveis mecanismos anti-hipertensivos do
Agaricus blazei e frações, todavia, permanecem desconhecidos.
Objetivos:
Avaliar os efeitos do cogumelo Agaricus blazei, extrato bruto e frações, na reatividade vascular em
aortas isoladas de ratos - como possível alvo de ação para atividade anti-hipertensiva.
Metodos:
Avaliamos os efeitos do Agaricus blazei em aortas isoladas. Ratos Wistar machos foram
sacrificados; sendo retirados segmentos da artéria aorta para o protocolo de reatividade vascular in
vitro: pré-contração com fenilefrina (0,1 µM), adição acumulativa do Agaricus blazei (10-7 –
10-3 µg/L) em 3 grupos: a) vasos com endotélio; b) vasos sem endotélio; c) vasos com inibição da
enzima Óxido Nítrico Sintase (NOS).
Resultados:
O extrato bruto do cogumelo Agaricus blazei apresentou atividade bifásica na reatividade vascular.
Nas concentrações iniciais, mais baixas, os vasos apresentaram uma tendência vasodilatadora
(Emax.: 19±3,5%) e nas últimas concentrações o comportamento foi nitidamente contrário (Emax.:
-4±7,2%). Por outro lado, o extrato aquoso, com massa molecular ≤ 3000kD, apresentou
pronunciado efeito vasodilatador (Emax: 52±5,2%). Em vasos sem endotélio ou com inibição da
NOS, a vasodilatação foi atenuada.
Conclusão:
Os dados encontrados demonstraram que o cogumelo Agaricus blazei, em pelo menos um dos
seus extratos, apresentou pronunciado efeito vasodilatador dependente do endotélio vascular e da
via do óxido nitrico , sugerindo, desta forma, um possível mecanismo de ação que justifique o uso
do Agaricus como antihipertensivo. Por outro lado, a caracterização desta hipótese, depende da
administração do extrato em ensaios in vivo – que será o escopo para etapas futuras.
Apoio Financeiro:
Os dados encontrados demonstraram que o cogumelo Agaricus blazei, em pelo menos um dos
seus extratos, apresentou pronunciado efeito vasodilatador dependente do endotélio vascular e da
via do óxido nitrico , sugerindo, desta forma, um possível mecanismo de ação que justifique o uso
do Agaricus como antihipertensivo. Por outro lado, a caracterização desta hipótese, depende da
administração do extrato em ensaios in vivo – que será o escopo para etapas futuras.
Comitê de Ética:
0033-2012
2.036 Tratamento com a associação de derivados N-acilidrazônicos,
LASSBio-294 e LASSBio-897, melhora a disfunção diastólica induzida pela
hipertensão e infarto do miocárdio.
Frazão, T. N. , Da Silva, J. S., Maia, R. C. , Fraga, C. A. M., Barreiro, E. J., Zapata-Sudo, G. , Sudo,
R. T. ,
Programa de Pós-Graduação em Ciências Cirúrgicas - UFRJ
Programa de Pesquisa em Desenvolvimento de Fármacos - UFRJ
Laboratório de Avaliação e Síntese de Substâncias Bioativas - UFRJ
Introducao:
O infarto do miocárdio é um processo de morte celular e necrose, que associado à hipertensão
arterial sistêmica aumenta o desenvolvimento da insuficiência cardíaca. Os derivados
N-acilidrazônicos LASSBio-294 e LASSBio-897 demonstraram efeitos cardioprotetores em ratos
espontaneamente hipertensos (SHR) submetidos ao infarto do miocárdio (IM).
Objetivos:
Investigar os efeitos da associação de LASSBio-294 com LASSBio-897 em prevenir as alterações
cardiovasculares no modelo de IM em ratos SHR.
Metodos:
Os protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética de Uso de Animais do
CCS/UFRJ (DFBCICB049). Os SHR (12-14 semanas) foram divididos em grupos falso-operado
(FO) e infartado (IM), tratados com associação de LASSBio-294 e LASSBio-897 (5 mg/kg e 20
mg/kg p.o.) durante 8 semanas. Os resultados da associação foram comparados aos obtidos com
uso de DMSO. Após oito semanas do IM induzido pela oclusão da artéria coronária descendente
anterior, os seguintes parâmetros foram avaliados: frequência cardíaca, duplo produto PASxFC,
pressões arterial sistólica (PAS), diastólica (PAD) e média (PAM), pressão sistólica do VE (PSVE),
pressão VE diastólica final (PVEDF) e suas derivadas +dP/dt e -dP/dt, e a hipertrofia do VE. Os
resultados foram expressos como média ± EPM. A comparação entre diferentes grupos foi
realizada por meio da ANOVA, seguido do teste de Newman-Keuls’ e as diferenças foram
consideradas significativas para P < 0,05.
