análise por imunohistoquímica do receptor cxcr4 em pacientes

ANÁLISE POR IMUNOHISTOQUÍMICA
PACIENTES COM NEFROBLASTOMA
DO RECEPTOR CXCR4 EM
Marcos Henrique Rosa (CNPq),Carolina Batista Ariza, Maria Angelica Ehara
Watanabe (Orientadora), e-mail: [email protected]
Universidade Estadual de Londrina, Departamento
Patológicas, Centro de Ciências Biológicas (CCB)
de
Ciências
Ciências Biológicas III, Imunologia
Palavras-chave: Nefroblastoma, CXCR4, Imunohistoquimica
Resumo:
Os tumores renais representam 5 a 10% de todas as neoplasias infantis. A
quimiocina CXCL12 e seu receptor CXCR4 estão envolvidos em diversos
processos biológicos, incluindo o desenvolvimento de vários órgãos, como
cerebelo e rim. O receptor de quimiocina CXCR4 tem sido estudado devido ao
seu envolvimento no desenvolvimento tumoral, bem como no processo de
metástase. Inicialmente foi realizado um estudo retrospectivo o qual avaliou
pacientes pediátricos com tumores sólidos (tumor de Wilms, meduloblastoma,
neuroblastoma, adrenocortical). No presente trabalho, foi verificado que o
tumor pediátrico mais frequente na região Norte do Paraná foi nefroblastoma
ou tumor de Wilms (43,182%). Embora tenha sido verificado a presença de
CXCR4 tanto nos tumores quanto no tecido normal adjacente, a intensidade da
marcação foi maior nos tumores, sugerindo que este receptor, de alguma
forma, pode estar influenciando no processo tumoral.
Introdução
O espectro de câncer que ocorre na população pediátrica é
marcadamente diferente do observado em adultos. Por exemplo, os principais
do cérebro e tumores sólidos que surgem em crianças, incluindo
meduloblastoma (MB), neuroblastoma (RN) e do tumor de Wilms (WT), são
extremamente rara em adultos (DOWNING et al., 2012). Um dos grandes
problemas dos tumores pediátricos é o fato de sua localização ser em tecidos
que estão em desenvolvimento. Uma vez que o tratamento afeta células em
proliferação, o desenvolvimento desses órgãos imaturos pode ser seriamente
afetado. Os tumores renais representam aproximadamente 6% de todas as
neoplasias infantis (RIES et al., 2004).
O microambiente tumoral é de grande importância para o estudo da
patogênese do câncer, uma vez que há interação entre as células malignas
neoplásicas, o estroma circundante e o sistema imune. Essa complexa
interação presente no microambiente tumoral influencia a forma como o
organismo irá combater o tumor, bem como afeta o crescimento, o potencial
invasivo e o processo metastático (YAQUB & AANDAHL, 2009). O
entendimento dessa interação contribuirá com a identificação de marcadores e
o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas (FRIDMAN et al., 2011).
É conhecido que o receptor de quimiocina CXCR4 está expresso
comumente nos tumores (LEE et al., 2011) e está envolvido no processo de
metástase (MULLER et al., 2001). Sabendo-se que o CXCR4 está envolvido na
migração de células tumorais com potencial invasivo, o presente trabalho teve
como objetivo avaliar a expressão deste receptor no microambiente do
nefroblastoma.
Materiais e métodos
Este projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Envolvendo
Seres Humanos da Universidade Estadual de Londrina Paraná, Brasil
(Nº.171231134.0000.5231). Através de análises em prontuários, foi avaliado a
distribuição segundo o tipo de tumor pediátrico na região Norte do Paraná.
