Diagnostico Laborial Hepatite
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Diagnóstico Laboratorial das Hepatites A, B e C Amadeo Sáez-Alquézar Vitória 2008 Hepatites por Vírus Até 1965 Hepatite Infecciosa A Curto período de incubação Hepatite por soro homólogo Longo período de incubação B Hepatites Virais Hepatite por vírus A Hepatite por vírus B Hepatite por vírus C Hepatite por vírus D Hepatite por vírus E Hepatites Não A-E HAV HBV HCV HDV HEV HGV.. Vírus Epstein Bar, Citomegalovírus, Herpes, outros Hepatites Virais Mais Frequêntes VÍRUS Família A Picornaviridae B Hepadnaviridae C Flaviviridae D Deltaviridae E Caliciviridae Características das Hepatites A B C D E Agente HAV HBV HCV HDV HEV Dimensões Envelope Genoma 27-32 Não RNA 42 Sim DNA 55-65 Sim RNA 36 do HBV RNA 27-34 Não RNA Fecal/oral Parenteral Sexual Sim Não Não Não Sim Sim Não Sim pouc.freq Não Sim ... Sim Não Não F. crônica Não (5-7%) (>80%) Sim Não Transmissão Hepatites Não A-E Vírus da Hepatite G ou GB-C Agente etiológico HGV TTV flavivirus circovirus RNA DNA 50 – 100 30 – 50 SIM NÃO Marcadores HGV – RNA Anti-E2 TTV – DNA Transmissão Parenteral Parenteral Família Genôma Tamanho (nm) Envelope Diagnóstico das Hepatites por Vírus • Testes sorológicos. – Marcadores sorológicos (Ac, Ag). • Testes de biologia molecular. – Amplificação de ácidos nucléicos. • Testes bioquímicos. – Enzimas, pigmentos biliares, proteínas. HAV e HEV • Distribuição mundial • Transmissão entérica (fecal-oral) • Não apresentam formas crônicas • Hepatite aguda grave: – HAV • Crianças < 1%; adultos >2% – HEV:em gestantes • 15 – 25% HAV: Prevenção da Infecção • Melhoria dos Padrões Sócio-econômicos e de Higiene. • Em áreas endêmicas para HAV: A vacinação de crianças é mandatoria. • A imunogenicidade da vacina para hepatite A é muito alta, obtendo-se 97% a 100% de soro conversão após uma única dose e de 100% com a segunda dose. • Vacinar viajantes de áreas não endêmicas para áreas endêmicas. Vacinas: Havrix® e Vaqta® Transmissão da HVA • Por contato pessoal • Doméstico, sexual, crianças em locais de estudo e recreação. • Por água e alimentos contaminados. • Pelo sangue (rara) • Uso de drogas endovenosas. • Transfusão sangüínea HVA - Características Clínicas • Período de incubação: 30 (15-50) dias • Icterícia por faixa etária • < 6 anos: < 10% • 6 a 14 anos: 40 – 50% • > 14 anos: 70 – 80% • Complicações: raras • Formas crônicas: ausentes Distribuição geográfica da infecção pelo vírus da Hepatite A CDC HAV Estrutura e variabilidade genética • Estrutura icosahédrica • Não envelopado • Genoma: fita única de RNA – 7500 nucleotídeos (3 regiões) – Região codificadora (P1 – P2 – P3) – 4 proteínas virais: VP1, VP2, VP3 e VP4 • Três Genótipos (15% de variações no VP1) • Um único sorotipo P2: Proteínas nâo estruturais (2A, 2B e 2C) P3: Proteinas estruturais (3A, 3B, 3C e 3D) Marcadores Sorológicos da Hepatite por Vírus A • Anti-VHA (IgM) – Anticorpos contra o VHA, subclasse IgM • FASE AGUDA • Anti-VHA (IgG) – Anticorpos contra o VHA, subclasse IgG • RECUPERAÇÃO - IMUNIDADE EVOLUÇÃO DA INFECÇÃO PELO VHA Fase ictérica Convalescença Anti-VHA IgM Anti-VHA IgG Viremia ALT VHA Nas fezes 0 2 4 6 8 10 12 Semanas após a infecção pelo VHA 14 Imuno Captura : IgM reverso anti-HAV (IgM), anti-HBc (IgM), anti-Delta (IgM) H2O2/TMB HRP H2SO4 AgHAV Positivo Fase sólida HVE Características Clínicas Paraná R & Schinoni MI • Período de incubação:: 40 (15 – 60) dias • Formas graves: – Gestantes: • Gravidade: 1% - 3% 15% - 25% aumenta com a idade • Formas crônicas:: não identificadas. HEV – Características epidemiológicas • A maioria dos surtos estão associados à ingestão de água contaminada com fezes. • A transmissão, pessoa a pessoa, é mínima. • Frequêntemente descrita em viajantes para áreas endêmicas. Distribuição geográfica da infecção pelo vírus da Hepatite E CDC Surtos de infecção confirmada em > 25% de hepatites esporádicas Não ABC Marcadores Sorológicos para o Vírus da Hepatite E • Anti-HEV IgM – Fase aguda • Diagnóstico • Anti-HEV IgG – Recuperação • Prevalência Prevalência de infecção por HEV e HAV - Rio de Janeiro Grupos Anti-HEV (IgG) (%) Anti-HAV (IgG) (%) Doadores de sangue (93) 4,3 92,5 Gestantes (304) 1,0 84,5 0 31,2 Área rural (145) 2,1 79 Hemodiálise (65) 6,2 91 11,8 80,4 Área urbana (260) Usuários de drogas IV (102) TRINTA, Karen S, LIBERTO, Maria Isabel M, PAULA, Vanessa S de et al. Hepatitis E virus infection in selected Brazilian populations. Mem. Inst. Oswaldo Cruz, Jan. 2001, vol.96, no.1, p.25-29. Infecção pelo HBV • A prevalência da infecção por HBV, no mundo, é estimada em torno de 4 – 5% da população total do planeta. – Portadores crônicos assintomáticos – Hepatite crônica (350 milhões) – Carcinoma Hepatocelular (HCC) • Estima-se que ocorrem 50 milhões de novos casos, por ano, de infecção pelo HBV. Distribuição Mundial da Infecção Crônica por HBV CDC HBsAg Prevalência 8% - Alta 2-7% - Intermediária <2% - Baixa Formas de Transmissão do HBV Exposição per