Resultados:
Relativo ao grupo SHR FO (n=3), o IM (n=3) aumentou a PAS de 180,7 ± 14,7 para 231,8 ± 14,6
mmHg, a PAD de 145 ± 6 para 194,8 ± 18,6 mmHg, e a PVEDF de 4,65 ± 0,3 para 30,01 ± 3,6
mmHg (P < 0,05), diminuiu a +dP/dt de 9055 ± 1285 para 2659 ± 1266 mmHg/s (n=3, P < 0,05). O
duplo produto foi aumentado no grupo SHR IM (n=3) comparado ao FO de 69155 ± 6436 para
103599 ± 7019 (n=4, P < 0,05) e aumento da hipertrofia do VE de 4,44±0,18 (SHR FO) para
6.98±1,16 (SHR IM) mg/g (P < 0,05). O tratamento com a associação de LASSBio-294 com
LASSBio-897 nas doses de 5 e 20 mg/kg no grupo IM reduziu os seguintes parâmetro; PAS para
156,5 ± 8 (n=6) e 116,4 ± 6,0 (n=4, P < 0,05) mmHg; PAD para 118,3 ± 7,8 (n=6) e 90,9 ± 4,0 (n=4,
P < 0,05) mmHg; e a PAM para 137,3 ± 7,8 (n=6) e 90,9 ± 4 (n=4, P < 0,05) mmHg,
respectivamente quando comparado ao grupo IM. O tratamento com a associação nas doses de 5
e 20 mg/kg reduziu a PVEDF para 6.92 ± 0,6 (n=6) e 6,1 ± 1,9 (n= 4, P < 0,05) mmHg
respectivamente comparado ao IM e aumentou a +dP/dt para 5520 ± 340,5 (n=6) e 7331 ± 266,9
(n=4) mmHg/s, respectivamente (P < 0,05) e reduziu o duplo produto PASXFC para 65424 ± 3730
(n=6) e 38356 ± 6859 (n=4, P < 0,05), respectivamente, bem como reduziu a hipertrofia cardíaca
para 4,72 ± 0,2 (n=6) e 4,8±0,0 (n=4, P < 0,05), respectivamente, quando comparado ao grupo IM.
Conclusão:
A associação de LASSBio-294 e LASSBio-897 é promissora na prevenção de disfunção cardíaca
do animal SHR induzida pelo IM.
Apoio Financeiro:
A associação de LASSBio-294 e LASSBio-897 é promissora na prevenção de disfunção cardíaca
do animal SHR induzida pelo IM.
Comitê de Ética:
DFBCICB049
2.037 EFEITO DA ATIVAÇÃO CRÔNICA DOS RECEPTORES
β-ADRENÉRGICOS NO RELAXAMENTO DEPENDENTE DO ENDOTÉLIO
EM ARTÉRIA PULMONAR DE RATOS
Victorio, J. A. , Rossoni, L. V. , Davel, A. P. C. ,
Departamento de Biologia Estrutural e Funcional - UNICAMP
Departamento de Fisiologia e Biofísica - USP
Introducao:
A hiperativação dos receptores Beta-adrenérgicos (B–AR) induz estresse oxidativo e reduz a
biodisponibilidade basal de óxido nítrico (NO) em aorta; entretanto um aumento da defesa
antioxidante mantém inalterada a síntese estimulada de NO pela acetilcolina (ACh). As artérias
pulmonares perfazem um leito vascular sob baixa pressão que apresentam especificidades no
controle do tônus; e a hiperativação B–AR poderia induzir efeitos diferenciados neste leito,
seja pela atividade dos B-AR vasculares, e/ou por alteração da pós-carga do ventrículo direito (VD).
Objetivos:
Avaliar o efeito as respostas de relaxamento da artéria pulmonar em ratos submetidos ao
tratamento por 7 dias com isoproterenol (ISO).
Metodos:
Ratos Wistar (~350 g, n=24) foram tratados com ISO (0,3 mg/kg/dia, s.c.) ou veículo (CT). Ao final
dos 7 dias de tratamento o coração e os pulmões foram isolados. Foram avaliados peso, diâmetro
dos cardiomiócitos e conteúdo de colágeno do VD. Em anéis de artéria pulmonar extralobar
realizou-se curvas concentração-resposta (CCR) à ACh (10-9 - 10-5 M), ao nitroprussiato de sódio
(NPS, 10-11 - 10-6 M), ao ISO (10-11 - 10-6 M) e ao KCl (1 - 10 mM). Alguns anéis foram
incubados com o inibidor da NOS, o L-NAME (100 µM) por 30 min antes da CCR à ACh, ou
ouabaína (100 µM) por 30 min antes da CCR ao KCl. A produção de NO e de espécies reativas de
oxigênio (EROs) foi realizada pela quantificação da fluorescência emitida pelo DAF-2 (8 µM) e DHE
(2 µM), respectivamente. Via Western-blot avaliamos a expressão proteica da NO sintase endotelial
(eNOS), fosfoproteína estimulada por vasodilatador (VASP) e das isoformas 1, 2 e 3 da superóxido
dismutase (SOD). Estatística: Teste t de Student; *p<0,05.
