RTF - FeSBE

Setor 03 - Coração
03.001
HORMÔNIO TIROIDEANO (T3) AUMENTA A ATIVIDADE E A EXPRESSÃO
DA 5´NUCLEOTIDASE EM CULTURAS PRIMÁRIAS DE CARDIOMIÓCITOS
DE RATOS NEONATOS. Silva, V. B.; Carneiro Ramos, M. S. **; Battastini, M. S.; Freitas
Sarkis, J. J.; Morais Barreto-Chaves, M. L.; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Anatomia - ICB
III, USP; Histologia e Embriologia, USP.
Objetivo: ATP, ADP, AMP e adenosina em geral apresentam papel inibitório no
músculo cardíaco, sendo diretamente dependentes dos níveis de ativação das
ectonucleotidases nos diferentes tipos celulares. O objetivo deste estudo foi
avaliar a ação do T3 sobre a hidrólise extracelular de nucleotídeos em culturas
primárias de cardiomiócitos de ratos neonatos.
Métodos e Resultados: Miócitos cardíacos de ratos neonatos (Wistar) foram
extraídos após sucessivas digestões com tampão à base de colagenase. Os
cardiomiócitos foram mantidos em DMEM contendo HS (5%) e NCS (10%) por 48
hs e posteriormente depletados de soro e em contato com meio contendo BrDU
(100M). As células foram tratadas com T3 (de 0,1M a 10M) durante 24hs. A
atividade da 5´-nucleotidase, com conseqüente geração de adenosina, foi
determinada por ensaio colorimétrico, utilizando AMP como substrato. Todas as
amostras foram feitas em triplicatas e normalizadas pela concentração de
proteína, quantificada pelo método de Bradford. Em relação ao grupo controle, o
tratamento com T3 (1M) promoveu um significativo aumento na hidrólise de
AMP (45,8%), assim como na expressão da ecto-5’ nucleotidase (172%).
Conclusões: Os resultados sugerem que o T3 age estimulando a ecto5´nucleotidase, colaborarando diretamente para o aumento dos níveis de
adenosina no tecido cardíaco.
03.002
EFFECT OF THYROID HORMONE ON ANGIOTENSIN TYPE 1 RECEPTOR
(AT1)
EXPRESSION
IN
CULTURED
CARDIAC
MYOCYTES
AND
**
FIBROBLASTS. Carneiro Ramos, M. S. ; Silva, V. B.; Barreto-Chaves, M. L. M.;
Anatomia - ICB III, USP; Histologia e Embriologia, USP.
Objetivo: Renin-Angiotensin System (RAS) has been associated with cardiac hypertrophy induced
by thyroid hormone. However, little is known regarding the regulation of AT1 receptor in cardiac cells
after hyperthyroidism.
Métodos e Resultados: Newborn rat ventricular cardiomyocytes and fibroblasts
were obtained from 1 to 2 day old Wistar rats. After successive digestion of the
tissue, cardiomyocytes and fibroblasts were separated using a Percoll gradient
and pooled in DMEN enriched with Horse or Foetal Bovine Serum, respectively. 24
hours before the treatment, cells were maintained in serum free media. Cells
were treated with crescent doses of T3 (1ηM - 1μM) during 24 hours. After that
total RNA was extracted from two cell types and AT1 expression analyzed using
semiquantitative RT-PCR. Results: After treatment, cardiomyocytes showed a
significative decrease on expression level of AT1, characterizing a dose-response
relation, which showed the lowest expression level with 1 μM of T3. On the other
hand, the treatment with T3 in cardiac fibroblasts did not significantly change the
expression level of AT1, independent of dose used.
Conclusões: The effect of Thyroid hormone on decreasing AT1 receptors levels on cardiac
myocytes may play an important regulatory role considering that both Angiotensin II and
Thyroid Hormone induced cardiac hypertrophy.
Apoio Financeiro: FAPESP
03.003
EFEITO COLINÉRGIO SOBRE ARRITMIAS INDUZIDAS EM ÁTRIO DIREITO
ISOLADO DE RATOS JOVENS Machado Faria, D. **; Gurjão de Godoy, C. M.; Núcleo
de Pesq. Tecnol., UNIVERSIDADE MOGI DAS CRUZES; Núcleo de Pesquisas
Tecnológicas, UNIVERSIDADE MOGI DAS CRUZES.
Objetivo: A partir do método de indução de arritmia por estimulação elétrica,
desenvolvido para tecido atrial de rato adulto, desenvolver metodologia para
indução de arritmias in vitro específica para tecido atrial de ratos jovens (30 dias)
e testar o efeito colinérgico nessas idades.
Métodos e Resultados: Foram obtidos taquiarritmias atriais na condição
controle em animais de 30 e 100 dias (frequências médias, médiaa±desvio
padrão: 14.7±7 e 21.2±3, respectivamente) As amplitudes de estimulação
mínimas para induzir arritmias foram 3 e 2 vezes o limiar atrial em animais de 30
e 100 dias, respectivamente. Na condição tratado foi adicionado ao banho 1mM
de atropina ou 1mM de carbacol. Na presença de atropina não foi possível induzir
arritmias. Na presença de carbacol a indução de arritmia foi obtida com um
número menor de tentativas (em relação ao controle) nas duas idades estudadas.
Conclusões: Concluímos que a estimulação colinérgica é arritmogênica para átrio
de ratos adultos e jovens.
Apoio Financeiro: FAPESP
03.004
ESTUDO FUNCIONAL DO EFEITO DE PLASMAS DE PACIENTES
CHAGÁSICOS CRÔNICOS DIGESTIVOS EM CORAÇÃO E ÍLEO ISOLADOS.
Rose, J. L. **; Garcia, S.; Díaz Giménez, L. E. **; Hernández, C. C. Q. **; Masuda, M. O.;
Campos de Carvalho, A. C.; Bioquímica Médica - CCS, UFRJ; Cardiologia Celular
Molecular - IBCCF, UFRJ; Eletrofisiologia Cardíaca - IBCCF, UFRJ; IBCCF - BL. G,
UFRJ.
Objetivo: No presente trabalho investigamos se plasmas de pacientes chagásicos
com comprometimento digestivo grave, porém sem alteração cardíaca
significativa, têm efeito sobre a eletrogênese cardíaca e se também são capazes
de induzir ou modular a contração, ou o relaxamento, na musculatura lisa
intestinal de rato, registrando contrações isométricas em segmentos de íleo.
Métodos e Resultados: Obsevamos que não há modificação na eletrogênese
cardíaca quando se perfunde o coração com o plasma de pacientes chagásicos
digestivos, enquanto que, como já havia sido demonstrado (Oliveira et al.,
Circulation 96(6):2031-7, 1997), observam-se alterações significativas na
eletrogênese cardíaca quando o coração é perfundido por soro e/ou plasma de
pacientes chagásicos cardíacos. Com relação a preparação de íleo 61% dos
plasmas dos pacientes chagásicos digestivos foram capazes de acelerar o tempo
de relaxamento da musculatura lisa do íleo isolado de rato em relação ao
relaxamento proporcionado pelo isoproterenol 10-6M (T1/2 em minutos – controle
= 0,703 ± 0,11 (n=27) e experimental = 0,351 ± 0,09* (n=8), *Student –t,
p<0,001), enquanto que 39% dos plasmas prolongaram o tempo de relaxamento
(T1/2 em minutos – controle = 0,703 ± 0,11 (n=27) e experimental = 1,138 ±
0,14* (n=5), *Student –t, p<0,001).
Conclusões: Dada a complexidade farmacológica do sistema gastrointestinal, a
utilização de anticorpos purificados e de preparações isoladas de músculo liso
intestinal deverá permitir, no futuro, uma melhor caracterização dos anticorpos
putativos contra receptores acoplados a proteína G, presentes no sangue de
pacientes chagásicos crônicos com comprometimento digestivo.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX
03.005
RETÍCULO NUCLEOPLASMÁTICO: UMA NOVA ORGANELA PRESENTE EM
CARDIOMIÓCITOS Sampaio, B. V. *; Diniz, R. D. *; Goes, A. M.; Leite, M. F.; Biofísica e
Fisiologia, UFMG; Bioquímica e Imunologia, UFMG.
Objetivo: O cálcio intracelular (Ca2+) é, virtualmente,um segundo mensageiro
em todas as células e tecidos. A ação deste mensageiro tem sido,
extensivamente, caracterizada no citosol, onde regula uma variedade de
processos tais como contração, locomoção, morfogênese, crescimento,
diferenciação e secreção. No núcleo, a sinalização por Ca2+ tem importante efeito
na regulação da expressão gênica. Nosso grupo descobriu uma nova organela que
foi denominada retículo nucleoplasmático. Esta organela está localizado no
núcleo, tem continuidade com o envelope nuclear e com o retículo
endoplasmático, expressa receptores de inositol 1,4,5-trisfosfato (InsP3) e sua
função é o armazenamento de Ca2+. Esta organela foi inicialmente caracterizada
em hepatócitos. O objetivo deste
nucleoplasmático em cardiomiocitos.
foi
investigar
a
presença
do
retículo
Métodos e Resultados: Para estes estudos utilizamos cultura primária de
cardiomiócitos de ratos Wistar machos recém-natos. As células foram plaqueadas
1x105/cm2 e os experimentos foram realizados entre o 3o e 5o dias de cultura.
Para investigarmos a presença de retículo nucleoplasmático em cardiomiócitos
utilizamos técnica de imunofluorescência com anticorpos anti-calreticulina. A
presença de canais de cálcio no retículo nucleoplasmático foi investigada
utilizando anticorpo anti-rianodina e anti-InsP3. Fluo-4/AM foi usado como
marcador de cálcio intracelular. As imagens foram obtidas por microscopia
confocal BioRad. Os nossos resultados mostram que o retículo nucleoplasmático
está presente em cardiomiócitos e que funciona como compartimento de cálcio
intranuclear. Além disto observamos que esta organela possui receptores de
InsP3 e rianodina.
Conclusões: Em conjunto nossos resultados mostram que cardiomiócitos possuem
retículo nucleoplasmático. A presença de tal maquinaria fornece um potencial mecanismo
pelo qual o Ca2+ pode regular funções celulares no núcleo.
Apoio Financeiro: CNPq, NIH - USA
03.006
CHARACTERIZATION
OF
THE
TRANSCRIPTION
PATHWAY
THAT
REGULATES CX40 SPECIFICATION BY MULTIPLE CARDIAC FACTOR
INTERACTIONS. Almeida, N. A. dos S. **; Stennard, F. A.; Elliott, D. A.; Campos de
Carvalho, A. C.; Harvey, R. P.; Costa, M. W.; Cardiologia Celular Molecular - IBCCF,
UFRJ; IBCCF - BL. G, UFRJ; Developmental Biology Unit, Victor Chang Cardiac
Research Institute.
Objetivo: The formation of the specialized conductive system occurs by
differentiation of a subset of cardiac cells within the heart field responding to cues
derived from adjacent developing coronary vessels in early development. One of
the earliest markers of this specification within the developing ventricle is the
expression of Cx40, a gene essential for cardiac conduction and synchronization
in the heart. Here we demonstrate the presence of a network of regulators
involved in the specific expression of Cx40 in the developing heart.
Métodos e Resultados: Recently we demonstrated that Cx40 expression was
under the control of cardiac transcription factors Nkx2.5 and GATA4. As shown by
transient transfection and EMSA, this gene is also a specific target of other
essential cardiac regulators such as SRF, T-box factors and other members of the
GATA cardiac family, GATA5/6. SRF or Tbx20 activates the transcription in a triad
containing Nkx2.5/GATA4. Another cardiac member of the T-box family, Tbx5,
represses this activation on Cx40 promoter, but displays strong activation on
another cardiac gene, ANF, showing a dual role for T-box factors in cardiac
regulation of Cx40. Among the cardiac expressed GATA members, GATA5 displays
the highest activation ability, revealing a complex spatial patterning of the
transcription network within the heart. Interestingly, direct binding to DNA is not
essential for the activation observed, with these factors being tethered to the
promoter region through Nkx2.5.
Conclusões: In this work we were able to dissect some of the networks involved
in the cardiac specific regulation of the Cx40, confirming the central role of
Nkx2.5 and demonstrating that regional differences in expression of these factors
might be essential for this specific pattern of expression.
Apoio Financeiro: PADCT, PRONEX, CNPq, CAPES
03.007
ANALISE DO RECEPTOR DE LEPTINA E GLUT-4 EM MUSCULO CARDIACO
DE RATOS WISTAR MACHOS ADULTOS OBESOS. Hippolyto Latsch Cherem, E. **;
Cruz, H. G. da *; Lopes da Costa, C.; Costa Amorim, T. **; Paraguassú Brandão, P. *; Franco
de Sá, C.; Sanchez moura, A.; Ciências Fisiológicas, UERJ; Fisiologia, UERJ; Nutrição
Aplicada - Instituto de Nutrição, UERJ; Fisiologia, UNESA.
Objetivo: A leptina (L) é produzida e secretada predominantemente pelos adipócitos, está
associada a diminuição da ingestão e aumento gasto energético, embora esses efeitos
estejam comprometidos em obesos. Tem sido também proposto seu efeito inibidor sobre a
ação da insulina no músculo cardíaco, com possível comprometimento da translocação do
transportador de glicose GLUT-4. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da obesidade
sobre a concentração de receptores de leptina (OB-R) e de GLUT-4, no músculo cardíaco, de
ratos machos adultos obesos.
Métodos e Resultados: Ratas Wistar lactantes foram divididas em grupo controle
submetidas à ração normal durante toda a lactação. Para o grupo controle, no dia do
nascimento foram mantidos 6 filhotes machos (MC) por ninhada e para a indução da
obesidade, a partir do 3° dia de lactação foram mantidos somente 2 filhotes machos (MO) por
ninhada. A concentração de OB-R e GLUT-4 foram analisadas pelo método de Western Blot.
Os animais obesos apresentaram um aumento significativo de 20,5% no peso corpóreo (MO:
458,0  30,1 g, p<0,01) em comparação aos controles (MC: 380,1  6,2g). Foi observado um
aumento significativo de 35% no OB-R e diminuição significativa de 25% no GLUT-4 nos
grupos MO em relação aos grupos MC. Foi utilizado n= 6 em cada grupo.
Conclusões: Os resultados demonstram que a obesidade induz em ratos machos adultos
um aumento da concentração de receptores de leptina associado a uma diminuição da
concentração de GLUT-4, no músculo cardíaco. Sugerimos, que no coração desses animais
ocorre modificação da homeostase energética, provavelmente modulada pela interação da
leptina com a insulina.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, UNESA
03.008
ANALISE DO GLUT-4 EM MUSCULO CARDIACO DE RATOS WISTAR
MACHOS ADULTOS OBESOS APOS CLAMPEAMENTO EUGLICEMICO.
Paragassú, P. *; Costa Amorim, T. **; Hippolyto Latsch Cherem, E. **; Lopes da Costa, C.;
Tinoco, S. **; Paragassú, P. *; Franco de Sá, C.; Vasconcelos Dantas, S.; Osso, F. *; Santos
de Carvalho da Rocha, A.; Sanchez moura, A.; Ciências Fisiológicas, UERJ; Fisiologia,
UERJ; Fisiologia - IB, UERJ; Nutrição Aplicada - Instituto de Nutrição, UERJ;
Fisiologia - IB, UFRJ; Fisiologia, UNESA.
Objetivo: A obesidade é uma condição de alteração metabólica que está associada ao
aumento do risco de doenças cardíacas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da
obesidade sobre a concentração de GLUT-4, no músculo cardíaco, assim como níveis
plasmáticos de insulina e glicose de ratos machos adultos.
Métodos e Resultados: Ratas Wistar lactantes foram divididas em grupo controle
submetidas à ração normal durante toda a lactação. Para o grupo controle, no dia do
nascimento foram mantidos 6 filhotes machos (MC) por ninhada e para a indução da
obesidade, a partir do 3° dia de lactação foram mantidos somente 2 filhotes machos (MO) por
ninhada. A glicose e a insulina plasmática foram obtidas após clampeamento-euglicêmico
(solução com 20% de glicose) e analisadas pelo método enzimático (glicose-oxidade) e
radioimunoensaio, respectivamente. A concentração de GLUT-4 foI analisada pelo método
de Western Blot. Os animais obesos apresentaram um aumento significativo de 86.8% no
peso corpóreo (MO: 467 8.9g, p<0.05) em comparação aos controles (FC: 250 4.7g). O
grupo MO apresentou glicemia significativamente menor (99,9 8,79 mg/dl) em relação ao
grupo FC (165 14,76 mg/dl, p<0.01). Não foi observada diferença significativa entre os
grupo em relação a insulina plasmática (MO:125,6 11.69; MC:112,4 17,3 ng/ml). Foi
observada uma diminuição significativa de 20% no GLUT-4 nos grupos MO em relação aos
grupos MC. Foi utilizado n= 5 em cada grupo.
Conclusões: Os resultados demonstram que a obesidade induz em ratos machos adultos
uma diminuição da concentração de GLUT-4, no músculo cardíaco, associada a uma
diminuição da glicemia e níveis normais de insulina plasmática. Sugerimos, portanto, que há
uma diminuição do metabolismo energético no coração de ratos machos adultos obesos
Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, UNESA
03.009
EFEITOS DROMOTRÓPICO E CRONOTRÓPICO NEGATIVOS DO EXTRATO
AQUOSO DA AVERRHOA CARAMBOLA L. (CARAMBOLEIRA) NO CORAÇÃO
DE COBAIA. Vasconcelos, C. M. L. de **; Araújo, M. S. de *; Conde Garcia, E. A.;
Tecnologia Farmacêutica, UFPB; Fisiologia, UFSE.
Objetivo: Chás e infusões das folhas da A.carambola são usados como agente
antihipertensivo e antidiabético. Em coração isolado de cobaia, o extrato aquoso
das folhas (ExA) dessa planta apresentou atividade inotrópica negativa e induziu
bloqueio atrioventricular (BAV) de 1o, 2o ou de 3o grau (FeSBE2001 Res.03.003,
FeSBE2002 Res.11.029). Neste trabalho, foram investigados os efeitos do ExA
sobre: a)a velocidade de condução atrial (VCA), b)a condução atriohissiana
(CAH), c)o tempo de latência (TL) estímulo-átrio e d)o cronotropismo do átrio
direito isolado de cobaia (AD).
Métodos e Resultados: A VCA, CAH e o TL foram determinados em preparações
átrio-ventrículo direito (Tyrode 15mL, 34±0,1oC, 95%O2, 5%CO2). As ondas
elétricas do átrio e do feixe de His foram captadas no endocárdio com dois
eletrodos de superfície separados por uma distância conhecida. O tempo gasto
pelo impulso elétrico para trafegar entre os eletrodos foi determinado com ajuda
de um gate eletrônico delimitador de um trem de pulsos (100kHz). O início e
término do gate coincidiram com a passagem da onda pelos eletrodos
(DIGITIMER D4030, WPI 1830,1831,1832). O ExA (0,4-0,9g/L, n=3, 11 séries)
reduziu em 17±3% (p<0,05) a VCA, prolongou em até 65% (n=5, 10 séries,
p<0,05) o tempo de CAH (BAV total em 82% dos testes) e em 30±7% o TL (n=5,
13 séries, p<0,05). Em AD com batimento espontâneo, o ExA apresentou efeito
cronotrópico negativo dependente de concentração e, em concentrações acima de
1,2g/L, foi capaz de silenciar o marcapasso atrial. Todos os efeitos foram
reversíveis após a remoção do extrato da A. carambola do banho.
Conclusões: O ExA da A.carambola: 1)diminuiu a velocidade de condução atrial;
2)deprimiu o nódulo atrioventricular e 3)apresentou uma potente atividade
bradicárdica, sendo capaz de abolir o marcapasso dominante do átrio direito
isolado de cobaia.
Apoio Financeiro: CNPq, UFSE
03.010
ESTUDO INOTRÓPICO DE EXTRATO DA CITRUS SINENSIS OSB. (LARANJA
PÊRA) EM ÁTRIO DE COBAIA. Oliveira, E. D. **; Santos, S. D. dos *; Silva, B. A. da;
Conde Garcia, E. A.; Fisioterapia, Faculdade Integrada do Recife; Tecnologia
Farmacêutica, UFPB; Fisiologia, UFSE.
Objetivo: Serafim et al. (FeSBE2002, Res. 11.030) mostraram que o extrato
acetônico (ExA) da C.sinensis foi o mais ativo (CE50 =0,35g/L) e que o bloqueio
colinérgico, opióide ou adrenérgico não alterou o efeito contrátil do extrato bruto
(1,4g/L). Este trabalho visou investigar o mecanismo de ação do ExA no
miocárdio de mamífero.
Métodos e Resultados: 1)Os estudos foram feitos em átrio esquerdo de cobaia
(AE) montado em cuba (Tyrode, 27±0.1oC, 95%O2, 5%CO2), estirado (1gf) e
estimulado (400V, 0.5ms); 2)O ExA foi adicionado cumulativamente à cuba; 3)A
força atrial isométrica (HP FTA-10, HP 8805B) foi registrada (HP 7754A, 7754B),
digitalizada (DATAQ DI400) e gravada em computador; 4)O efeito do ExA foi
testado: a)no controle, b)sob bloqueio de canais de K+ (TEA 20 mM) e c)sobre a
curva de força induzida pelo CaCl2 (DORIGO et al., Cardiovasc. Drugs Ther.,
4:1477-1486,1990); 5)Foi determinado o efeito do ExA sobre o intervalo de
tempo estímulo-força (acoplamento eletromecânico, AEM), bem como sobre o
fenômeno de Bowditch; 6)A ação do ExA sobre o esvaziamento de cálcio
citoplasmático foi investigada pela velocidade de redução da força pós-pausa
(Nayler & Merrillees, Calcium and the Heart, Eds.Harris & Opie,1971, Acad.Press,
p.49). Para isso, as forças foram ajustadas pela equação y=[(100-Amin)/ki]+Amin
(CONDE GARCIA, E.A.). O ExA não alterou o AEM atrial (97±1ms para
102±2,5ms, p>0,05, n=4), nem a velocidade de esvaziamento do cálcio
citoplasmático livre. No entanto, a 1g/L, inverteu o fenômeno de Bowditch (+80%
para -40%, n=6, p<0,01). O TEA diminuiu a CE50 do ExA de 0,35g/L para 0,9g/L
(n=5, p<0,001). O ExA não alterou a curva concentração-efeito produzida pelo
CaCl2 (CE50 =2,7±0,7 mM, n=2, p>0,05).
Conclusões: O efeito do ExA da C.sinensis parece ser mediado pela ativação de
canais de K+ da membrana celular.
Apoio Financeiro: CNPq, UFSE
03.011
DEPRESSÃO DA RESPOSTA CRONOTRÓPICA A CATECOLAMINAS EM
ÁTRIOS DIREITOS DE RATOS NEONATOS Souto Oliveira, E.; Franchi, R.; Bassani,
R. A.; Centro de Engenharia Biomédica, UNICAMP.
Objetivo: Parte do estabelecimento da inervação simpática cardíaca ocorre após
o nascimento. Este fator, além do desenvolvimento da via de transdução adrenérgica, poderia modular a resposta cardíaca a mediadores simpáticos
durante o amadurecimento. Este estudo teve por objetivo analisar a reatividade
cronotrópica a catecolaminas em átrios direitos de ratos durante o
desenvolvimento pós-natal.
Métodos e Resultados: Foram obtidas curvas concentração-efeito a
isoproterenol (ISO) e noradrenalina (NA) em átrios isolados de ratos Wistar a
partir de zero dias até 3-6 meses de idade (adultos). A reatividade do tecido aos
agonistas foi avaliada pela resposta cronotrópica máxima (Rmax) e pelo valor pD2
(logaritmo negativo da concentração do agonista que elicia uma resposta igual a
50% da Rmax). Os dados foram comparados por análise de variância e teste de
Newman-Keuls. A Rmax a ISO e NA mostrou-se deprimida em ~45% em átrios de
ratos de 1-2 dias (p< 0,01). A partir de 1 semana de idade, os valores R max não
foram estatisticamente diferentes daqueles em adultos. O valor pD2 do ISO
mostrou-se reduzido (7,83 ± 0,19, n=8, vs. 8,41 ± 0,07, n=11, em adultos, p<
0,01) em ratos de 1 semana (mas não em neonatos), e aumentou
gradativamente até atingir o valor adulto à idade de 3 semanas. Em contraste, o
pD2 da NA foi máximo em neonatos (7,19 ± 0,13, n = 5, vs. 6,68 ± 0,09, n=12
em adultos, p< 0,05), reduzindo-se progressivamente com o desenvolvimento.
Conclusões: a) a redução de Rmax a ambos os agonistas em neonatos e
subsequente subsensibilidade ao ISO sugerem marcante imaturidade do sistema
de transdução -adrenérgica de controle do cronotropismo atrial durante os
primeiros dias de vida pós-natal; b) a redução gradativa da sensibilidade à NA
pode indicar a instalação progressiva da inervação simpática atrial, com
consequente aumento da captação e metabolismo neuronal desta catecolamina.
Apoio Financeiro: FAPESP
03.012
USO DO THAPSIGARGIN COMO FERRAMENTA PARA ESTIMAR A
CONTRIBUIÇÃO DA TROCA SÓDIO-CÁLCIO PARA O RELAXAMENTO
VENTRICULAR Bassani, R. A.; Bassani, J. W. M.; Centro de Engenharia Biomédica,
UNICAMP; Engenharia Biomédica - FEEC, UNICAMP.
Objetivo: No ventrículo de mamíferos, o relaxamento é iniciado pela remoção de
Ca2+ do citosol por três principais transportadores: a ATPase de Ca2+ do retículo
sarcoplasmático (RS-A), a troca Na+-Ca2+ (NCX) e os chamados sistemas lentos
(ATPase de Ca2+ do sarcolema e uniporter de Ca2+ mitocondrial). Para estimar-se
a contribuição relativa de cada sistema, é preciso inibir seletivamente a
acumulação de Ca2+ pelo RS, o que é comumente feito pela aplicação de cafeína.
Porém, há indicações de que este procedimento possa causar despolarização de
membrana, o que poderia levar a subestimativa da participação da NCX no
relaxamento. Neste estudo, calculamos os fluxos integrados de Ca2+ mediados
por RS-A, NCX e sistemas lentos durante o relaxamento de miócitos cardíacos, e
comparamos os resultados obtidos com o uso de transientes de Ca 2+ evocados
por cafeína (Cf-NT) e aqueles evocados por estimulação elétrica após inibição da
RS-A com thapsigargin (TG-TW), no mesmo conjunto de células.
Métodos e Resultados: A concentração intracelular de Ca2+ foi medida indo-1
em 20 miócitos ventriculares de ratos adultos. Os protocolos experimentais e
análises foram os mesmos descritos por Bassani et al., 1994 (J Physiol., 476:
279-293). O fluxo integrado de Ca2+ carreado por NCX foi significativamente
maior com TG-TW do que com Cf-NT (12 ± 2 vs. 7 ± 1 mM, p< 0,05), enquanto
o fluxo dependente do RS foi menor com TG-TW (77 ± 6 vs. 81 ± 7 mM, p<
0,05). As participações relativas da NCX (12,5% vs. 8% com TG-TW e Cf-NT,
respectivamente) e RS-A (85% vs. 89,5% com TG-TW e Cf-NT, respectivamente)
no fluxo total de Ca2+ durante o relaxamento também foram significativamente
diferentes (p< 0,05).
Conclusões: Propomos que o TG-TW seja uma alternativa experimental mais
confiável para estimativa da contribuição da NCX no relaxamento, neste tipo de
análise.
Apoio Financeiro: FAPESP
03.013
RETINOIC ACID METABOLIC AND SIGNALING PATHWAYS AS TARGETS
FOR DETECTION OF GENETIC VARIATION IN CONGENITAL HEART
DISEASE: A SCREEN FOR CHANGES IN THE RALDH2 GENE Ruiz, V. *; Pereira,
A. da C. *; Mesquita, S.; Silva, F. A. **; Lopes, A. A. B.; Krieger, J. E.; Xavier-Neto, J.; 2Unidade Clínica de Cardiologia Pediátrica e Cardiopatias Congênitas, INCor;
Genética e Cardio. Molecular, INCor; Genética e Cardio. Molecular, InCor HCFMUSP; Clínica Médica - FMUSP, USP.
Objetivo: To investigate the role of genes in the retinoic acid (RA) pathway in
human congenital heart disease.
Métodos e Resultados: We developed a DHPLC screen for genetic variants in RA
metabolic and signaling pathways. Using the gene of the major retinaldehyde
dehydrogenase RALDH2 as a prototype we screened 82 patients with Tetralogy of
Fallot (TF), Ebstein’s anomaly (EA), atrial and ventricular septal defects,
transposition of great vessels and dextrocardia for alterations in coding as well as
in regulatory sequences. All coding exons were screened as well as 3 blocks of the
promoter containing putative binding sites for cardiac transcription factors
conserved between humans and mice. We detected 7 RALDH2 gene variants (1
exonic and 6 intronic). No variants were found in the promoter. One patient with
TF displayed a synonymous change in exon 4 of the transition type (A496G).
Further analysis of A496G indicated that it was not represented in 100
chromosomes of healthy individuals. RNA folding analysis indicated that the
A496G variant produced substantial changes in mRNA structure suggesting a
possible role of this variant in mRNA stability. In a patient with EA we detected a
G to C change occurring in intron 3, 25 bp from the splice acceptor site. All other
variants were deep intronic: intron 2 (C to T in 3 patients), intron 3 (G to A in 5
patients), intron 5 (G to T in 12 patients), intron 6 (insertion of A in one patient),
intron 8 (G to A in 37 patients).
Conclusões: The RALDH2 screen identified 2 rare variants with yet undefined potentials for
changes in gene expression, as well as 5 more frequent intronic changes that have little
potencial for gene expression, but can be useful as markers for linkage disequilibrium and
association studies.
Apoio Financeiro: FAPESP
03.014
ESTUDO INOTRÓPICO E CRONOTRÓPICO DO EXTRATO METANÓLICO DA
PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) SPRENG NO CORAÇÃO DE COBAIA.
Oliveira, V. R. de; Conde Garcia, E. A.; Fisiologia, UFSE.
Objetivo: Na medicina popular, as folhas da P.amboinicus (hortelã-graúda) são
usadas como antiinflamatório, cicatrizante e anticonvulsivante. O extrato bruto
(EB) das folhas dessa planta deprime a contratilidade do átrio esquerdo (AE) de
cobaia, sem que haja o envolvimento dos receptores opióides, colinérgicos e
adrenérgicos da membrana celular (Oliveira et al., FeSBE2001, Res. 03.006 e
FeSBE2002, Res. 11.031). Neste trabalho, foram estudados os efeitos inotrópicos
e cronotrópicos de extratos obtidos das folhas dessa planta sobre o átrio de
cobaia.
Métodos e Resultados: As folhas foram eluídas (Soxhlet) com hexano,
clorofórmio, acetona, etanol, metanol, água e ácido acético. Os extratos foram
testadas em átrio esquerdo (AE) de cobaia mantido numa cuba (4mL, 27oC,
Tyrode, 95% O2 e 5% CO2) onde foi pré-estirado (1gf) e estimulado (75bpm,
400V, 0.5ms). O estudo cronotrópico foi feito em átrio direito (AD) com
batimentos espontâneos. A força de contração isométrica foi registrada (HP
FTA10-1, HP8805B, HP7754B), digitalizada (DATAQ DI400) e gravada em
computador. Os extratos aquoso e acético não induziram qualquer variação no
período interbatimentos. O extrato metanólico (ExMe) a 1,2 g/L reduziu em 65%
a força de contração em relação ao controle (n=5, p<0,001) e apresentou uma
CE50 de 0,6 g/L (Hill-Langmuir). Além disso, produziu uma alteração da
excitablidade atrial caracterizada por uma maior dispersão dos períodos interpicos
(800±3ms para 1109±395ms, n=2 corações, 4 séries, 200 contrações, p<0,05).
O ExMe apresentou efeito cronotrópico negativo, reduzindo a freqüência
espontânea do AD de 97±3 bpm para 59±5 bpm (64%, n=5, p<0,05).
Conclusões: No miocárdio atrial, o ExMe da P.amboinicus: 1) deprimiu a
contratilidade; 2) reduziu a excitabilidade tissular 3) apresentou uma CE50 de 0,6
g/L e 4) reduziu a freqüência cardíaca espontânea, deprimindo o marcapasso
atrial.
Apoio Financeiro: CNPq, UFSE
03.015
EFEITOS AGUDOS DO CHIMARRÃO (ILEX PARAGUARIENSIS) EM
CORAÇÕES ISOLADOS DE RATOS. Chaves, E. A. **; Nigri Jr, M. *; Tavares, K. C. da S.
**; Masuda, M. O.; Nascimento, J. H. M.; Eletrofisiologia Cardíaca - IBCCF, UFRJ;
IBCCF, UFRJ; IBCCF - BL. G, UFRJ.
Objetivo: O chá de erva mate (conhecido como chimarrão ou Ilex paraguariensis) é uma das
bebidas mais consumidas na América Latina. Vários trabalhos têm demonstrado que seu extrato possui
efeitos antioxidantes em preparações in vitro e in vivo (Bioch. Biophy.Research Communications 224,
338–344,1996). Tendo em vista que substâncias com poder antioxidante poderiam amenizar as injúrias
isquêmicas e que pouco se sabe sobre os possíveis efeitos cardíacos do mate, buscamos investigar o
efeito do extrato aquoso do mate na eletrogênese e função cardíaca e na área de infarto induzida por
isquemia e reperfusão.
Métodos e Resultados: Corações isolados de ratos Wistar machos foram perfundidos em um
sistema de Langendorff modificado. Foram registrados o eletrocardiograma e a pressão do ventrículo
esquerdo (VE). Para verificar os efeitos cardíacos agudos do mate, perfundiu-se 1% de mate durante 10
minutos, seguido de 30 minutos de lavagem. Em 6 corações testados, o mate promoveu um aumento de
12,55±9.6% na freqüência cardíaca e de 27±10% na pressão desenvolvida pelo VE. Visando elucidar se
a ação antioxidante do mate poderia proteger o miocárdio das lesões geradas por isquemia e reperfusão,
os corações foram perfundidos com 1% de mate durante 10 minutos, seguido de isquemia global por 30
minutos e posterior reperfusão por 60 minutos. Ao término do experimento, os corações foram fatiados,
corados com trifeniltetrazólio e as imagens das fatias obtidas com um scanner, para determinação
planimétrica da área de infarto. Foi encontrada uma redução da área de infarto nos corações tratados
com mate (24,5 ± 3,2%, n = 6), quando comparado aos não tratados (45,1 ± 2,6%, n = 8).
Conclusões: Nossos dados preliminares mostram que o mate induz efeitos
cronotrópico e inotrópico positivos. Além disso possui ação cardioprotetora,
reduzindo a área de infarto induzida por isquemia e reperfusão.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ
03.016
ATIVAÇÃO DE RECEPTORES BETA1-ADRENÉRGICOS CARDÍACOS PELO
SORO DE PACIENTES COM MIOCARDITES Nunes, N. *; Brandão, F. de A. *; dos
Santos Costa, P. C. **; Pordeus, V. *; Tinoco Mesquita, E.; Campos de Carvalho, A. C.;
Masuda, M. O.; Nascimento, J. H. M.; Faculdade de Medicina, UFF; Faculdade
Medicina, UFF; Biofísica, UFRJ; Biofísica do Centro de Ciência da Saúde, UFRJ;
Eletrofisiologia Cardíaca - IBCCF, UFRJ; IBCCF, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos
Chagas Filho, UFRJ.
Objetivo: As miocardites representam um grupo heterogêneo de etiologias –
causas tóxicas, infecciosas e auto-imunes, e recentemente tem sido associadas à
presença de auto-anticorpos. Estes auto-anticorpos, são capazes de interagir com
receptores acoplados a proteína-G no tecido cardíaco e desta forma interferir com
a função celular. Este trabalho teve como objetivo identificar a presença de
anticorpos com ação b-adrenérgica no soro de pacientes com miocardites.
Métodos e Resultados: Soros de pacientes com cardiomiopatia dilatada,
selecionados com critérios clínicos de miocardite pela equipe da Clínica de
Insuficiência Cardíaca do HUAP/UFF, foram testados em preparação de coração
isolado de coelho, perfundido pelo método de Langendorff. O protocolo
experimental consistiu de três períodos de 20-30min de perfusão (controle, soro e
lavagem, respectivamente), com solução Tyrode acrescida de 10 -6 M de atropina
para bloqueio de possível ativação do receptor muscarínico. No segundo período,
o soro diluído a 1:100 (vol:vol) foi adicionado à solução de perfusão. Através do
registro do ECG, identificamos que dois soros aumentaram a freqüência cardíaca
(FC) em média 19% (n=3), com observação de fibrilação ventricular durante a
perfusão de soro ou no período de lavagem. Os outros dois soros testados não
induziram alterações na FC. Para confirmar a ativação do receptor 1adrenérgico, retestamos os soros que induziram aumento de FC na presença do
antagonista atenolol (10-6M). Estes efeitos foram totalmente bloqueados por
atenolol (p=0,01).
Conclusões: Substâncias presentes no soro de alguns pacientes com miocardites
são capazes de ativar receptores 1-adrenérgicos em coração isolado de coelho.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ
03.017
CARACTERIZAÇÃO DE SOROS POLICLONAIS CONTRA RECEPTORES
CARDÍACOS ACOPLADOS A PROTEÍNA-G. Diaz Paredes, B. **; dos Santos Costa, P.
C. **; Nasser, H. *; Campos de Carvalho, A. C.; Coeli dos Santos Goldenberg, R.; Biofísica,
UFRJ; Biofísica do Centro de Ciência da Saúde, UFRJ; IBCCF, UFRJ; Instituto
Biofísica Carlos Chagas Filho - BL. C, UFRJ.
Objetivo: A presença de auto-anticorpos contra receptores cardíacos acoplados à
proteína G (GPCR) no soro de pacientes chagásicos crônicos pode estar associada
às alterações morfológicas e elétricas cardíacas. Neste trabalho produzimos
anticorpos policlonais em coelhos contra a segunda alça extracelular de GPCR
humanos
(β1-,
β2-adrenérgicos
e
muscarínico
m2).
Adicionalmente
caracterizamos a interação dos anticorpos produzidos com os receptores
cardíacos em diferentes preparações.
Métodos e Resultados: Os animais foram imunizados por um período de três
meses. Os ensaios de imunoadsorção (ELISA) demonstraram que os soros dos
coelhos imunizados são capazes de reconhecer os peptídeos utilizados com títulos
entre 1:2000 e 1:8000, com exceção do soro anti-M2 (1:50). Os resultados nos
ensaios de western blotting e imunohistoquímica demonstraram imunoreatividade
para os receptores estudados. A perfusão do soro dos coelhos imunizados em
coração isolado de coelhos normais, pelo método de Langendorff, demonstrou
que o soro anti-β1 causa efeito cronotrópico positivo (12,5%), o soro anti-m2
causa tênue efeito cronotrópico negativo (6%) e soro anti- β2 não causa efeito
(3%).
Conclusões: Conseguimos obter, com esta metodologia, anticorpos capazes de
reconhecer os receptores cardíacos tanto na sua forma desnaturada (ensaio de
ELISA e western blotting) quanto em sua conformação natural (Langendorff e/ou
imunohistoquímica). Estes anticorpos serão utilizados em estudos futuros como
ferramenta para o melhor entendimento das alterações cardíacas induzidas por
autoanticorpos.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ
03.018
REGULAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO INTRACELULAR DE CA2+ PELA S(-)
ROPICACAÍNA EM CÉLULAS VENTRICULARES DE RATOS QUIMICAMENTE
PERMEABILIZADAS. Chedid, N. G.; Zapata-Sudo, G.; Sudo, R. T.; Trachez, M. M.;
Faculdade, UFF; Farmacologia, UFRJ; Farmacologia Básica e Clínica - BL K, UFRJ;
Farmacologia Básica e Clínica ICB BLJ, UFRJ.
Objetivo: Vários estudos demonstraram que anestésicos locais interferem com a
função do retículo sarcoplasmático (RS) de músculos cardíaco e esquelético (J.
Memb. Biol. 133, 171-181, 1993). Este trabalho investigou os efeitos da S(-)
ropivacaína (S(-)ropi) na regulação da concentração intracelular de Ca2+ e na
sensibilidade das miofibrilas a este íon em feixes de células ventriculares
permeabilizadas de ratos.
Métodos e Resultados: Feixes de ventrículo de rato (2 mm de comprimento e
200-250 µm de diâmetro) foram preparados para registro de tensão isométrica e
submetidos a permeabilização do sarcolema com saponina (0,5 % v/v).
Protocolos específicos para investigar o efeitos da S(-)ropi na liberação de Ca2+
pelo RS via receptor da rianodina (RyR 2) e na captação deste íon pela Ca-ATPase
do RS foram montados. Em fibras ventriculares cujo RS foi destruído pelo Triton
X-100 foi também estudado o efeito da S(-)ropi na sensibilidade das miofibrilas
ao Ca2+. O Po, contratura máxima do feixe induzida pelo Ca2+, foi determinado
para cada experimento antes do início do protocolo. Em feixes cujo RS foi
carregado de Ca2+ (pCa 6,8, 3 min), a S(-)ropi provocou contraturas de forma
dose-dependente (15,5±3,4% Po, 0,5 mM; 32,9±2,9% Po, 5 mM; e 72,3±5,6%
Po, 20 mM). O efeito da S(-)ropi foi abolido na presença de procaína (40 mM),
um inibidor da liberação de Ca2+ via RyR2 (J. Gen. Physiol. 101: 207-233, 1993).
A captação de Ca2+ pelo RS não foi modificada pela S(-)ropi. Em feixes
desprovidos de RS, a curva tensão versus pCa foi deslocada para a esquerda na
presença de 5 mM de S(-)ropi indicando que a sensibilidade das proteínas
contráteis ao Ca2+ foi aumentada na presença desta substância. Assim, o pCa50
de controle (5,93±0,03) foi significativamente maior (P<0,05) na presença da S()ropi (6,17±0,03).
Conclusões: S(-)ropi provoca liberação de Ca2+ do RS de células ventriculares de
ratos, efeito este bloqueado na presença de procaína. Além disto, a sensibilidade
das proteínas contráteis ao Ca2+ é aumentada na presença de S(-)ropi (5 mM).
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, FUJB
03.019
AUMENTO DA OSMOLALIDADE COM CLORETO DE SÓDIO AUMENTA A
MOBILIZAÇÃO DE CÁLCIO EM MIÓCITOS VENTRICULARES Ricardo, R. de A. *;
Bassani, R. A.; Bassani, J. W. M.; CEB, UNICAMP; Centro de Engenharia Biomédica,
UNICAMP; Engenharia Biomédica - FEEC, UNICAMP.
Objetivo: Soluções hiperosmóticas de NaCl têm se mostrado efetivas como
tratamento único para a condição de choque hemorrágico. Neste trabalho,
procuramos distinguir os efeitos osmótico e do aumento da concentração
extracelular de NaCl sobre a atividade contrátil e concentração citosólica de Ca 2+
([Ca2+]i) em miócitos cardíacos.
Métodos e Resultados: O encurtamento celular e [Ca2+]i (medida com indo-1)
foram registrados em miócitos ventriculares de ratos adultos estimulados a 0,5
Hz, antes e depois do incremento da osmolalidade em 100 mOsm/l pela adição de
sacarose ou NaCl à solução de perfusão. Variações do conteúdo de Ca 2+ do
retículo sarcoplasmático (RS) foram investigadas pela aplicação de 10 mM
cafeína. Ambos os solutos reduziram a amplitude (em 60 e 30% para sacarose e
NaCl, respectivamente, p< 0,05) e prolongaram o relaxamento das contrações
(em mais de 2 vezes, p< 0,01). Porém, enquanto sacarose não afetou os
transientes de Ca2+, NaCl aumentou em cerca de 50% o valor de [Ca2+]i diastólica
(p< 0,05), bem como a amplitude dos transientes de Ca2+ durante twitches e em
resposta a cafeína (p< 0,05).
Conclusões: a) A hiperosmolalidade per se tem um efeito depressor seletivo
sobre a atividade mecânica celular, sem afetar [Ca2+]i; b) quando o soluto é NaCl,
no entanto, ocorre aumento da mobilização de Ca2+ e do conteúdo de Ca2+ do RS,
o que atenua a depressão contrátil devida ao efeito osmótico; c) o efeito do NaCl
poderia ser atribuído a um marcante acúmulo intracelular de Na+ na presença de
alta [Na+]o. Aumento da [Na+]i inibiria a extrusão de Ca2+ pela troca Na+-Ca2+,
levando à elevação da carga celular de Ca2+.
Apoio Financeiro: FAPESP
03.020
AVALIAÇÃO
BIOQUÍMICA
E
FUNCIONAL
DE
CORAÇÕES
DE
*
*
*
CAMUNDONGOS BALB C. Lachtermacher, S. ; yamada, r. ; Gracindo Roubach, R. ; C.
Mattos, E.; Coeli dos Santos Goldenberg, R.; Campos de Carvalho, A. C.; -, 0; Biofísica,
UFRJ; Biofísica do Centro de Ciência da Saúde, UFRJ; Instituto Biofísica Carlos
Chagas Filho - BL. C, UFRJ.
Objetivo: Objetivo: No infarto agudo do miocárdio (IAM), há uma liberação do conteúdo celular
para a corrente sangüínea, incluindo enzimas específicas deste tecido como a troponina I (cTn) e
creatina quinase (CK-MB). Esse extravasamento ativa uma reação inflamatória, detectada
laboratorialmente pela alteração da série branca no hemograma (CBC) e proteína C reativa (PCR), um
marcador inflamatório de fase aguda sintetizado pelo fígado. Como conseqüência da perda do tecido
miocárdio, a função ventricular esquerda é afetada, podendo assim evoluir para a insuficiência cardíaca
(IC), que por sua vezes, pode ser evidenciada precocemente pelo aumento dos níveis do peptídio
natriurético cerebral (BNP). Os estudos sobre IC de origem isquêmica em modelos experimentais
utilizam análises eletro-mecânicas funcionais mediante avaliação eletrocardiográfica (ECG),
ecocardiográfica (ECO) e histológica post mortem (HPM). A possibilidade de ampliar os parâmetros
indicativos do grau de IC nos modelos animais através dos testes bioquímicos descritos acima nos
levou a avaliar um grupo controle de camundongos Balb C de ambos os sexos, estabelecendo os
valores basais de parâmetros necróticos, inflamatórios e funcionais. Posteriormente determinaremos
estes mesmos parâmetros em camundongos submetidos a IAM.
Métodos e Resultados: Métodos: Camundongos tipo Balb C, machos (5) e fêmeas (5), de dois
meses de idade, pesando aproximadamente 25 a 30g foram anestesiados e submetidos à análise sérica
de marcadores necróticos (cTn e CK), inflamatórios (CBC e PCR) e funcionais (BPN, ECG, ECO) e
HPM. As análises bioquímicas foram realizadas utilizando-se kits de imuno-ensaio usados em
diagnóstico de humanos. Resultados: Os camundongos apresentaram níveis séricos de marcadores de
necrose miocárdica de 0.179 ± 0.037 ng/mL para cTn e 4.46 ± 1.31 ng/mL para CK, compatíveis com
os níveis encontrados em humanos normais. O hemograma evidenciou uma leucocitose de 14.3 ± 1.3
X 103/mm3 com predomínio de linfócitos (»82%) e não de neutrófilos como observado em humanos.
Apesar disso, os resultados de PCR não apresentaram diferenças significativas (1.2 ± 0.1 mg/dL)
quando comparados com humanos saudáveis. A série vermelha do sangue mostrou os mesmos níveis
de hemoglobina que os humanos (14.3 ± 0.5 g/dL), mas isso ocorre as custas de um número
aumentado de hemácias (9.11 ± 0.20 X 106/mm3) que compensam o menor volume corpuscular médio
(47 ± 1 mm3). O marcador de insuficiência cardíaca (BNP) também apresentou níveis similares aos
observados em humanos (< 5 pg/mL). Classicamente, o vetor de despolarização ventricular (ÂQRS) foi
de 40.90° ± 3.3 e a fração de ejeção de 92% ± 2, compatível com outros estudos em camundongos.
Em todas as análises não houve diferença significativa entre os sexos.
Conclusões: Conclusão: Os dados acima descritos confirmam a possibilidade da mensuração
bioquímica de parâmetros necróticos, inflamatórios e de insuficiência cardíaca (BNP) no modelo de
IAM, e estabelecem um valor padrão para estes parâmetros em camundongos saudáveis.
Apoio Financeiro: CNPq, CNPq
03.021
AVALIAÇÃO BIOQUÍMICA E FUNCIONAL DE CAMUNDONGOS BALB C
Lachtermacher, S. *; yamada, r. *; Gracindo Roubach, R. *; mattos, e.; dohmann, h. f. *; Coeli
dos Santos Goldenberg, R.; Campos de Carvalho, A. C.; Biofísica, UFRJ; Cardiologia
Celular Molecular - IBCCF, UFRJ; Instituto Biofísica Carlos Chagas Filho - BL. C,
UFRJ.
Objetivo: Objetivo: No infarto agudo do miocárdio (IAM), há uma liberação do conteúdo celular
para a corrente sangüínea, incluindo enzimas específicas deste tecido como a troponina I (cTn) e
creatina quinase (CK-MB). Esse extravasamento ativa uma reação inflamatória, detectada
laboratorialmente pela alteração da série branca no hemograma (CBC) e proteína C reativa (PCR), um
marcador inflamatório de fase aguda sintetizado pelo fígado. Como conseqüência da perda do tecido
miocárdio, a função ventricular esquerda é afetada, podendo assim evoluir para a insuficiência cardíaca
(IC), que por sua vezes, pode ser evidenciada precocemente pelo aumento dos níveis do peptídio
natriurético cerebral (BNP). Os estudos sobre IC de origem isquêmica em modelos experimentais
utilizam análises eletro-mecânicas funcionais mediante avaliação eletrocardiográfica (ECG),
ecocardiográfica (ECO) e histológica post mortem (HPM). A possibilidade de ampliar os parâmetros
indicativos do grau de IC nos modelos animais através dos testes bioquímicos descritos acima nos
levou a avaliar um grupo controle de camundongos Balb C de ambos os sexos, estabelecendo os
valores basais de parâmetros necróticos, inflamatórios e funcionais. Posteriormente determinaremos
estes mesmos parâmetros em camundongos submetidos a IAM.
Métodos e Resultados: Métodos: Camundongos tipo Balb C, machos (5) e
fêmeas (5), de dois meses de idade, pesando aproximadamente 25 a 30g foram
anestesiados e submetidos à análise sérica de marcadores necróticos (cTn e CK),
inflamatórios (CBC e PCR) e funcionais (BPN, ECG, ECO) e HPM. As análises
bioquímicas foram realizadas utilizando-se kits de imuno-ensaio usados em
diagnóstico de humanos. Resultados: Os camundongos apresentaram níveis
séricos de marcadores de necrose miocárdica de 0.179 ± 0.037 ng/mL para cTn e
4.46 ± 1.31 ng/mL para CK, compatíveis com os níveis encontrados em humanos
normais. O hemograma evidenciou uma leucocitose de 14.3 ± 1.3 X 103/mm3
com predomínio de linfócitos (»82%) e não de neutrófilos como observado em
humanos. Apesar disso, os resultados de PCR não apresentaram diferenças
significativas (1.2 ± 0.1 mg/dL) quando comparados com humanos saudáveis. A
série vermelha do sangue mostrou os mesmos níveis de hemoglobina que os
humanos (14.3 ± 0.5 g/dL), mas isso ocorre as custas de um número aumentado
de hemácias (9.11 ± 0.20 X 106/mm3) que compensam o menor volume
corpuscular médio (47 ± 1 mm3). O marcador de insuficiência cardíaca (BNP)
também apresentou níveis similares aos observados em humanos (< 5 pg/mL).
Classicamente, o vetor de despolarização ventricular (ÂQRS) foi de 40.90° ± 3.3
e a fração de ejeção de 92% ± 2, compatível com outros estudos em
camundongos. Em todas as análises não houve diferença significativa entre os
sexos.
Conclusões: Conclusão: Os dados acima descritos confirmam a possibilidade da
mensuração bioquímica de parâmetros necróticos, inflamatórios e de insuficiência
cardíaca (BNP) no modelo de IAM, e estabelecem um valor padrão para estes
parâmetros em camundongos saudáveis.
Apoio Financeiro: CNPq
03.022
INFARTO EXPERIMENTAL DO MIOCÁRDIO EM RATOS: ASPECTOS
ELETROCARDIOGRÁFICOS, MORFOLÓGICOS E ECOCARDIOGRÁFICOS
Wermeck de Castro S, J. P. **; Costa e Sousa, R. H. da **; Lopes Olivares, E. **; Pinho
Ribeiro, V. **; Gracindo da Silva, M.; mattos, e.; Miranda, A. **; Mill, J. G.; Coeli dos Santos
Goldenberg, R.; Masuda, M. O.; Campos de Carvalho, A. C.; Ciências Fisiológicas Centro Biomédico, UFES; Biofísica, UFRJ; Biofísica e Fisiologia, UFRJ; Cardiologia
Celular Molecular - IBCCF, UFRJ; Eletrofisiologia Cardíaca - IBCCF, UFRJ; Instituto
Biofísica Carlos Chagas Filho - BL. C, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos Chagas
Filho, UFRJ.
Objetivo: Investigar e correlacionar alterações eletrocardiográficas (ECG),
ecocardiográficas (ECO) e morfológicas induzidas pelo infarto experimental do
miocárdio (IM).
Métodos e Resultados: Foram infartadas (IN) 17 ratas Wistar, pesando 200g,
através da ligadura da artéria coronária esquerda descendente anterior (LDA). Os
animais foram anestesiados (quetamina 50mg/kg e xilazina 5mg/kg, i.p.),
submetidos ao ECO e ao ECG 1, 7 e 28 dias após a cirurgia. Um grupo de animais
foi sacrificado nestes períodos e seus ventrículos fatiados em 4 segmentos
transversais para a quantificação da área de infarto (SI). Como grupo controle
foram utilizadas fêmeas falso operadas (FO), que foram submetidas à mesma
cirurgia, exceto pela LDA. Todos os animais submetidos à LDA que apresentavam
reduzida fração de ejeção (FE) pelo método Simpson e aumento no diâmetro
diastólico final do ventrículo esquerdo (DDF) no ECO, também apresentavam, no
ECG, onda Q na derivação frontal D1. No 1o dia após a cirurgia, os IN (n=17)
apresentavam a FE inferior a dos FO (n=12) (43,8±2,4% vs 78,0±1,1%;
P<0,01), desvio do ângulo do vetor médio de despolarização ventricular (ÂQRS)
para direita (147,6±5,2° vs 63,7±4,6°; P<0,01) e aumento do DDF (6,7±0,1 vs
5,5±0,2mm; P<0,01). Após 7dias a FE permanecia menor no grupo IN (n=10)
(43,6±2,2% vs 80,0±1,8%; P<0,01), o ÂQRS desviado (116,5±6,5° vs. 71,7°;
P<0,01) e o DDF aumentado (7,8±0,1mm vs 6,3±0,2; P<0,01), quando
comparados aos FO (n=9). No estudo morfológico do 7odia (n=5) a SI foi
27,0±8,1%, havendo correlação com amplitude de onda Q em D1 (r=0,77), DDF
(r=0,95) e FE (r=-0,74). No 28odia, o ÂQRS, a FE, o DDF e a área do átrio
esquerdo (AE) dos IN (n=5) eram 116,7±12,6°, 40,6±2,7%, 8,2±0,1mm e
0,32±0,04cm2, diferindo dos FO (n=7) que apresentavam 65,9±4,5°,
84,7±1,6%, 5,7±0,2mm e 0,16±0,02cm2 (P<0,01).
Conclusões: A presença de onda Q em D1 é um parâmetro útil para o
diagnóstico do IM em ratos e sua amplitude pode servir como indicativo do grau
de lesão. Com 1 dia de IM já há desvio do ÂQRS para direita e aumento do DDF,
permanecendo alterados até o 28o dia, quando se observou aumento do AE.
Apoio Financeiro: Inst. Milênio Bioeng. Tecidual, CNPq, CAPES, FAPERJ
03.023
VARIABILIDADE
DA
FREQUÊNCIA
CARDÍACA
DE
PACIENTES
CORONARIOPATAS REVASCULARIZADOS SUBMETIDOS À REABILITAÇÃO
CARDIOVASCULAR. Marães, V. R. F. da S. **; Pimenta, A. C. *; Papa, V. **; Fisioterapia,
Fac Integradas da Assoc. Educ. Evangélica; Fisioterapia, UFSCar.
Objetivo: A reabilitação cardiovascular por meio de exercícios físicos é muito
utilizada nas unidades de terapia intensiva e no hospital geral, porém são
necessários estudos conduzidos no sentido de verificar os possíveis riscos e
benefícios desta conduta. O presente trabalho teve como objetivo utilizar a
resposta da freqüência cardíaca (FC) e sua variabilidade (VFC) como ferramenta
para avaliar o controle autonômico do coração de pacientes coronariopatas no pré
e pós-operatório de revascularização miocárdica submetidos à reabilitação
cardiovascular (fase I).
Métodos e Resultados: Cinco pacientes coronariopatas do sexo masculino com
idade entre 47 e 60 anos admitidos na Unidade Coronariana do Hospital do
Coração São Francisco, foram esclarecidos e orientados sobre os procedimentos a
serem utilizados nesta investigação; explicitando-se o caráter não invasivo da
mesma e após concordaram, assinaram o termo de consentimento formal de
participação em pesquisa de acordo com as normas do Conselho Nacional de
Saúde (Parecer n° 03/2000). Os pacientes foram submetidos à avaliação clinica,
eletrocardiografia, ecocardiografia, cinecoronariografia e ao procedimento
experimental que constou da coleta da FC batimento a batimento e dos intervalos
RR (iRR) em milisegundos (ms) por meio de um cardiofrequêncimentro, na
condição de repouso supino durante 15 min após uma hora da finalização dos
exercícios físicos graduais (protocolo de reabilitação cardiovascular), no pré (um
dia) e no pós-operatório (quatro dias). Para análise utilizou-se os valores
absolutos dos iRR e o índice de VFC (RMSSD) e para análise estatística utilizou-se
os testes de Friedman e Dunn com nível de significância de 5%. Os valores
absolutos dos iRR e dos índices de RMSSD dos iRR em ms nas diferentes etapas
do procedimento experimental não apresentaram diferenças estatisticamente
significantes (p>0,05).
Conclusões: Os resultados sugerem que os exercícios físicos utilizados na
reabilitação cardiovascular (fase I) dos pacientes estudados não promoveram
alterações na resposta da FC e sua variabilidade, ou seja, na modulação
autonômica do coração, não aumentando os riscos cardiovasculares.
Apoio Financeiro: CAPES
03.024
VENTRICULAR FUNCTION IN M2 MUSCARINIC AND BETA1-ADRENERGIC
RECEPTOR PLASMID DNA IMMUNIZED MICE. Díaz Giménez, L. E. **; Quintero
Hernandez, C. C. **; F. Rodrigues, D. d. R. *; Beltrão, F. C. *; Perez Campelo, R. **; Mattos, E.;
Silva, C. L.; Kurtenbach, E.; Bioquímica Médica - CCS, UFRJ; Instituto de Biofísica
Carlos Chagas Filho, UFRJ; Imunologia - FMRP, USP.
Objetivo: Autoantibodies to M2 muscarinic (M2AChR) and β1 adrenergic
receptors (β1AR) were found in sera of patients with chronic chagasic disease and
dilated cardiomyopathy. It was previously shown that antibodies from these
individuals exerted agonist-like effects and were associated with progressive
heart failure and cardiac dilatation. To demonstrate these effects, groups of mice
were immunized with the pcDNA3-hM2 (n=12) and pBC12IB-hβ1AR (n=18)
plasmids coding for the M2AChR and β1AR respectively and M mode
echocardiographic images were obtained throughout the study and analyzed.
Métodos e Resultados: ELISA assays showed that experimental groups
presented higher IgG titters against second extracellular loop peptides from both
receptors or against the M2AChR third intracellular loop (muscarinic group) when
compared with the control group (n=19). End diastolic and systolic left ventricular
(LV) dimensions were increased at wks 21 and 37 for the 1AR group with no
significant alterations observed in the M2AChR group. Changes for the LV
mass/body weight ratio were also observed in the 1AR group, with values
ranging from 3.7 ± 0.2 for experimental animals as compared to 2.8 ± 0.3 for the
control group at wk 21 with a sharp reversal of this tendency at wk 42 with
values of 1.95 ± 0.2 vs. 3.5 ± 0.3. A significant increase of left atrium/aorta
dimension ratios (1.34 ± 0.09 for the M2AChR group; 1.46 ± 0.098 for the 1AR
group vs. 1.02 ± 0.04, 30 wks after the immunization onset), a decrease in LV
ejection fraction (78,1 ± 2,7 and 74.0 ± 3.66 vs. 85.8 ± 1.3, at wk 42 for the
M2AChR, 1AR and control groups respectively) and LV fractional shortening
(40,5 ± 2,6 and 36.99 ± 3.26 vs. 48.2 ± 1.9 at wk 42 for the same groups) were
also observed.
Conclusões: Our results clearly demonstrate that β1AR and in a lesser extent,
M2AChR plasmid DNA immunization, induced an important cardiac mechanical
dysfunction as shown by a significant decrease in LV ejection fraction, fractional
shortening and left ventricular dilatation.
Apoio Financeiro: CNPq, PRONEX, FAPERJ, FAPESP, FUJB
03.025
SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE DO ELETROCARDIOGRAMA (ECG) NA
DETECÇÃO PRECOCE DO INFARTO DO MIOCÁRDIO (IM) EM RATOS.
Pimentel, E. B. *; de Moraes, A. C. **; Leite, C. M.; Mill, J. G.; Ciências Fisiológicas Centro Biomédico, UFES; Departamento de Ciências Fisiológicas, UFES.
Objetivo: Objetivos: A presença de onda Q em DI e o desvio do eixo de QRS
para a direita constituem sinais de IM crônico em ratos (Brazilian J. Med. Biol.
Res. 24:1173-6, 1991). Não existe estudo sistemático da sensibilidade deste
método no diagnóstico precoce (3 dias) e tardio (30 dias) de IM em ratos.
Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (3 meses) foram divididos nos
grupos controle (Con, n=10), com ligadura da artéria coronária esquerda (IM,
n=72) e com cirurgia fictícia (SO, n=16). O ECG foi feito em decúbito dorsal
(anestesia com éter) e os membros anteriores a 90° do tronco. As derivações do
plano frontal foram obtidas com agulhas (25x7) hipodérmicas introduzidas nos
membros e o registro em papel termossensível (100 mm/s; 1 mV/20mm), antes
da cirurgia e 3,7,15 e 30 dias após. Os animais foram então sacrificados e o IM
considerado se cicatriz (Ctz) transmural estivesse presente. Dos 72 animais com
ligadura 13 (17%) morreram em 48h. Dos 59 restantes, 50 (84%) apresentavam
IM (Ctz= 173±17mg) e destes 44 apresentavam onda Q em DI aos 30 dias. Dos
9 animais sem Ctz, 1 apresentava onda Q. Assim, a sensibilidade da onda Q em
DI como indicativo de IM foi de 90%, a especificidade 88% e o valor preditivo
positivo 90%. Nenhum animal Con e SO apresentou Q em DI de 0-30 dias. Nos
19 animais com IM onde o ECG foi repetido aos 3, 7 e 15 dias, a presença de Q
em DI de 3 a 30 dias foi constante em 16 ratos. A amplitude de R em DI
manteve-se inalterada nos grupos Con e SO. A amplitude do QRS em DI
(média±epm, uV) decaiu de 298±21 antes da cirurgia, para 165±41 (3d) e para
100±16 (30d; P<0.01) e seu eixo no plano frontal ficou em torno de +60° em
90% dos animais Con e SO, desviando-se para a direita (>+90°) em 85% dos
ratos com Ctz.
Conclusões: Conclusão: Q em DI com desvio do QRS para a direita,
praticamente confirma IM em ratos após 3 dias de ligadura, quadro que não se
altera ao longo do primeiro mês após IM.
Apoio Financeiro: CNPq
03.026
O TRATAMENTO CRÔNICO COM ENALAPRIL E AMLODIPINA NA
PREVENÇÃO DO REMODELAMENTO ELETROFISIOLÓGICO NO MIOCÁRDIO
DE RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS Nobre, R. de A. N. **; Mill, J. G.;
Leite, C. M.; Ciências Fisiológicas - Centro Biomédico, UFES.
Objetivo: A hipertrofia miocárdica é acompanhada de alterações na eletrogênese
cardíaca, principalmente pelo alargamento do potencial de ação (PA). O objetivo
deste trabalho foi determinar as alterações de duração do PA nos ventrículos
direito (VD) e esquerdo (VE) em ratos espontaneamente hipertensos (SHR)
tratados com enalapril (Ena) ou amlodipina (Aml)
Métodos e Resultados: SHRs de 30 dias foram divididos em grupos controle
(Con n=7) e tratado com Ena (n=7;10 mg/Kg/dia) ou Aml (n=5;10 mg/Kg/dia,
vo). Após 12 semanas, fez-se as medidas hemodinâmicas no rato anestesiado.
PAs foram registrados na superfície endocárdica do VD e VE, usando
microeletródios convencionais. A PAM do grupo Ena foi menor do que a do Con
(127+-6 vs 189+-11mmHg,P<0,05) e não foi reduzida significativamente pela
Aml (169+-13mmHg). A massa do VE foi reduzida tanto no grupo Ena (2,29+0,09mg/g,P<0,01) quanto no Aml (2,58+-0,05mg/g,P<0,05) comparada ao Con
(2,88+-0,03mg/g). Não houve diferença quanto ao peso do VD. Houve redução
significativa da duração do PA pelo Ena, mas não pela Aml. No VD, a redução de
duração foi mais uniforme (entre 40 e 45%) quando medida entre 10 e 80% da
repolarização. Já no VE a redução foi significativa apenas na fase inicial da
repolarização (6,55+-0,8 vs 2,81+-0,25ms,P<0,01).
Conclusões: O tratamento precoce de SHR com bloqueadores de canais de Ca+2
e principalmente com inibidores da ECA foi capaz de prevenir não só a
hipertensão como também a hipertrofia ventricular esquerda, e apenas o iECA
foram capazes de reduzir significativaemente a duração do PA. É possível que a
AngioII possa agir diretamente na dimuição da expressão gênica dos canais de
K+ transientes de saída, reduzindo a duração do PA.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq
03.027
VARIABILIDADE DA FREQÜÊNCIA CARDÍACA E TREINAMENTO DE SPRINT
EM RATOS: EFEITO DO TRATAMENTO CRÔNICO COM ESTERÓIDE
ANABÓLICO. Pereira Jr., P. P. **; Chaves, E. A. **; Nascimento, J. H. M.; IBCCF, UFRJ;
IBCCF - BL. G, UFRJ.
Objetivo: A utilização crônica abusiva de esteróides anabólicos é uma prática
cada vez mais constante entre jovens atletas e não-atletas, pois associada ao
treinamento físico intenso, é tida como capaz de otimizar e amplificar os
processos de ganho de força e massa corporal magra. No entanto, diversos
efeitos colaterais no sistema cardiovascular são propostos, dentre os quais
podemos citar a indução de perfil aterogênico, e cardiomiopático, sendo o último
relacionado à ocorrência de arritmias e morte súbita. O objetivo deste trabalho foi
o de investigar, em ratos submetidos a treinamento de sprint, o papel do
tratamento crônico com decanoato de nandrolona (DECA) na regulação da
atividade cardíaca pelo sistema nervoso autônomo (SNA).
Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (200-230g) foram selecionados e
treinados em esteira ergométrica utilizando-se protocolo de sprint (6 tiros de 30
s, com recuperação ativa) durante 10 semanas. Nas 8 semanas finais de
treinamento, os animais foram tratados com 10mg/kg de DECA (n=7) ou
VEÍCULO (n=7). Ao final do período de tratamento, foram obtidos os registros de
eletrocardiograma (ECG) nos animais, anestesiados com éter etílico. O ECG
(derivação DII, 3 min. de duração) foi adquirido digitalmente à freqüência de
amostragem de 1kHz, e posteriormente processado, para análise de variabilidade
da freqüência cardíaca (VFC), em software desenvolvido em MATLAB. O grupo
DECA apresentou VFC significativamente menor que o grupo VEÍCULO (p<0,05)
nos índices SDNN (desvio padrão dos intervalos R-R: DECA=3,31±1,42ms;
VEÍCULO=5,89±3,26ms) e RMSSD (raiz quadrada da média do somatório dos
quadrados
das
diferenças
entre
os
intervalos
R-R
sucessivos:
DECA=2,40±0,89ms; VEÍCULO=4,29±1,96ms).
Conclusões: Nossos resultados preliminares sugerem que, em ratos submetidos
a treinamento de sprint, o tratamento crônico com DECA pode atenuar a
modulação da atividade cardíaca pelo SNA.
Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ
03.028
AVALIAÇÃO DO ESTRESSE OXIDATIVO SISTÊMICO E ÓRGÃO-ESPECÍFICO
NA INTOXICAÇÃO CRÔNICA POR CLORETO DE MERCÚRIO Mazzotti, N. G. *;
Gutierrez, L. L. P. **; Klipel, R. *; Fernandes, T. R.; Martins, M. I. M. **; Belló-Klein, A.;
Fisiologia, UFRGS.
Objetivo: Foi objetivo deste estudo produzir intoxicação crônica por HgCl2
através da administração subcutânea durante 30 dias, verificando-se
modificações temporais sistêmicas no estresse oxidativo (EO), assim como em
tecido cardíaco, hepático e renal.
Métodos e Resultados: Foram utilizados 20 ratos machos Wistar, divididos em
dois grupos: grupo Controle (C), injeção de salina, e grupo HgCl2 (H), injeção
subcutânea deste metal (5mg/Kg). Foram coletados sangue do plexo retrorbital
na 1°, 2° e 4° semana de tratamento e coração, rins e fígado ao final para
medidas de EO. A concentração sangüínea de mercúrio no grupo H estava
aumentada (73,5 mg/dL). Na 2° semana, as enzimas glutationa transferase
(GST) e glutationa peroxidase (GPx) aumentaram suas atividades (14% e 24%,
respectivamente), em relação ao grupo C. A superóxido dismutase (SOD)
diminuiu na 1° e 2° e aumentou na 4° semana (25%, 54% e 43%,
respectivamente). A catalase (CAT) estava aumentada (10%) no final do
tratamento. O potencial antioxidante (TRAP) esteve diminuído na 1° semana de
estudo (69%), mostrando tendência de aumento nas restantes semanas. Em
relação aos tecidos, no coração, a CAT diminuiu 44% a LPO aumentou 25% e o
TRAP aumentou 225%, ao final do tratamento com mercúrio. No rim, a CAT
diminuiu 25%, a GST aumentou 362%, e o TRAP aumentou 100% no grupo H,
quando comparados ao grupo C na 4ª semana. No fígado, a LPO aumentou 44%
e as enzimas tiveram suas atividades diminuídas (CAT 43%, SOD 13%, GPx
41%), com exceção da GST. O TRAP diminuiu 55%.
Conclusões: Os resultados sugerem que a administração subcutânea crônica de
HgCl2, aumentou o EO sistêmico principalmente na fase aguda. Da mesma forma,
o EO cardíaco e hepático mostrou-se aumentado do período de intoxicação
crônica, determinando adaptações seletivas no sistema antioxidante.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PROPESQ
03.029
EFEITO DA DIETA À BASE DE PROTEÍNA DE SOJA SOBRE O CRESCIMENTO
E CAPACIDADE ANTIOXIDANTE TOTAL Hagen, M. E. K. **; Hack Mendes, R. **;
Fernandes, T. R.; Mazzotti, N. G. *; Toniolo, J. *; Rodrigues, G. P. *; Voght, e.; Irigoyen, M. C.
C.; Bello Klein, A.; Unid. Hipertensão, INCor; Bioquímica, UFRGS; Ciências
Biológicas, UFRGS; Fiologia, UFRGS; Fisiologia, UFRGS; Alimentos, Universidade
Federal do Rio Grande do Sul.
Objetivo: Muitos trabalhos têm sido desenvolvidos vinculando a ingestão de
dietas à base de proteínas de soja com redução de fatores de risco para doenças
cardiovasculares. Esse efeito tem sido diretamente relacionado a um constituinte
da soja denominado isoflavona, encontrado principalmente sob as formas
genisteína, daidzeína e gliciteína. O objetivo do presente trabalho foi estudar o
efeito da dieta à base de proteína de soja sobre o crescimento e capacidade
antioxidante total (TRAP) cardíaca e plasmática.
Métodos e Resultados: Os animais utilizados foram ratas Wistar, divididas em
dois grupos (n=5 animais/grupo) : 1) Caseína: tratadas com ração à base de
caseína e, 2) Soja: tratados com ração a base de proteína de soja (Samprosoy)
por um período de 30 dias.As duas dietas tinham igual percentual de proteínas
(17%). Os animais eram pesados semanalmente, para posterior avaliação de
crescimento. O sangue e o coração foram coletados no final do tratamento para
avaliação do TRAP. Observou-se que não houveram diferenças significativas no
crescimento (p=0,25) para os animais estudados, apesar de ter havido aumento
significativo (p= 0,019) no consumo de ração a base de proteína de soja pelos
animais estudados. A capacidade antioxidante total no plasma foi 52% maior nos
animais do grupo soja e no músculo cardíaco foi também 49% maior no grupo
soja.
Conclusões: Os resultados demonstraram que a dieta
crescimento e aumentou a capacidade antioxidante total
no tecido cardíaco dos animais. Estes dados confirmam
produtos de soja, podendo estes serem utilizados para
cardiovasculares.
utilizada não alterou o
tanto no pasma quanto
o importante papel dos
modulação de doenças
Apoio Financeiro: CNPq, PROPESQ
03.030
EFFECT OF METFORMIN TREATMENT ON THE GLYCOGEN REMNANT ON
CARDIAC VENTRICLE OF DIABETIC RAT Gonçalves, A. A.; Silva, E. C. da **;
Teixeira Frigato, V. C. **; Moreno Jr., H.; Farmacologia, UNICAMP; Fisiologia e Biofísica
- IB, UNICAMP.
Objetivo: We already showed that metformin increases the glycogen content in
ventricle. Since we observed that diabetic’s heart accumulate more glycogen than
the control ones, we investigated the effects of an ischemia on the remnant
glycogen content in the isolated heart of rats.
Métodos e Resultados: Males rats, diabetic by alloxan was treated with
metformin (3.5, 30 and 74 g/g bw) during 4 weeks. Non-diabetic (ND) and
diabetic (D) non-treated rats served as control. Under anesthesia, heart was
isolated and perfused with Krebs-Henseleit solution (KHS) in a Langendorff
apparatus. Ischemia was induced by adding norepinephrine 10-6 M (NE) to the
KHS (2 ml/min/g, 1 h). At the end, glycogen was isolated through fenol sulfuric
method and expressed as mg/100 mg tissue. At rest, the ventricle glycogen
content was 0.19  0.007 in the control group (ND, n=6). In similar condition,
diabetic ventricle glycogen (D, n=7) was 0.43  0.03 (p< 0.05). In the rats
treated with the highest concentration (DM74 group) glycogen storage increased
to 0.7  0.04 (p< 0.05). Glycogen content also increased in the DM3.5 and DM30
groups (0.36  0.02, n=8 and 0.50  0.05, n=4, respectively) but did not differ
from the diabetic group. In the perfused groups, ischemia decreased the glycogen
content from all groups (p< 0.05): ND group: 0.11  0.01; D group: 0.1  0.007;
DM3.5 group: 0.08  0.01; DM30 group: 0.1  0.006. Although, the group treated
with the highest metformin dose (DM74) increased the glycogen content in
ventricle, it was almost completely depleted at the end of ischemia (0.06  0.005;
p<0.05 vs other groups).
Conclusões: Those results suggest that the high doses of metformin, specially
the 74 ug/g bw, which is similar to the maximum prescribed for humans, turns
increased the heart susceptibility to the effects of ischemia.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPESP
03.031
EVIDENCE FOR BONE MARROW STROMAL CELL TRANSDIFFERENTIATION
INTO CARDIAC TISSUE OF HEALED INFARCTED RAT HEARTS C. Ribeiro, K.;
Lopes Olivares, E. **; Pinho Ribeiro, V. **; Wermeck de Castro S, J. P. **; C. Mattos, E.; Coeli
dos Santos Goldenberg, R.; Campos de Carvalho, A. C.; Masuda, M. O.; -, 0; Cardiologia
Celular Molecular - IBCCF, UFRJ; Eletrofisiologia Cardíaca - IBCCF, UFRJ; Instituto
Biofísica Carlos Chagas Filho - BL. C, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos Chagas
Filho, UFRJ.
Objetivo: Post-infarct congestive heart failure (CHF) is one of the leading causes of
morbidity and mortality all over the world. In a previous report we have demonstrated that
cellular cardiomyoplasty improved heart function in the model of healed infarct. In this study
we pursue histological evidences that could explain this functional improvement.
Métodos e Resultados: Cell culture medium with or without bone marrow stromal cell
(BMSC) was injected in the borders of cardiac scar tissue four weeks after the experimental
infarction. At the end of the functional studies, two of the BMSC injected animals that showed
enhancement of cardiac performance by electrocardiogram and echocardiogram, were
chosen for histological study. These animals were perfused with fixative solution, the hearts
were sectioned, frozen for immunofluorescence localization of cytoskeletal differentiation
markers or dehydrated and included in paraffin for dye staining and bright field microscopy
examination. Hematoxylin and eosin (HE) or picrosirious (PS) staining was carried out.
Transmural scar formation was observed only in the control, medium injected group. Positive
immunostaining for sarcomeric and smooth muscle actin co-localized with DAPI-labeled
injected BMSC nuclei detected among cardiomyocytes and smooth muscle cells from the
tunica media of coronary vessels in BMSC injected hearts. However, not all the cells
presenting both nuclear and cytoskeletal fluorescent labeling seemed to have achieved a fully
differentiated state at this time interval. When this was the case, cell shape was round and the
cells were frequently found in groups or distributed along the cardiomyocytes.
Conclusões: Our data provided strong evidence that BMSC implant can integrate into
viable tissue leading to angiogenesis and regeneration of the damaged myocardium, which
could explain the enhanced cardiac performance. This work outstands from other similar
reports since it deals with cell therapy application in the healed infarct model. Therefore, new
and extremely promising therapeutic opportunities arise for patients with post-ischemic CHF.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, IMBT
03.032
OBTENÇÃO DE CAMUNDONGOS TRANSGÊNICOS CONDICIONAIS PARA
ESTUDO DO PAPEL DA AUTOIMUNIDADE NA DOENÇA DE CHAGAS.
Quintanilha Bonfim Metello Silva, E. *; Paschoal B. Dias, L. **; Costa, M. W.; Andreeva, L.;
Serova, I.; Campos de Carvalho, A. C.; Dvoriantchikov, G.; Biofísica, UFRJ; Biofísica CCS,
UFRJ; Cardiologia Celular Molecular - IBCCF, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos
Chagas Filho, UFRJ.
Objetivo: Através dos camundongos transgênicos estabelecemos um modelo
experimental que possibilita a expressão controlada de um único antígeno no
camundongo adulto de modo a estabelecer a importância da autoimunidade
direcionada ao tecido cardíaco na progressão da Doença de Chagas. O
camundongo transgênico expressará a proteína P2b somente em miócitos
cardíacos onde será possível relacionar o aumento do título de anticorpos com o
desenvolvimento dos sintomas da doença. A possibilidade de ligar e desligar a
expressão do gene exógeno oferece a vantagem adicional de mimetizar os
possíveis episódios de recidiva da infecção por T. cruzi.
Métodos e Resultados: O cDNA da região codante da proteína ribossomal de T.
cruzi P2b de 321pb contendo o códon de iniciação e de terminação foi isolado do
plasmídeo pCDNA3/p2b e posteriormente subclonado no vetor de transgênese
condicional pTRE2 contendo promotor do CMV mínimo e o sinal de poli-adenilação
de b-globina. O plasmídeo resultante denominado pTcp-2b foi posteriormente
confirmado por sequenciamento. O cassete de expressão foi isolado por restrição
com a enzima BsrBI, ressuspenso em TE, utilizado para a obtenção de
camundongos transgênicos por injeção no pronúcleo de zigotos obtidos de fêmeas
híbridas (C57BlxCBA). Os zigotos foram transferidos para ovidutos de fêmeas
receptoras pseudográvidas e a análise da prole obtida foi realizada pela reação de
PCR de DNA de cauda para detecção do transgene. Foram transplantados 192
zigotos e obtidos 54(27%) filhotes. Destes foram identificadas 2 fêmeas
transgênicas(3,7%) sendo somente uma com transmissão germinativa do
transgene, sendo então utilizadas para a obtenção da sublinhagem transgênica
homozigota.
Conclusões: Neste trabalho obtivemos uma colônia transgênica contendo a proteina ribossomal de
T. Cruzi estabelecida e que será agora cruzada com camundongos Tet-off por expressar o trangene de
p2b ribossomal condicionalmente no coração da prole.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ
03.033
EFEITO AGUDO DA LORATADINA NOS INTERVALOS QT E QTC EM
CORAÇÕES ISOLADOS DE COELHOS. Medei, E. H. **; Brandão, A. **; Masuda, M. O.;
Campos de Carvalho, A. C.; Campos de Carvalho, A. C.; Nascimento, J. H. M.; Biofísica
CCS, UFRJ; Cardiologia Celular Molecular - IBCCF, UFRJ; Eletrofisiologia Cardíaca
- IBCCF, UFRJ; IBCCF, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, UFRJ.
Objetivo: investigar modificações dos intervalos QT e QTc induzidos pela
loratadina em corações de coelho usando uma dose de Lor de 1,5 mM.
Métodos e Resultados: corações isolados de 7 coelhos, de ambos os sexos,
foram perfundidos pelo método de Langendorff com solução de Tyrode. Os
corações foram submetidos a um período controle (ctrl.) de 15 min. após
estabilização de 20 min. e a seguir perfundidos com Lor 1,5 mM durante 15 min.
Registrou-se o eletrocardiograma durante os períodos ctrl. e 15 minutos com Lor.
Foram medidos os intervalos QT e QTc (corrigido pela equação de Bazzet) e a
freqüência cardíaca. Os resultados (media ± erro padrão) obtidos foram os
seguintes: houve prolongamento dos intervalos QT (Lor, 324,3±42,76ms vs ctrl.,
273,6±10,29ms) e QTc (Lor, 426,0±58,07ms vs ctrl., 348,1±21,43ms) durante a
perfusão de Lor, em relação ao período ctrl, mas este efeito não foi
estatisticamente significativo.
Conclusões: os dados preliminares sugerem que Lor sob as condições descritas
tendem a aumentar os intervalos QT e QTc; o que dá a esta droga uma certa
margem de segurança ao nível cardiológico e recomenda seu uso preferencial
sobre as demais drogas deste grupo.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT
03.034
EFEITOS DOS ANÁLOGOS DO NOVO AGENTE INOTRÓPICO POSITIVO,
LASSBIO 294, NA CONTRATILIDADE DE MÚSCULOS CARDÍACO E LISO
VASCULAR Godinho Silva, A. **; Zapata-Sudo, G.; Sudo, R. T.; de Jesus Barreiro, E.;
Manssour Fraga, C. A.; Farmacologia Básica e Clínica - BL K, UFRJ; Farmacologia
Básica e Clínica ICB BLJ, UFRJ; Fármacos, UFRJ.
Objetivo:
Recentemente,
demonstramos
que
3,4-methylenebenzoyl-2thienylhydrazone, denominado LASSBio 294 (L294) aumenta o inotropismo de
músculo cardíaco interferindo na regulação da concentração intracelular de
Ca2+. Neste trabalho, os efeitos de seis análogos do L294 foram investigados
quanto às atividades no coração e no músculo liso vascular.
Métodos e Resultados: Músculo papilar e anéis de aorta de rato Wistar foram
dissecados, montados em cubas verticais preenchidas com solução nutridora
oxigenada (95%O2/5%CO2) à 37oC e preparados para registro de tensão
isométrica. Os abalos musculares do papilar obtidos com estimulação elétrica a 1
Hz e a contratura da aorta induzida pela adrenalina (1 µM) foram armazenados
em computador para posterior análise usando o programa Axoscope. A atividade
contrátil dos músculos cardíaco e liso vascular foi observada na ausência e
presença dos análogos L785, L786, L787, L789, L790, L791. Os resultados foram
apresentados como média ± EPM. O L789 aumentou os abalos do músculo papilar
de forma dose-dependente com efeito máximo (100 µM) de 117,0±4,9%
(N=6) da amplitude controle (P<0,05). Por outro lado, o L786 reduziu os abalos
musculares do papilar atingindo o efeito máximo de 52,7 ± 2,2 % (N=6) em
relação ao controle na concentração de 200 µM. Tanto o L789 quanto o L786
reduziram a contratura da aorta induzida pela adrenalina. Com 200 µM, a
contratura foi reduzida pelo L786 em 55,1 ± 8,4% (N=6) nas aortas com
endotélio íntegro 45,6 ± 15,0% (N=6) em aortas desprovidas de endotélio.
Conclusões: Dentre os análogos do L294 testados, o L789 aumentou e o L786 diminuiu o
inotropismo cardíaco de forma dose-dependente. Estes análogos provocaram relaxamento da contratura
induzida pela adrenalina em aortas com ou sem endotélio.
Apoio Financeiro: CNPq, PRONEX, FUJB
03.035
EFEITOS DA INSUFICIÊNCIA CARDÍACA NO ESTRESSE OXIDATIVO DO
MÚSCULO DIAFRAGMA. Mazzotti, N. G. *; Leichsenring-Silva, F. *; Picoral, M. *;
Fernandes, T. R.; Nascimento, D. M. **; Belló-Klein, A.; Martins, M. I. M. **; Fisiologia,
UFRGS; Fisiologia Cardiovascular, UFRGS.
Objetivo: Estudos têm mostrado que indivíduos que desenvolvem insuficiência
cardíaca apresentam diminuição da força muscular. Para essas pessoas um dos
fatores limitantes é a incapacidade ventilatória por diminuição da força muscular
diafragmática. Uma das hipóteses para essa fraqueza é a disfunção das fibras
musculares em virtude do estresse oxidativo gerado pela diminuição do aporte
sangüíneo. O objetivo deste trabalho foi quantificar o estresse oxidativo no
músculo diafragma de ratos com insuficiência cardíaca induzida pelo infarto do
miocárdio (IM).
Métodos e Resultados: O infarto foi realizado cirurgicamente ocluindo a
coronária esquerda. Dois grupos experimentais (n=8/grupo): Grupo controle:
simulação do infarto; Grupo IM: oclusão da coronária esquerda. Após 6 semanas
da cirurgia, os animais foram mortos e retirados: o coração para análise de
hipertrofia e o diafragma homogeneizado para as análises bioquímicas. O estresse
oxidativo foi medido através do teste de substâncias reativas ao ácido
tiobarbitúrico (TBA-RS), e da determinação da atividade das enzimas
antioxidantes: catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e superóxido
dismutase (SOD). A análise de variância de uma via mostrou diferença
significativa em todos parâmetros analisados. O grupo IM aumentou 68% os
níveis de TBA-RS em relação ao grupo controle. Quanto à atividade das enzimas
antioxidantes foi observado que no grupo IM: a CAT diminuiu 331%; a GPx
apresentou uma diminuição de 24% e a SOD diminuiu 5% em relação ao
controle. Nas medidas de hipertrofia cardíaca o grupo IM teve um aumento de
28% em relação ao controle.
Conclusões: A insuficiência cardíaca induzida por IM leva a um aumento do
estresse oxidativo e redução de atividade das enzimas antioxidantes no diafragma
que pode estar relacionado com a diminuição de força diafragmática.
Apoio Financeiro: FAPERGS, PROPESQ, CNPq, CNPq
03.036
PRECONDICIONAMENTO ISQUÊMICO: PURIFICAÇÃO DO EFLUENTE
CORONARIANO PRECONDICIONADO DE RATOS Serejo, F. C. **; Rodrigues Jr, L.
F. *; Campos de Carvalho, A. C.; Nascimento, J. H. M.; Cardiologia Celular Molecular IBCCF, UFRJ; IBCCF, UFRJ.
Objetivo: A cardioproteção por precondicionamento isquêmico (PI) pode ser
transferida entre corações de ratos através do efluente coronário (FeSBE, 03.036,
2001). O objetivo deste estudo foi purificar e analisar o efluente coronariano
através de cromatografia de fase reversa para a identificação de possíveis
ativadores do PI.
Métodos e Resultados: Corações isolados de ratos Wistar machos, perfundidos
segundo a técnica de Langendorff, foram submetidos ao protocolo de isquemia e
reperfusão (I/R), consistindo de 30 min. de isquemia seguido de 60 min. de
reperfusão. Em seguida os corações foram fatiados e corados com
trifeniltetrazólio, para medição da área de infarto. O PI consistia de 3 ciclos de 5
min. de isquemia e 5 min. de reperfusão, antes da isquemia de 30 min. O
efluente coronariano, coletado durante o PI, foi liofilizado, dialisado (cut off:
3.500 Da) e centrifugado a 1.500g. O precipitado foi aplicado em uma coluna de
fase reversa (Sep-Pak C-18) e eluído com 20% de acetonitrila. Após secar em
atmosfera de N2, o extrato foi liofilizado, resuspenso em solução de Krebs e
perfundido em corações isolados, antes de I/R. Os resultados mostram que no
grupo de corações submetidos ao PI a área de infarto é menor (12,64 ± 0,99%, n
= 5) comparada ao grupo não precondicionado (39,15 ± 0,66%, n = 5). O
efluente concentrado por liofilização, diálise e centrifugação produziu um
sobrenadante sem atividade cardioprotetora (40,21 ± 0,77%, n= 5), enquanto o
precipitado reduziu significativamente a área de infarto (13,60 ± 1,60%, n = 5).
A fração não-ligada à coluna não teve efeito cardioprotetor (39,10 ± 0,06%, n =
4), enquanto a fração ligada reduziu a área de infarto (13,31 ± 0,68%, n = 4).
Conclusões: O fator cardioprotetor presente no efluente precondicionado pode
ser concentrado por liofilização, diálise e centrifugação, sendo este uma
substância com peso molecular acima de 3.500 Da e de características
hidrofóbicas.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT
03.037
SENSIBILIDADE TÉRMICA E PROTEOLÍTICA DO EFLUENTE CORONARIANO
PRECONDICIONADO DE RATOS Serejo, F. C. **; Rodrigues Jr, L. F. *; Brandão, F. de
A. *; Campos de Carvalho, A. C.; Nascimento, J. H. M.; Cardiologia Celular Molecular IBCCF, UFRJ; IBCCF, UFRJ.
Objetivo: A cardioproteção por precondicionamento isquêmico (PI) pode ser
transferida entre corações de ratos através do efluente coronariano (FeSBE,
03.036, 2001). O objetivo deste estudo foi avaliar a estabilidade térmica e
proteolítica da atividade cardioprotetora do efluente coronariano precondicionado
de ratos.
Métodos e Resultados: Corações isolados de ratos Wistar machos, perfundidos
segundo a técnica de Langendorff, foram submetidos a um protocolo de isquemia
e reperfusão (I/R), consistindo de 30 min. de isquemia seguido de 60 min. de
reperfusão. Ao final da reperfusão os corações foram fatiados e corados com
trifeniltetrazólio, para medição da área de infarto. O PI consistia de 3 ciclos de 5
min. de isquemia e 5 min. de reperfusão, aplicados antes da I/R. Os corações
perfundidos, antes da I/R, com efluente coronariano (EF) coletado durante o PI
foram divididos em grupos experimentais (n = 5, por grupo), de acordo com os
tratamentos: a) efluente fresco; b) efluente pré-aquecido a 70 ºC (EF70) e 100
ºC (EF100); c) efluente a temperatura ambiente por 24 horas, na ausência (IP-)
ou presença de inibidores de proteases (IP+). Os resultados mostram que a área
de infarto foi significativamente menor no grupo que recebeu o PI (12,64 ±
0,99%, n = 5), comparado ao grupo controle (39,15 ± 0,66%, n = 5). O grupo
que recebeu o efluente fresco teve área de infarto de 14,15 ± 0,47%, enquanto o
grupo IP- teve área de 40,20 ± 1,04%. A perda de atividade após 24 horas foi
atenuada por inibidores de proteases (IP+, 22,67 ± 3,15%). A atividade
cardioprotetora do efluente foi reduzida também quando este foi aquecido a 70 e
100 ºC (EF70 = 20,97 ± 1,56% e EF100 = 39,13 ± 0,96%, respectivamente).
