UPCII M Microbiologia Teórica 5-6 2º Ano 2015/2016 Sumário Capítulo IV. Crescimento e Nutrição dos Microrganismos Crescimento Matemática do crescimento Curva de crescimento Factores que influenciam o crescimento Aquisição de Nutrientes De que são feitas as células bacterianas? Fontes de Nutrientes Aquisição dos Nutrientes Capítulo V. Diagnóstico Microbiológico 2 Produtos biológicos para análise Colheita e transporte de amostras Identificação do agente infecioso: Métodos Fenotípicos (Culturais e Bioquímicos) Métodos Genotípicos (Moleculares) Métodos Imunológicos (Serológicos) T5-T6 MJC 22-09-2015 Capítulo IV. Crescimento e Nutrição dos Microrganismos Matemática do crescimento bacteriano 4 T5-T6 MJC 22-09-2015 Curva de crescimento bacteriano 5 T5-T6 MJC 22-09-2015 Como se “vê” o crescimento no lab? 6 T5-T6 MJC 22-09-2015 De que é “feita” a célula bacteriana? H2O é o mais abundante Seguidas das proteínas 97% é orgânico 96% CHONPS De cerca de 9 nutrientes: • (NH4)2SO4 • FeCl2 • NaCl • Glicose • KH2PO4 • MgSO4 • CaHPO4 • H20 • Elementos vestigiais • Faz 5000 compostos • • • • • 7 T5-T6 MJC 22-09-2015 Onde é que a célula obtém esses nutrientes? 8 T5-T6 MJC 22-09-2015 Aquisição de Nutrientes 9 T5-T6 MJC 22-09-2015 Aquisição de Nutrientes - Digestão enzimática 10 T5-T6 MJC 22-09-2015 Aquisição de Nutrientes – Transporte Canais Sem consumo de energia. Gradientes Transportadores primários Transporte ativo com hidrólise de ATP. Transporte “contra gradiente”. Transportadores secundários (inclui uniporters, symporters Transporte ativo com gradiente e antiporters) iónico. Transporte “contra gradiente”. 11 T5-T6 MJC 22-09-2015 Aquisição de Nutrientes – Transporte 12 T5-T6 MJC 22-09-2015 Sistemas Fosfotransferase (PTS) http://www.youtube.com/watch?list=UUG5TBP ANNSiKf1DpR5Dibg&v=7zwjnyphAHo&feature=player_deta ilpage 13 T5-T6 MJC 22-09-2015 Factores que influenciam o crescimento Ac. gordos insaturados ou saturados 14 T5-T6 MJC 22-09-2015 Factores que influenciam o crescimento 15 T5-T6 MJC 22-09-2015 Factores que influenciam o crescimento Meios hipotónicos --› aquaporinas Meios hipertónicos --› solutos compatíveis 16 T5-T6 MJC 22-09-2015 Factores que influenciam o crescimento 17 T5-T6 MJC 22-09-2015 Factores que influenciam o crescimento 18 T5-T6 MJC 22-09-2015 Bibliografia Capítulo 4 e 9 Capítulo 3 Capítulo 1 19 T5-T6 MJC 22-09-2015 Capítulo V. Diagnóstico Microbiológico Diagnóstico Microbiológico Paciente Pedido de Exame Diagnóstico e Terapia Colheita Interpretação Transporte Resultado Laboratório 21 T5-T6 MJC 22-09-2015 Colheitas a partir de: Excreções Secreções Tecidos Órgãos 22 T5-T6 MJC 22-09-2015 Colheita e Transporte das amostras Anaeróbios / Fastidiosos / Vírus Psicrófilos / Mesófilos Colheitas de locais com MI Contaminação do ambiente (Expetoração e saliva) Meio de recolha Eficácia Meio de transporte Antibioterapia precedente Tempo da colheita /Rota de infeção e ciclo de infeção Tempo de espera para processamento 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos de diagnóstico Fenotípicos Morfológicos Fisiológicos/Bioquímicos Químicos Genotípicos Imunológicos Baseados em cultura Podem ser independentes de cultura Resultados preliminares e definitivos 24 T5-T6 MJC 22-09-2015 Métodos fenotípicos - Observação directa - MO Ovos de helmintas Espiroquetas Cryptococcus neoformans Preparação Tzanck (infecção por vírus herpes simplex ou varicella-zoster) 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos fenotípicos - Observação directa Colorações A= Não acid fast Fluido CerebroEspinal Bacillus antracis 26 B=Acid Fast T5-T6 MJC 22-09-2015 Métodos fenotípicos - Observação directa - ME 27 T5-T6 MJC 22-09-2015 Métodos fenotípicos - Observação directa Imunocitoquímica 28 T5-T6 MJC 22-09-2015 Métodos fenotípicos - Bioquímicos • Fermentação de vários hc • Hidrólise de gelatina, amido e outros • Catalase, oxidase, coagulase • metabolitos 29 T5-T6 MJC 22-09-2015 Métodos fenotípicos - Outros Serotipagem Biotipagem Tipagem de fagos Tipagem de bacteriocinas 30 22-09-2015 T5-T6 MJC Cultura Meios de Cultura: Função? Meios de transporte: Função? Incubação: (Temperatura e oxigénio) 31 T5-T6 MJC 22-09-2015 Cultura Reacções com o meio de cultura Streptococcus beta hemolítico 32 T5-T6 MJC 22-09-2015 Cultura-tipagem fenotípica e bioquímica Após cultura segue-se identificação: 33 22-09-2015 T5-T6 MJC Cultura-tipagem fenotípica e bioquímica Após cultura segue-se identificação: 34 T5-T6 MJC 22-09-2015 Cultura – Permite antibiograma 35 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos genotípicos – sondas moleculares 36 T5-T6 MJC 22-09-2015 Métodos genotípicos 37 PCR – gene 16sRNA 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos genotípicos PCR Visualização Utilização noutras técnicas 38 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos – indiretamente 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos diretamente 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos - Aglutinação 41 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos - Precipitação 42 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos – Western Blotting 43 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos 44 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos – Teste do Complemento 45 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos – Anticorpos flourescentes Diretos 46 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos – Anticorpos flourescentes Indiretos 47 T5-T6 MJC 22-09-2015 Métodos Imunológicos - Elisa 48 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos - Elisa 49 22-09-2015 T5-T6 MJC Métodos Imunológicos – Elisa sandwich 50 22-09-2015 T5-T6 MJC Sensibilidade e Especificidade Presença do Microrganismo Ausência do Microrganismo 22-09-2015 + - Verdadeiro (V+) Falso (F-) Verdadeiro (V-) Falso (F+) T5-T6 MJC 52 22-09-2015 T5-T6 MJC Bibliografia Capítulo 15-17 Capítulo 6 Capítulo 17 53 22-09-2015 T5-T6 MJC