Resultados:
O tratamento com ISO resultou em hipertrofia (CT= 0,6±0,03 vs. ISO= 0,9*±0,02 mg/g), aumento do
diâmetro dos miócitos (CT= 10,5±0,1 vs. ISO= 12,5*±0,1 mm) e não alterou o conteúdo de
colágeno no VD. A artéria pulmonar do grupo ISO apresentou um aumento da resposta máxima a
ACh (CT= 78±3,4 vs. ISO= 90±3,8% *), e a incubação com L-NAME aboliu as diferenças entre os
grupos, resultando em um aumento da diferença da área abaixo da CCR a ACh no grupo ISO (CT=
87±19 vs. ISO= 146*±11%). As CCR ao NPS, ISO agudo e ao KCl com e sem ouabaína não foram
diferentes entre CT vs. ISO (p>0,05). A produção de NO após estímulo com ACh (10-5 M) foi
aumentada em artéria pulmonar dos animais tratados com ISO em comparação ao CT. A produção
de EROs também encontrou-se aumentada na artéria pulmonar do grupo ISO, mas a incubação de
L-NAME reduziu a fluorescência ao DHE neste grupo. A expressão proteica da SOD-2 aumentou
no grupo ISO (+34%), sem alteração na expressão de SOD-1 e -3. A expressão de eNOS total e de
VASP foram significativamente aumentadas no grupo ISO (+51% e +62%, respectivamente).
Conclusão:
Os resultados sugerem que a hiperativação de B-AR, apesar de induzir estresse oxidativo aumenta
o relaxamento endotélio-dependente induzido pela ACh em artéria pulmonar. Este efeito foi
associado a aumento da produção de NO e da expressão de eNOS, VASP e SOD-2.
Apoio Financeiro:
Os resultados sugerem que a hiperativação de B-AR, apesar de induzir estresse oxidativo aumenta
o relaxamento endotélio-dependente induzido pela ACh em artéria pulmonar. Este efeito foi
associado a aumento da produção de NO e da expressão de eNOS, VASP e SOD-2.
Comitê de Ética:
Protocolo CEUA n° 2609-1.
2.038 Improvement of diastolic dysfunction by LASSBio-294 in infarcted
spontaneously hypertensive rats
Da Silva, J. S. , Debom, R. C. , Fraga, C. A. M. , Moraes, M. , Barreiro, E. J. , Nascimento, J. H. M. ,
Ferraz, E. B. , Sudo, R. T. , Zapata-Sudo, G. ,
Programa de Desenvolvimento de Fármacos - UFRJ
Cristália Produtos Químicos e Farmacêuticos Ltda - Crístália
Departamento de Fisiologia - UFRJ
Introducao:
The association of arterial hypertension and myocardial infarction (MI) increased ventricular
dysfunction. N-acylhydrazone, LASSBio-294, have demonstrated positive inotropic properties.
Objetivos:
LASSBio-294 was tested in SHR submetted to myocardial infarction.
Metodos:
Protocols were approved by Animal Care and Use Committee at Universidade Federal do Rio de
Janeiro (DFBCICB049). Male SHR (12-14 weeks old) were randomly divided into groups,
false-operated (Sham-SHR) and infarcted (MI-SHR) treated orally with vehicle (DMSO) or
LASSBio-294 (20 mg / kg) for 28 days. The experimental groups underwent echocardiographic
assessment and was evaluated anterior wall thickness (AWT) during diastole and mitral flow through
the relationship between the rapid filling (E), the slow rate of filling (A).The animals were subjected
to an exercise test. Also the following hemodynamic parameters were analyzed; left ventricular end
diastolic pressure (LVEDP), left ventricular systolic pressure (LVSP) and well as dP/dt. The heart
sections were used to measure cardiac fibrosis. Pro-inflammatory cytokine TNF-α in the
cardiac tissue was evaluated by immunohistochemistry.
Resultados:
The running distance that the SHR-MI group was reduced from 216.0 ± 48.1 82.7 ± 29.0 m m (P
<0.05). However, treatment with LASSBio-294 promoted an increase of 652.0 ± 115.0 m.
LASSBio-294 reduced MI-induced ventricular dysfunction in SHR. There was a reduction of the
AWT in SHR-MI when compared to SHR-Sham 1.46 ± 0.99 mm to 0.39 ± 0.09 mm and was
increased in SHR-IM-LASSBio-294 to 2.42 ± 0.34 mm. Mean arterial pressure was reduced from
169.0 ± 5.6 mmHg to 99.95 ± 7.4 (P < 0.05) in SHR-IM group treated with LASSBio-294. In
SHR-Sham, the LVEDP was 8.9 ± 1.1 mmHg and it was increased in SHR-IM to 25.5 ± 3.1 mmHg
(P <0.05). However, LVEDP of SHR-IM treated with LASSBio-294 reduced to 4.91 ± 0.76 mmHg,
which was similar to the SHR-Sham group. Negative dP/dt of SHR-Sham was 7121 ± 664 mmHg/s
which was reduced in SHR-IM to 6310 ± 466 mmHg/s (P < 0.05). The dP/dt was recovered to 7238
± 1187 (P < 0.05) when SHR-IM was treated with LASSBio-294. We were observed an increase in
the percentage of collagen to 59.81 ± 5.49% in the SHR-MI group when compared to SHR-Sham
(14.50 ± 3.58%, P < 0.05). Treatment of SHR-MI with LASSBio-294, reduced the percentage of
collagen to 12.40 ± 3.14%. There was an increase of positive staining for TNF-α in SHR-MI
compared to SHR-Sham from 8.81 ± 0.89% to 29.16 ± 3.71% (P < 0.05), which was reduced to
14.59 ± 1.63% when SHR-MI group was treated with LASSBio-294.
Conclusão:
LASSBio-294 is a promising candidate for preventing MI-induced cardiac dysfunction in SHR, which
could potentially prevent heart failure.
Apoio Financeiro:
LASSBio-294 is a promising candidate for preventing MI-induced cardiac dysfunction in SHR, which
could potentially prevent heart failure.
Comitê de Ética:
049
2.039 DIPEPTIDYL PEPTIDASE IV INHIBITION EXERTS THERAPEUTIC
EFFECTS IN RATS WITH ESTABLISHED HEART FAILURE.
Arruda-Junior, D. F. , Martins, F. L. , Socas, L. J. , Dariolli, R. , Antonio, E. L. , Tucci, P. J. F. ,
Santos, L. , Girardi, A. C. C. ,
Laboratório de Genética e Cardiologia Molecular - LGCM - USP
Departamento de Fisiologia - SP
Departamento de Ciências Fisiológicas - ES
Introducao:
Dipeptidyl peptidase IV (DPPIV) inhibitors exert cardioprotective effects in experimental models of
cardiovascular diseases and these effects seem to be mediated at least in part by increasing
glucagon-like peptide-1 (GLP-1) bioavailability. We have recently reported that long-term DPPIV
inhibition mitigates the development and/or progression of HF in rats subjected to myocardial injury.
Objetivos:
This study aimed to investigate whether DPPIV inhibition has therapeutic effects in rats with
established heart failure (HF) and to test the hypothesis that HF patients display lower circulating
levels of active glucagon-like peptide-1 (GLP-1).
Metodos:
Experimental HF was induced in male Wistar rats by left ventricle (LV) radiofrequency ablation to
promote a myocardial injury. Echocardiographic analysis were performed six and ten weeks after
surgery. Six weeks after surgery, rats which had developed HF (determined by ECO analysis and
BNP serum levels) were daily treated with vildagliptin at 80 or 120 mg/kg or vehicle for four weeks.
Non-treated sham rats were used as controls. Biometric and morphometric analysis were carried out
to evaluate cardiac remodeling. Immunoblotting analysis was performed to examine abundance of
DPPIV and GLP-1 receptor (GLP-1R). Active GLP-1 was measured in HF patients after an overnight
fast and 15-min following the ingestion of a standardized breakfast. Data are expressed as means ±
standard error. Comparisons among groups were made by one-way analysis of variance (ANOVA).
Adjustment for multiple comparisons was made with the Bonferroni’s method. Differences
were considered significant if P < 0.05.
Resultados:
Echocardiographic analysis demonstrated that vildagliptin dose- dependently improved systolic and
diastolic function in HF rats. Treatment with 80 and 120 mg/kg/day of vildagliptin remarkably
reduced BNP circulating levels as compared to vehicle treated HF rats (167±40 and 152±42 vs.
372±75 pg/mL, respectively). In addition, vildagliptin-treated rats had lower pulmonary congestion,
cardiac hypertrophy and interstitial collagen deposition in the remaining myocardium as compared to
HF rats treated with vehicle. HF rats treated with vehicle displayed higher DPPIV activity and
abundance in serum and heart compared to sham rats. Vildagliptin dose dependently inhibited
DPPIV activity and abundance in serum and heart. Moreover, HF rats treated with vehicle displayed
glucose intolerance and were hyperinsulinemic. Abnormal glucose homeostasis in HF rats was
normalized by all doses of vildagliptin. The increase in postprandial levels of active GLP-1 negatively
correlated with circulating BNP in HF patients.
Conclusão:
Taken together, these results suggest that DPPIV inhibition improves cardiac function in rats with
established HF. Moreover, GLP-1 bioavailability seems to be associated with the severity of HF in
patients. Thus, DPPIV inhibitors may be effective not only for prevention but also for the treatment of
HF in rats.
Apoio Financeiro:
Taken together, these results suggest that DPPIV inhibition improves cardiac function in rats with
established HF. Moreover, GLP-1 bioavailability seems to be associated with the severity of HF in
patients. Thus, DPPIV inhibitors may be effective not only for prevention but also for the treatment of
HF in rats.
Comitê de Ética:
486/13
2.040 ESTUDO DOS EFEITOS DO METILMERCÚRIO SOBRE OS CANAIS DE
POTÁSSIO Kv4.3, hERG e KCNQ1/KCNE1 EM CÉLULAS HEK-293.