cutânea e de mucosas a fluídos corporais contaminados. Contato sexual Transfusão sangüínea Transplante de órgãos Vertical (mãe p/ o recém nascido) Uso de agulhas e seringas contaminadas Acidentes em laboratório Infecção pelo HBV Adultos 80% Assintomática 5-10% Infecção 20% Doença Aguda crônica >1% Hepatite Fulminante 30% 5% a 10% Cirrose Crianças Quase sempre Sub-clínica Hepato carcinoma 23% Em 5 anos Falência hepática Transplante ou óbito Infecção Crônica por HBV Risco para desenvolver infecção crônica Risco para Desenvolver HCC Período perinatal > 90% 25% Crianças 1 a 5 anos 25 – 50% 25% Crianças (>5) Adultos 6 – 10% 15% Infecção HBV - PREVENÇÃO • Imunização passiva – Imuno globulina • Proteção curta (2 – 3 meses) • Imunização ativa – Vacina • Proteção longa (anos) – Plasma purificado (1981) – Vacina recombinante (1986) VACINA HBV • Esquema – Três doses (0-1-6 meses) – Não é necessário reiniciar, se passou o tempo estabelecido entre as doses. • Eficacia – Resposta adequada: anti-HBs > 10UI/ml • Proteção (> 15 anos) – 1ª dose: 30-50% - 2ª dose: 75% - 3ª dose: 96% – Menor em imunodeprimidos e idosos Vírus da Hepatite B Marcadores sorológicos da Hepatite por Vírus B • AgHBs • Anti-HBs • AgHBe • Anti-HBe • Anti-HBc (IgM) • Anti-HBc (IgG ou total) HBV EVOLUÇÃO NORMAL Fases Clínicas Pré-Inctérica Inctérica Convalescença AgHBs Anti-HBs AgHBe Anti-HBe Anti-HBc IgM Anti-HBc IgG ALT HBV-DNA 0 1 2 3 4 5 6 12 Meses após a infecção pelo VHB 24 AgHBs AgHBe Anti-HBe Anti-HBc IgM Anti-HBc IgG ALT HBV-DNA 0 1 2 3 4 5 6 Meses após a infecção pelo VHB 12 24 Perfis Sorológicos Observados em Indivíduos Infectados pelo HBV Perfil Ag HBs 1 + + + + + - 2 3 4 5 6 7 8 Anti-HBc IgM + + - Anti-HBc IgG + + + + + - AntiHBs + + + Interpretações para o anti-HBc (+) com AgHBs/anti-HBs (-) 1-Resultado falso positivo para o anti-HBc. Mais de 66% dos indivíduos com AgHBs negativo, anti-HBc positivo e anti-HBs negativo, quando submetidos à vacinação contra o HBV soroconvertem, com positividade para o anti-HBs, o que indicaria que o anti-HBc isolado correspondia a um resultado falso positivo. 2-Infecção passada pelo HBV e que após algum tempo desapareceu o anti-HBs. 3-O AgHBs está en níveis muito baixos, ou se encontra formando imunocomplexos com o anti-HBs, de modo que não pode ser detectado. 4-Mutantes AgHBs. Ainda que as provas para detecção do AgHBs apresentem alta sensibilidade, alguns testes podem não detectar mutantes. HBV – DNA circular de hélice dupla parcialmente fechada e envelope lipídico 4 Regiões abertas para leitura S P C X Genoma: 3.200 nucleotídeos GENOMA DO HBV Pré S1 Pré S2 DNA Polimerase gene P AgHBc AgHBe gene C Pré C AgHBs gene S HBV: Replicação e Variantes Replica seu genoma (DNA) via transcrição reversa do RNA pré-geonómico • Inserção incorreta de nucleotídeos no cDNA • Geração de “quasiespécies” • Alta replicação viral: 1012-13 por dia • Alta taxa de mutações HBV – AgHBs – Variantes • Subtipos – O AgHBs possui diversas proteínas – Determinantes antigênicos (a, d, y, w, r) • Combinações: subtipos – Mais comuns: adw, adr, ayw. • O determinante antigênico “a” é comum a todos os subtipos • Genótipos – Baseados na divergência genética de 8%, ou mais, da sequência completa de nucleotídeos – Genótipos: A, B, C, D, E, F, G, H • Mutantes Genótipos Distribuição do HBV Geográfica Genótipos A B C D E F G H A/D B/C Ba Bj A A G G H F D AD D E C BaB A Baseados na divergência genética de 8% ou mais da sequência completa de nucleotídeos Stuyver et al., J Gen Virol. 2000;81(1):67-74. deMan et al., J Hepatol. 1998;29(4):669-75. Bj BC D Variantes do HBV Os subtipos e genótipos do HBV se originam de forma natural durante o curso da infecção pelo HBV – Consolidadas na natureza – Apresentam distribuição étnica e geográfica características Mutantes do HBV 1. Gerados espontaneamente durante o curso da infecção natural pelo HBV 2. Gerados num ambiente de pressão seletiva Uso de imuno profilaxia ativa Uso de imuno profilaxia passiva Tratamento com anti-virais Principais Mutantes do HBV Mutantes pré-Core ou Core promoter • Achados em cepas mais virulentas Mutantes no gene P (polimerase) • Resistência a anti-virais Mutantes no gene X • Associados ao desenvolvimento de hepatocarcinoma Mutantes no gene S • Modificam os epítopos imunodominantes do determinante antigênico “a” Principais Mutações do HBV • Na região pré core do DNA-HBV (mutantes de escape do AgHBe) – Falha na expressão do AgHBe a partir da região PréCore • Ex: aa gly, substituído pelo aa arg • [PCR DNA-HBV (+) e AgHBe (-)] • Resistência aos anti-virais – Mutações na Polimerase • Lamivudina • Adefovir Estrutura antigênica do AgHBs O envelope do HBV contem 3 proteínas (complexo AgHBs) SHAgHBs com 226 aa MHAgHBs com 281 aa LHAgHBs com 345 aa Codificadas pelo gene S do genoma viral REGIÕES S S/pré-S1 S-pré-S1/pré-S2 Região hidrofílica globular: aas 99 a 169 do SHAgHBs DETERMINANTE ANTIGÊNICO “a” aas 121 – 149 da região S Determinante Antigênico “a” É comum a todos os sub-tipos