Material de apoio- BACTERIOLOGIA Microbiologia clínica As bactérias são organismos de uma única célula (unicelulares), relativamente simples e muito pequenos. As células geralmente apresentam-se em vários formatos: Coco: forma esférica ou ovalada; Bacilo: forma de bastão; Espirilo: forma de espiral. Mas existem muitos grupos de bactérias que aparecem de diferentes formas como estrela ou quadrada etc. As bactérias individualmente podem formar pares, grupos, cadeias ou outros agrupamentos no momento da divisão (crescimento). Staphilococcus aureus De todas as espécies do gênero, S. aureus é o mais importante; esta bactéria é responsável pelo segundo maior número de infecções em seres humanos. São responsáveis também por infecções na comunidade em ambiente hospitalar; é a principal responsável por infecções supurativas da pele e dos tecidos como as foliculites e furúnculos e é importante agente causador de bacteremia ou sepse intra hospitalar. Existem na pele de todas as pessoas (microbiota normal) e em outros locais do nosso organismos, como vias respiratórias, pele, trato urinário e trato gastrintestinal, estas são bactérias que apresentam pouco virulência (coagulase negativa), embora existam também Staphilococcus aureus sem causar doença. Estes m.o podem ser destruídos com sabão e altas temperaturas; Passam de pessoa para pessoa pelo contato direto ou com objetos; Feridas e outras aberturas na pele, estados de debilidade, operações cirúrgicas e doenças que debilitam pacientes podem transformar m.o até então inofensivos em potenciais causadores de doenças. Os estafilocos são divididos em dois grandes grupos, com base na habilidade de coagular o plasma. Coagulase positiva (+): patógeno mais encontrado em infecções Coagulase negativa (-): mais de trinta espécies descritas até hoje. Fatores de virulência Os fatores de virulência são todos os mecanismos que permitem a invasão do hóspede, ou evasão da bactéria ao sistema imune. Cada estirpe tem geralmente apenas alguns destes fatores. 1. Têm cápsula que protege muitas variedades de bactérias contra fagocitose e contra o sistema imune; 2. Peptideoglicano, na parede celular: tem atividade de endotoxina, estimulando a febre e vasodilatação excessivas, devido à produção pelas células imunitárias de citocinas; 3. Proteína A: específica dos S. aureus. Neutraliza imunoglobulinas (anticorpos); 4. Ácidos teicóicos: servem para ancorar a bactéria, impedindo-a de ser arrastada pelo sangue, urina, suor ou outros fluídos corporais do seu local de colonização; 5. Toxina alfa: produzida pelo Staphilococcus aureus, destrói vários tipos de células; 6. Toxina beta: produzida apenas pelo Staphilococcus auresus, também destrói vários tipos de células; 7. Toxina delta: produzida pela maioria dos estafilocos. É um surfactante que desestabiliza a membrana celular. Destrói por lise celular (explosão dos conteúdos), eritrócitos e muitos outros tipos de células 8. Toxina gama e leucocidina P-V: grupo de até seis toxinas que formam poros na membrana celular de leucócitos destruindo-os por lise; 9. Coagulase: esta enzima coagula o sangue ao transformar o fibrinogênio em fibrina, da mesma forma que a trombina humana. Por formar coágulos dificulta o reconhecimento da bactéria pelo sistema imune, diminuindo a chance de fagocitose pelo sistema imune. Esta característica diferencia os Staphilococcus aureus; 10. Fibrolisina ou estafilocinase: produzido pelo Staphilococcus aureus. Dissolve os coágulos de fibrina, o que é útil se forem grandes, impedindo a multiplicação e invasão; 11. Hialuronidase: é composta de ácido hialurônico que facilita a invasão nostecidos, degrada a matriz extracelular; 12. Catalase: os leucócitos produzem superoxidantes que destroem as bactérias; a catalase protege as bactérias destes superoxidantes. A enzima catalase transforma o peróxido de oxigênio (presente na água oxigenada) em água e oxigênio inofensivos; 13. Lípase: todos os Staphilococcus aureus e algumas outras bactérias produzem. Esta enzima neutraliza os lipídios (repelem água e causam destruição das bactérias) eliminando a proteção da pele (sebo) e mucosas; 14. Penicilinase: produzidas por bactérias resistentes ao antibiótico penicilina. Ela degrada o antibiótico; 15. Enterotoxinas: são peptídeos produzidas em alimentos, resistentes às enzima digestivas e ao calor, não são destruídas pelo processo de cocção e ou esterilização. Agem na parede do estômago, nos receptores do nervo vago. São produzidas diversas toxinas, designadas por letras: A, B, C (C1 e C2), D, E, F e G. TOXINAS E ENZIMAS 1. Betalactamase (B- lactamase) são enzimas produzidas por algumas bactérias e são responsáveis por sua resistência aos antibióticos beta- lactâmicos como: penicilinas, cefalosporinas, cefamicinas e carbapenemas. 