Enzimas de Restrição

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BIOTECNOLOGIA
1ª PARTE: OGM´s e Testes de DNA
Colégio Pessoa
2009
Claudio Paris – Magrão
[email protected]
2000 -03
1996
1990
1988
1982
1975
1973
1961-66
1956
1953
1944
1943
HISTÓRICO – Eventos Importantes
[email protected]
Biotecnologia
Conjunto de conhecimentos técnicos e
métodos, de base científica ou prática,
que permite a utilização direta ou
indireta de organismos ou seres vivos
como parte integrante e ativa do
processo de produção industrial de
bens e serviços.
Biotecnologia
• Conjunto de técnicas que usam organismos vivos
ou partes destes para produzir ou modificar
produtos, melhorar geneticamente plantas e
animais, ou desenvolver microrganismos para
fins específicos
Biotecnologia
As técnicas de biotecnologia servem-se da engenharia
genética, biologia molecular, biologia celular e
outras disciplinas. Seus produtos são usados nos
campos científico, agrícola, médico e ambiental.
Engenharia genética
É a técnica do DNA recombinante, utiliza-se das
enzimas de restrição ou endonucleases, moléculas
originárias de bactérias que atuam como tesouras
moleculares permitindo a manipulação de genes.
ENGENHARIA GENÉTICA
Princípios
Técnicas
Replicação
Transcrição
Tradução (Síntese de Proteínas)
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Enzimas de restrição ou Endonucleases
Principais ferramentas da Engenharia Genética
Enzimas de Restrição
- 1953 – Restrição crescimento de fagos
- Presença de endonucleases
- Degradação DNA viral
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Enzimas de restrição circundam a
molécula de DNA no ponto a ser
digerido, cortando-a em locais
específicos.
[email protected]
Como surge uma planta
transgênica?
1.Criar uma bactéria
recombinante com o
gene desejado.
2. Permitir que a bactéria
infecte células da
planta.
3. Genes desejados são
inseridos nos
cromossomos das
plantas.
Qual sua opinião sobre o
consumo de alimentos
geneticamente modificados?
Qual sua opinião sobre o
consumo de alimentos
geneticamente modificados?
Qual sua opinião sobre o
consumo de alimentos
geneticamente modificados?
BIOTECNOLOGIA
• Tradicional
- Seleção de organismos – caract. Desejáveis / cruzamento
- + tempo – transferências de genes NÃO desejáveis
• Moderna
- Transferência APENAS de genes desejáveis
- Doador – espécie diferente
- + preciso, + rápido e + eficiente
O que são organismos
geneticamente modificados?
Involve a inserção de DNA de um organismo em outro
OU a modificação do DNA do próprio organismo pelas
técnicas do DNA recombinante
Transgênico
MANIPULAÇÃO GENÉTICA
Técnica DNA Recombinante ou
Engenharia genética
- Expressão DNA exógeno – espécies diferentes
- Novos organismos – características não encontradas na natureza
Enzimas de Restrição
- Sítio de reconhecimento –
ARARA
OMO
ANA
ARARA
OMO
ANA
- Reconhecem de 4 a 8 pb
- Cortes com extremidades abruptas / coesivas
- Clonagem molecular - ~ 1.073 enzimas diferentes
Enzimas de Restrição
- Clivagens
Eletroforese
- Conhecida desde 1930
- Difundida 1950-1960
- Movimentação de moléculas – campo elétrico
- Matriz – Agarose / Poliacrilamida
- Separa proteínas – carga elétrica / peso molecular
- Separa ácido nucléico – peso molecular
Eletroforese
Eletroforese
TESTE - DNA FINGER
PRINT
TESTE - DNA FINGER
PRINT
O exame de paternidade baseia-se na
identificação de marcas genéticas
específicas no DNA de células sanguíneas
da mãe, do filho e do suposto pai.
O esquema mostra
padrões de DNA
de um casal (mãe e
pai) e seus quatro
filhos: F1- filho
biológico do casal,
F2 - filho somente
da mãe, F3 - filho
biológico do casal
e F4 - filho
adotivo do casal.
Clonagem Molecular
Plasmídeo
Plasmídeo
- Extracromossômico
Plasmídeo
Plasmíeo +
Recombinante
Inserto
- Fita dupla
- Conjugação
- Resistência à antibióticos
- Circular
- Insertos até 4.000 pb
Clonagem Molecular
Plasmídeo
Plasmídeo Recombinante
Plasmídeo + Inserto
Clonagem Molecular
DÚVIDAS ???
Gel de agarose + corrente e-
Revelação UV
4º Passo: Comparação entre pedaços de
DNA da mãe criança e dos supostos pais,
em busca de semelhanças.
Metade dos fragmentos de DNA devem ser
iguais aos da mãe e a outra metade do pai.
Muito obrigado pela atenção.
COLÉGIO PESSOA
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