radioimunoensaio para determinação do hormônio

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RADIOIMUNOENSAIO PARA DETERMINAÇÃO DO HORMÔNIO TIREOIDEANO NA PROLE DE RATAS
HIPOTIREOIDEAS E HIPERTIREOIDEAS
SILVEIRA1,2, 3 , Maria F.G.; DANDA1, Karina P.N.; LUNA1, Taciana F.; SOUZA2, Grace M.; CATANHO2, Maria T.J.A.;
BERNARDO FILHO3, Mário e MOURA3, Egberto G.
1
Departamento de Anatomia - Centro de Ciências Biológicas / UFPE
Av. Profo Morais Rêgo, s/ - 50.670-420 Recife-PE - [email protected]
2
Departamento de Biofísica - Centro de Ciências Biológicas / UFPE
Av. Profo Morais Rêgo, s/n - 50.670-420 Recife-PE – [email protected]
3
Departamento de Biofísica e Biometria, Instituto de Biologia Roberto Alcântara Gomes / UERJ
Av. 28 de Setembro, 87 –20551-030 Rio de Janeiro –RJ – [email protected]
RESUMO
A função tireoideana fetal, em ratos, tem início em torno de 17-18 dias depois da concepção.
O hipotireoidismo ou o hipertireoidismo maternos quando ocorre durante gestação provocam
alterações nos ratos depois de nascidos. Devido a essas alterações, nós decidimos analisar as
modificações hormonais dos filhotes. O hipotireoidismo foi induzido em fêmeas normais, que foram
tratadas por 7 dias com metimazol (0,03 % em água de beber) antes do acasalamento; o grupo
controle recebeu água destilada. O hipertireoidismo foi induzido em fêmeas normais, tratadas com 2
µg (100g de peso corporal/dia) de tiroxina (T4), por via intraperitonial, durante 2 dias antes do
acasalamento; o grupo controle recebeu solução salina. Os ratos filhos de mães hipotireoideas ou
hipertireoideas apresentaram alterações nos níveis séricos de T4 em 10, 20, 30 e 60 dias de vida. A
administração de metimazol e tiroxina afeta a função da glândula tireóide fetal, causando alterações
nos níveis séricos de T4, dos ratos depois de nascidos, indicando que hipotireoidismo ou
hipertireoidismo materno influencia a vida pós-natal do rato.
Keywords: thyroid hormones, hyperthyroid, hypothyroid
I. INTRODUÇÃO
A função tireoideana fetal na espécie humana
inicia-se durante a embriogênese, ou seja, nas primeiras 12
semanas de gestação [1]; em ratos em torno de 17 a 18 dias
depois da concepção [2].
A tireóide fetal funciona, ao término gestacional,
com autonomia, mas há participação de hormônios
tireoideanos maternos na economia fetal [3, 4], portanto a
deficiência materna de iodo provoca a deficiência destes
hormônios em tecidos embrionários [5].
Os hormônios da tireóide são fundamentais para o
desenvolvimento normal de todos os tecidos orgânicos [6],
sendo importantes reguladores das células do crescimento,
do metabolismo [7] e o desenvolvimento neurológico estão
na dependência de um adequado suprimento destes
hormônios [8].
Distúrbios da tireóide, em fêmeas, quando ocorrem
durante a gestação, provocam alterações nos filhotes, mas
alterações ocorridas antes do acasalamento não são tão
esclarecidas, por isso resolvemos investigar quais as
alterações provocadas na prole de fêmeas que sofreram
distúrbios da glândula tireóide por um curto período de
tempo nesta fase da vida.
II. MATERIAIS E MÉTODOS
Ratas fêmeas adultas (Wistar) normais, com 220250g de peso corporal, foram mantidas no biotério do
Departamento de Biofísica da UFPE em gaiolas com 3
animais, a temperatura em torno de 280C; receberam ração
comercial do tipo Labina (Purina) e água “ad libitum”.
Sendo manipuladas de acordo com as normas estabelecidas
pelo Comitê de Ética da Universidade.