Conclusões: A atividade cardioprotetora do efluente coronariano precondicionado
de rato pode ser reduzida significativamente por calor e proteólise, sugerindo que
o fator precondicionante seja de natureza proteíca.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT
03.038
AVALIAÇÃO DO POTENCIAL TERAPÊUTICO DAS CÉLULAS DE MEDULA
ÓSSEA NO INFARTO DO MIOCÁRDIO EXPERIMENTAL Pinho Ribeiro, V. **;
Wermeck de Castro S, J. P. **; Olivares, E. L. **; Kyle Cezar, F. *; C. Ribeiro, K.; Mill, J. G.; C.
Mattos, E.; Coeli dos Santos Goldenberg, R.; Campos de Carvalho, A. C.; -, 0; Ciências
Fisiológicas - Centro Biomédico, UFES; Biofísica CCS, UFRJ; Cardiologia Celular
Molecular - IBCCF, UFRJ; Instituto Biofísica Carlos Chagas Filho - BL. C, UFRJ;
Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, UFRJ.
Objetivo: Avaliar o potencial terapêutico das células de medula óssea,
transplantadas por via intravenosa (i.v.) durante a fase aguda do infarto
experimental em ratos, e comparar com nossos resultados de injeção
intramiocárdica no infarto crônico
Métodos e Resultados: grupo 1 - ratos infartados, tratados com célula de
estroma de medula óssea (CEMO), por via intramiocárdica (i.m.), 28 dias após a
indução do infarto (IT-CEMOim) (n=7); grupo 2 - ratos infartados, tratados com
CEMO por via intravenosa, seis dias após o infarto (IT-CEMOiv) (n=5); grupo 3 ratos infartados, tratados com células mononucleares de medula óssea (i.v),
cinco horas após o infarto (IT-CMMOiv) (n=9). A função cardíaca foi avaliada
antes e/ou após a terapia celular através de eletrocardiograma (ECG) e
ecodopplercardiograma (ECO), e comparada com a dos animais infartados não
tratados (INT) e falso-operados (FO). Os animais IT-CEMOim, duas semanas após
a terapia celular, apresentaram perfil eletrocardiográfico típico de um animal
normal (D1 e aVF positivas) e fração de ejeção significantemente maior em
relação aos animais INT (IT-CEMOim = 73,98% ± 27,24 vs INT = 48,00% ±
3,89). Em contrapartida, os animais IT-CEMOiv e IT-CMMOiv apresentaram
padrão elétrico típico de animal INT (D1 negativa e aVF positiva) e fração de
ejeção similar a dos animais INT (IT-CEMOiv = 53,00% ± 4,36; IT-CMMOiv =
54,13% ± 15,82) mesmo várias semanas após a terapia celular.
Conclusões: Estes resultados indicam que a terapia i.m. com CEMO 28 dias após
o infarto (ICM) é bastante eficiente; o que torna sua aplicação clínica viável. No
entanto, o tratamento i.v. com CEMO ou CMMO nos animais com IAM, não
promoveu nenhuma melhora na performance cardíaca.
Apoio Financeiro: Inst. Milênio Bioeng. Tecidual, CAPES, CNPq, PRONEX, FAPERJ
03.039
REGULAÇÃO DO CÁLCIO INTRACELULAR EM FIBRAS MUSCULARES
ESQUELÉTICAS DESNUDAS DE RATOS SUBMETIDOS AO INFARTO DO
MIOCÁRDIO do Carmo, F. L. *; Gabriel, D. *; Zapata-Sudo, G.; Sudo, R. T.; Ciências
Biológicas, UERJ; Farmacologia Básica e Clínica - BL K, UFRJ; Farmacologia Básica
e Clínica ICB BLJ, UFRJ.
Objetivo: Nosso laboratório demonstrou que o infarto do miocárdio (IM)
provocava menor resposta contrátil induzida pela cafeína em músculos
esqueléticos isolados. Esta alteração poderia ser decorrente da alteração na
regulação do Ca2+ intracelular pelo retículo sarcoplasmático (RS) ou ainda na
função do sistema contrátil. Este trabalho investiga os processos de liberação e
captação de Ca2+ pelo RS e a sensibilidade do sistema contrátil ao Ca2+ em fibras
de ratos falso-operados (RFO) e infartados (RI).
Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos foram submetidos à cirurgia de IM
com oclusão total da artéria coronária descendente anterior. O grupo FO foi
submetido ao mesmo procedimento sem sofrer a ligadura da artéria. Quatro
semanas após o IM, músculo solear dos RFO e RI foram dissecados e deles
retirados feixes que foram permeabilizados manutendo em solução de
relaxamento contendo 5 mM de EGTA durante 24h. A cada experimento, uma
fibra muscular isolada foi preparada para registro de tensão isométrica com
tensão máxima (Po) desenvolvida através de exposição à solução de pCa 4,8. As
contraturas induzidas por concentrações crescentes de cafeína nas fibras foram
comparadas nos grupos RFO e RI. A curva dose-resposta da cafeína em induzir
contratura não foi alterada pelo IM. A tensão máxima foi observada com 2 mM de
cafeína sendo a resposta 65,9 ± 3,7 e 73,0 ± 3,5% do Po para os grupos RFO e
RI, respectivamente. A concentração necessária para se obter 50% da resposta
máxima foi de 0,12 ± 0,02 e 0,18 ± 0,14 mM de cafeína para as fibras de RFO e
RI. Fibras desprovidas de RS funcional após tratamento com Triton X-100 foram
expostas a concentrações crescentes de Ca2+. O IM não modificou a curva que
relaciona pCa com a tensão isométrica. Nos grupos RFO e RI, os valores de pCa 50
foram de 5,9 ± 0,04 e 6,0 ± 0,10, respectivamente.
Conclusões: A menor responsividade do músculo esquelético íntegro à cafeína
não pode ser explicada por modificações na liberação e/ou captação de Ca 2+ do
RS nem na sensibilidade do sistema contrátil ao Ca2+.
Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, FUJB, PRONEX
03.040
CARDIAC FUNCTION IN ISOLATED HEART OF DIABETIC RAT. EFFECT OF
METFORMIN TREATMENT UNDER ISCHEMIA Silva, E. C. da **; Teixeira Frigato, V.
C. **; Moreno Jr., H.; Gonçalves, A. A.; Farmacologia, UNICAMP; Fisiologia e Biofísica IB, UNICAMP.
Objetivo: Drugs could alter cardiac functions during overload. We studied the
effects of 4 weeks metformin treatment on the pressure developed by the left
ventricle (LVP) and its derived parameters (DP/Dt+ and DP/Dt-) of isolated heart
from diabetic rats.
Métodos e Resultados: Alloxan diabetic male adult rats received metformin
(DM) (3.5; 30 and 74 ug/g bw/day) in the drinking water, during 4 weeks. Nondiabetic (ND) and non-treated diabetic (D) rats served as control. Hearts were
removed under anesthesia and mounted on a Langendorff apparatus and
perfused by Krebs-Henseleit solution (KHS). A latex balloon, coupled to a
pressure transducer by a cannula, was inserted in the left ventricle to record LVP,
DP/Dt+ and DP/Dt- (mm Hg). After 10 min, 10-6 M norepinephrine (NE) were
added to KHS and perfused (2 ml/min/g) during 1 h. In the ND group, after 5 min
NE perfusion, LVP and DP/Dt+ increased (145  9.7; 4055  508, n=8
respectively) and DP/Dt- decreased (-2738  301) and followed by a slow return
(99  3, 2500  226 and -1830  152) to the control period. The response to
ischemia by hearts from DM3.5 and DM30 groups, did not differ from control (ND,
p> 0.05). Contrasting to this, hearts of D and DM74 groups developed an inferior
maximal LVP (96  8 and 112  4.7, p< 0.05), DP/Dt+ (2308  279 and 2430 
393) and DP/Dt- (-1652  217 and 1860  190). The return of the LVP (64  5; 79
 9) and the DP/Dt+ (1438  84; 1823  313) and DP/Dt- (-1056  78; -1184 
189) was faster than those recorded from the ND, DM3.5 and DM30 groups.
Conclusões: Hearts of diabetic rats, treated with high metformin (DM74 group),
similar to the maximum dose, as indicated for humans, may turn the ventricles
highly susceptible to the effects of ischemia, causing prejudice to cardiac work. In
part, these effects are associated to the increased glycogen content.
Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPESP
03.041
EFEITOS DOS FLAVONÓIDES DA UVA PRETA NA INSUFICIÊNCIA
CARDÍACA DIREITA: AVALIAÇÃO DO ESTRESSE OXIDATIVO. Mazzotti, N. G. *;
Hübscher, G. **; Parise, C. *; Auzani, J. A. *; Schenkel, E. P.; Fernandes, T. R.; Voght, e.;
Bello Klein, A.; Fisiologia, UFRGS; Fisiologia Cardiovascular, UFRGS; Produção,
UFRGS; Alimentos, Universidade Federal do Rio Grande do Sul.
Objetivo: O alcalóide vegetal monocrotalina (MCT) é utilizado para produzir
hipertensão pulmonar e hipertrofia ventricular direita. O consumo de polifenóis da
uva tem sido associado com baixos índices de doenças cardiovasculares devido à
presença de antioxidantes.Avaliar os efeitos dos flavonóides do suco de uva preta
e vinho tinto Cabernet Frank quanto à capacidade antioxidante (TRAP) e atividade
das enzimas catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e superóxido dismutase
(SOD) em corações de ratos com insuficiência cardíaca direita (ICD).
Métodos e Resultados: Ratos machos Wistar (25 dias) foram divididos em 4
grupos: Controle (GC), Flavonóide (GF), Insuficiente (GI) e Flavonóide
Insuficiente (GFI). A ICD foi induzida por MCT em uma única injeção i. p.
(60mg/kg) aos 49 dias de vida. Os animais GFI e GF receberam diariamente suco
por sonda intragástrica, da data do desmame até 50 dias, na quantidade de
20mL/kg/dia e, no período de 51 a 70 dias, foi administrado vinho na
concentração de 15mL/kg/dia. No 70° dia os corações foram retirados para
medida da TRAP e das enzimas. A TRAP do GI foi 40% inferior ao GC e 24%
inferior ao GFI. A atividade da CAT foi 14% e da GPx 64% inferior no GI em
relação ao GFI. O mesmo não foi observado na atividade da SOD que no GI foi
13% superior em relação GFI.
Conclusões: A ICD promove uma depleção de antioxidantes enzimáticos e não
enzimáticos, que pode estar contribuindo para a patogênese da doença. A
administração de flavonóides previne este efeito.
Apoio Financeiro: FAPERGS, PROPESQ, CAPES, PIBIC
03.042
PAPEL DA INSULINA NA ASSOCIAÇÃO ENTRE GÊNERO E DESNUTRIÇÃO
NO INÍCIO DA LACTAÇÃO NA MORFOLOGIA DO CORAÇÃO DE RATOS
QUANDO ADULTOS. Moura, A. S.; Costa Lopes, C.; Flavia, P. **; Mandarim de Lacerda,
C.; Ciências Fisiológicas, UERJ; Ciências Fisiológicas - IB, UERJ; Morfologia, UERJ;
Nutrição Aplicada - Instituto de Nutrição, UERJ.
Objetivo: Objetivo: Desnutrição no início da vida é causa de doenças crônicas
na idade adulta. Neste estudo avaliamos prováveis associações entre o gênero e
a desnutrição na lactação induzindo modificações morfológicas no coração dos
animais adultos.
Métodos e Resultados: Métodos e resultados: Foram utilizados rato(a)s
Wistar desnutrido(a)s no início da lactação (8 dias). A morfometria, esteriometria
e a insulina e glicose plasmáticas foram estudados nos animais aos 8 dias e 60
dias de idade. Observamos que a relação entre o peso corporal e peso do
coração, está reduzido nas fêmeas desnutridas e não se modifica nos machos
desnutridos. A desnutrição induz redução na relação peso ventrícular
(esquerdo)/coração aos 8 e 60 dias, nas fêmeas (20% de redução aos 8 dias e
30% aos 60 dias de idade). Aos 60 dias as fêmeas apresentam maior densidade
de cardiomiócitos (dc) e interstício (i) quando comparadas aos machos (dc: 220%
maior, p<0.05% e i: 530% maior, p<0.001). Somente nos machos observa-se
impacto negativo da desnutrição na dc aos 60 dias de idade (dc: 25% menor,
p<0,05). Aos 8 dias de idade, a relação insulina/glicose plasmática nas fêmeas é
igual quando comparadas às fêmeas desnutridas e, nos animais machos, está
reduzida em 42%. A relação i/g encontra-se alterada nas fêmeas aos 60 dias de
idade (33% maior nas fêmeas desnutridas, p<0.05).
Conclusões: Conclusões: Os resultados sugerem que a desnutrição na lactação associase ao gênero na determinação de peculiar processo de impressão/programação da
morfologia cardíaca. Tal processo provavelmente ocorre através de ação gênero-específica
da insulina.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