Foram selecionadas 32 amostras incluídas em parafinas, de pacientes com
nefroblastoma.Para análise imunohistoquimica amostras de tecido normal e
tumoral de 37 pacientes fixadas em formalina embebidas em parafina cortadas
com uma espessura de 3µm, as quaisforam fixadas em lâmina silanizada
(Starfrost, Knittel, Alemanha). As amostras foram aquecidas a 56°C,
desparafinizadas em xilol e reidratadas em álcool. A recuperação antigênica foi
realizada utilizando tampão de ácido cítrico (1,8mM) e citrato de sódio dihidratado (8,2mM) para posterior adição do anticorpo primário. O anticorpo
primário utilizado para detecção do receptor CXCR4 foi um anticorpo de
camundongo
anti-CXCR4
(CD184)
humano
purificado
(clone polyclonal; eBioscience, San Diego, CA, EUA). A diluição 1:100 foi
usada de acordo com Kishima et al., (2015).O anticorpo secundário
(Mouse/Rabbit Immunodetector HRP/DAB, Bio SB INC, Santa Barbara, CA,
USA) foi adicionado, as lâminas foram contra coradas com hematoxilina e a
lamínula foi fixada utilizando-se balsamo do Canadá. Foram realizados
controles de especificidade do anticorpo primário, em amostras positivas e sem
a adição do mesmo. A marcação para CXCR4 foi avaliada no tecido tumoral e
normal adjacente. A análise foi realizada em microscópio óptico (Eclipse-E200,
Nikon, Japão).
Resultados e Discussão
Inicialmente foi realizado um estudo retrospectivo o qual avaliou
pacientes pediátricos com tumores sólidos (tumor de Wilms, meduloblastoma,
neuroblastoma, adrenocortical) (Figura 1).
Figura 1. Distribuição segundo tipo de tumor pediátrico no Norte do
Paraná. A: distribuição dos 88 tumores sólidos pediátricos no Norte do Paraná.
B: Demonstração de dispersão de idade segundo WT, NB, MB, ACT. C:
Número de casos segundo o gênero dos pacientes. Barras representam a
média de idade. WT: tumor de Wilms, NB: neuroblastoma; MB:
meduloblastoma, ACT: tumor adrenocortical , M: masculino, F: feminino .
Dentre os tumores pediátricos, o nefroblastoma foi o mais prevalente
com idade média de 3 anos, 76% dos casos diagnosticados antes de 5 anos,
o qual está de acordo com dados da literatura (Breslow et al., 2006). Neste
trabalho foram avaliados 32 amostras de pacientes com nefroblastoma, e foi
verificado que a maioria das células tumorais apresentavam expressão
citoplasmática de CXCR4. Não houve correlação entre a expressão do CXCR4
com as características clínico-patológicas de pacientes (idade, sexo e tamanho
do tumor). A proteína CXCR4 foi expressa em tecido normal de 16 indivíduos.
Embora não tenha sido verificada associação significativa entre a expressão no
tecido normal e tumoral para esta proteína, o tecido tumoral apresentou
marcação mais intensa em algumas amostras (Figura 2).
Figura 2.
Expressão da proteína CXCR4 por imuno-histoquímica em células normais e
tumorais. A: tecido adjacente normal sem coloração; B: O tecido normal
adjacente corada; C: tecido tumoral sem coloração; D: tecido de tumor coradas.
Estes indivíduos apresentaram três cruzes (+++) intensidade. Ampliação de
400x
Conclusões
Dentre os tumores pediátricos o WT (nefroblastoma) foi o mais prevalente
sendo 76% dos casos diagnosticados antes de 5 anos. Embora tenha sido
verificado a presença de CXCR4 tanto nos tumores quanto no tecido normal
adjacente, a intensidade da marcação foi maior nos tumores, sugerindo que
este receptor, de alguma forma, pode estar influenciando no processo tumoral.
Agradecimentos
CNPq (Apoio a Projetos de Pesquisa -Chamada CNPq/MS/SCTIE/DECIT Nº
36/2014 Processo 470452/2014-5), Fundação Araucária e CAPES.
Referências
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heterogeneity in the pathogenesis of Wilms tumor. Pediatric Blood & Cancer,
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