Slide 1 - DBM

IX Semana de Biologia da UFPB
Biossegurança e Rotina Laboratorial
Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Técnicas Microbiológicas
Biossegurança
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Biossegurança
Conjunto de procedimentos, ações,
técnicas, metodologias, equipamentos e
dispositivos
capazes
de
eliminar
ou
minimizar riscos inerentes às atividades de
pesquisa,
produção,
desenvolvimento,
tecnológico, ensino e prestação de serviços,
que podem comprometer a saúde do
homem, dos animais, do meio ambiente ou
a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Histórico
1941 – Meyer e Eddie – 74 casos de
brucelose associados a laboratórios
Conclusão:
“A manipulação de culturas, espécies ou inalação
de poeira contendo a bactéria Brucella é
eminentemente perigosa para os trabalhadores de
um laboratório.”
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Histórico
1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre
infecções associadas a laboratórios
222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por
acidentes relatados
1951 - Sulkin e Pike – Nova pesquisa
1342 casos de infecções, sendo 72% das
infecções por brucelose, tuberculose, tifo e
infecção estreptocócica
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Histórico
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Histórico
1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos
1980 – Precauções universais na manipulação
de fluídos corpóreos
1984 – Primeiro Workshop Brasileiro
de Biossegurança - Fiocruz
1995 – Lei Brasileira de
Biossegurança – Lei 897/95
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Histórico
1999 – Fundação da Associação Nacional de
Biossegurança (ANBio)
1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de
Biossegurança
2000 – Biossegurança como
discíplina científica universitária
2001 – Indução de ações em
biossegurança pelo CNPq
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Tipos de Riscos
Físicos
Químicos
Biológicos
Acidentes e
Ergonômicos
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Tipos de Riscos
Físicos
-Provocados por algum tipo
de energia;
Químicos
- A caracterização depende
do equipamento;
- Principais:
Biológicos
Acidentes e
Ergonômicos
* Equipamentos que geram
calor ou chamas;
* Equipamentos de baixa
temperatura;
* Material radioativo
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Tipos de Riscos
Físicos
Químicos
Biológicos
-Conhecimento das
substâncias químicas;
- Cuidados adequados
para o manuseio.
Acidentes e
Ergonômicos
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Tipos de Riscos
Físicos
Químicos
- Decorrentes da exposição
à produtos de animais,
vegetais e microrganismos;
- Agentes microbiológicos:
Biológicos
Acidentes e
Ergonômicos
*
*
*
*
*
Grau de patogenicidade
Poder de invasão
Resistência a esterilização
Virulência
Capacidade mutagênica
- Vias de contaminação.
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Tipos de Riscos
Físicos
Químicos
Biológicos
Acidentes e
Ergonômicos
- Fatores que gerem
situações de risco para a
integridade física e
moral;
- Fatores que possam
interferir nas
características
psicofisiológicas.
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Classificação dos Microorganismos
Classe 2:
Risco individual moderado e baixo
risco para a comunidade.
Nível de Segurança 2
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Uso de Barreiras
Equipamentos de Proteção Individual (EPI):
Proteção contra o contato com agentes
infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor
excessivo, fogo dentre outros.
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Uso de Barreiras
Equipamentos de Proteção Coletiva:
Proteção dos pesquisadores, do
ambiente e da pesquisa desenvolvida.
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Biossegurança
Manuseio de produtos biológicos envolve:
Limpeza
Descontaminação
Desinfecção
Anti-sepsia
Esterilização
Assepsia
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Processos Físicos:
Calor
Radiação
Filtração
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Processos Físicos:
Radiação
- Calor úmido (vapor sob
pressão) – Autoclave, maior
poder de penetração e
redução do número de
microrganismos.
Filtração
- Calor seco - Incineração,
flambagem ar quente (estufa)
Calor
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
AUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de
vapor sob pressão.
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
ESTUFA - Calor seco
Ação: desnaturação das proteínas microbiana
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Processos Físicos:
- Flambagem
Calor
Esterilização de alças e
agulhas.
Radiação
Filtração
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Processos Físicos:
Calor
Radiação
Filtração
- Radiação eletromagnética
Exemplos:
• microondas
• radiação ultravioleta
• raios X
• raios γ
• elétrons
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Radiação ultravioleta – Capela de Fluxo Laminar
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Processos Físicos:
Calor
Radiação
- Remoção dos
microrganismos de líquidos e
gases sensíveis ao calor:
* Glicose
* Antibióticos
Filtração
* Reagentes químicos
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Tipos de filtros:
A)
B)
C)
A) Filtro de profundidade
B) Membrana filtrante
C) Filtro de trilhas de nuleação
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Esterilização
Filtração:
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Filtro de trilhas de nucleação - microscopia
eletrônica de varredura
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Esterilização
Produtos Químicos – Desinfetantes e Esterilizantes
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Biossegurança
Atividades no laboratório:
Planejamento das tarefas
Condições adequadas
Material necessário
Maior segurança
Menor desperdício
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Técnicas Microbiológicas
Rotina Laboratorial
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Cultivo e Manutenção
Meios de Cultura:
Mistura de nutrientes requeridos para a
sobrevivência e crescimento dos
microorganismos em um sistema artificial.
Podem ser em caldo (líquido) ou ágar
(sólido).
Meios líquidos - úteis para a obtenção
de grande biomassa de microrganismos
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Cultivo e Manutenção
Meios quimicamente definidos:
(Meios com finalidades especiais)
Meios seletivos
Meios diferenciais
Meios de enriquecimento
Meios para anaeróbios
Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI)
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Métodos de Cultivo
Inoculação:
• Técnica de esgotamento por estrias
• Técnica da semeadura em superfície
• Inundação
• Diluição por extinção
(Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma
única célula (UFC) – A suspensão original da amostra é diluída
seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição)
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Medida do Crescimento
Método Quantitativo:
• Avaliação do número de células - UFC/mL –
Unidades Formadoras de Colônias por mL
ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica,
contagem em placa ou através de membrana filtrante.
Método Qualitativo:
Avaliação do peso celular ou estimativa de
unidades de absorbância da massa de células
em caldo ou suspensões (turbidez).
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Identificação dos Microorganismos
Características Culturais
Microscopia Óptica
Morfologia Colonial
Características Metabólicas
Características Morfológicas
Características Fisiológicas
Coloração simples
Características Antigênicas
Coloração diferencial
Características patogênicas
Coloração de Gram
Características genéticas
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Estocagem
Conservação de Culturas Puras:
• Conservação por um curto período (dias a
meses):
Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4°C a
10°C) - Repiques freqüentes
• Conservação por longos períodos:
Nitrogênio líquido a -196°C
Freezers a -70°C/ -120°C
Liofilização – congelamento a seco - viabilidade das
culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como
referência.
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Material:
Tubos de Cultura e Placas de Petri
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Material
Instrumentos para Transferência de Culturas
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Obrigada!!!!!
Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica