201601_unisa_biomedicina_micobacterias
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Micobactérias Microbiologia Básica e Clínica II Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Introdução “Febre, hemoptise, dispnéia e suores noturnos. A vida inteira que podia ter sido e que não foi Tosse, tosse, tosse.” – Pneumotórax. Manuel Bandeira, 1966. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Introdução • Um terço da população mundial está infectada com o bacilo • Em 2010, 9 milhões de pessoas desenvolveram a doença • É a principal causa de morte em pacientes com HIV • Entre as doenças infecciosas é a quarta causa de morte Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Introdução Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Taxa de mortalidade por tuberculose Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Taxa de incidência de TB, 1990 a 2010 Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Tuberculose e HIV ART = Terapia antiviral para HIV TB = casos de tuberculose Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Introdução Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Micobactérias: Parede celular 1 – lipídeos de membrana 2- ácido micólico 3- polissacarídeo (arabinogalactana) 4- peptideoglicano 5 – membrana plasmática 6 – lipoarabinomanana (LAM) 7 – fosfatidilinositol 8 – parede celular Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Tuberculose pulmonar Mycobacterium tuberculosis Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Granuloma Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Tuberculose extra-pulmonar Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Resistência à degradação Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Incidência de tuberculose por 100.000 habitantes - 2010 Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Hanseníase Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Mycobacterium leprae Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Diagnóstico Laboratorial Coleta de escarro por expectoração Obtido após esforço de tosse, volume ideal é de 5 a 10 mL. Amostras contendo apenas saliva não devem ser aceitas. • Recipiente Descartável, boca larga, estéril, transparente e identificado com todos os dados do paciente. Identificação SEMPRE no corpo do frasco e nunca somente na tampa. • Coleta Deve ser realizada pelo próprio paciente, de preferência em local aberto ou sala bastante arejada. Coletar de preferência pela manhã, ao despertar. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Diagnóstico Laboratorial Outras amostras: lavado gástrico, lavado bronco-alveolar, expectoração induzida, urina, biópsias, sangue, medula óssea. Transporte e Conservação Manter sob refrigeração, protegido do calor e luz solar. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Baciloscopia • Exame de execução rápida, fácil e de baixo custo. • Identifica os indivíduos que estão eliminando os bacilos e são portanto fontes de infecção. • Serve para acompanhamento da eficácia do tratamento. • Para o exame ser positivo estima-se que são necessários entre 5.000 a 10.000 bacilos por mL de escarro. • Sensibilidade em torno de 65% Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Baciloscopia • Confecção do esfregaço • Fixação • Coloração de Ziehl-Neelsen Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Baciloscopia – coloração de Ziehl Neelsen 1 – Cobrir a lâmina com Fucsina fenicada 2 – Aquecer suavemente com ajuda do bico de Bunsen até começar a desprender vapor e então deixar esfriar. Nunca deixar a solução de fucsina ferver. Repetir esta etapa 3 vezes. Ao final, lavar com água corrente delicadamente. 3 – Cobrir todo o esfregaço com solução de álcool-ácido. Agitar a lâmina delicadamente. Deixar agir por dois minutos. Ao final, lavar com água corrente delicadamente. 4 – Cobrir as lâminas com azul de metileno por 30 segundos. Ao final, lavar com água corrente delicadamente. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Baciloscopia – coloração de Ziehl Neelsen • Leitura da lâmina Micobactérias apresentam-se como bastonetes delgados, ligeiramente curvos, corados em vermelho. O fundo do esfregaço fica azul. Ler no mínimo 100 campos em objetiva de maior aumento. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Resultado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Bacterioscopia - Causas de erros • • • • • Amostra inadequada Esfregaços muito espessos ou delgados Uso de lâminas arranhadas Depósitos de fucsina cristalizada ou seca Descoramento insuficiente ou demasiado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Cultura • Mais sensível que a baciloscopia. Requer a partir de 10 bacilos por mL de escarro para o exame ser positivo. • Diagnóstico mais precoce da doença • Permite o estudo posterior do microrganismo (tipagem molecular, sensibilidade aos antimicrobianos) • Há necessidade de descontaminação da amostra biológica com solução de N-acetil-cisteína + NaOH 1N, citrato de sódio 0,1N Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Meios de cultura • Lowenstein-Jensen Glicerol (carbono) e Asparagina (nitrogênio) Maioria das espécies Piruvato (carbono) e Asparagina (nitrogênio) M. bovis e M.africanum • 7H10 e 7H11 (sólidos) • 7H9 (líquido) Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Incubação e Leitura Incubar os meios semeados a 37 graus. Após 48 horas observar se há contaminação por outras bactérias. Continuar observando a cultura por até 6 semanas. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Resultado As colônias são de cor creme, rugosas, desenvolvem-se na superfície do meio e não alteram a cor do meio LJ. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Cultura positiva Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Colônias de Mycobacterium tuberculosis Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Resultado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Teste Tuberculínico (PPD) Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Teste tuberculínico (PPD) Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Interpretação A interpretação do resultado depende da população a qual o paciente está incluído: O resultado é positivo quando: Pacientes HIV+ e crianças não vacinadas > 5 mm Outros > 10mm Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Xpert MTB/Rif Teste de PCR em tempo real para diagnóstico molecular da tuberculose e da resistência à rifampicina. Implantado no SUS em algumas regiões do país. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Xpert MTB/Rif Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo O teste molecular não substitui a baciloscopia para acompanhamento do tratamento Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Identificação das Micobactérias Testes bioquímicos (niacina e nitrato) HPLC Moleculares Comerciais (GEN-PROBE, INO-LIPPA) In-house (PCR - RFLP) Sequenciamento genético do gene do RNA ribossomal 16S, genes HSP65 e RPOB Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Identificação fenotípica de micobactérias Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Identificação bioquímica TCH: ácido tiofeno carboxílico PNB: ácido para-nitro-benzóico Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo PCR RFLP Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Teste de sensibilidade aos antimicrobianos Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Teste de sensibilidade aos antimicrobianos • Direto O inóculo é a própria amostra do paciente • Indireto O inóculo é uma suspensão de bactérias da cultura isolada. São utilizados meios de cultura LJ acrescidos das drogas em estudo. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Fórmula para determinar resistência Considera-se 1% como o limite de corte (cut off). Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Sistema automatizado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Ensaios imunológicos • Interferon gamma release assays (IGRAs) - QuantiFERON-TB Gold test Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Tratamento para casos novos Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Resistência Multiresistente (MDR): resistente à isoniazida e rifampicina Extensamente resistente (ER): resistência à isoniazida e rifampicina e a pelo menos 3 das 6 outras classes de antibióticos. O TB adquire resistência aos antibióticos apenas por mutação e não por transdução, conjugação ou transformação. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Baciloscopia – preparação dos corantes Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Baciloscopia – preparação dos corantes Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo Fonte: http://www.cdc.gov/tb/statistics/default.htm http://www.cve.saude.sp.gov.br/htm/tb/eventos/forum/ 04TB09_Brasil_DBarreira.pdf Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo
![código de ética do companheiro leo[1]](http://s1.studylibpt.com/store/data/000092607_1-8faba7a1e5a5db79a22cab1ee5cb01bb-300x300.png)
