Enzimas de Restrição
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BIOTECNOLOGIA 1ª PARTE: OGM´s e Testes de DNA Colégio Pessoa 2009 Claudio Paris – Magrão [email protected] 2000 -03 1996 1990 1988 1982 1975 1973 1961-66 1956 1953 1944 1943 HISTÓRICO – Eventos Importantes [email protected] Biotecnologia Conjunto de conhecimentos técnicos e métodos, de base científica ou prática, que permite a utilização direta ou indireta de organismos ou seres vivos como parte integrante e ativa do processo de produção industrial de bens e serviços. Biotecnologia • Conjunto de técnicas que usam organismos vivos ou partes destes para produzir ou modificar produtos, melhorar geneticamente plantas e animais, ou desenvolver microrganismos para fins específicos Biotecnologia As técnicas de biotecnologia servem-se da engenharia genética, biologia molecular, biologia celular e outras disciplinas. Seus produtos são usados nos campos científico, agrícola, médico e ambiental. Engenharia genética É a técnica do DNA recombinante, utiliza-se das enzimas de restrição ou endonucleases, moléculas originárias de bactérias que atuam como tesouras moleculares permitindo a manipulação de genes. ENGENHARIA GENÉTICA Princípios Técnicas Replicação Transcrição Tradução (Síntese de Proteínas) [email protected] Enzimas de restrição ou Endonucleases Principais ferramentas da Engenharia Genética Enzimas de Restrição - 1953 – Restrição crescimento de fagos - Presença de endonucleases - Degradação DNA viral [email protected] Enzimas de restrição circundam a molécula de DNA no ponto a ser digerido, cortando-a em locais específicos. [email protected] Como surge uma planta transgênica? 1.Criar uma bactéria recombinante com o gene desejado. 2. Permitir que a bactéria infecte células da planta. 3. Genes desejados são inseridos nos cromossomos das plantas. Qual sua opinião sobre o consumo de alimentos geneticamente modificados? Qual sua opinião sobre o consumo de alimentos geneticamente modificados? Qual sua opinião sobre o consumo de alimentos geneticamente modificados? BIOTECNOLOGIA • Tradicional - Seleção de organismos – caract. Desejáveis / cruzamento - + tempo – transferências de genes NÃO desejáveis • Moderna - Transferência APENAS de genes desejáveis - Doador – espécie diferente - + preciso, + rápido e + eficiente O que são organismos geneticamente modificados? Involve a inserção de DNA de um organismo em outro OU a modificação do DNA do próprio organismo pelas técnicas do DNA recombinante Transgênico MANIPULAÇÃO GENÉTICA Técnica DNA Recombinante ou Engenharia genética - Expressão DNA exógeno – espécies diferentes - Novos organismos – características não encontradas na natureza Enzimas de Restrição - Sítio de reconhecimento – ARARA OMO ANA ARARA OMO ANA - Reconhecem de 4 a 8 pb - Cortes com extremidades abruptas / coesivas - Clonagem molecular - ~ 1.073 enzimas diferentes Enzimas de Restrição - Clivagens Eletroforese - Conhecida desde 1930 - Difundida 1950-1960 - Movimentação de moléculas – campo elétrico - Matriz – Agarose / Poliacrilamida - Separa proteínas – carga elétrica / peso molecular - Separa ácido nucléico – peso molecular Eletroforese Eletroforese TESTE - DNA FINGER PRINT TESTE - DNA FINGER PRINT O exame de paternidade baseia-se na identificação de marcas genéticas específicas no DNA de células sanguíneas da mãe, do filho e do suposto pai. O esquema mostra padrões de DNA de um casal (mãe e pai) e seus quatro filhos: F1- filho biológico do casal, F2 - filho somente da mãe, F3 - filho biológico do casal e F4 - filho adotivo do casal. Clonagem Molecular Plasmídeo Plasmídeo - Extracromossômico Plasmídeo Plasmíeo + Recombinante Inserto - Fita dupla - Conjugação - Resistência à antibióticos - Circular - Insertos até 4.000 pb Clonagem Molecular Plasmídeo Plasmídeo Recombinante Plasmídeo + Inserto Clonagem Molecular DÚVIDAS ??? Gel de agarose + corrente e- Revelação UV 4º Passo: Comparação entre pedaços de DNA da mãe criança e dos supostos pais, em busca de semelhanças. Metade dos fragmentos de DNA devem ser iguais aos da mãe e a outra metade do pai. Muito obrigado pela atenção. COLÉGIO PESSOA
