Ontogenia e Fisiologia de Células T
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Mestrado em Imunologia Clínica Células T L. Taborda Barata Morfologia linfocitária Hematopoiese Papel das citocinas na hematopoiese Timo Timo Ontogenia de células T Período intra-medular e sanguíneo Geração de diversidade no TCR Período intra-tímico Selecção de repertórios O complexo do TCR Domínios da estrutura proteica do TCR Genes codificadores do TCR humano Recombinação e transcrição dos genes das cadeias ab do TCR Geração de diversidade no TCR 1. Número de genes codificadores de regiões V (D) J e C das cadeias a e b 2. Recombinação entre genes codificadores de regiões V (D) J e C das cadeias a e b 3. Junção imprecisa entre genes codificadores recombinados 4. Adição de bases novas pela TdT Ontogenia de células T Período intra-medular e sanguíneo Geração de diversidade no TCR Período intra-tímico Geração de diversidade no TCR Selecção de repertórios Processos de selecção de linfócitos T no timo 1º Passo: Selecção positiva 2º Passo: Selecção negativa Processos de selecção de linfócitos T no timo Selecção positiva Selecção negativa Figura obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Moléculas do MHC estão envolvidas na selecção positiva de células T ab in vitro Figura obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Selecção positiva de linfócitos T ab no timo Selecção positiva de linfócitos T ab no timo Selecção negativa de linfócitos T ab no timo Selecção intra-tímica de células T Tabela obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Modelos propostos do papel de CD4 e CD8 na selecção de células T ab no timo Modelo Instructivo Figura obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Modelos propostos do papel de CD4 e CD8 na selecção de células T ab no timo Modelo Estocástico Figura obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Processos adicionais de selecção de linfócitos T no timo 1º Passo: Selecção positiva 2º Passo: Selecção negativa Papel de superantigénios Linfócitos T e superantigénios Figura obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Superantigénios, famílias Vb e patologia Tabela obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Superantigénios e famílias Vb Tabela obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Papel de superantigénios na selecção negativa de linfócitos T no ratinho Tabela obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Processos adicionais de selecção de linfócitos T no timo 1º Passo: Selecção positiva 2º Passo: Selecção negativa Papel de superantigénios Papel de receptores de superfície (CD5, outros) Processos de selecção de linfócitos T ab no timo 1º Passo: Selecção positiva Inespecífica: depende da afinidade para MHC 2º Passo: Selecção negativa Específica: depende do antigénio Subtipos de células T na periferia Maturação de linfócitos Tgd Células T na periferia CD4+ (++++) CD8+ (++) TCR ab CD4-CD8- (+) TCR gd (+++) Lidam com: Ag externos Ag do próprio MHC clássico MHC não clássico Superantigénios Lidam com: Ag queratinócitos HSP micobacterianas Subtipos de células T na periferia TCR gd ab CD4+ CD8+ +++ +++ “helper” citólise Fisiologia de células Tab na periferia Apresentação de Antigénios Sinapse imunológica Modificado de “Antigen Presentation”, de F. Arosa (2001) e Kuby (2000) Moléculas co-acessórias em células T, e seus ligandos em células apresentadoras de antigénios Papel da co-estimulação através de CD28 e CD80/CD86 na activação de células T Papel da interacção entre CD40 e CD40L na activação de células T Activação versus anergia em células T Importância do segundo sinal Figura obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Figura obtida de Kuby “Immunology” 4ª Edição (2000) Expressão de genes em linfócitos T activados Várias citocinas Alguns padrões de citocinas em células T Respostas celulares T após correcta apresentação de antigénio Activação celular Proliferação celular Expressão de receptores Síntese de citocinas Respostas funcionais e efectoras de células T CD4+, expressando TCR ab Células T “naive” e de “memória” CD45RA+ “naive” Ainda não contactaram com Ag CD45R0+ Já contactaram com Ag “memória” Activação de linfócitos T “naive” e efectores Técnicas laboratoriais ligadas à apresentação de antigénio e fisiologia de células T • Testes de proliferação celular T utilizando 3H-Timidina • Testes de análise de especificidade celular T • Análise de diluição limitante (LDA) • Técnica de tetrâmeros • Avaliação da produção de citocinas em células T • Imunoensaios ou bioensaios • ELISA • ELISPOT • Detecção de citocinas intracelulares • Avaliação da citotoxicidade de células T: Técnica de libertação de Crómio Teste de proliferação celular T utilizando 3H-timidina Testes de análise de especificidade celular T Análise de diluição limitante (LDA) de células T Análise com TETRÂMEROS para detectar células T específicas Avaliação da produção de citocinas em células T B Menu F Ensaio de ELISPOT para quantificar síntese de citocinas por células T B Menu F B Menu F Testes de avaliação da citotoxicidade de células T