do HBV Tem afinidade com o determinante “a” – Acs contra o AgHBs na infecção pelo HBV – Acs após a vacinação – Acs das gamaglobulinas específicas policlonais (HBIg) – Acs dos kits diagnósticos para a detecção de AgHBs Principais Mutações do HBV • No determinante antigênico “a” – Gly (145) substituída por arg – Lys (141) substituída por glu – Vacina, HBIG e diagnóstico “escape” • G145R, K141E (Alça 2 “determinante a”) • T126S, T131N (Alça 1 “determinante a”) – G145R • Descrita mais frequentemente em pacientes vacinados, mas também em portadores crônicos não vacinados Alça 1do determinante “a” 121 s-s-124 Vaccine Escape Mutants: 126 158 Y F 131 99 T126S M133L D144E N144R Thr143Leu Ser 143Leu 133 137 141 G130N res à lamivudina --s--s- 149 107 -s-s- 138 139 T131N K141E G145R 164 D s-s-147 E 145 144 G D 195 R I W E Alça 2 do determinante “a” (Carman, W. J Viral Hepatitis 1997 4: 11-20) 210 M 198 I M S 196 Mutações do AgHBs • Diagnóstico de HBV em indivíduos AgHBs negativos – Importância dos Ac monoclonais / policlonais • Falha na vacinação de recém nascidos de mães Ag HBs positivas (0,6 – 4,0%) • Falha na imuno profilaxia em receptores de transplante ortotópico de fígado (11 -66%) • Falhas no tratamento com antivirais BRASIL –Testes obrigatórios na triagem sorológica de doadores de sangue • • • • • Anti-HIV1/2 Anti-HTLVI/II Anti-HCV Ag HBs Anti-HBc Sífilis Chagas ALT (2) (1) (1) (1) (1) (1) (2) (1) Nº 1.376 Nov / 93 Nº 2.009 Out / 96 Nº 488 / 98 • • • • Anti-HIV1/2 Anti-HTLVI/II Anti-HCV Ag HBs Anti-HBc Sífilis Chagas – ELISA • Alta sensibilidade RDC Nº 343 Dez / 2002 RDC Nº 153 Junho / 2004 (2) (1) (1) (1) (1) (1) (1) Testes para detecção do AgHBs • Sensibilidade • Especificidade • Detecção de mutantes Sensibilidade clínica de 17 kits com marca CE, frente a diversos painéis de soro-conversão Ensaio PRISM HBsAg Enzygnost HBsAg 5.0 Monolisa Ag HBs Ultra Elecsys HBsAg Murex HBsAg Version 3 ETI-MAK 4 ARCHITECT HBsAg ADVIA Centaur HBsAg Vitros HBsAg Reagent Pack Imx HBsAg (V2) Reagent Pack Immulite I/2000 HBsAg AxSYM HBsAg (V2) Reagent Pack ORTHO Antibody to HBsAg ELISA Cobas Core HBsAg II EIA Genedia HBsAg 3.0 Bioelisa HBsAg Colour Hepanostika HBsAg Uni-Form II Fabricante Abbott DADE Behring Bio-Rad Roche Murex DiaSorin Abbott Bayer Ortho-Clinical Abbott DPC Abbott Ortho-Clinical Roche Greencross Biokit Bio-Mérieux Rank 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Sheiblauer H,Soboll H and Nick S. J. Med. Virol. 78:S66-S70, 2006 Sensibilidade analítica de 7 kits para AgHBs. Dados recentes da literatura: 1-Ly TD et al, J. Clin. Microbiol 2006; 44(7): 2321-2326 2- Ly TD et al. J. Med. Virol. 2007; 79:S37-S41. Sensibilidad analítica de 7 kits AgHBs Marca Limite mínimo de detecção HBsAg 5.0 – Dade Behring 0,07 ng/ml Monolisa Ultra – BioRad 0,08 ng/ml Vidas Ultra – Bio-Mérieux 0,09 ng/ml Liaison Dia - Sorin 0,11 ng/ml Advia Centaur - Bayer 0,12 ng/ml Architect - Abbott 0,13 ng/ml AxSYM V2 - Abbott 0,16 ng/ml Ensaio Direto “Sandwich”: Detecção de AgHBs (ELISA) Ac Monoclonais (mistura) H2O2/TMB HRP Ag HBs H2SO4 Ac monoclonais Ac policlonais Fase sólida Positivo Anticorpos Policlonais: Reconhecem múltiplos sítios de ligação do Ag Monoclonais: Reconhecem um único sítio de ligação do Ag Ac Policlonais Ac Monoclonais Sensibilidade de acordo com o tipo de anticorpos utilizados em kits AgHBs Anticorpos na Fase sólida Anticorpos do conjugado Sensibilidade 1 anticorpo monoclonal 1 anticorpo monoclonal ~ 1,5 ng/mL Anticorpos policlonais 2 anticorpos monoclonais 0,3-0,5 ng/mL 3 anticorpos monoclonais Anticorpos policlonais < 0,15 ng/mL Triagem Sorológica de Doadores de Sangue para o HBV • Na seleção dos testes para AgHBs, dar preferência: – Aos que apresentem melhor sensibilidade • Detecção <0,1 ng de AgHBs /mL – Aos que consigam detectar o maior número de mutantes Teste rápido para Ag HBs VIKIA - bioMérieux Evaluation of VIKIA HBs Ag, a new immuno-chromatographic test for the qualitative detection of HBs antigen in serum, plasma and whole blood human samples. Serge Diagbouga, Centre Muraz, Bobo Dioulasso, Burkina-Faso Dr Kavita Chatterjee, Department of Transfusion Medicine, All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, India Dr Madhu Choudhary, Department of Microbiology, Employee State Insurance Hospital, Basidarapur New Delhi. India Dr Amadeo Saez Alquezar, PANEL laboratory, Sao Paulo, Brazil Suzanne Marcillat, R&D Immunoessais Department, bioMérieux, France Results : VIKIA HBsAg and Determine HBsAg presented a sensitivity of 99.0% (418/422 samples tested) and 97.8% (413/422 samples tested), and a specificity of 99.8% (1525/1528 samples tested) and 100.0% (1528/1528 samples tested), respectively. The paired samples of plasma, serum, venous and capillary whole blood gave homogeneous results when tested with VIKIA HBsAg. Conclusion: These results demonstrate that VIKIA HBsAg perform equally with plasma, serum, venous and capillary whole blood. In addition, Vikia HBsAg detects well the