2. Exotoxinas: substância química solúvel que incluem enzimas citolíticas e as proteínas que se ligam a receptores, alterando a função da célula e acarretando a sua morte. As bactérias liberam esta toxina na corrente sanguínea do seu hospedeiro no momento em que a bactéria se multiplica e ou como resultado de seu metabolismo, têm efeitos gerais que variam como diarréia, perda da função neuronal e morte, não causa febre. 3. É necessário pouca quantidade para causar um dano grande porque é muito tóxica (1mg é suficiente para matar um milhão de cobaias). Esta proteína toxina é capaz de lisar eritrócitos e plaquetas, tem ação sobre a muscular lisa e vascular. 4. Lipases: enzimas que atuam sobre lipídeos, na pele causam necrose. 5. Proteases: também chamada de proteinases, peptidades ou enzimas proteolíticas; são enzimas que quebram as ligações peptídicas entre os aminoácidos das proteínas. Este processo envolve principalmente um mecanismo comum de ativação ou inativação de enzimas envolvidos na digestão e coagulação sanguínea. Exercícios sobre bactérias 1. Quais são as diferentes funções do glicocálix da célula bacteriana? Proteção, obstáculo de difusão, coesão celular e inibição por contato. Proporciona resistência à membrana plasmática agindo contra agressões físicas e químicas do meio externo conferindo capacidade de reconhecimento de substâncias nocivas e retenção de nutrientes. 2. Comparar a estrutura e a composição química das paredes celulares de bactérias Gram-negativas e Grampositivas. R : Gram-negativas: paredes mais finas, mais complexas, possuem uma membrana externa cobrindo uma camada fina de peptideoglicano, a camada de peptideoglicano das Gram-negativas representa somente 5 a 10% do peso seco da parede celular. Esta camada é encontrada no espaço periplasmático entre a membrana citoplasmática e a membrana externa, as paredes são constituídas por lipossacarideos. Gram- positivas: mais espessas, mais simples, têm uma quantidade maior de peptideoglicano em sua parede celular que representa 50% ou mais do peso seco da parede de algumas espécies Gram-positiva, não possuem membrana externa como parte de sua parede celular e não possuem também o espaço periplasmatico. 3. Onde se localizam os ribossomos na célula bacteriana? R: Os ribossomos estão dispersos no citoplasma. São encontrados tanto em células procarióticas como eucarióticas. Alguns ribossomos são encontrados lires no citoplasma procariótico, enquanto outros ,principalmente aqueles envolvidos com sintese de proteínas secretadas estão associados com a superfície interna da membrana citoplasmática. 4. Quando os ribossomos são o sítio de uma ação antibiótica, que processo metabólico é inibido? R: Inibe a síntese de proteínas tais como a estreptomicina, neomicina e tetraciclinas 5. Descrever algumas propriedades únicas dos endósporos bacterianos. R: São exclusivos das bactérias. Possuem parede celular espessa, são altamente refrateis e altamente resistente às mudanças de ambiente. Quando liberados da célula mãe podem sobreviver ao calor e ao dessecamento intenso e à exposição a compostos químicos tóxicos 6. Explicar por que a formação dos endósporos nas bactérias não é um modo de reprodução da célula. R: Sob certas condições ambientais, como falta de nutrientes ou água, algumas espécies de bactéria formam estruturas chamadas de endósporos. Ele resulta da desidratação da célula bacteriana e da formação de uma parede grossa e resistente em torno do citoplasma desidratado. Nessas condições, o endósporo é capaz de permanecer anos com a atividade metabólica suspensa, resistindo