Santos, M. C. P. , Gallego, M. , Medei, E. , Casis, O. , Nascimento, J. H. M. ,
Laboratório de Eletrofisiologia Cardíaca Antonio Paes de Carvalho - UFRJ
Departamento de Fisiología, Escuela de Farmácia - UPV/EHU
Introducao:
O metilmercúrio (MeHg) é um organomercurial encontrado em peixes e outros animais aquáticos da
Região Amazônica em áreas expostas à contaminação mercurial. Estudos epidemiológicos têm
mostrado que a exposição humana ao MeHg pode contribuir para o desenvolvimento e progressão
de desordens cardiovasculares, com aumento do risco de arritmias cardíacas. Diversos estudos
mostram que a redução nas correntes repolarizantes de potássio são uma das principais causas
destes eventos arrítmicos, que podem levar a maior suscetibilidade à morte súbita.
Objetivos:
Investigar os efeitos do MeHg sobre as correntes de potássio de canais iônicos Kv4.3, hERG e
KCNQ1/KCNE1 expressos em células HEK-293.
Metodos:
Células HEK-293 expressando estavelmente as subunidades hERG e Kv4.3 (linhagens criadas por
Craig January - Wisconsin e Eduardo Marban -Baltimore, respectivamente) ou transfectadas com
as subunidades KCNQ1+KCNE1 foram utilizadas para o estudo eletrofisiológico pelo método de
Patch-clamp na configuração Whole-cell. Protocolos de voltagem específicos foram utilizados para
registro das correntes de potássio dos canais hERG, Kv4.3 e KCNQ1/KCNE1 na ausència e
presença das seguintes concentrações de MeHg: 0,01 nM; 0,1 nM; 1 nM.
Resultados:
O MeHg promoveu redução na amplitude de todas as correntes iônicas estudadas. Em Kv 4.3 a
densidade da corrente apresentou-se reduzida nas concentrações de 0,1 (n=8) e 1 nM (n=6)
(120,4 ± 31,22 pA/pF e 81,88 ± 19,59 pA/PF, respectivamente) vs Controle (n=8) (233,9 ± 62,91
pA/PF). A corrente permeada por hERG foi reduzida nas concentrações de 0,1 (n=14) e 1 nM (n=5)
( 11,47 ± 1,82 pA/PF e 7,73 ± 2,07 pA/PF, respectivamente) vs Controle (n=10) (18,11 ± 2,38
pA/pF). O mesmo padrão foi visto em KCNQ1/KCNE1, com redução da densidade da corrente nas
concentrações de 0,1 (n=6) e 1 nM (n=7) (19,09 ± 2,94 e 12,51 ± 2,00 pA/PF, respectivamente) vs
Controle (n=6) (31,48 ± 1,92 pA/pF). A cinética de ativação e inativação de Kv4.3 e de ativação e
desativação de hERG não sofreu alterações com a utilização do MeHg. Entretanto, a corrente
permeada pelas subunidades KCNQ1/KCNE1 apresentou mudança na dependência de voltagem
da ativação, tendo seu V1/2 deslocado para potenciais mais positivos na concentração de 0,1 nM
(26,93 ± 6,11 mV) vs Ctrl (10,26 ± 0,05 mV).
Conclusão:
Os resultados apresentados mostram que o MeHg as tem efeito bloqueador dependente de
concentração sobre as correntes iônicas dos canais hERG, Kv4.3 e KCNQ1/KCNE1, sugerindo que
a ação arritmogênica do MeHg no coração seja causada pela redução das correntes repolarizantes.
Apoio Financeiro:
Os resultados apresentados mostram que o MeHg as tem efeito bloqueador dependente de
concentração sobre as correntes iônicas dos canais hERG, Kv4.3 e KCNQ1/KCNE1, sugerindo que
a ação arritmogênica do MeHg no coração seja causada pela redução das correntes repolarizantes.
Comitê de Ética:
Foram utilizadas células HEK-293 em todos os experimentos.
2.041
TRATAMENTO COM DIETA HIPERLIPÍDICA DURANTE 12 SEMANAS
PREJUDICA O RELAXAMENTO VASCULAR INDUZIDO PELO ÓXIDO NÍTRICO
(NO) VIA DEPENDENTE E INDEPENDENTE DO ENDOTÉLIO
Oishi, J. C. , Moraes, T. F. , Duarte, A. C. G. O. , Rodrigues, G. J. ,
Departemento de Ciências Fisiológicas - UFSCar
Introducao:
A obesidade é considerada um problema mundial de saúde nas sociedades modernas e
urbanizadas. O aumento da prevalência da obesidade está associado a um estilo de vida
sedentário e uma alimentação desbalanceada. O excesso de gordura é deletério para saúde e
predispõe a síndrome metabólica, diabetes tipo 2 e desordens metabólicas. Como resultante desta
condição ocorre elevação da pressão arterial, dislipidemia, diabetes e aumento na produção de
aníon superóxido, o qual reage com óxido nítrico (NO) e diminui sua biodisponibilidade. A
diminuição na produção e ou o aumento na degradação do NO nas células endoteliais é um dos
principais
marcadores
de
disfunção
endotelial.
Esta
condição
está
associada
com
o
desenvolvimento e progressão das doenças cardiovasculares.
Objetivos:
O objetivo deste estudo foi verificar a função endotelial em ratos Wistar alimentados com dieta
hiperlipídica por 12 semanas.
Metodos:
Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal de
São Carlos, parecer no 026/2013. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos: controle (GC)
alimentado com dieta comercial normocalórica e grupo alimentado com dieta cafeteria hiperlipídica
(GAH) por 12 semanas. Para a reatividade vascular, aortas torácicas foram isoladas, cortadas em
anéis de 2-3mm de comprimento com endotélio integro e com endotélio removido mecanicamente,
montadas em miógrafo, (Danish Myo Tech, modelo 610M). As aortas foram pré-contraídas com
fenilefrina e logo após curvas concentração-efeito para acetilcolina ou para nitroprussiato de sódio
foram construídas. Os valores da potência (pD2) e efeito máximo (Emax) foram analisados. Foi
utilizado o teste t de student não pareado para comparação entre os grupos, Dados estão
expressos em média e erro padrão.
Resultados:
Ao fim das 12 semanas, a vasodilatação induzida pela acetilcolina foi prejudicada na aorta dos
ratos alimentados com dieta hiperlipídica (pD2 GAH: 6,83 ±0,068 n=8; GC: 6,91 ± 0,43 n=6;
p<0,05). Também, a vasodilatação induzida pelo nitroprussiato de sódio foi prejudicada na aorta
dos ratos alimentados com dieta hiperlipídica (pD2 GAH: 8,23±0,027 n=7;GC: 8,12 ± 0,046 n=6,
p<0,05). O relaxamento máximo (Emax) para acetilcolina foi diminuído nas aortas dos ratos
alimentados com dieta hiperlipídica (Emax GAH: 92,930 ± 2,1650 n=8, GC: 97,61±1,50, p<0,05),
enquanto nos anéis sem endotélio não houve diferença significativa.
Conclusão:
A oferta de dieta hiperlipídica por 12 semanas foi suficiente para causar a disfunção endotelial em
ratos Wistar.
Apoio Financeiro:
A oferta de dieta hiperlipídica por 12 semanas foi suficiente para causar a disfunção endotelial em
ratos Wistar.
Comitê de Ética:
026/2013
2.042 AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA DO TECIDO CARDÍACO DE RATOS APÓS O
CONSUMO DA ERVA-MATE
Carneiro, R. C. M. , Budbi, C. B. , Mian, C. L. , Silva, B. A. K. , Dourado, D. M. , Bento, L. M. A. ,
Curso de Medicina - Universidade Anhanguera-Uniderp
Laboratório de Fisiologia Experimental - Universidade Anhanguera-Uniderp
Laboratório de Toxinologia e Plantas - Universidade Anhanguera-Uniderp
Docente do Curso de Fisioterapia - UFPI
Introducao:
A Ilex paraguariensis, da família Aquifoliaceae é utilizada para o preparo de bebidas como o
chimarrão, o tereré, o mate cozido e o chá mate. A erva é apreciada pelo seu sabor amargo
peculiar e propriedades estimulantes. Estima-se que milhões de pessoas consomem cerca de um a
dois litros por dia de infusão de erva-mate, constituindo a principal alternativa para o café ou para o
chá preto. No Brasil, o consumo anual per capita é de 4 quilos de erva- mate, com 6,7 quilos por
habitante a cada ano, superado em mais de 50% os argentinos e perde somente para os
uruguaios, que mesmo sem ter um hectare de erva-mate plantado, consome 7,8 quilos anuais por
habitante. Existem evidências de que as substâncias contidas na erva mate como xantinas,
cafeínas, flavonóides e vitaminas, exercem ações sobre o sistema cardiovascular, respiratório,
muscular e gastrointestinal. Estudos epidemiológicos sugerem que o consumo de alimentos e
bebidas contendo compostos fenólicos exerce um papel importante na prevenção de doenças
crônicas não transmissíveis, como as cardiopatias. O objetivo deste trabalho foi avaliar
morfologicamente a influência do consumo de erva-mate no tecido cardíaco de ratos saudáveis.
Objetivos:
Avaliar morfologicamente a influência do consumo de erva-mate no tecido cardíaco de ratos
saudáveis.
Metodos:
Pesquisa aprovada com o parecer 2408 do CEUA. Foram utilizados 16 ratos machos adultos Wistar
(Rattus norvegicus albinus), com 2 meses de idade, pesando inicialmente 200 a 300 gramas,
procedentes do Biotério da Universidade Anhanguera-Uniderp. No preparo da erva, foram utilizados
100 ml de água tratada em temperatura ambiente (mensurada em um béquer) para cada 6g da
erva devidamente pesada em balança analítica. Posteriormente, a mistura ficou por 15 minutos,
filtrada em coador de pano, sendo oferecidos 200 ml do extrato por bebedouro diariamente. A
eutanásia foi realizada após 90 dias de tratamento, os animais foram submetidos à mesma através
de exsanguinação sob anestesia, sendo utilizada a associação de anestésicos Xilazina (5mg/kg) e
Quetamina (30mg/kg), administradas via intraperitoneal. O coração foi retirado, pesado, medido e
fixado em formol tamponado a 10%, processado e incluído em parafina, para ser seccionado a 5
micrometros, corado por hematoxilina-eosina (HE) e avaliado por meio de microscopia óptica. Para
análise estatística foi utilizado Teste t de Student para amostras independentes.