most prevalent HBV genotypes and combines a high sensitivity and specificity. Therefore, it represents an improvement in the quality of HBV rapid testing in comparison to the rapid test used in reference Ensaios para HBV DNA HBV Digene Hybrid-Capture I Digene Corp. HBV Digene Hybrid-Capture II Ultra-Sensitive Digene Hybrid-Capture II Roche Molecular Systems Artus-Biotech Bayer Corp. Amplicor HBV Monitor Cobas Amplicor HBV Monitor Cobas Taqman 48 HBV Real Art HBV PCR Assay Versant HBV DNA 1.0 Versant HBV DNA 3.0 WHO International Standar Locarnini S, 2005 1UI/ml = 5-6 cópias/mL 1 10 102 103 104 105 106 107 108 109 1010 HBV DNA IU/mL Importância do anti-HBc • Diagnóstico – Anti-HBc (IgM / IgG) • Triagem sorológica – Anti-HBc IgG (total) • Sensibilidade • Especificidade % de receptores infectados Hepatites pós - Transfusionais 30 HBsAg 25 20 Exclusão de doadores com fatores de Risco p/ HIV 15 Anti-HIV ALT/Anti-HBc 10 Anti-HCV 5 0 1965 Testes HCV melhorados 1970 1975 1980 1985 1990 Ano Adaptado de HJ Alter and Tobler and Busch, Clin Chem 1997 1995 2000 AÇÕES PARA EVITAR AS HEPATITES PÓS-TRANSFUSIONAIS 1965: Descoberto o Antígeno Australia (AgHBs) 1960 1975: Reconhece-se que cerca de 90% de todas as hepatites transmitidas por transfusão eram “não-A, não-B”. (NANB). 1970 Testes AgHBs 3ªgeração aplicados na triagem 1990: Início da Triagem para anti-HCV (1ª G) 1990 1980 1985-87: Triagem por Anti-HBc e ALT “surrogate tests” para HNANB 2000 AgHBs + Anti-HBc 1991: Triagem por Anti-HBc recomendada 1995: NIH/NHLBI Concensus Development Conference recomenda que o teste ALT seja pela FDA para reduzir a incidência de descontinuado; Mantem-se o teste anti-HBc hepatite B transmitida por transfusão para evitar o risco residual de transmissão do HBV Marcadores da Infecção pelo HBV Perfis observados na triagem de doadores PERFIL Ag HBs Anti-HBc 1 2 3 4 5 6 7 8 Neg Pos Pos Neg Neg Neg Neg Neg Neg Pos Pos Pos Pos Pos Pos Pos Anti-HBs Ag HBe Anti-HBe HBV DNA Pos Neg Pos Neg Neg Pos Pos Pos/Neg Pos/Neg Pos Pos/Neg Pos Pos Pos Pos Neg Neg Neg 2 e 3: Portadores. (3 = alta infectividade) 4 e 5: Hepatite B oculta. (DNA em baixas concentrações: <103 UI/mL) 6 e 7: Exposto ao HBV? Imune? Anti-HBs? Infectante? 8: Recuperação sorológica Sensibilidade analítica e Especificidade de alguns kits anti-HBc (total) Testes Anti-HBc Marcas Sensibilidade (PEI/mL) Especificidade (%) 0,7 99,85 <0,5 99,83 Dade Behring - 99,7 Wiener - 99,4 BioKit 1,5 - Bio Rad 0,6 99,6 - 100 bioMérieux Dia Sorin Ensaio Competitivo Anti-HBc Total H2O2/TMB Soro AgHBc HRP H2SO4 NEGATIVO Fase sólida Ensaio Indireto: IgG H2O2/TMB Ag HRP H2SO4 Soro Fase sólida Positivo Ensaio Direto “Sandwich”: IgG Anti-HBs H2O2/TMB HRP H2SO4 Fase sólida Positivo Falhas na detecção do Anti-HBc Avettand-Fenoel V, et al. J. Clin. Microbiol. 2006 2.169 amostras de soro, AgHBs (+) [hepatite crônica p/ HBV] Anti-HBc Positivo 2.130 Negativo 39 (1,79%) 26 (66,6%) +/- com kits diferentes Apenas 3 mutações HIV (+) = 13 Transplantados = 5 13 (33,3%) Sempre Neg -Pacientes altamente imunocomprometidos -Falta de sensibilidade de alguns kits Tipos de Testes ELISA utilizados para a triagem de doadores de sangue no Brasil Tipos de testes Anti-HBc - Brasil - 2007 6% 7% ELISA MEIA QUIMIO 87% RFP e RFN (%) para a triagem por anti-HBc, observados nos PCQES* desenvolvidos para Bancos de Sangue no Brasil (2006 – 2007) 3 2,8 2,5 % 2 1,4 1,5 1 1 0,5 0,4 0,3 0 0,13 0,26 0,17 0,1 PA0407 PA0807 0,2 0,35 0 PA0406 PA0806 PA1206 RFN RFP (*) Programas de Controle de Qualidade Externo em Sorologia PA1207 Importância do Anti-HBc na triagem sorológica de doadores de sangue • Eliminar o risco residual de transmissão do HBV por transfusão Testes AgHBs com baixa sensibilidade Níveis de AgHBs indetectáveis Mutantes no determinante “a” do HBV Hepatite B oculta Dados da Triagem sorológica para anti-HBc em Regiões de média prevalência para o AgHBs Países AgHBs (neg) Anti-HBc (pos) Paquistão 17,28% Grécia 14,95% Índia 10,82% Triagem sorológica pelo anti-HBc Bhatti FA et al. Transfusion 2007 Paquistão - Transfusão de unidades de sangue: 1,5 milhões de unidades transfundidas anualmente Prevalência de AgHBs (+) em doadores: 2,16% O anti-HBc não é usado na triagem de doadores Estudo do anti-HBc em 966 doadores mostrou: 185 (19%) foram anti-HBc (+) 167 (17,28%) eram AgHBs (-) e anti-HBc (+) Desses 167, 76% eram anti-HBs (+) HBV-DNA foi detectado em 5 doadores que eram AgHBs (-) e anti-HBc (+). Infecção oculta pelo HBV 1 em cada 200 doadores AgHBs negativos ainda poderiam transmitir HBV para os receptores % de Bolsas descartadas na Triagem Sorológica de Doadores de Sangue, por Macroregião – Brasil, Dados HEMOPROD / ANVISA / MS - 2002 Norte Nordeste Sudeste Centro Oeste Sul Brasil AgHBs 0,6 0,77 0,42 0,43 0,46 0,52 AntiHBc 8,12 4,29 2,91 4,95 4,92 4,2 AntiHCV 0,62 0,69 0,47 0,35 0,38 0,51 AntiHIV 0,46 0,9 0,39 0,41 0,27 0,49 Importância do Anti-HBc na triagem sorológica de doadores de sangue • Em regiões de baixa prevalência