in vivo
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Doutoranda: Cláudia Turra INTRODUÇÃO NP magnéticas → agentes de contraste em RM Óxidos de Fe Marcação celular Entrega de fármacos Agentes de contraste em RM Hipertermia magnética localizada FeCo, FePt, FePd → fortes propriedades magnéticas dissolução gradual dosmetais INTRODUÇÃO NP magnéticas do tipo core shell - revestimento de sílica NP de FePt@Fe2O3 → imagens in vitro FePt@Fe2O3 > FePt@Fe2O4 INTRODUÇÃO - OBJETIVOS Sintetizar NP de FePt@Fe2O3 do tipo core shell revestidas com PEG Estudos in vitro e in vivo de toxicidade e imagens de RM Adição de AF (in vitro): estabilidade marcação de células de câncer – morte seletiva in vivo: contraste para imagens do tipo T2 de RM toxicidade não observável http://www.plataformainterativa2.com/coluna/html/revistacoluna/volume1/imagens_ressonancia.htm METODOLOGIA Síntese de NP core shell de FePt@Fe2O3 Síntese de NP de FePt Oleyamina (99%) Ácido oleico (99%) 1,2-hexadecanodiol (90%) 1-octadeceno (99%) Pt(acac)2 98% Fe(CO)5 Sigma-Aldrich Deposição térmica partindo do Pt(acac)2 e Fe(CO)5 → caroço Crescimento de uma camada de Fe por injeção de Fe(CO)5 Atmosfera aquecida a 180 ◦C + fluxo de O2 por 2h = oxidação → Fe2O3 Dispersão em diferentes solventes orgânicos METODOLOGIA Cultura de células Células de carcinoma humano do tipo KB Células HeLa Células hepáticas Células de câncer de mama Crescidas em meios de cultura específicos METODOLOGIA Modelos tumorais Ratos Balb/c injetados com 2x106 células em 60 μL de PBS no ombro direito da fêmeas Volume de 60 mm3 Dieta livre de folato por duas semanas antes da inoculação do tumor METODOLOGIA Imagens de RM in vivo Injeção intravenosa com FePt@Fe2O3-PEG ou FePt@Fe2O3-PEG-FA (34 mg/kg de Fe) Scanner clínico de 3T com bobina especial para pequenos animais Parâmetros específicos METODOLOGIA Hematoxicilina e eosina Ratos não tratados (controle) e injetados com as NP foram sacrificados após 1 e 20 dias da injeção Órgãos (fígado, pulmões, baço, rins, coração e tumores) retirados Fixados em formalina 4% e coloridos com H e E e PSB Examinados em microscópio digital METODOLOGIA Bioquímica sérica e análise de sangue Ratos injetados com as NP foram sacrificados após 1, 7 e 20 dias da injeção para coleta de sangue 0,8 mL de sangue por animal foi coletado antes RESULTADOS E DISCUSSÕES Síntese via Efeito Kirkendall Difratometria de raios-X: picos característicos de cristal FCC http://www.nanowerk.com/spotlight/spotid=301.php RESULTADOS E DISCUSSÕES imagem TEM Estruturas core shell 2,6 nm 2,3 nm RESULTADOS E DISCUSSÕES 51 nm RESULTADOS E DISCUSSÕES 15 Caráter superparamagnético RESULTADOS E DISCUSSÕES Imagens de RM T2 de soluções de FePt@Fe2O3-PEG com ≠ [ Fe] RESULTADOS E DISCUSSÕES Células KB Liberação de LDH RESULTADOS E DISCUSSÕES - 25% - 28% 63% + - 26% [NP] = 100 μg/mL RM – 3T Temperatura ambiente - 73% RESULTADOS E DISCUSSÕES pH = 8,0 RESULTADOS E DISCUSSÕES 32 50 RESULTADOS E DISCUSSÕES Células HeLa Toxicidade < para NP-PEG-DOX Células KB Toxicidade > para NP-PEG-DOX RESULTADOS E DISCUSSÕES RESULTADOS E DISCUSSÕES 34 mg/kg de Fe - 14% - 37% - 63% PEG+FA PEG RESULTADOS E DISCUSSÕES RESULTADOS E DISCUSSÕES RESULTADOS E DISCUSSÕES Bioquímica Albumina/globulina RESULTADOS E DISCUSSÕES CONCLUSÕES produção e caracterização de NP de FePt@Fe2O3 PEGuiladas NP do tipo core-shell – material para entrega de fármaco e contraste para RM in vitro – entrega de fármaco e morte celular seletiva in vivo – contraste para imagens de RM baixa citotoxicidade estudos futuros - efeitos terapêuticos da DOX + citotoxicidade a longo prazo superfície da NP com engenharia apropriada – potencial agente de contraste para imagens T2 + utilização molecular in vivo + aplicações terapêuticas