Resultados:
Os resultados mostraram que no controle hídrico (CH) o tecido cardíaco apresentava-se com
morfologia normal característica do tecido. Já no controle extrato (CE) com a Ilex paraguariensis
foram observadas as seguintes alterações no tecido cardíaco: infiltrado inflamatório focal entre as
fibras cardíacas, vasos sanguíneos com parede espessada e deposição proteinácea na superfície
da camada de célula endotelial. Na comparação entre as porcentagens de Colágeno Tipo I e III na
artéria aorta e no músculo estriado cardíaco, nos grupos estudados (Hídrico e Illex) não foram
encontradas diferenças significativas (p = 0,3416, p= 0,3467, p =0,2014 e p= 0,1317
respectivamente.
Conclusão:
Os resultados do presente estudo mostraram que a ingesta da erva-mate nos animais promoveu
alterações morfológicas no tecido cardíaco, porém não ocasionou alterações significativas na
deposição do colágeno tipos I e III.
Apoio Financeiro:
Os resultados do presente estudo mostraram que a ingesta da erva-mate nos animais promoveu
alterações morfológicas no tecido cardíaco, porém não ocasionou alterações significativas na
deposição do colágeno tipos I e III.
Comitê de Ética:
2408
2.043 HISTOGÊNESE CARDÍACA DE RÃ-TOURO (Lithobates catesbeianus) EM
ÁGUA PLUVIAL COLETADA DE CAMBISSOLO APÓS APLICAÇÃO DO
GLIFOSATO-ROUNDUP® ORIGINAL
Machado, J. F. F. , Lima, I. B. , Machado, J. R. , Rivaroli, L. ,
Departamento de Ciências Naturais- DCNAT - UFSJ
Introducao:
O desenvolvimento na fase larval de anfíbios é essencial para que energia necessária seja
reservada para metamorfose. Os anfíbios são altamente sensíveis a perturbações ambientais,
sendo pesticidas um dos principais responsáveis pelo declínio de suas populações. O glifosato é
um dos defensivos agrícolas mais utilizados na agricultura mundial e já é conhecido seu efeito no
equilíbrio oxidativo celular, levando a lesões em músculo esquelético e fígado de girinos de
rã-touro. O cambissolo ocupa cerca de 10% do cerrado Brasileiro sendo uma de suas
características a baixa permeabilidade, o que acarreta no escoamento superficial das águas
pluviais. A aplicação de glifosato em vegetação sobre cambissolos pode levar à sua lixiviação para
corpos d’água, o que pode significar riscos a perpetuação de espécies de anfíbios.
Objetivos:
O presente estudo analisou o efeito da exposição de girinos de Lithobates catesbeianus em água
lixiviada do cambissolo exposto ao Roundup Original® na histogênese cardíaca, utilizando a
arquitetura do miocárdio como marcador.
Metodos:
Os procedimentos adotados foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais
(CEUA/UFSJ - n°01/2012). Parcelas do cambissolo com leve declividade foram delimitadas e
acoplado um sistema de captação de água. Em uma dessas parcelas foi aplicado Roundup
Original®. A água coletada dessas parcelas foram utilizadas nos aquários experimentais nos Grupo
Cambissolo lixiviado (GCL, n=10) e no Grupo Cambissolo Lixiviado com Roundup (GCLR, n=10).
Foi criado um Grupo Controle (GC, n=10) no qual os ovos de L. catesbeianus foram mantidos em
água declorinada. Todos os aquários receberam aeração constante. Após os 3 primeiros dias de
desenvolvimentos todos os grupos foram transferidos para aquários com água declorinada e
aerada até o 15° dia de vida, sendo então eutanasiados e fixados com solução de Clark para
preparação histológica. As amostras foram incluídas em parafina e cortados em um micrótomo
Leica RM2245 para obtenção de secções com espessura de 7 µm em cortes frontais, sagitais e
transversais. As preparações foram coradas com hematoxilina-eosina. Através de um sistema de
aquisição de imagens constituído de um microscópio Olympus BX51 acoplado a uma câmara Motic
e a um computador as medidas de espessura das trabéculas e dos espaços inter-trabeculares
foram executadas no programa Motic 2.0.
Resultados:
Foi verificado aumento da espessura trabecular dos grupos experimentais em relação ao GC (3,98
± 0,55 µm). Foram identificadas diferenças significativas entre GCL (6,69± 0,92 µm) e GCLR
(10,51± 3,75 µm). O espaço médio inter-trabecular de GCLR (13,26 ± 4,5 µm) é significativamente
inferior que os de GCL e GC (16,32± 4,5 µm e 18,58± 6,1µm, respectivamente).