Descarte de 2 a 5% • Em regiões de média e alta prevalência para o AgHBs O descarte pode atingir mais de 20% Em regiões com baixa prevalência para o AgHBs, mas onde ocorra intensa transmissão horizontal em crianças, o descarte por anti-HBc em doadores pode chegar aos 10% Alternativas em Regiões com Alta Prevalência de Anti-HBc (+) Conseguir um pool de doadores negativos para AgHBs e Anti-HBc e motivá-los a doar sangue regularmente Vacinar os doadores com apenas anti-HBc (+) e verificar a soroconversão Importar unidades de sangue de regiões com baixa prevalência de Anti-HBc Alternativas em Regiões com Alta Prevalência de Anti-HBc (+) Aproveitar doadores anti-HBc (+) Doadores anti-HBc (+) com anti-HBs >100 mUI/mL, Poderiam ser aceitos Doadores anti-HBc (+) com anti-HBs < 100 mUI/mL, só seriam aceitos se fossem HBV-DNA Negativos Controverso, porque a presença de anti-HBs nem sempre é indicativa da ausência de HBV - DNA Alternativas em Regiões com Alta Prevalência de Anti-HBc (+) Um estudo no Irã com 2.000 doadores mostrou a presênça de Anti-HBc (+) em 131 (6,55%) sendo que 16 dos 131 (12,2%) eram HBV – DNA (+) Se o anti-HBc é (+) a bolsa de sangue deverá ser Descartada Posteriormente o teste para HBV-DNA pode ser adequado para seguimento da infecção por HBV Behzad-Behbahani A. J. Med. Res. 2006 Arraes LC et al. Rev. Inst. Med. Trop. S.Paulo 2003 Yotsuyanagi H et al. Transfusion, 2001 Reatividade de mutantes r-HBsAg, em vários ensaios AgHBs Mutantes (conc.) 145R H 145R L 144A H 144A L 142L H 142S H 142S L 133L L 126H H 126S L Wild type ENSAIOS A B C D E F G H + + + + + + + + + + + + + + + + + + N N N N N N + + + + + + N N N N N N + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + N N + + + + + + + + + + + + + N + N + + + + + + + Harrison T.J. et al, 1998 N + Comportamento dos testes para detecção de AgHBs na presença de mutantes do antígeno de superfície do HBV Coleman PF Emerging Infectious Diseases • www.cdc.gov/eid • Vol. 12, No. 2, February 2006 Desempenho de kits AgHBs para a detecção de mutantes Louisirirotchanakul, S et al. HBsAg diagnostic kits in the detection of hepatitis B Virus mutation within “a” determinant. Viral. Immunology 2006; 19(1): 108-114. Painel de referência com amostras de doadores de sangue - Tailândia N = 212 amostras 107 AgHBs Negativas 105 AgHBs Positivas Painel de mutantes AgHBs rec Thr126-Ser Gln129-His Met133-Leu Asp144-Ala Gly145-Arg Thr126-Ser + Gly145-Arg Pro142=Leu + Gly145-Arg Pro142-Ser + Gly145-Arg Asp144-Ala + Gly145=Arg Desempenho de diversos kits AgHBs frente a um painel de referência de doadores de sangue na Tailândia Performance de kits diagnósticos Ag HBs Painel de referência (doadores de sangue) 107 Negativas e 105 positivas para Ag HBs Ab : MONO / POLI Ab: MONO / MONO Sensibilidade (% ) LC 95% Especificidade (% ) LC 95% AxSYM HBsAg (V2) 100 VIDAS HBsAg (ultra) 100 Hepanostika MONOLISA HBsAg HBsAg Uniform II (Ultra) 100 100 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 100 100 100 100 99,07 100 100 99,07 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 94,2-99,9 95,6-99,9 95,6-99,9 94,2-99,9 Elecsys Vitros Enzygnost Ortho HBsAg I HBsAg HBsAg HBsAg 100 100 100 100 Louisirirotchanakul, S et al. HBsAg diagnostic kits in the detection of hepatitis B Virus mutation within “a” determinant. Viral. Immunology 2006; 19(1): 108-114. Kits AgHBs usados no estudo Louisirirotchanakul, S et al. HBsAg diagnostic kits in the detection of hepatitis B Virus mutation within “a” determinant. Viral. Immunology 2006; 19(1): 108-114. Abbott Diag AxSYM HBsAg (V2) MEIA fluor Bio-Mérieux AS VIDAS HBsAg (Ultra) ELFA fluor Ab: Mono/poli Bio-Mérieux AS Hepanostika HBsAg Uniform II EIA color Bio-rad Roche Diag MONOLISA HBsAg (Ultra) EIA color Elecsys HBsAg I ECLIA quimiolum HBsAg ECI quimiolum Ortho-Clinical Diag Vitros Ab: Mono/mono Dade Behring Enzygnost Ortho-Clinical Diag Ortho HBsAg EIA color HBsAg EIA color MEIA: microbead enzyme-linked immunoassay; ELFA: enzyme-linked fluorescent assay; EIA: enzyme-linked immunosorbent assay; ECLIA: electrochemiluminescence-linked immunoassay; ECI: enhanced chemiluminescence immunoassay. Desempenho de diversos kits AgHBs frente a um painel de Mutantes AgHBs rec Performance de kits diagnósticos Ag HBs Painel de referência: Mutantes Ag HBs rec Ab : MONO / POLI Ab: MONO / MONO Fluorescência EIA color Quimiolum EIA color Mutantes AgHBs rec AxSYM HBsAg (V2) Thr126-Ser 7,96 (Pos) Gln129-His 7,02 (Pos Met133-Leu 7,17 (Pos) Asp144-Ala 5,56 (Pos) Gly145-Arg 5,56 (Pos) Thr126-Ser + Gly145-Arg 4,77 (Pos) Pro142=Leu + Gly145-Arg 5,80 (Pos) Pro142-Ser + Gly145-Arg 5,94 (Pos) Asp144-Ala + Gly145-Arg 5,25 (Pos) Control Negativo 1,06 (Neg) Control Positivo* 8,69 (Pos) (*): recombinant Wild-type HBS Ag VIDAS HBsAg (ultra) 9,7 (Pos) 8,5 (Pos) 8,7 (Pos) 5,4 (Pos) 5,8 (Pos) 10,5 (Pos) 4,9 (Pos) 5,8 (Pos) 6,1 (Pos) 0,08 (Neg) 1,3 (Pos) Hepanostica MONOLISA HBsAg HBsAg Elecsys Uniform II (Ultra) HBsAg I 1,96 1,96 2,00 1,48 1,53 1,36 1,29 1,48 