ao calor intenso, a falta de água entre outras condições precárias. Portanto, a esporulação está relacionada à formação de estrutura capaz de conferir resistência às bactérias e não à reprodução celular 7. Qual é o mecanismo geralmente aceito para a reação diferencial da coloração de Gram? R: Durante o processo de coloração de Gram, as células são tratadas com cristal violeta (corante primário) e em seguida com uma solução de iodo (um mordente). Isto resulta na formação de um complexo cristal violeta-iodo (CVI) dentro das células. Quando uma bactéria Gram-negativa é tratada com etanol, o lipídeo na membrana externa é dissolvido e removido. Isto rompe a membrana externa e aumenta sua permeabilidade. Assim, o complexo corante pode ser removido, descorando a bactéria Gram-negativa (que pode então ser tingida com o corante de fundo safranina). Em bactérias Gram-positivas, o etanol faz com que os poros no peptideoglicano se contraiam, e o complexo corante CVI permanece no interior da célula. 8. A estrutura que mantém a forma bacteriana é: a) Cápsula b) Parede celular c) Membrana celular d) Área nuclear 9. As bactérias Gram negativas,diferem das Gram positivas: a) Pela presença do peptideoglicano b) Pela presença da membrana externa c) Pela presença dos antígenos polissacarídeos d) Pela ausênica do N acetil murâmico na parede celular e) Pela presença do ácido teicóico. 10. As cápsulas são envoltório de polissacarídeos das bactérias, que para os médicos a sua função é de antigenicidade e de dificultar à fagocitose em um processo da defesa imunológica. No entanto, para a microbiologia da bactéria esta estrutura tem a função de Captação de cátions bivalentes, tais como cálcio e magnésio.Assinale verdadeiro ou falso para a afirmação acima. ( X ) Verdadeiro 11. ( ) Falso Devido a menor concentração de peptideoglicano, a parede das bactérias Gram positivas são mais susceptíveis a quebras (rompimento físico) quando comparadas à de bactérias Gram negativas, pois nãopossuem ácidos teicóicos. Assinale verdadeiro ou falso ( ) Verdadeiro ( X ) Falso 12. Em relação à morfologia, as bactérias com as formas esféricas, de bastão, em cachos de uva e em colar, denominam-se, respectivamente: a) Cocos, bacilos, estafilococos e estreptococos; b) Cocos, espirilos, estafilococos e estreptococos; c) Cocos, bacilos, estreptococos e estafilococos; d) Cocos, sarcinas, estreptococos e estreptococos; e) Bacilos, cocos, estreptococos e estafilococos. 13. Na coloração de Gram, as bactérias Gram positivas... Assinale a alternativa correta: a) Não são descoradas pelo álcool- acetona b) Fixam o corante de Gram c) Coram-se de ROXO e formam o complexo cristal-violeta-iodo (CVI) d) A fucsina impregna a parede celular juntamente com o violeta e) Todas estão corretas 14. Os micro organismos da pele das pessoas são dificilmente removidos sendo necesssário a fricção vigorosa durante a lavagem das mãos. Assinale Verdadeiro ou Falso para a afirmação abaixo. ( ) Verdadeiro ( ) Falso 15. Qual a estrutura bacteriana responsável pelo início do processo infeccioso na diarreia infantil? a) Parede celular b) Fímbrias c) Cápsulas d) Membrana celular e) Flagelos 16. Qual a principal função da parede celular nas células bacterianas? 17. Qual o significado da coloração de Gram para a medicina? 18. Comente o efeito da penicilina sobre a parede celular bacteriana, correlacionando-a com a reação tintorial de Gram. A penicilina age sobre a parede celular bacteriana, causando ruptura e consequentemente altera todas as características morfotintoriais observada na coloração de Gram. 19. A partir do gráfico abaixo, dê o nome das fases do crescimento e desenvolvimento das bactérias apontados pelos numerais e após, explique cada fase. 20. O que são antibióticos beta lactâmicos. Dê exemplos 21. a) b) Diferencie: Bacteriostático Bactericida 22. Pesquise em livros e sites científicos local de ação nas bactérias dos diversos antibióticos. 23. Após a leitura do artigo “A infecção hospitalar e suas implicações para o cuidar da enfermagem”, pesquise quais são as principais bactérias envolvidas nas infecções hospitalares. 24. Explique e dê exemplos de desinfecção e esterilização.