Conclusão:
As trabéculas cardíacas do GCLR apresentaram-se maiores em relação à GC com redução do
espaço inter-trabecular, o que significa perda do volume sistólico. Estudos complementares se
fazem necessários para avaliar se houve hipertrofia e/ou hiperplasia e se este efeito está
relacionado à prejuízo no desenvolvimento ou, se houve estresse de alguma natureza relacionado
a elevação da demanda metabólica, que resultasse em alterações fisiológicas como a hipertrofia do
miocárdio.
Apoio Financeiro:
As trabéculas cardíacas do GCLR apresentaram-se maiores em relação à GC com redução do
espaço inter-trabecular, o que significa perda do volume sistólico. Estudos complementares se
fazem necessários para avaliar se houve hipertrofia e/ou hiperplasia e se este efeito está
relacionado à prejuízo no desenvolvimento ou, se houve estresse de alguma natureza relacionado
a elevação da demanda metabólica, que resultasse em alterações fisiológicas como a hipertrofia do
miocárdio.
Comitê de Ética:
n°01/2012
2.044 SODIUM INTAKE INDUCED BY COMBINING FUROSEMIDE AND
CAPTOPRIL IN RENOVASCULAR HYPERTENSIVE RATS.
Barbosa, R. M. , Freiria-oliveira, A. H. , Blanch, G. T. , Menani, J. V. , Colombari, E. , Colombari, D.
S. A. ,
Department of Physiology and Pathology - UNESP
Introducao:
Goldblatt renovascular 2 kidneys, 1 clip (2K1C) hypertensive rats present an overactive
renin-angiotensin system (RAS) and increased 2% NaCl intake. The increased sodium intake is
suggested to be an effect of increased RAS activity. The treatment with the diuretic furosemide
(FURO, 10 mg/kg of body weight, wt.) combined with the blockade of the angiotensin converting
enzyme with captopril (CAP, 5 mg/kg of body wt.) usually induces 1.8% NaCl intake in normotensive
rats, however, the same treatment in 2K1C hypertensive rats produced a large decrease in the
arterial pressure and reduced 1.8% NaCl intake.
Objetivos:
In the present study, we tested the effects FURO + CAP treatment using a lower dose of CAP on
the water and 1.8% NaCl intake, urinary excretion and arterial pressure in 2K1C hypertensive rats.
Metodos:
Male Holtzman rats (initial weight 150-180 g, n=4-7/group) received a silver clip around the left renal
artery to generate 2K1C hypertension. Sham rats underwent similar surgical procedure, but no clip
was placed around the renal artery. Six weeks after the renal surgery, when the hypertension was
well established, the animals received subcutaneous injections of FURO (10 mg/kg of body wt.) +
CAP (2.5 mg/kg of body wt.) and water and 1.8% NaCl intake, urinary volume, sodium and
potassium excretion and changes in arterial pressure were tested in the next 2 h in 3 different tests.
Resultados:
No difference between 2K1C and sham rats occurred in water intake (16.6 ± 3.4, vs. sham: 15.4 ±
1.7 ml/2 h), 1.8% NaCl intake (6.5 ± 2.0, vs. sham: 9.9 ± 0.8 ml/2 h), natriuresis (1275 ± 66, vs.
sham: 1653 ± 98 µEq/2 h), kaliuresis (507 ± 76, vs. sham: 552 ± 46 µEq/2 h) and urinary volume
(11.9 ± 1.8, vs. sham: 14.8 ± 0.6 ml/2 h). However, mean arterial pressure was significantly reduced
in 2K1C hypertensive rats (before FURO+CAP: 194 ± 2, vs. 30 min after FURO+CAP: 148 ± 7
mmHg), without significant changes in sham rats (before FURO+CAP: 107 ± 3, vs. 30 min after
FURO+CAP: 110 ± 4 mmHg).
Conclusão:
The results show that the treatment with FURO + CAP using a low dose of captopril induced similar
1.8% NaCl and water intake in 2K1C hypertensive and sham rats, which is different from the
reduction of 1.8% NaCl previously described using higher dose of captopril. These results suggest
that sodium intake in 2K1C hypertensive rats is strongly affected by the dose of captopril used in the
FURO + CAP protocol. Tests with doses of CAP even lower are necessary in order to find a
possible increased ingestion of 1.8% NaCl in 2K1C hypertensive rats treated with FURO + CAP.
Apoio Financeiro:
The results show that the treatment with FURO + CAP using a low dose of captopril induced similar
1.8% NaCl and water intake in 2K1C hypertensive and sham rats, which is different from the
reduction of 1.8% NaCl previously described using higher dose of captopril. These results suggest
that sodium intake in 2K1C hypertensive rats is strongly affected by the dose of captopril used in the
FURO + CAP protocol. Tests with doses of CAP even lower are necessary in order to find a
possible increased ingestion of 1.8% NaCl in 2K1C hypertensive rats treated with FURO + CAP.
Comitê de Ética:
Processo CEUA nº 17/2014