1,58 0,54 2,20 (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Neg) (Pos) 6,19 7,49 6,35 6,33 4,91 4,20 3,74 5,04 4,19 0,57 7,53 (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Neg) (Pos) 9,88 9,70 8,59 7,73 0,46 0,48 0,48 0,46 0,47 0,47 10,1 (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Pos) Vitros HBsAg 12,9 13,7 11,2 0,15 0,06 0,06 0,06 0,04 0,09 0,08 15,6 (Pos) (Pos) (Pos) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Pos) Louisirirotchanakul, S et al. HBsAg diagnostic kits in the detection of hepatitis B Virus mutation within “a” determinant. Viral. Immunology 2006; 19(1): 108-114. Enzygnost HBsAg 9,35 8,81 9,01 7,61 0.69 0,83 0,61 0,26 0,61 0,39 9,45 (Pos) (Pos) (Pos) (Pos) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Pos) Ortho HBsAg 5,33 6,43 5,65 0,71 0,43 0,47 0,43 0,43 0,47 0,45 7,35 (Pos) (Pos) (Pos) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Neg) (Pos) Desempenho de kits AgHBs para a detecção de mutantes Roche Mutant Panel (Recombinant) Enzygnost HBsAg 5.0 Dade Mutação Diluição 1:10 pura 1:10 1:10 pura pura 1:10 pura 1:10 pura pura 1:10 1:10 1:10 pura D144A/L186T D144A/L186T M133T M133T/Y161F T123N Y100C/P120T T143L T143L S143L S143L S38P/M198T C76Y/R169H S53L/I126N/S210N C76Y/T143M/F219S C76Y/T143M/F219S Murex ETI-MAK-4 Architect Immulite ORTHO Monolisa Hepanostika Bioelisa HBsAg HBsAg HBsAg HBsAg HBsAg HBsAg HBsAg HBsAg Version 3 ELISA TS 3 Ultra Uniform II colour Behring Murex Dia-Sorin Abbott DPC Ortho S/CO 20,2 n.t 29,2 16,1 26,9 0,6 47,1 n.t 49,4 n.t 12,7 36,3 20,3 6,5 n.t S/CO 12,8 n.t 21,1 14,4 4,5 32,9 36,3 n.t over n.t 10,0 27,0 8,0 5,2 n.t S/CO 8,7 n.t 22,4 9,5 23,1 46,6 82,4 n.t over n.t 6,9 35,7 14,7 5,3 n.t S/CO 0,4 n.t 1,1 0,3 VNS VNS 5,2 n.t 15,6 n.t VNS 1,7 0,6 0,3 n.t S/CO 3,3 n.t 7,8 1,7 VNS VNS 24,5 n.t 157,7 n.t VNS 11,7 4,0 1,8 n.t S/CO 0,5 8,4 7,2 2,2 0,8 27,8 -0,1 0,6 0,0 1,2 5,5 43,7 19,3 0 n.t Bio-Rad BioMérieux S/CO 8,2 n.t 12,9 4,8 VNS VNS 24,6 n.t 28,5 n.t VNS 6,9 4,1 2,3 n.t Cut-off of ARCHITECT assay = 0,05 IU/mL Sheiblauer H,Soboll H and Nick S. J. Med. Virol. 78:S66-S70, 2006 S/CO 2,3 n.t 7,3 2,3 2,0 6,7 16,1 n.t 47,4 n.t 1,8 6,9 2,1 0,8 13,6 Biokit S/CO 4,6 n.t 7,0 3,1 4,8 14,5 22,2 n.t 34,6 n.t 2,9 12,8 6,3 2,3 n.t Desempenho de kits AgHBs para a detecção de mutantes ABBOTT Coleman Panel Mutação T126S Q129H M133L D144A G145R T126S / G145R P142L / G145R P142S / G145R D144A / G145R AxSYM Advia HBsAg Centaur V2 HBsAg Bioelisa HBsAg colour Monolisa HBsAg Ultra Enzygnost HBsAg 5.0 Dade ETI-MAK-4 HBsAg Immulite HBsAg Murex HBsAg Version 3 Elecsys HBsAg Abbott Bayer Biokit Bio-Rad Behring Dia-Sorin DPC Murex Roche S/CO S/CO S/CO S/CO S/CO S/CO S/CO S/CO S/CO 3,74 20,17 3,84 12,73 14,11 10,42 3,56 10,32 8,64 4,08 20,21 30,9 16,31 11,26 8,76 3,22 8,90 8,61 4,17 12,72 3,13 12,41 12,09 8,42 3,06 9,95 8,58 3,16 6,47 1,94 12,31 11,06 3,58 2,30 8,45 6,55 3,20 0,10 2,06 11,03 0,80 4,21 2,47 8,80 0,56 2,35 0,10 1,58 9,21 0,82 4,06 2,29 6,56 0,56 3,26 0,10 2,54 10,48 0,72 3,76 2,67 8,37 0,56 3,10 0,10 2,39 10,57 1,69 4,09 2,90 8,81 0,56 2,61 0,10 1,52 10,71 2,63 3,33 1,67 8,40 0,56 Sheiblauer H,Soboll H and Nick S. J. Med. Virol. 78:S66-S70, 2006 Desempenho de Kits Ag HBs para a Detecção de Mutantes Natural Mutant Panel Sheiblauer H,Soboll H and Nick S. J. Med. Virol. 78:S66-S70, 2006 Sensitivities of four New commercial hepatitis B surface antigen (HBsAg) assays in detection of HBsAg mutant forms. Thoai Duong Ly et al. J. Clin. Microbiol, july 2006 Sensitivities of four New commercial hepatitis B surface antigen (HBsAg) assays in detection of HBsAg mutant forms. Thoai Duong Ly et al. J. Clin. Microbiol, july 2006 Desempenho de Kits Ag HBs na Detecção de Mutantes (Ly TD. J. Med. Virol. 2007; 79:S37-S41) Recombinant mutants: Abbott Panel Teste Q129H Auzyme 5,8 GS 3.0 28 Test System 3 15,8 Vitros Eci 10,7 Centaur 21,61 AxSYM v 2 8,15 Architect 0,26 Immulite 7,64 Elecsys 15,06 Liaison 17 Vidas ultra 1,33 Bio-Elisa 30,9 Eti-Mak 4 15,6 Monolisa ultra 25,4 Hepanostika ultra 22 Dade 5.0 50,9 Murex v 3 8,8 M133L 6,9 25 12,3 8,8 14,61 8,33 1,23 7,25 11,66 15 1,61 3,13 13,3 17,7 19,19 41,98 9,95 D144A 7,1 5 0,71 0,18 3,06 6,32 0,67 5,64 10,69 6,2 1,34 1,94 5,7 19,3 13,13 50 8,45 G145R 6,4 0,4 0,15 0,14 <0,1 6,4 1,09 6,82 0,37 4 1,09 2,06 7,1 14,6 17,09 1,16 8,8 P142L/ G145R 5,1 0,4 0,17 0,13 <0,1 6,51 1,08 6,25 0,33 3,7 1,06 2,54 6,6 15,8 17,27 0,86 8,37 Bio-Rad Panel P142S/ G145R 6,4 0,4 0,23 0,14 <0,1 6,19 0,65 5,83 0,35 5 1,15 2,39 5,2 13 15,56 3,24 8,81 T123N/ T124S NT NT NT NT 0,3 1,29 0,11 0,57 NT 5,8 0,49 NT 3,6 1,51 47 0,46 NT T126S NT NT NT NT 1,73 2,2 0,06 0,91 NT 4,6 0,2 NT 21,5 4,6 46 1,48 NT T123N NT NT NT NT 0,56 0,99 0,07 7,58 NT 6,5 1,16 NT 3 3,05 46 Over NT Reactive S/CO: AxSYM = 2; Architect = 0,05 IU/ml; Liaison = 1,1; Vidas ultra = 0,13; los demás = 1 Janela Imunológica do HBV Janela imunológica NAT Vírus Testes ELISA HBV 56 dias 31-42 dias HBV 56 dias 45 (34-66) dias Risco residual de transmissão por transfusão 1:77.000 a 149.000 NAT para HBV na Triagem de doadores de sangue NAT para HBV Doações 1.641.891 Doações NAT-HBV (+), AgHBs (-) 10 Rendimento período de janela 1/164.189 Rendimento Infecções HBV ocultas 39 (1/42.100) Sociedade Espanhola de Transfusão Sanguínea, 2007 Vírus da Hepatite Delta (HDV) • O HDV precisa da presença do HBV para causar infecção. • Distribuição heterogênea ao redor do mundo. • Endêmico em algumas regiões da América Latina, Europa e África. • Pode estar associado a formas graves de hepatites em algumas regiões do Norte da América do Sul. Vírus da Hepatite Delta (HDV) Vírus da Hepatite B Vírus da Hepatite Delta Envelope AgHBs Envelope AgHBs DNA polimerase RNA 42 nm DNA Core (27 nm) AgHBc AgHBe Vírus Delta Core (27 nm) Virus Delta Marcadores sorológicos da Hepatite por Vírus Delta • Anti-VHD (IgM) – Fase aguda • Anti-VHD (IgG) – Recuperação • AgVHD – Fase aguda VIRUS DA HEPATITE DELTA INFECÇÃO SIMULTÂNEA COM O VHB VHD-RNA VHB-DNA IgG Anti-VHD IgM anti-VHD IgG anti-VHD AgHBs Anti-HBs ALT VHD + VHB 0 1 2 3 4 Meses 5 6 12 SUPERINFECÇÃO PELO VHD EM PORTADOR DO VHB VHD-RNA VHB-DNA Anti-VHD IgM anti-VHD IgG anti-VHD AgHBs ALT VHD Diagnóstico da infecção por HDV AgHBs Anti-HBc IgM Anti-HDV IgM Anti-HDV Total + + + Coinfecção + Neg + Super infecção + +/- Neg + Infecção passada + +/- Neg Neg Ausência de infecção Interpretação Hepatite por Vírus C (HCV) • A infecção pelo HCV representa um dos mais graves problemas de saúde pública no Brasil e no mundo. • 170 milhões de pessoas infectadas pelo HCV, no mundo. • Indivíduos infectados pelo HCV – Hepatite crônica (80% - 85%) • Cirrose hepática (20%) – HCC (10% - 20%) História Natural da Hepatite C crônica (50 anos) Hoofnagle JH, Hepatology 36(5), 2002 Prevalência de infecção pelo HCV em doadores de sangue Anit-HCV Prevalence* >5% - High 1.1-5%- Intermediate 0.2-1%- Low <0.1% - Very Low Unknown *Anti-HCV defined by EIA and supplemental testing CDC Transmissão do HCV • A principal via: parenteral – Entre usuários de drogas intravenosas – Por agulhas e seringas • Esterilização inadequada ou reutilização – Transfusão Sangüínea – Transplante de órgãos • Vertical • Sexual (ineficiente) • Ocupacional Teste para HCV recomendado em: • Usuários de drogas ilícitas injetáveis • Quem recebeu fatores de coagulação antes de 1987 • Quem recebeu hemocomponentes ou órgãos antes de 1992 • Pacientes submetidos a hemodiálise • Evidência de doença hepática • Profissionais da área da saúde (com suspeita de exposição a sangue contaminado com HCV) • Crianças nascidas de mães HCV positivas Recomendações após exposição ao HCV • Seguimento após picadas de agulhas, cortes ou exposição de mucosas a sangue HCV positivo – Testar a fonte de contaminação p/ HCV – Testar a pessoa exposta, se a fonte for (+) – Anti-HCV e ALT, imediato e até 4-6 meses – HCV-RNA em 4-6 semanas (+ rápido) – Confirmar todos os anti-HCV com IB • Encaminhar a pessoa infectada a serviço médico especializado para avaliação e seguimento CDC Risco de infecção após picada com agulha usada em paciente infectado Vírus Risco HBV 30% HCV 3% HIV 0.3% Padrão Sorológico na Infecção aguda por HCV com Recuperação anti-HCV Título HCV - RNA ALT Normal 0 1 2 3 4 5 6 Meses Tempo após a Infecção 1 2 3 Anos 4 Mod. CDC, 2002 HCV - Evolução para Infecção Crônica anti-HCV Título HCV RNA ALT Normal 0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 Anos Meses Tempo após a infecção 4 Evolução do HCV-RNA, Ag HCV e anti-HCV Evolução Para a cura Evolução Para a cronicidade Detecção da infecção pelo HCV Testes Laboratoriais • Indiretos – Pesquisam a presença de anticorpos contra o HCV • Diretos – Testes de biologia molecular para pesquisa do RNA – HCV – Pesquisam a presença do Ag core do HCV • Combinação – Pesquisam a presença de anticorpos contra o HCV e do Ag core do HCV Estrutura do RNA - HCV Estrutural Não-Estrutural -----estrutura --------- --processamento ---- -----replicação ----C E1 E2 NS2 NS3 NS4A NS4B NS5A NS5B C Nucleocapsídeo Protease ELISA Proteínas do envelope Reunião e entrada Serina protease Helicase NS3 cofator Replicação ? 1ª geração 2ª geração 3ª geração Fosfoproteína replicação RNA dependente RNA polimerase Testes Laboratoriais – HCV ELISA – 1ª Geração – NS4 – 2ª Geração – Core+NS3+NS4 – 3ª Geração – Core+NS3+NS4+NS5 • Ac IgG + IgM • Variantes virais da NS3 – 4ª Geração – Ag / Ac Testes Laboratoriais - HCV • • • • • • ELISA MEIA Quimioluminescência (CLIA) Aglutinação de partículas de gelatina Imuno blot Testes rápidos Imunoblot – RIBA HCV 3.0 Interpretação Positivo Positivo Indeterminado Indeterminado Negativo Negativo Controle IgG c100(p) 5-1-1(p) Nível II c33c c22 (p) NS5 Controle IgG hSOD Nível I Amostras Repetidamente Reagentes M urex ELISA-1 ELISA-2 RIBA-3 M urex Resul tado Amostras ELISA-1 ELISA-2 RIBA-3 Amostras DO/CO DO/CO DO/CO DO/CO DO/CO DO/CO Resul tado 1 0,29 0,24 1,29 N 29 0,41 0,27 6,29 N 2 3,56 3,43 3,73 IND 30 0,24 6,13 0,10 N 3 0,35 0,18 1,01 N 31 1,01 0,42 0,18 N 4 0,39 0,16 