O hipotireoidismo foi induzido em fêmeas tratadas
com tiamazol – metimazol (MMI, Lilly), por 7 dias à 0,03
% em água de beber [9] antes do acasalamento; o grupo
controle recebeu água destilada. O hipertireoidismo foi
induzido nas fêmeas, tratadas (2 µg/100 g de peso
corporal/dia) de tiroxina (T4, Sigma), por via intraperitonial,
durante 2 dias antes do acasalamento; o grupo controle
recebeu solução salina.
Os filhotes foram anestesiados com éter e
sacrificados aos 10, 20, 30 e 60 dias de vida; por punção
cardíaca o sangue foi retirado para obtenção do soro e
realização das dosagens hormonais. Os hormônios T4 e T3
total foram avaliados por radioimunoensaio com kit
gammacoat (Coat-A-Count Total T3 e Total T4 de fase
sólida - DPC) que é um ensaio competitivo. O 125I-T4 e 125IT3 competem com os hormônios não marcados ligando-se
no tubo gammacoat, sendo essa ligação inversamente
proporcional à concentração destes hormônios na amostra.
III. RESULTADOS
Níve is sé ricos de T4
[ug/dl]
Na Figura 1 são mostrados os efeitos em filhotes
do grupo tratado com metimazol. Os ratos com 60 dias de
vida apresentaram um aumento significante de 47% nos
níveis séricos de T4, em relação aos filhotes do grupo
controle. Pode-se observar na Figura 2 que os ratos com 20
dias de vida, filhotes do grupo hipertireoideo, apresentaram
reduções significativas nos níveis séricos de T4 em 85%, em
relação aos filhos de mães do grupo controle.
A transferência de T4 materno para o feto é livre,
porém limitada [10], A administração de MMI em fêmeas
prenhes por 7 dias provoca decréscimo dos níveis séricos
de T4 e T3 na circulação materna [11].
O metimazol cruza a placenta em direção ao feto,
indo alterar o desenvolvimento fetal [12]. Como o T4 tem a
meia-vida de 7 dias [13] e o MMI tem a meia-vida de 5 dias
[14], provavelmente estas drogas influenciaram a
embriogênese da glândula tireóide fetal nos períodos
utilizados para o presente estudo.
15
10
*
5
*
Hipotireoideos
0
10
20
30
Controle
60
Ida d e [Dia s]
Figura 1. Níveis Séricos de T4 Total (µg/dl) em Prole de
Ratas Hipotireoideas Tratadas Antes do Acasalamento em
Relação à Prole do Grupo Controle. Os Resultados são em
Função da Idade (dias) de Nascidos, n=10 e *p<0,05.
Níve is sé ricos de T4
[ug/dl]
Index
15
10
Controle
Hipertireoideas
5
*
*
*
10
20
30
0
60
Ida d e [Dia s]
Figura 2 – Níveis Séricos de T4 Total (µg/dl) em Prole de
Ratas Hipertireoideas Tratadas Antes do Acasalamento em
Relação à Prole do Grupo Controle. Os Resultados são em
Função da Idade (dias) de Nascidos, n=10 e *p<0,05.
IV. CONCLUSÃO
A administração do metimazol e da tiroxina em
fêmeas antes do acasalamento afeta a função da glândula
tireóide fetal, causando alterações nos níveis séricos de T4
da
prole,
indicando
que
hipotireoidismo
ou
hipertireoidismo materno poderá influenciar a vida pósnatal do rato.
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Endocrinology, 114(3), p 786-793, 1984.
ABSTRACT
The onset of fetal thyroid function occurs about
17-18 days after conception in the rat. The maternal
hypothyroidism or hiperthyroidism which occur during
gestation provokes alteration, the hormonal modification in
the newborn rats was analyzed. The hypothyroidism was
induced in normal dams, which were being treated for 7
days with metimazole (in the of 0,03 % in drinking water)
before mating. The hyperthyroidism was induced in normal
dams, which were being treated for 2 days with T4 (2 µg
per 100 g body wt/day) before mating. It was seen that the
rat which was born from hypothyroic or hyperthyroic dams
suffered alteration on its T4 levels concerning the days
10,20,30 and 60 after birth. The administration of
metimazole or thyroxine affects the fetal thyroid gland
function, causing alteration of both T4 levels, even after the
birth, indicating that the maternal hypothyroidism or
hiperthyroidism influence on the post-natal life of the rat.