1,09 N 32 0,21 0,41 3,29 N 5 0,39 0,15 1,52 N 33 13,68 2,41 1,17 IND 6 0,23 1,44 1,17 N 34 0,23 0,18 1,45 N 7 2,89 0,19 0,07 N 35 0,27 1,63 0,16 N 8 0,32 0,23 1,36 IND 36 0,28 0,97 0,25 N 9 0,25 0,17 1,20 N 37 0,42 6,36 0,10 N 10 0,50 0,41 1,16 N 38 0,21 0,22 3,79 N 11 0,36 1,28 1,80 N 39 0,24 0,18 1,98 IND 12 1,75 1,48 0,68 IND 40 0,29 1,67 0,17 N 13 0,22 0,94 0,08 N 41 0,29 7,01 0,74 N 14 0,28 2,16 0,08 N 42 0,34 1,16 0,32 N 15 0,28 5,12 1,47 IND 43 0,25 0,37 1,90 N 16 13,81 10,73 9,89 POS 44 1,36 0,27 0,09 N 17 0,33 0,31 5,19 N 45 0,25 0,24 3,23 N 18 0,21 0,18 1,06 N 46 0,31 2,59 0,07 N 19 0,39 2,88 0,08 IND 47 1,01 0,25 0,03 N 20 0,31 0,18 3,41 48 0,45 0,34 1,47 21 2,46 0,54 1,58 49 0,43 0,18 3,17 22 0,29 0,23 1,09 N IND N 50 14,04 11,37 9,69 N IND POS 23 0,31 0,19 3,27 N 51 0,80 0,18 4,93 N 24 0,11 1,02 0,02 N 52 0,26 1,28 0,43 N 25 0,33 1,36 1,55 N 53 0,53 0,21 2,34 N 26 0,35 0,93 0,14 N 54 14,02 11,35 13,62 POS 27 0,31 1,74 0,06 N 55 1,17 0,33 1,39 N 28 0,40 0,21 8,18 N 56 0,41 0,21 6,19 N Avaliação de Kits anti-HCV - ELISA Sensibilidade Especificidade Triagem Sensibilidade Especificidade Kit “A” Kit “B” Kit “C” 100% 100% 100% 99,4% 98,6% 97,9% 100% 99,4% 98,2% 98,6% 100% 97,9% Triagem + painel de soros (-) e Heterólogos Sáez-Alquezar A et al. Laes & Haes 169: 90-94, 2006 Ensaios para a detecção do RNA - HCV • Testes qualitativos – Limite inferior de detecção: 10 – 50 UI/mL • Testes quantitativos* – Valor de corte para quantificação do RNA • Limite inferior: ~ 600 UI/mL • Limite linear superior : 850.000 – 7.700.000 UI/mL (*): Amplificação do alvo (PCR ou TMA ou amplificação do sinal (branched ) A OMS padronizou as unidades de quantificação do RNA-HCV em UI/mL Exemplos de fatores de conversão Cobas Amplicor HCV Monitor. V2,9: 1 UI/mL = 2,7 cópias/ml Versant HCV RNA Quantitative assay: 1 UI/ml = 5,2 cópias/ml ALGORITMO PARA HCV ELISA - 3.0 ANTI-VHC PCR NÃO-REAGENTE Positivo REPETIDAMENTE REAGENTE Negativo SOROTECA IMUNOBLOT LIA ou RIBA NEGATIVO INDETERMINADO POSITIVO PCR CONFIRMAÇÃO PCR GENOTIPAGEM Nomenclatura dos Diferentes Genótipos do Vírus da Hepatite C Genótipos Subtipos 1 1a, 1b, 1c 2 2a, 2b, 2c 3 3a, 3b, 3c 4 4a 5 5a 6 6a Stuyver & Simmonds Genotipagem do HCV INNO - LIPA RFLP Restriction fragment Lenghtpolymorphism Seqüênciameneto de porções variáveis do genoma Distribuição dos diferentes genótipos do HCV em diferentes regiões • Genótipos 1, 2 e 3. – Países Ocidentais , Oriente Próximo • Genótipos 5 e 6. – África do Sul, Sudeste da Ásia • Genótipo 4. – Oriente Médio, África Central, Brasil Prevalência dos genótipos do HCV São Paulo – Brasil (N=348) Doadores de Hemofílicos sangue (%) (%) Transplante renal (%) Hepatite crônica C (%) Total (%) Genótipos 1 2,9 4,3 75,0 5,2 12,9 1a 17,6 34,8 - 20,3 18,7 1b 38,2 17,4 - 36,6 31,3 2 5,9 13,0 5,0 3,2 4,3 3 32,4 30,4 15,0 33,9 31,3 4a 0 0 2,5 0 0,3 Mix 2,9 0 2,5 0,8 1,1 Bassit L et al. Rev. Inst. Méd. Trop. São Paulo. v. 41 (3): 183 – 189, May – June, 1.999. Bassit L et al. Hepatology Vol. 29 (3): 994 – 95, 1.999. Considerações Sobre o uso de Testes ELISA anti-HCV Pacientes imunocompetentes Pacientes imunocomprometidos ou em Hemodiálise Pacientes com Hepatite Crônica Populações de alto risco Populações de baixa prevalência Doadores de sangue Hemoterapia • Importância da Triagem Sorológica em Doadores de Sangue – Usar testes que diminuam o período da janela imunológica • Anti-HCV • Combo Ag/Ac • Ag • NAT (mini pool – amostras individuais) Janela imunológica na infecção pelo HCV com os marcadores utilizados Infecção NAT Ag EIA 3ª EIA 2ª EIA 1ª Ag/Ac Janela imunológica 0 13 15 70 80 DIAS 150 Alan Kitchen Example of a representative profile HCV Seroconversion Panel BBI 917 : HCV-Ag/Ac Redução da Janela Imunológica Ranking on 35 Seroconversion panels, including subtype 1a, 1b, 2b, 3a in average days of delay for detection versus NAT : HCV Ultra detects exposure to HCV with a minimum of 17 days earlier than anti-HCV Ab assays tested : 70 % reduction of the serologic HCV WP Desempenho do HCV-Ag/Ac frente a diferentes Genótipos A total of 405 genotyped samples were tested : 133 genotypes from various origin 272 genotypes from 2 hospital laboratories All these samples from different genotypes were found positive : 100 % sensitivity (405 / 405) Bio-Rad Janela Imunológica dos vírus HBV, HCV e HIV Janela imunológica Vírus Testes ELISA Ag / Ac NAT HBV 56 dias - 31-42 dias HCV 70 dias 25-39 dias ? 23 dias HIV 22 dias 15-16 dias 11 dias Fase inicial da infecção pelo HCV Eclipse Retrovirus Epidemiology Donor Study [REDS] group Busch MP. Transfusion 2006; 46:1624-1640 Bianco C. Janela Imunológica com os testes diagnósticos para a infecção por HCV Anti-HCV 1ª G 150 dias Anti-HCV 2ª G 82 dias Anti-HCV 3ª G 66 dias 38 -94 dias Combo Ag/Ac 12,5 dias* 39,2 dias** 38 dias menos que o anti-HCV NAT 7.4 dias* 31.9 dias** 8 – 9 dias (*)Buch M et al. Transfusion 2005, 45:254-264 (**) Laperche S et al. Transfusion 2005. 45:1965-72 Muito Obrigado [email protected]
